PESQUISA DE ALTERAES GENTICAS NO GENE

CDKN2A EM PACIENTES COM RETINOBLASTOMA

Pesquisa de Alteraes Genticas no gene

CDK2A
em
Pacientes
com
Retinoblastoma
Vanessa dos Santos Mendona Silva (IC), Dr Adriana Helena de Oliveira Reis (Orientadora)
Departamento de Gentica Instituto Nacional do Cncer (INCA)
Rio de Janeiro, RJ
I. INTRODUO
O retinoblastoma um tumor ocular maligno que se apresenta, geralmente, no primeiro ou segundo ano de vida, sendo este o tumor
intraocular mais comum na infncia. As manifestaes fenotpicas mais frequentes so a leucocoria (presente em 60% dos casos),
que corresponde a um reflexo pupilar branco, notado durante o flash de fotografias, e o estrabismo. A sua ocorrncia pode ser
na forma espordica, quando causada por mutaes somticas no hereditrias (60% dos casos) ou na forma hereditria (40% dos
casos), quando se deve a mutaes germinativas nos progenitores ou mutao ps-zigtica. Ambas as formas so causadas por
mutaes no gene RB1, o qual codifica uma fosfoprotena nuclear que, por interagir com fatores de transcrio e outras protenas
nucleares, atua na regulao do ciclo celular, apoptose e diferenciao.
Como descrito por Robbins & Cotran em 2008, a perda do controle celular central para a transformao maligna e em geral pelo
menos um dos quatro genes reguladores-chave do ciclo celular (CDKN2A, ciclina D, CDK4 e RB1) apresenta-se alterado na grande
maioria de cnceres. O CDKN2A, foco deste estudo, um gene encontrado na regio 9p21, que codifica duas protenas envolvidas
com o ciclo celular (p16 e p14) atravs de processamento alternativo. A P16 age como supressor tumoral ao inibir CDK4 e CDK6,
responsveis pela fosforilao de pRb e a P14 que est relacionada a via da TP53. Cerca de 50% dos cnceres humanos esto
relacionados mutaes no gene TP53 e acredita-se que na segunda metade destes a via da TP53 esteja comprometida por outros
mecanismos. A p14 age ao inibir a MDM2, agindo contra uma degradao antecipada da p53, o que impediria a interrupo do ciclo
celular bem como a transcrio de genes de reparo. O gene MDM2 um regulador negativo de p53 que age principalmente
promovendo sua ubiquitinao (funciona como ubiquitina ligase) e ento reconhecimento por proteossomas para degradao .

Muitas das alteraes encontradas so descritas na literatura relacionadas a outros tipos de cncer e a demais patologias como mostra a tabela IV.

Vanessa

V. CONCLUSO
A presena de um polimorfismo pode implicar em mudanas na sequncia correspondente a uma protena , levando a alteraes no gentipo (sequncia de
bases) e podendo afetar ou no o fentipo de um indivduo. Ainda no existem estudos sobre o gene CDKN2A em retinoblastoma por isso o resultado
possibilitar um maior conhecimento acerca das bases genticas que causam a doena, sendo essencial para a clnica dos pacientes.
A prxima etapa do projeto consiste no sequenciamento do o exon 1 (T2-p14/arf) dos pacientes e na coleta de dados clnicos para que seja feita anlises de
risco, interao gnica e sobrevida associada aos SNPs. Para tais anlises ser realizado tambm o sequenciamento dos exons 1 (T2-p14/arf), 1 (T1- p16) e 2
de 100 indivduos controles como j realizado para o exon 3.

Fonte: Acessado em 20 de abr. 2015. Disponvel em: http://what-when-how.com/acp-medicine/molecular-genetics-of-cancer-part-2/

II. OBJETIVOS
Pesquisar polimorfismos e mutaes no gene CDKN2A em DNA obtido a partir de sangue perifrico de pacientes com
retinoblastoma e indivduos no portadores de cncer (controles).
Relacionar as alteraes encontradas com os dados clnicos dos pacientes.

III. MATERIAIS E MTODOS

A amostra composta por 114 pacientes de retinoblastoma acompanhados pelo servio de aconselhamento gentico do INCA no
perodo de 2001 a 2014. O DNA foi extrado a partir de amostras de sangue perifrico atravs do mtodo de extrao salina e a
amplificao dos fragmentos de interesse ser realizada atravs do mtodo de PCR (Reao em Cadeia da Polimerase).
Posteriormente, os produtos de PCR sero purificados e ento sequenciados com o Kit BigDye Terminator v3.1 cycle sequencing
(Applied Biosystems) e a partir das alteraes encontradas sero realizadas anlises de risco, interao gnica e sobrevida.

IV. RESULTADOS PARCIAIS E DISCUSSO

As alteraes encontradas atravs do sequenciamento das amostras so Polimorfismos de Nucleotdeo nico (Single Nucleotide
Polimorphism - SNP), que consistem na substituio de um nico nucleotdeo em determinada regio genmica.. Abaixo a tabela I
apresenta os SNPs encontrados aps anlise do eletroferograma dos xons 1 (T1- P16) e 2 e a frequncia deste nos pacientes
com Retinoblastoma.

Na Tabela II encontram-se os resultados obtidos atravs da anlise do eletroferograma do exon 3 dos pacientes e tambm da
populao controle.