Productos naturales- Anlisis fitoqumico preliminar

Parte II.
Muestras para el anlisis:
Cada volumen de los extractos calculados I, II y III (Diagrama de flujo 1) se evaporan en capsulas de
porcelana, sobre un bao de mara y los residuos obtenidos son procesados como se indica en los diagramas 2 y
3**. El residuo III se lleva a la mitad del volumen.
**este procedimiento puede cambiar si se utiliza el rotaevaporador

Residuo I.
Anlisis preliminares de alcaloides.
El residuo I se trata con ter de petrleo para extraer grasas y otras sustancias poco polares (diagrama 2), se le
agrega dos veces 5mL de HCl al 5%. Se calienta a 60C, se agita y se deja enfriar. Luego se filtra hasta obtener
un filtrado perfectamente transparente. De esta solucin se toman alcuotas de 1,0 mL y cada una se le aaden 2
gotas de reactivos para alcaloides: Drangerdorf, Mayer, Valser, Wagner y Schleiber. En todos los casos se
obtienen precipitados de diferentes coloraciones, por ejemplo Dragendorf da una coloracin anaranjada-marrn.
Residuo II.
El residuo 2 se extrae dos veces con ter de petrleo ( 5 mLx2) y se filtra. La solucin etrea se guarda para el
anlisis de carotenoides, esteroides y triterpenoides.
El residuo se extrae dos veces con 4 mL de una mezcla etanol /agua 1/7 a 60C. La solucin etanlica se divide
en tres fracciones para el anlisis de diferentes grupos de metabolitos y el residuo final se descarta (Diagrama 2)
Extracto Etanlico
1) Anlisis de flavonoides
a) Reaccin de Shinoda. En un tubo de ensayo que contiene 0,5 g de magnesio en polvo agregar 0,5 mL de
solucin A y cido clorhdrico concentrado hasta que termine el desprendimiento de hidrgeno. Observar durante
10 min y anotar el cambio de color. La formacin de una coloracin rosada, rojo o violeta esprueba positiva para
sustancias que posean e sun estructura el ncleo de benzopirano (flavonas, flavonoles, flavononas, etc)
b) Reaccin de Rosenheim. Transferir 0,5ml de extracto etanlico, a un tubo de ensayo, agregar 0,5 mL de de HCl
concentrado y colocar el tubo en el bao de mara hirviendo durante 10 a15 min. Enfriar y extraer con 0,4 ml de
alcohol amlico. Una coloracin roja en la fase amlica es positiva para antocianidinas.
b) Reaccin de leucoantocianidinas. Transferir 0,5 ml de solucin etanlica, a un tubo de ensayo, agregar 1,0 mL
de HCl 10% y colocar el tubo en el bao de mara hirviendo durante 10 a15 min. Una coloracin roja es positiva
para leucoantocianidinas.
2) Anlisis de taninos.
a) Reaccin de la gelatina-sal. A 0,5 mL de la solucin A adicionar un mL de solucin gelatina-sal, y observar la
formacin de un precipitado
b) Reaccin con tricloruro ferrco. A 0,5 mL de la solucin A adicionar una gota de FeCl3 al 1%. Los taninos
siempre forman soluciones verdes, azules o negras cuando se adiciona cloruro frrico.

