PRCTICAS DE ENZIMAS: ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE

LA ALFA-AMILASA SALIVAL
Introduccin:
La saliva es una secrecin que contiene entre otras cosas, mucoprotenas y alfa-amilasa. Estas
ltimas son las encargadas de la digestin del almidn, sustancia de reserva mayoritaria de las
plantas y fuente muy importante de carbohidratos para los animales.
Uno de los mtodos ms importantes para conocer el mecanismo de una enzima, es mediante el
estudio y caracterizacin de su cintica, es decir, el estudio de las velocidades de reaccin y la
forma en que cambian en respuesta a cambios en los parmetros experimentales como la
temperatura o la concentracin de sustrato. As, esta prctica tiene por objeto la determinacin
experimental de la cintica de la alfa-amilasa secretada en la saliva humana.

Objetivos:

Familiarizarse con las propiedades de los enzimas y observar la actividad de la alfaamilasa salival.
Relacionar los resultados obtenidos con la cintica de las reacciones enzimticas.
Entender la aplicacin del mtodo cientfico en al resolucin de problemas.

Material y recursos necesarios:

Micropipeta de 200 a 1000 microlitros.
Tubos de ensayo
Vaso de precipitados
Espectrofotmetro.
Celdas para espectrofotmetro. (Por favor mucho cuidado con ella que son caras!)
Cronmetro.
Reactivos.
Lugol: 1 gr de yodo + 2 gr. de yoduro de potasio disueltos en 300 ml. de agua destilada
y filtrados.
Suspensin de almidn (almidn soluble Panreac): 100 mg /ml, 50 mg/ml, 25 mg/ml, 10 mg/ml
y 5 mg/ml.

Procedimiento:
1. Preparar una disolucin de 100mg/ml de almidn soluble y llena 5 tubos, uno con esta, y los
dems, realizando en cada uno las diluciones siguientes (50 mg/ml, 25 mg/ml, 10 mg/ml y 5
mg/ml) a partir de la primera disolucin. No olvides rotular los tubos.
2. Obtener por cada equipo 1 ml de saliva y colocarla en un tubo de ensayo rotulado. Cuando se
tome la alcuota de saliva debe tomarse del fondo del tubo de forma que no tenga espuma.
5. Preparar la mezcla de reaccin dentro de un tubo, agitar, y lo ms rpido posible colocarla en
la cubeta del espectrofotmetro. Las mezclas de reaccin se prepararn de acuerdo a la tabla que
se presenta a continuacin.

7. Para la lectura de cada tubo se procede de la siguiente manera:

PRCTICAS DE ENZIMAS: ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA DE

LA ALFA-AMILASA SALIVAL
Con el espectrofotmetro ajustado a 660 nm (o 505 nm), introducir la cubeta en el
espectrofotmetro, tomar la lectura inmediatamente (esto representa el tiempo cero) y despus
medir cada 30 segundos hasta completar 3 minutos por lo que de cada tubo se tendrn las
siguientes lecturas: 0, 30, 60, 90, 120 y 180 segundos.

Cuestiones para los alumnos:

- Buscad informacin sobre el enzima alfa-amilasa salival: Qu reaccin cataliza?Dnde se
encuentra? Por qu es tan importante?
- Qu factores creis que pueden influir en la actividad de la alfa-amilasa? Emitid una hiptesis
sobre la influencia de uno de esos factores sobre la actividad enzimtica de la catalasa Cul es
la variable dependiente? Y la independiente? Cmo se podra disear un experimento similar al
anterior pero que permita comprobar la hiptesis que has emitido. Para ello tened en cuenta que
no debis modificar ms de una variable independiente en cada experimento.
- Calcula la concentracin de almidn final en cada mezcla de reaccin.
Sabiendo que Abs= cte. [ ] y conociendo la Abs a tiempo 0 para cada muestra y la concentracin
de almidn a la que corresponde, calcula todos las dems concentraciones de almidn.
- Elabora un informe sobre los resultados de tu investigacin en el que se reflejen los siguientes
apartados:
a) Problema a investigar
b) Hiptesis planteadas (una o varias)
c) Diseo experimental realizado que incluya material y mtodos
d) Resultados obtenidos (organzalos en tablas y grficas, expresa la velocidad de reaccin en
mg de producto/min)
e) Conclusiones, comenta los resultados y relacinalos con los visto en clase sobre las enzimas.
Este informe puede tener formato de presentacin, vdeo, animacin, artculo de divulgacin,
pster cientfico, etc.