Segn Simone Golunski ,Viviane Astolfi ,Naira Carniel ,Dbora de
Oliveira ,Marco Di Luccio ,Marcio A. Mazutti ,Helen Treichel en
artculo de investigacin Precipitacin con etanol y ultrafiltracin de inulinasas de Kluyveromyces marxianus nos menciona que: Las tcnicas ms utilizadas para la purificacin de protenas se basan en los procesos cromatogrficos que son muy especficos y que permiten la obtencin de fracciones muy puras. Sin embargo, estos procesos presentan bajos rendimientos, y son difciles de escalar en marcha, lo que aumenta los costos del producto final. Para la aplicacin en la industria de alimentos y bebidas, enzimas microbianas requieren un cierto grado de purificacin, sin embargo, los costes de separacin deben reducirse al mnimo para hacer que el uso de enzimas en el proceso de alimentos factible [5] . Para la minimizacin de costes es importante encontrar mtodos de procesamiento aguas abajo econmicos y eficaces. Segn Simone Golunski ,Viviane Astolfi ,Naira Carniel ,Dbora de Oliveira ,Marco Di Luccio ,Marcio A. Mazutti ,Helen Treichel en artculo de investigacin Precipitacin con etanol y ultrafiltracin de inulinasas de Kluyveromyces marxianus nos menciona que: Ensayo de protenas (mtodo estndar). Solucin de protena que contiene 10 a 100, la protena ug en un volumen de hasta 0,1 ml se pipetearon en 12 x 100 mm Tubos de ensayo. El volumen en el tubo de ensayo se ajust a 0,1 ml con tampn apropiado. Cinco mililitros de reactivo de protena se aadi a la tubo de ensayo y los contenidos mezclados ya sea por inversin o vrtex. Los absorbancia a 595 nm se midi despus de 2 min y antes de 1 h en 3 ml cubetas contra un blanco de reactivo preparado a partir de 0,1 ml de la apropiada tampn y 5 ml de reactivo de protena. El peso de la protena se represent en contra de la absorbancia correspondiente que resulta en una curva estndar utilizado para determinar la protena en muestras desconocidas. Segn Simone Golunski ,Viviane Astolfi ,Naira Carniel ,Dbora de Oliveira ,Marco Di Luccio ,Marcio A. Mazutti ,Helen Treichel en artculo de investigacin Precipitacin con etanol y ultrafiltracin de inulinasas de Kluyveromyces marxianus nos menciona que:
ENSAYO DE PROTENAS POR VINCULANCION DE COLORANTE
FIG. 1. Protenas de tinte modelo de respuesta de unin para
diversas protenas. La Figura 1 muestra los resultados de diversas protenas se ensay en el sistema como a las respuestas individuales. Hay una dispersin de puntos alrededor de la lnea trazada en el grfico. La dispersin se cree que es una funcin multifactico compuesto por las dificultades para determinar la exacta cantidad de protena presente en una muestra dada debido a la variacin de la extincin coeficientes en la literatura, los mtodos utilizados para determinar la exacta cantidad de protena utilizada en la medicin de los coeficientes de extincin, y algunos grado de variacin en la eficiencia de colorante de unin a protenas diferentes.
FIG. 2. Patrn de Respuesta obtenida de Lowry (1) en ensayos de
Protenas La Figura 2 muestra el patrn de respuesta obtenida de Lowry (1) ensayos de las mismas protenas. El grado de dispersin en respuesta de las protenas de Lowry (1) de ensayo es similar al que se muestra para el ensayo de fijacin de colorante que aqu se presenta. Los sensibilidad de la Lowry (1) mtodo es una absorbancia de 0,110 unidades de DO para la correspondi estndar 25 pg a 8 pg proteina ml de ensayo final volumen. Por clculo, a continuacin, el ensayo de unin de colorante es de aproximadamente cuatro veces ms sensible que el Lowry (1) de ensayo. El grado de dispersin alrededor del Lowry (1) parcela de ensayo tambin apunta a la dificultad de establecer un valor cuantitativo de una protena en soluciones estndar. Estabilidad de la protena-colorante de color compleja.
La Figura 3 muestra la tasa de formacin de protena-colorante complejo en
el sistema de ensayo y la estabilidad del complejo de color. La absorbancia se monitoriz a intervalos fijos 7.5 durante 2 min y luego a intervalos de 1 min para un perodo de 1 hr. Como se ve a partir del grfico, el desarrollo del color es esencialmente completo en 2 minutos, y replatos principales y estable o menos 4% por un perodo de 1 hora. Dado que la protenacolorante complejo tiene una tendencia a agregarse con el tiempo, hay una disminucin en color despus de este perodo de tiempo, simplemente por la eliminacin fsica de la protena-colorante complejo de la solucin. Si determinaciones son muy precisas requeridos, los investigadores deben tomar precauciones para leer la absorban muestras durante una de las partes ms planas de la curva de estabilidad del color ser- entre 5 y 20 min despus de la adicin del reactivo. Esto todava le da tiempo suficiente para leer un nmero relativamente grande de muestras
FIG. 3. La protena-colorante tasa de formacin de complejos y