LABORATORIO MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS

PRCTICA DE LABORATORIO
Recuento de Estafilococos coagulasa positiva

1. Definicin
La presencia de Staphylococcus aureus en un alimento se interpreta como
indicativo de contaminacin a partir de la piel, boca y fosas nasales de los
manipuladores de alimentos, material, equipos sucios y materias primas de
origen animal contaminadas.
Es una especie muy sensible a la accin del calor y los desinfectantes. Su
presencia o la de sus toxinas en los alimentos es signo evidente de falta de
higiene. Las intoxicaciones estafilocccicas son causadas por la ingestin
de alimentos que contienen una de las enterotoxinas producidas por el
Staphylococcus aureus en el alimento. Puede ocurrir que no se detecte
Staphylococcus aureus en un alimento, que el nmero detectado sea
pequeo y que, sin embargo, exista cantidad detectable suficiente de
enterotoxina. En este caso los microorganismos que originaron la toxina
han ido descendiendo en nmero, incluso desapareciendo, mientras que la
toxina, por su mayor resistencia, permanece en el alimento.
2. Materiales
- Pipetas estriles de 1 ml
- Cajas de Petri
3. Medios de cultivo
Agua peptonada
Agar Baird Parker
Caldo BHI
Plasma de conejo
4. Reactivos
- Frascos de dilucin con 90 ml de agua peptonada
- Tubos de 9 ml de agua peptonada
5. Equipos
- Incubadora de 35 2 C
- Balanza
- Contador de colonias
- Pipeteador
6. Procedimiento
- Pesar 10 gramos de alimento en 90 ml de agua peptonada, realizar dos
diluciones segn la contaminacin del alimento.
- Sembrar 0,1 ml de cada dilucin en la superficie de una caja de agar
Baird Parker y esparcir cuidadosamente por todo la caja con suavidad
utilizando una varilla o rastrillo de Drigalski
- Permita que el inoculo sea absorbido por el medio
- Invierta e incube la caja a 35C por 24 a 48 horas
- Realice la lectura de las colonias caractersticas (Las colonias tpicas son
negras o grises, brillantes redondas, de borde lisos, hmedas
y
convexas (de 1mm a 1,5mm de dimetro despus de 24h de incubacin
y 1,5mm a 2,5mm de dimetro despus de 48h de incubacin) rodeadas
por una zona clara. Despus de por lo menos 24h de incubacin puede

LABORATORIO MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS

PRCTICA DE LABORATORIO
Recuento de Estafilococos coagulasa positiva

aparecer en esta zona clara, un halo opalescente, en contacto con las

colonias.)
De la superficie de cada colonia seleccionada, se remueve el inoculo con
un asa estril y se transfiere a un tubo de BHI. Se incuba a 35C por 24
2 horas.
Posterior a la incubacin se adiciona 0,1 ml de cada cultivo a 0,3 ml de
plasma de conejo en tubos o frascos estriles y se incuba a 35C, se
inclina el tubo, se examina el coagulo del plasma despus de 4 a 6 horas
de incubacin, y si la prueba es negativa, se reexaminan a las 24 horas
de incubacin. Se considerara la prueba coagulasa positiva si el volumen
del coagulo ocupa desde un cuarto del volumen original del liquido.
Como control negativo, para cada lote de plasma se adicionan 0,1 ml de
caldo BHI a la cantidad recomendada de plasma de conejo y se incuba
sin inoculacin. Para validar la prueba, el plasma de control no debe
mostrar ningn signo de coagulacin.
7. Expresin de resultados
N=

C
( n1 + 0.1 n2 ) x d

Donde:
C: es la suma de colonias contadas en todas las cajas retenidas
n1: es el nmero de cajas retenidas en la primera dilucin
n2: es el nmero de cajas retenidas en la segunda dilucin
d: es el factor de dilucin correspondiente a la primera dilucin
Se redondea el resultado obtenido a dos cifras significativas
Si no hay colonias en las cajas debe reportarse como < 100 UFC/ ml o g segn
corresponda