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USUMACINTA
DIVISIN:
Procesos alimentarios, biotecnolgicos y paramdico.
CARRERA:
TSU-Qumica rea Biotecnologa.
ASIGNATURA:
Biologa Molecular II
UNIDAD:
Marcadores Genticos
REPORTE DE PRCTICA
ALUMNOS:
Nicols Bernab Reyes Peralta.
MAESTRO:
M.C. Manuela del Jess Cambranes Chi
5to CUATRIMESTRE
INTRODUCCIN
La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas en primer lugar tienen
que romperse la membrana plasmtica de la clula eucariota para poder acceder
al ncleo de la clula. En el caso de los vegetales tambin habr que romper la
pared celular. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para
dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan
degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.
La extraccin consiste en el aislamiento y purificacin de molculas de ADN y se
basa en las caractersticas fisicoqumicas de la molcula. El ADN est constituido
por dos cadenas de nucletidos unidas entre s formando una doble hlice. Los
nucletidos estn integrados por un azcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una
base nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina). La unin de los nucletidos
ocurre entre el grupo fosfato y el azcar, mediante enlaces fosfodister, dando
lugar al esqueleto de la molcula. Las bases de cadenas opuestas se unen
mediante puentes de hidrgeno y mantienen estable la estructura helicoida.
A lo largo del tiempo se han diseado distintos protocolos con la finalidad de
obtener una cantidad y calidad de ADN adecuados, as como garantizar la
eliminacin de inhibidores potenciales que dificulten el tratamiento posterior de la
molcula. Los mtodos tradicionales, desarrollados en los aos 50, utilizan
solventes orgnicos para separar a las protenas del ADN y, una vez suspendido
en la fase acuosa, aislarlo por precipitacin con etanol. Estos mtodos requieren
preparar soluciones y la extraccin puede tomar desde unas horas hasta varios
das por los numerosos pasos que deben realizarse. En general, los protocolos
tradicionales consisten de cinco etapas principales: homogeneizacin del tejido,
lisis celular, separacin de protenas y lpidos, precipitacin y redisolucin del
ADN.
OBJETIVO
Que el alumno realice la extraccin correcta del ADN para su posterior lectura.
MATERIALES
Para realizar la prctica se necesitaron los siguientes materiales, reactivos y
equipos.
Reactivos
Buffer
de
CTAB
Cloroformo
Equipos
extraccin Bao Mara
Centrifuga
Alcohol isoamlico
Isoprapanol
Etanol 80%
Uv-visible
H2O MQ
Agarosa
Agua destilada (esteril)
Materiales
Tubo falcon
Puntillas
amarillas,
azules
y
blancas
(estriles)
Micropipeta
Tubo eppendorf
Mortero
con
pistilo
(esteril)
Varilla de vidrio
Hoja de maguey
260 NM
0.125
280 NM
0.151
DNA
Clculos que se realzan para determinar la calidad del ADN
Factor de dilucin: volumen + total de la celda
v. de la muestra
999: 1000 l = 1 l
1000 l
Concentracin DNA= (factor de dilucin) (lectura 260 nm)
20
260 nm
280 nm
999 nm (1000 ul) (0.125 nm) = 6.25 ug/ul
(1000 ul) (0.151 nm) = 7.55 ug/ul
20
20
Calidad del DNA
Dividir ondas de 260 nm/ 280 nm
0.125nm /0.151 nm = 0.827 nm.
ANEXOS
CONCLUSIN
El resultado obtenido de la calidad del DNA es algo buena, debido a que hubo una
probabilidad de contaminacin al momento de realizar la prueba y con los
resultados mostrados con anterioridad pude darme cuenta que de acuerdo a los
resultados que se muestran en la prctica esta fuera de lo normal.
Es muy importante saber el objetivo del porque realizamos todo esto en el
laboratorio donde interactuamos con algo muy importante ya que el ADN lo
contemos todos los seres vivos y a partir de este podemos saber mucho de lo que
en si somos, porque as nos percatamos de saber cmo nuestro material gentico
es expresado teniendo ms rasgos de nuestros padre o tal vez de nuestra madre,
en si es muy importante porque a partir de estos estudios que nosotros como
biotecnologos en formacin podemos realizar cosas con el ADN ya sea creando
un fruto con el mejor el color, olor, sabor o personas con mejores rasgos, color de
piel, ojos, etc.
BIBLIOGRAFA
2015,
de
Universidad
Politecnica
Sitio
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/extraccion.pdf
web: