TALLER

CONTAMINACIN MICROBIANA EN EL CULTIVO IN VITRO DE PLANTAS.

1. Qu problemas puede traer la contaminacin microbiana en los trabajos de
cultivo de tejidos vegetales? Qu problemas principales causa a los tejidos en
desarrollo?
En los cultivos vegetales ocasiona prdidas frecuentes de material vegetal, en
las zonas tropicales alcanza proporciones dado que el clima y ambiente son
propicios para el desarrollo y multiplicacin de microrganismos.
En los tejidos de desarrollo compiten los microrganismos por nutrientes del
medio, daos directos o indirectos por la colonizacin de sus tejidos o la
expulsin al medio de cultivo de metabolitos txicos. Reduciendo la
multiplicacin, inhibe el enraizamiento y muerte de la planta (cassells, 19911993).
2. Realice un cuadro comparativo entre microorganismo fitopatgeno y un
vitropatgeno.
fitopatgeno
Son bacterias

vitropatgeno
Hongos filamentosos

3. Qu se entiende por contaminacin endgena o latente? Cules son los

grupos y gneros de microorganismos ms asociados a este tipo de
contaminacin? Cul es la fuente de este tipo de contaminacin? Cmo se
controla en los trabajos de cultivo "in vitro"?
Contaminacin endgena es aquella en la que bacterias patgenas o no,
organismos fastidiosos, en la que los contaminantes fungosos no deben
encontrarse latentes en cultivos in vitro.
Los gneros asociados a esta contaminacin se encuentran: Micrococos,
Bacillus, Staphylococcus, Mycobacterium, Psuedomonas, Enterobacter,
Acinotobacter, Xanthomonas, Lactobacillus, Erwinia, Agrobacterium,
Corynebacterium. Especies Enterobacter aggomerans. (george, leifert, &
richard, 1988, 1994, 1995, 1996)
La fuente de esta contaminacin proviene de la zona basal y apical, amplia
distribucin en la naturaleza y algunas son patgenas del hombre y animales
Se controla con la aplicacin de mtodo turbidimetro, este es unas tcnicas
pticas tradicionales de medicin, con uso de detectores de luz que vara de
acuerdo con la configuracin del diseo en el instrumento. (MJ., 1996)

4. Cul es la contaminacin exgena? Cules son las diversas fuentes de

contaminantes exgenos? Relacione los tipos y gneros de microorganismos
con la fuente de contaminacin probable y con la forma y momento en que
aparecen. Explique cmo se controlan cada uno de los casos.
Contaminacin exgena es la que se introduce al laboratorio, fuentes de los
microorganismos que se encuentran en el ambiente, saprofitos o patgenos de
las plantas, microbiota del cuerpo humano, instrumentos de trabajo.
Encontrndose hongos filamentosos, gneros como Aspergillus, Cladosporium,
Penicillum, Fusarium, Alternaria y Neurospora. (enjalric y col, 1988, 1994,
1997)
Estas crecen superficialmente en el medio de cultivo de planta, alrededor
explante y dentro del medio, crecimiento sobre el tejido cuando esta
necrosado. Toman forma de pliegues, halos o rosetas.
Se controla en el caso de las bacterias con altas presiones osmticas, el PH,
hormonas como citoquininas que ejerce efecto bacteriosttico sobre ellas.
(tersi & col, 1988)
5. Qu importancia considera usted tiene detectar a tiempo un contaminante
en un proceso de propagacin masiva? Como puede ser detectado en etapas
tempranas del cultivo "in vitro"? Cul es la importancia de poder identificar al
menos el gnero del contaminante?
Es de gran relevancia detectar ya que nos permite trazar estrategias
adecuadas para el control de la contaminacin. Detectndose al aplicar el
mtodo de transferencia de fragmentos de material vegetal a medios de
cultivo bacteriolgicos que permite crecimiento de bacterias. Al igual el uso de
fragmentos de tejidos de savia o extractos de planta dado que taninos inhiben
el crecimiento de bacterias contaminantes. La identificacin del gnero
contaminante nos ayuda a determinar el modo en que actan, el mtodo para
la deteccin y control. (cassell, 1991)
6. Una vez que el material vegetal "in vitro" se encuentra contaminado, que
acciones se deben tomar? Cmo puede usted tratar el material vegetal
contaminado y que se requiera obligatoriamente "salvar" de la contaminacin?
Al contaminarse el material in vitro se emplean mtodos tradicionales
auxiliados segn el grupo microbiano, caso de las bacterias las claves
taxonmicas, sistemas automatizados, kit de diagnstico. En el caso de
microorganismos especficos se emplean anlisis de acidos grasos, PCE, RFLP,
AFLP.
Es indispensable al tratar el material contaminado estudiar las caractersticas
de la microbiota bajo condiciones especficas del pas, biofabrica o laboratorio
para disear mtodos de deteccin y control en funcin.

7. Disee un esquema o diagrama de flujo con los pasos bsicos que se deben
tener en cuenta para prevenir la aparicin de contaminantes en un laboratorio
de micropropagacin de bananos.

8. Todos los microorganismos que pueden desarrollarse en un frasco de cultivo

"in vitro" de tejidos vegetales se consideran contaminantes? Explique su
respuesta.
Son contaminantes estos microorganismos, pero estos microorganismos al
reducir su expresin en los medios de cultivos junto con el conocimiento e
identificacin pueden mejorar el enraizamiento. Las bacterias del gnero
Pseudomonas al usarc en vitroplantas de papa logran estimular crecimiento
de la planta y proteccin hacia otras contaminantes. Algunos plsmidos de
bacterias se pueden insertar en genes de plantas (alvarado, 1997)
9. Si en un lote de vitroplantas en fase de multiplicacin, usted encuentra gran
cantidad de frascos de cultivo contaminados por Staphylococcus sp.
a) A qu atribuira usted la contaminacin?
b) Cmo comprobara su suposicin?
c) Qu plan de accin desarrollara para disminuir esta contaminacin?
Explquelo.