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Unidad 4. Mtodos
espectrofotomtricos
Qumica analtica
Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos
ndice
Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos..2
Consideraciones especficas de la unidad2
Presentacin de la unidad...2
Propsito.....3
Competencia especfica...3
4.1 Espectrofotometra ....3
4.1.1. Espectrofotometra visible .....12
4.1.2. Espectrofotometra UV e IR..........17
4.1.3. Espectrofotometra de absorcin atmica...21
Actividades...24
Autorreflexiones...24
Cierre de la unidad..24
Para saber ms25
Fuentes de consulta25
Qumica analtica
Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos
Presentacin de la unidad
En las primeras tres unidades nos centramos en el estudio de los principales mtodos
volumtricos; sin embargo, de manera rutinaria estos anlisis se complementan con los
llamados mtodos instrumentales, los cuales ofrecen las ventajas de utilizar pequeas
cantidades de muestra, ser rpidos en la mayora de los casos y detectar cantidades
pequesimas de la sustancia a determinar.
En este caso nos enfocaremos en el anlisis espectrofotomtrico, que corresponde a uno
de los principales mtodos pticos, en el que se estudia la interaccin de las sustancias
con las radiaciones electromagnticas, especficamente las localizadas en las regiones
visible, infrarroja y ultravioleta.
Analizars la metodologa necesaria para determinar la concentracin de algunas
sustancias, las cuales obedecen a la ley de Lambert-Beer, por medio de la
espectrofotometra y sers capaz de resolver problemas a travs de procedimientos
grficos.
Qumica analtica
Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos
Propsito
En la presente unidad analizars los fundamentos de la
espectrofotometra en las regiones visible, ultravioleta (UV) e infrarroja, y
su aplicacin en la determinacin de concentraciones de analitos en
muestras problema.
Competencia especfica:
Emplea la absorcin de radiacin electromagntica para la
identificacin y cuantificacin de sustancias, mediante las tcnicas
espectrofotomtricas en la regin visible, UV e infrarroja.
4.1 Espectrofotometra
En los ltimos aos, la revolucin cientfica y tecnolgica ha planteado nuevos problemas,
y con ello, el desarrollo de nuevos mtodos de anlisis en los que se ponen en juego
todas las propiedades de la materia para su caracterizacin. De esta manera han surgido
una gran variedad de mtodos instrumentales, los cuales se basan en la interaccin
materia-energa y que requieren de un aparato para su realizacin. En este caso, la
medida puede referirse a la simple percepcin sensorial de una caracterstica, como la
formacin de un precipitado, la presencia de un color, etc., o a la cuantificacin de la
intensidad de dicha propiedad, con la ayuda de un aparato denominado instrumento
analtico (Harris, 2001).
Qumica analtica
Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos
Qumica analtica
Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos
Entre los mtodos de anlisis instrumental, los pticos tienen en la actualidad una amplia
gama de aplicaciones. Los mtodos pticos son aquellos que implican la medida de la
radiacin electromagntica emitida por la materia o que interacciona con ella.
La radiacin electromagntica est constituida por ondas que viajan por el espacio a gran
velocidad (c = velocidad de la luz).
Para analizar una onda, se deben considerar las siguientes propiedades (Hernndez &
Gonzlez, 2002):
Longitud de onda (): se refiere a la distancia entre dos puntos iguales de ondas
sucesivas. Las unidades utilizadas son el centmetro, angstrom, nanmetro y micrmetro.
1 angstrom () = 10-10 metros
1 nanmetro (nm) = 10-9 metros
1 micrmetro (m) = 10-6 metros
Frecuencia ( ): se refiere al nmero de ondas que pasan por un punto en una unidad de
tiempo. Su unidad es el segundo recproco (s1-) o hertz (Hz).
Nmero de onda (): es el inverso de la longitud de onda, su unidad es el cm-1.
La relacin que se establece entre la frecuencia y la longitud de onda es:
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; = =
= =
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Como podrs notar, la regin visible a la que corresponde la visin humana es apenas
una pequea porcin del espectro. Cada una de las radiaciones se diferencia de otra tan
slo en la energa (frecuencia) de sus fotones.
Los cientficos utilizan la interaccin de las radiaciones electromagnticas con la materia
para obtener informacin sobre una determinada sustancia. La muestra se estimula al
aplicar sobre ella energa en forma de calor, energa elctrica, luz, partculas o una
reaccin qumica (Skoog D. A., 2008).
Se dice que un analito se encuentra en su estado basal (estado de energa ms bajo)
antes de la aplicacin de un estmulo. Una vez que se imprime el estmulo, el analito
experimenta una transicin a un estado de mayor energa o estado excitado. Las
radiaciones emitidas al momento de que la especie regresa a su estado fundamental se
utilizan para obtener informacin del analito.
El paso de luz a travs de un medio transparente experimenta una absorcin parcial de la
misma, lo que causa una modificacin de su estado basal. Esta modificacin puede ser
causa de:
1. Transicin de un electrn a un nivel de energa superior.
2. Cambio en el modo de vibracin de la molcula.
3. Alteracin en su modo de rotacin.
Cada transicin requiere de una cantidad de energa definida.
