Identificacin cualitativa de azcares reductores

Patrn terico negativo: Tome un tubo de ensayo (Tubo 1) y agregue 2 mL de H2O destilada ms 1 mL de
reactivo de Benedict.
Procedimiento cualitativo para la identificacin de almidn.
Patrn terico negativo: Al Tubo 1, agregue 2 mL de H2O destilada ms 5 gotas de reactivo de Lugol.
Procedimiento para la cuantificacin de azcares reductores.
a. Inicialmente debe prepararse el patrn de glucosa: Disolver 1 g de glucosa y aforar con agua destilada a
250 mL, obtenindose una solucin madre a una concentracin de 4 mg/L. Recordar que el rango es de 0
hasta 4 mg/L, de tal manera que el volumen final sea 2 mL. Para ello, mezcle el volumen adecuado de la
solucin madre de glucosa de 4 mg/L y el correspondiente volumen necesario de agua, de acuerdo con la
siguiente figura:
Procedimiento del mtodo DNS
Tanto para los patrones de la curva, como para la muestra problema y el blanco (agua) se procede de la
siguiente forma:
A 0.5 mL de cada muestra a analizar adicionar 0.5 mL de reactivo DNS. Agitar todas las muestras.
Colocar a ebullir las muestras en bao mara por 5 minutos y enfriar rpidamente con hielo.
Adicionar 5 mL de H2O destilada y agitar y dejar en reposo durante 15 min.
-----------------------------Procedimiento cualitativo para la identificacin de protenas.
Patrn terico negativo: Al Tubo 1, agregue 2 mL de H2O destilada ms 5 gotas de CuSO4 0.05M, ms 2
mL de NaOH 3M e inmediatamente mezcle vigorosamente.
Curva patrn
El mtodo de Bradford es til para cuantificar protenas en un intervalo de concentracin de 0-20g/mL.
Para la preparacin de la curva patrn se partir de una solucin madre de albmina de concentracin de
20g/mL, de la cual se realizarn las respectivas diluciones
Mtodo de Bradford
- Tomar 1 mL de cada muestra y aadir a cada tubo 1 ml del Reactivo de Bradford. Mezclar por inversin.
- Incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente.
- Traspasar el contenido a una celda para medir la absorbancia. Mezclar por inversin y secar las paredes
con papel absorbente.
- Realizar la lectura a 595nm, (Calibrar con el blanco). Anotar la absorbancia en el formato presentado en
la Tabla N1.
- Obtener la ecuacin de la recta de regresin.
__------------------------------------------------------Procedimiento Frotis fijado:
A.- Colocar una pequea gota de agua en el centro del portaobjeto limpio.
B.- Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo
bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua.
C.- Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede
bastante extendida para facilitar el secado.
D.-Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya
que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de
siembra, directamente sobre el portaobjetos.
E.-Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el portaobjetos a la llama
del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el portaobjeto pues
las clulas pueden deformarse o romperse.
-------------------------------------------------5.2 Tincin simple:

I.- Coloque la lmina del paso anterior sobre la bandeja de coloracin.

II.- Cubra totalmente el extendido con el colorante. Aplique a un extendido un solo colorante. Deje actuar
as: Azul de metileno por 5 min o fucsina por 30 s.
III.- Transcurrido el tiempo necesario, lave las placas con agua, escurra y deje secar al ambiente.
IV.- Deje escurrir las placas sobre una toalla de papel.
V.- Observe al microscopio y haga esquemas de forma y distribucin.
5.3 Tincin de Gram:
1.- Cubrir la preparacin con cristal violeta o violeta de genciana durante 1 minuto.
2.- Decantar el colorante y lavar suavemente con agua.
3.-Cubrir con lugol por 1 minuto lavar suavemente con agua.
4.-Decolorar con alcohol-acetona. Hasta que la preparacin deje de perder color (30 segundos).
5.- Cubrir con fucsina o safranina por 1 minuto.
6.- Remover suavemente el exceso con agua corriente.
7.- Drenar el frotis y secarlo al aire en posicin vertical o subvente con papel filtro.
8.- Limpiar el reverso.
9.- Examinar al microscopio.
-----esterilizacin y siembra