Pharmacogn Mag . 2010 Jul-Sep; 6 (23): 242-247.

doi: 10.4103 / 0.973-1.296,66944

PMCID: PMC2950390

La actividad antimicrobiana de extractos de Tamarindus

indica L. hojas
Julio Csar Escalona-Arranz , Renato Pres-Roses , Imilci Urdaneta-Laffita , Miladis Isabel
Camacho-Pozo , 1 Jess Rodrguez-Amado ,y Irina Licea-Jimnez
Informacin sobre el autor notas Artculo licencia y derechos de informacin

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Abstracto
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INTRODUCCIN
Tamarindus indica L. o tamarindo, como comnmente se le conoce, es un rbol de
tamao mediano perteneciente a la Caesalpinaceae familia. Tamarindo se ha utilizado
durante siglos como una planta medicinal; sus frutos son la parte ms valiosa que a
menudo han sido reportados como curativo en varias farmacopeas. Sin embargo, otras
partes de la planta han sido menos estudiado. Las hojas tienen una actividad
hepatoprotectora probado asociado con la presencia de compuestos polihidroxilados,
con muchos de ellos de carcter flavonolic. [ 1 , 2 ] Las semillas y la corteza tambin
tienen propiedades medicinales.
Debido a su antimicrobiano, efectos antifngicos y antispticas, hojas de tamarindo
tienen un amplio uso etnobotnico en muchas reas de Amrica Latina como Mxico,
Puerto Rico y Trinidad y Tobago, y en otros continentes como Asia y frica. [ 3 - 6 ]
Dentro la poblacin cubana multitnica - muy estrechamente relacionado con otros
pases del Caribe como Puerto Rico, Trinidad y Tobago y Mxico, y con una gran
influencia de las culturas de frica y Asia - este informe farmacolgico se asocia slo
con el uso tradicional de la planta por los esclavos africanos para el tratamiento de
enfermedades infecciosas, principalmente, trastornos intestinales. [ 7 ] En la actualidad,
este uso no es ms restringido a unas pocas reas montaosas y por lo general no se
inform en los estudios etnobotnicos locales.
Es bien conocido que diferentes climtica, suelo y las condiciones de crecimiento puede
modificar cualitativamente y cuantitativamente la composicin qumica de la planta y
por lo tanto sus usos farmacolgicos. En el caso especfico de tamarindo, se encontr
una diferencia en la composicin qumica del aceite esencial de pulpa de fruta entre las
especies que crece en [Cuba 8 ] y la que crece en Egipto. [ 9 ]

En un trabajo reciente realizado por nuestro grupo de investigacin en las hojas, se

inform, por primera vez, un total de 13 aceites esenciales en los que el benzoato de
bencilo y limoneno son los principales compuestos, seguido de hexadecanol y
pentadecanol. [ 10 ] Es ampliamente aceptado que los aceites esenciales son uno de los
principales metabolitos secundarios de la planta participan en actividades
antimicrobianas y antispticas, en el que el aceite de tomillo es uno de los ms
significativos. [ 11 - 13 ]
Las hojas tambin presentan buenos niveles de protena, grasa, fibra y algunas
vitaminas como la tiamina, riboflavina, niacina, cido ascrbico y -caroteno.
[ 14 ] Polifenoles flavonoides son metabolitos y otros que han sido tambin encontradas
en las hojas de tamarindo; [ 15 ] estos compuestos han demostrado un registro como
agentes antimicrobianos en muchas otras plantas.
En estudios llevados a cabo en Nigeria, flavonoides y polifenoles en asociacin con
alcaloides, estaban vinculados a la actividad antimicrobiana de las hojas de tamarindo.
[ 16 ] La capacidad de los flavonoides y polifenoles que se extrae por el agua caliente y
en un mayor grado por soluciones hidroalcohlicas les da un papel importante en
muchos remedios tradicionales.
Teniendo en cuenta las observaciones antes mencionadas, con el propsito de nuestra
investigacin es encontrar una explicacin fitoqumico y microbiolgica de la
relativamente pobre uso de hojas de tamarindo en Cuba.
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MATERIALES Y MTODOS
Material vegetal
hojas de tamarindo se obtuvieron de una poblacin de tamarindo en Santiago de Cuba,
parte oriental de Cuba, y fueron previamente identificados por el Dr. Jorge Sierra
Calzado. Un ejemplar de muestra registradas como 052.216 se deposit en la seccin
docente de BSC herbario de la Facultad de Biologa de la Universidad de Oriente.
Preparacin de extractos de plantas
Decoccin era un mtodo tradicional seleccionado para preparar los extractos
medicinales. Se utiliz tanto fresco y el sol seca de las hojas. Las dosis empleadas
fueron 10 g de frmaco en 100 ml de agua como se describe en las farmacopeas, y un
extracto ms concentrado con una dosis de 30 g de frmaco en 100 ml de agua. En todos
los casos, se hizo el volumen a 100 ml con agua destilada al final de la
formulacin. Extractos fluidos se prepararon por el mtodo de percolacin, el uso de
etanol 30 y 70%. Tanto los extractos fluidos se obtuvieron de 30 g de hojas en polvo
secados al sol y se concentraron mediante presin reducida con temperaturas por debajo