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Supongamos que una radiacin se hace pasar a travs de una muestra de (b) cm de
espesor y que contiene una especie capaz de absorber radiacin, cuya concentracin es
(c). Esto trae como consecuencia que la intensidad se vea disminuida en su potencia, de
I0 I. La cantidad de luz que atraviesa la disolucin se conoce como transmitancia (T), la
cual se puede expresar de la siguiente manera:
= 10 =
=
En la que:
a = constante de proporcionalidad (absortividad)
b = espesor del medio (denominado celda)
c = concentracin molar
Cuando la concentracin esta expresada en moles por litro (M) y la trayectoria en cm, la
absortividad se denomina como coeficiente de absortividad molar ().
=
= coeficiente de absortividad o extincin molar.
b = espesor del medio.
c = concentracin molar.
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Esta expresin se conoce como ley de absorcin o ley de LambertBeer, la cual establece
que:
Cuando la radiacin monocromtica atraviesa un medio que contiene una sustancia
absorbente, la velocidad de disminucin de intensidad con la concentracin de la especie
absorbente, es directamente proporcional a la intensidad de la radiacin (Skoog D. A.,
2008).
La ley de Lambert-Beer es vlida para la mayora de las sustancias, siempre y cuando se
encuentren diluidas (0.01M).
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absorbida (nm)
380-420
420-440
440-470
470-500
500-520
520-550
550-580
580-620
620-680
680-780
Color absorbido
Violeta
Azul-violeta
Azul
Verde-azulado
Verde
Amarillo-verdoso
Amarillo
Anaranjado
Rojo
Prpura
Color observado
(complementario)
Amarilloverdoso
Amarillo
Anaranjado
Rojo
Prpura
Violeta
Azul-violeta
Azul
Verde-azulado
Verde
Por ello, cada uno de los analitos de acuerdo al color que presentan, absorben mejor la
luz en determinadas zonas del espectro visible.
La determinacin de la absorbancia se lleva a cabo, como mencionamos, en los
espectrofotmetros, los cuales de manera general operan de la siguiente manera:
El primer paso es seleccionar la longitud de onda que se va a utilizar en la determinacin.
Posteriormente, se determina la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) con el
cual se ajusta a cero el valor de absorbancia (A) y a 100% el de transmitancia (T); con ello
eliminamos la posible interferencia del disolvente. Enseguida se colocan las muestras
problema, una a una, para determinar su valor de absorbancia.
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En la grfica podemos apreciar que la mxima absorcin del metamizol es a 271 nm,
dando su mximo de absorbancia en este punto. De esta manera, es que se determina la
longitud de onda ptima para realizar un anlisis cuantitativo en la espectrofotometra
visible.
Ahora veamos cmo se realiza la determinacin de la concentracin de un analito a partir
de los datos de absorbancia o transmitancia, en un ejercicio prctico.
Supongamos que se quiere determinar la concentracin de paladio en una muestra de
agua. Para ello se realiz una curva de calibracin de la cual se obtuvieron los siguientes
datos:
Muestra
Blanco
1
2
3
4
5
Concentracin
(mg/l)
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
Absorbancia
Absorbancia real
0.075
0.225
0.275
0.375
0.470
0.550
0.000
0.015
0.200
0.300
0.395
0.475
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Observars que la absorbancia real se determina restando el valor del blanco a las
muestras. Con estos datos se construye la curva de calibracin resultando:
Absorbancia
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
0
0.1
0.2
0.3
0.4
Concentracin mg/l
0.5
0.6
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4.1.2. Espectrofotometra UV e IR
La regin del infrarrojo se localiza a frecuencias de 8x10-5 a 8x10-2 cm. Los fotones de la
radiacin infrarroja no tienen la energa suficiente para provocar transiciones electrnicas
pero pueden conseguir vibraciones de los enlaces de las molculas a analizar.
La energa requerida para lograr una transicin depende del tipo de tomos y del tipo de
enlace que presenten.
Podramos pensar que los tomos se encuentran estticos en una molcula, pero eso no
es cierto. Los tomos se mueven constantemente, vibran en torno a sus enlaces. Cuando
los tomos se acercan unos a otros, las fuerzas de repulsin se incrementan y por el
contario, al alejarse disminuyen. La absorcin de energa infrarroja trae como resultado un
aumento en la frecuencia de vibracin.
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Figura 13. Vibracin simtrica y asimtrica de los enlaces en la molcula del agua.
Existen otros modos vibracionales como los provocados por los cambios del ngulo de
enlace, denominada flexin. Lo puedes observar en la prxima figura.
Si la flexin tiene lugar en un mismo plano, se pueden presentar los siguientes modos:
Flexin simtrica en el plan (tijera): el ngulo de enlace aumenta o disminuye debido a
que los tomos se acercan o se alejan, haciendo un movimiento similar al abrir o cerrar
unas tijeras.