c) Reaccin con acetato de plomo. A 0,5 mL de la solucin A adicionar 0,1 mL de solucin de acetato de plomo al
10%. Observar la formacin de turbidez o de un precipitado blanco.
3) Anlisis de naftoquinonas y/o antraquinonas.
a) Reaccin de Borntrager-Krauss. En un tubo de ensayo colocar 2 mL de la solucin A, agregar un mL de agua
oxigenada de 20 volumenes, un mL de cido sulfrico al 20%. Calentar la muestra en un bao de mara hirviendo
durante 10 a 15 min.Enfriar y extraer con embudo de decantacin con 3 mL. de benceno. Luego se agitan 1 mL
de la capa bencnica con un mL de una solucin de NaOH al 5%, que contiene 2% de hidroxido de amonio. La
obtencin de una coloracin que va del rosado al rojo intenso indica la presencia de naftoquinonas y/o
antraquinonas.
b) Comportamiento ante cidos y donador de electrones. A 0,5 mL de extracto etanlico agregar zinc en polvo y
algunas gotas de cido clorhdrico concentrado. Observar la coloracin amarilla, Repetir la prueba con zinc en
polvo y hidroxido de sodio al 40%.
c)Rodamina y amoniaco. Una gota de extracto etanlico se mezcla com una solucin saturada de rodamina y
otra en las mismas condiciones com amonaco. Observar coloraciones verde, azul y violeta.
d) Reaccin con hidrosulfito de sodio. A 0,2 mL de extracto etanlico agregar una gota de hidrxido de sodio 5N y
0,1g. de hidrosulfito de sodio. Calentar y observar coloracin rojo intensa
4) anlisis de saponinas.
a) Formacin de espuma. A un mL de la solucin A agregar 5 mL de agua y calentar (tubo de ensayo) durante 15
a 30 min. Luego agitar vigorosamente durante 5 minutos. La formacin de una espuma con apariencia de panal
de abeja, estable por 30 min. se considera prueba positiva.
b) Rosenthaler ; A 0,5 mL de extracto etanlico colocados en un tubo de ensayo agregar por las paredes 4 gotas
Del reactivo de VAO. Observar la formacin de una coloracin azul violeta en la interfase.
Extracto Etreo
1) Anlisis de triterpernos. Liebermann Buchard. Se toma 0,5 mL de extracto etreo y se le adiciona unas gotas
del reactivo de Liebermann Buchard (preparado con anhdrido actico cido sulfrico-cloroformo (10:1:25) v/v)
se agita durante uno a dos minutos. La aparicin de coloraciones rojas, rosa, prpura o azul se considera prueba
positiva.
2) Anlisis de esteroides. Se coloca el material seco pulverizado en una placa, aadiendo 0, 5 mL de anhdrido
actico y luego dos gotas de cido sulfrico. En casos positivos se observan coloraciones cambiantes, verdes,
azules, rosas o prpuras.
C) Dienos homonucleares. A o,5 mL de la solucin etrea agregar 0,1 mL de una solucin metablica de cido
tricloroactico al 40% y calentar a 90C. Observar una coloracin azul verdosa que se torna prpura.
3) Carotenoides
A 0,1 ml de cido sulfrico al 85% en un tubo de ensayo aadir lentamente por las paredes 0,5 mL de extracto
etreo. Observar la formacin de una coloracin azul en la interfase.

Residuo III
1) Cumarinas.
a) Hidroxamato frrco. A 0,5 mL de extracto etanlico adicionar una gota de una solucin metanlica 2N de
clorhidrato de hidroxilamina y una gota de hidrxido de potasio 2N en metanol. Calentar durante 2 min. enfriar, y
acidular con cido clorhdrico 0,5N y aadir una gota de cloruro frrico 1%. Observar una coloracin violacea.
b) Erlich. A 2 mL de extracto etanlico aadir 1 mL de reactivo de Erlich. Observar coloracin naranja.
c) Fluorescencia. 2ml de extracto etanlico se colocan en un tubo de ensayo y se ponen a hervir en un bao de
mara, colocando en la boca del tubo un papel de filtro impregnado con una solucin de NaOH 0,1N, durante 5 a
10 min. Observar la fluorescencia en el papel con una lmpara UV.
2) Sesquiterpenlactonas.
Hidroxamato ferrico. A 0,5 mL de extracto etanlico adicionar una gota de una solucin metanlica 2N de
clorhidrato de hidroxilamina y una gota de hidrxido de potasio 2N en metanol. Calentar durante 2 min. Enfriar y
acidular con cido clorhdrico 0,5N y aadir una gota de cloruro frrico 1%. Observar una coloracin violcea.
3) Glicsidos cardiotonicos.
a) Baljet. A un mL de extracto etanlico agregar 0,5mL de reactivo de Baljet. Observar coloracin naranja rojiza.
b) Tollens. A un mL de extracto etanlico aadir cuatro gotas de reactivo de Tollens, calentar suavemente.
Observar la formacin de un espejo de plata.
c) Antrona. A un mL de extracto etanlico colocados en un tubo de ensayo aadir por las paredes del tubo varias
gotas de reactivo de Antrona. Observar la coloracin azul-verdosa en la interfase
d) Molish. A un mL de extracto etanlico agregar 0,5mL de reactivo de Molish, verter la mezcla gota a gota por las
paredes de un tubo de ensayo que contenga un mL de cido sulfrico concentrado. Observar la formacin de una
coloracin violeta en la interfase.
Bibliografa.
Dominguez, X. A. Mtodos de investigacin fitoqumica. Mxico: Editorial Limusa.1973
Sanabria A. Anlisis fitoqumico preliminar. Bogot: Departamento de Farmacia, Universidad Nacional de
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~2007