UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per. DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGA MDICA
REA DE RADIOLOGA

Curso de Bioqumica
Informe de Laboratorio N 1
ESPECTROFOTOMETRIA - METODO GRAFICO ANALITICO DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE UNA MUESTRA PROBLEMA
Grupo A1
Mesa N 3
Alumnos:

Araucano Huamn Yhudith Antonieta

Campos Lpez Julio Csar

Profesor Responsable:

Marco Antonio Nez Fonseca

Profesor de mesa:

Mg. Gladys Lpez Romero

241 de agosto
2016

INTRODUCCIN

Este

informe

de

bioqumica

nos

permite

explicar

en

que

consta

la

espectrofotometra ya que es el mtodo mas usado en las investigaciones, nos

permite calcular la absorbancia o transmitancia en un sistema qumica en funcin
de la longitud de onda.
Adems podemos determinar el factor de calibracin de una solucin estndar
usando varias concentraciones conocidas y secuenciales para luego construir un
grafico en un sistema de coordenadas usando papel milimetrado para mayor
aproximacin teniendo en cuenta que este mtodo es solamente nos da valores
aproximados en comparacin con el mtodo analtico que se relaciona con la
cantidad de una sustancia con su determinada absorbancia.

OBJETIVOS

Nuestro objetivo es comprender en que consiste la espectrofotometra, para as

posteriormente calcular las concentracin segn los distintos mtodos, tanto
analtica como grficamente y comparar resultados para llegar a una conclusin
aproximada y

saber el porque de la refraccin de la luz implicada en la

espectrofotometra.

PROCEDIMIENTOS

PROCEDIMIENTOS DURANTE LA PRCTICA:

PASO 1:
Primero tener disponible en la mesa todos los materiales a
usar en nuestros procedimientos como: KMnO4 y H2O
Destilada, tambin tenemos 5 tubos de ensayo, 1 de ellos es
para la muestra problema.
PASO 2:
Tener en cuenta que cada tubo de ensayo debe ser rotulado
como 1, 2 ,3 y 4 respectivamente con un plumn indeleble,
para que cuando sean llevados al espectrofotmetro no se
borren fcilmente.
PASO 3:
En los 4 primeros tubos de ensayo administramos a cada uno 1ml, 2ml, 3ml y 4ml
de KMnO4 respectivamente con una pipeta.
PASO 4:
Luego respectivamente se agrega 9, 8, 7 y 6 medidas en
mililitros de H2O destilada y se diluye con el permanganato
de potasio (KMnO4). Cada procedimiento con debido cuidado
y con la posible exactitud en cuanto a las medidas.
PASO 5:
Llevamos las primeras 4 muestras al espectrofotmetro el
cual es calibrado en 0,00 con un poco de agua destilada.
PASO 6:
Para un mejor resultado el profesor limpia con H2O destilada
unas cubetas especiales hechas de cuarzo especiales para el espectrofotmetro
el cual debe estar lo ms transparente posible para que solo pueda pasar el rayo

de luz a travs de ese par de caras, luego llena las 4 cubetas con las
concentraciones diluidas de nuestros tubos de ensayo.
PASO 7:
Una vez ingresada las concentraciones, se programa el espectrofotmetro a 3
diferentes longitudes de onda (=425nm, =525nm y =625nm).

PASO 8:
El profesor nos da las absorbancias de cada muestra (1, 2, 3 y 4) a las 3
longitudes de onda y con esas absorbancias se percibe que las absorbancias a la
longitud de onda =525nm es la ms estable y es La Longitud de Onda ptima.
Al saber que la longitud de onda ptima es =525nm y sus absorbancias ya
podemos conocer el factor de calibracin de cada una de las muestras.

Fc = Concentracin Standard / Absorbancia del Standard

Fc1 = 1ml KMnO4/0.111 = 9.009
Fc2 = 2/0.256 = 7.81 X

Se excluye porque se aleja de los dems factores de concentracin

Fc3 = 3/0.327 = 9.17

Fc4 = 4/0.481 = 8.31

PASO 9:
Luego regresamos a nuestra mesa y preparamos nuestra Muestra Problema con
1ml de KMnO4 y vamos administrando H2O destilada poco a poco comparndola
con la muestra 1 y 3. Al final administramos 6 medidas de H2O destilada.

PASO 10:
Al igual que los otros llevamos nuestra Muestra Problema al espectrofotmetro y
nos sale una absorbancia de 0.398.
PASO 11:
Luego promediamos los otros 3 Factores de concentracin restantes y el
resultado es 8.829 que vendra a ser el Factor de Calibracin Promedio.
PASO 12:
Ahora con estos resultados ya podemos encontrar la Concentracin de la Muestra
Problema Analtica:

[MP]A = Abs MP x Fc x Dilucin

[MP]A = 0.398 x 8.829 mg/dL x 6
[MP]A = 21.08
PASO 13:
Finalmente se halla el valor de la concentracin de la muestra problema grfica:
[MP]G = (3.40)6
[MP]G =20.4

En la hoja milimetrada se procede a graficar los valores de absorbancia, utilizando

el valor ms optimo, que sera calculando la absorbancia en funcin a la longitud
de onda igual a 525 nm.

RESULTADOS

Los datos obtenidos de nuestra mesa y de las dems, al final de la prctica son:

Abs

Abs

Abs

Abs

M1

0.108

0.240

0.358

M2

0.110

0.228

M3

0.111

M4

Fc

dMP

0.436

8.55

1/10

24.19

0.347

0.471

8.749

1/10

16.71

0.256

0.327

0.481

8.829

1/6

0.108

0.290

0.349

0.488

8.476

1/20

23.27

M5

0.129

0.238

0.371

0.508

8.092

1/20

23.7

M6

0.107

0.239

0.364

0.481

8.30

1/15

29.13

M7

0.1070

0.237

0.365

0.491

8.28

1/10

[MP]G

20.4

25.1

[MP]A

21.8

24.67

INTERPRETACIN DE RESULTADOS
La tabla refleja los distintos valores de absorbancia de cada mesa como resultado de la
lectura del espectrofotmetro dio de acuerdo a la longitud de onda ptima.
Adems se incluye el factor de calibracin promedio respectivamente tras ello se
compara la muestra problema (con 6 ml de agua destilada) entre las muestras 1 y 3, de
ello se concluye que la dilucin de la muestra problema es 1/6.
Para interpretar los resultados de concentracin de aproximacin de la muestra problema
segn el mtodo grfico y analtico. Segn el mtodo grfico, la concentracin se
determina multiplicando la absorbancia por la disolucin; teniendo en cuenta que la
absorbancia es una aproximado.
Y segn el mtodo analtico, los resultados vendran a ser la multiplicacin de la dilucin
por la absorbancia y por el promedio del factor de calibracin. Sabiendo que la
absorbancia de la muestra problema determinada por el espectrofotmetro es 0.398.

DISCUSIN

La discusin sera porque hay los resultados que se alejan del valor promedio.
Creemos que el agregado de la solucin no se midi con exactitud, y ello nos
lleva a excluirlo, tanto la mesa 1 y 6 porque los valores no estn dentro del valor
promedio que debera de ser.
Pues se lleg a considerar adems que el mejor resultado aproximado estara
entre 24.19 y 24.67 de acuerdo a la tabla de resultados finales.
CONCLUSIONES
Podemos concluir que para poder obtener un buen resultado es necesario tener una
muestra problema para as comparar a cual de las otras 4 soluciones se asemejan.
Adems recordar que la muestra problema grfica es un aproximado, ms no exacto; sin
embargo calculando la muestra problema analtica obtendremos un valor de
concentracin ms aceptable.