Flexin asimtrica en el plano (balanceo): el ngulo de enlace aumenta o disminuye
debido a que el tomo central se acerca a uno de los extremos y por lo tanto se aleja del
otro, provocando un balanceo.
Flexin simtrica fuera del plano (coleo): el ngulo de enlace aumenta o disminuye,
porque los tomos se acercan o se alejan entre ellos, pero fuera del plano.
Flexin asimtrica fuera del plano (torsin): el ngulo de enlace aumenta o disminuye
debido a que el tomo central se acerca a uno de los extremos y se aleja del otro; este
movimiento lo hace fuera del plano.
Tijera
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Una molcula absorbe luz infrarroja cuando la energa de los fotones es muy cercana a la
diferencia entre un estado vibracional y el siguiente. La absorcin de la energa requiere
que el enlace de la molcula presente un momento dipolar, para que la absorcin sea
ms intensa.
Las bandas de absorcin de casi todos los grupos funcionales orgnicos se localizan
entre los 4000 y 800 cm-1. Los espectros infrarrojos se presentan como grficas de
absorbancia frente a nmero de onda (Hernndez y Gonzlez, 2002).
El espectrofotmetro infrarrojo (IR) contiene una fuente de emisin, que regularmente es
una barra de material cermico cuya radiacin se divide en dos porciones: la primera que
atraviesa la celda que contiene la muestra; y la segunda, una celda que contiene slo el
disolvente empleado. El haz de la muestra se dirige a la rejilla de difraccin, dnde se
separa en las longitudes de onda que la integran y dan lugar al espectro IR.
En la siguiente tabla se muestran las bandas de absorcin caractersticas de algunos
grupos funcionales orgnicos.
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Por ejemplo, en los alcanos de cadena normal o con ramificaciones, se espera slo
encontrar estiramientos y deformaciones de los enlaces C-H y C-C. Los estiramientos
debidos a la interaccin C-H son muy estables y aparecen en entre los 3000 y 2840 cm-1,
como se muestra en la figura 16.
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En resumen, cada uno de los grupos funcionales tiene una seal caracterstica que
requiere del entrenamiento o experiencia del analista. Sin embargo, para fines de esta
asignatura es importante que visualices su importancia y aplicacin en tu campo
profesional.
Otra de las tcnicas de gran importancia en el anlisis qumico es la espectrofotometra
de absorcin atmica, la cual resulta de inters al realizar la cuantificacin de metales,
sobre todo contaminantes de algunos ecosistemas o recursos naturales.
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Estado excitado
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Actividades
La elaboracin de las actividades estar guiada por tu docente en lnea, mismo que
te indicar, a travs de la Planeacin didctica del docente en lnea, la dinmica que t
y tus compaeros (as) llevarn a cabo, as como los envos que tendrn que realizar.
Para el envo de tus trabajos usars la siguiente nomenclatura: BQAN_U4_A1_XXYZ,
donde BQAN corresponde a las siglas de la asignatura, U4 es la unidad de
conocimiento, A1 es el nmero de actividad, el cual debes sustituir considerando la
actividad que se realices, XX son las primeras letras de tu nombre, Y la primera letra de
tu apellido paterno y Z la primera letra de tu apellido materno.
Autorreflexiones
Para la parte de autorreflexiones debes responder las Preguntas de Autorreflexin
indicadas por tu docente en lnea y enviar tu archivo. Cabe recordar que esta actividad
tiene una ponderacin del 10% de tu evaluacin.
Para el envo de tu autorreflexin utiliza la siguiente nomenclatura:
BQAN_U4_ATR _XXYZ, donde BQAN corresponde a las siglas de la asignatura, U4 es
la unidad de conocimiento, XX son las primeras letras de tu nombre, y la primera letra
de tu apellido paterno y Z la primera letra de tu apellido materno.
Cierre de la unidad
En esta unidad analizamos la importancia que tienen los mtodos pticos, especialmente
los espectrofotomtricos para complementar los anlisis volumtricos de muestras
problema. Observamos las ventajas que presentan al trabajar con cantidades pequeas
de muestra, su gran sensibilidad, precisin y exactitud. As como la principal metodologa
para determinar la cantidad o caracterizacin de un analito en una muestra determinada.
Es importante hacer hincapi, en que en este curso slo se manejaron algunas
generalidades de estos mtodos, por lo que para su manejo ptimo se requiere
especializarse en cada uno de ellos. Sin embargo, la informacin recibida as como las
actividades planteadas te permitirn interpretar y realizar anlisis qumicos basados en
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Fuentes de consulta
Harris, D. C. (2001). Anlisis Qumico Cuantitativo. Espaa: Revert S.A.
Hernndez, L., Gonzlez, C. (2002). Introduccin al anlisis instrumental. Espaa: Ariel
S.A.
Skoog, D. A.; et al. (2005). Fundamentos de Qumica Analtica. Mxico: Thomson.
Skoog, D. A.; et al. (2008). Principios de anlisis instrumental. Mxico: CENGAGE
Learning.
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