de 50 C. Para el aceite esencial, se recogi 200 g de hojas frescas e inmediatamente

hydrodistilled durante 2 h en un "aparato de tipo Clevenger". Pure n se aadi hexano
para evitar la prdida de los aceites esenciales ms polares en el agua.
caracterizacin fitoqumica
Para todas las decocciones y extractos fluidos, se desarroll una cuantificacin
espectrofotomtrica de fenoles totales y flavonoides. El contenido de fenoles totales se
estim utilizando el reactivo de Folin-Ciocalteu. [ 17] En resumen, el extracto se
disolvi en agua y se aadi una alcuota de esta solucin a 2 ml de 2% de Na 2CO 3 , y
despus de 2 min, se aadi 1 ml de reactivo de Folin. Despus de 15 min, se midi la
absorbancia a 700 nm. El contenido total de fenol se expres como equivalentes de
cido tnico. El contenido en flavonoides se determin de acuerdo con el AlCl 3 mtodo.
[ 18 ] En resumen, un volumen final de solucin de extracto se ajust a 10 ml con etanol
absoluto. Posteriormente, 1 ml de 2% AlCl 3 se aadi y luego la absorbancia de la
solucin de muestra se midi a 430 nm. Los datos se dan como equivalentes de
quercetina.Todas las mediciones se realizaron usando un espectrofotmetro CECIL
CE7-200 UV-visible. Una prueba cualitativa para el aceite esencial tambin fue
desarrollado para estos extractos. El aceite esencial se caracteriz por cromatografa de
gases-espectrometra de masas (GC / MS) / anlisis desarrollado en un sistema de
FISONS 1000 Trio. Un SPB-1 columna de slice fundida de 30 m x 0,32 mm, se utiliz
0,25 micras de espesor de pelcula, con un programa de temperatura de 70 a 250 C a
4 C / min. Gas portador (helio) velocidad de flujo fue 1 ml / min y los espectros de
masas se midieron por ionizacin de electrones (EI) a 70 eV. La identificacin se
realiz la comparacin de los espectros de masas y los ndices de retencin GC (RI) con
los de nuestro banco de datos de identificacin y con los resultados de trabajos previos
de nuestro grupo. [ 10 ] Algunos espectros de masas tambin se compararon con los
datos de la literatura. [ 19 ]
microorganismos de prueba
Cepas de microorganismos utilizados fueron suministrados por el Centro de Estudios de
Biotecnologa Industrial, Universidad de Oriente. Bacillus subtilis ATCC
6633, Enterococcus faecalis ATCC 29212,Staphylococcus aureus ATCC
25923, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC
14028, Pseudomona aeruginosa ATCC 27853 y Candida albicans CCEBI 2048
(levadura) fueron las especies utilizadas. Las bacterias crecieron en un nutriente de agar
Mueller-Hinton (UNI-CHEM) (cultivo estacionario) durante 48 horas a 37 C, seguido
de la inoculacin en caldo nutriente (UNI-CHEM). La turbidez se corrigi mediante la
adicin de solucin de cloruro sdico isotnica hasta 10 8 se alcanzaron unidades
formadoras de colonias (CFU / ml). [ 20 ] Para las levaduras, se emple PDA (Sigma,
EE.UU.) para la incubacin y la inoculacin.

Evaluacin de la actividad antimicrobiana

El mtodo de difusin en placa en placas estriles de 20 ml de Petri fue utilizado como
una prueba de los antimicrobianos. Las placas inoculadas se incubaron a 37 C durante
48 h en el caso de C. albicans y de 24 h para el resto de los microorganismos. La
actividad antibacteriana de las sustancias ensayadas se demostr por una zona clara de
inhibicin alrededor del punto de aplicacin. Siete extractos de hojas de tamarindo se
evaluaron, as como disolventes y algunas sustancias antibacterianas utilizadas como
referencias. La dosis de decocciones y extractos fluidos fue de 10 l / placa, y para el
aceite esencial de tamarindo la dosis fue de 4 l / placa. Los controles positivos fueron
gentamicina (10 UI), ketoconazol (30 g) y aceite de tomillo (un extracto farmacolgico
BDH), mientras que los disolventes se emplearon como control negativo.
Determinacin de la concentracin inhibitoria mnima y la concentracin
mnima bactericida
El mtodo de dilucin en caldo aprobado por el Comit Nacional para Clinical
Laboratory Standard (NCCLS) se sigui para aquellos extractos que mostraron cierta
actividad en el mtodo de difusin en placa.En pocas palabras, para todos los extractos,
se prepar una serie de diluciones dobles en 1 ml de caldo de Mueller-Hinton. Los
extractos acuosos variaron desde 0,15 hasta 0,001 g / ml (las hojas de peso / volumen),
mientras que para extractos fluidos hidroalcohlicas, las dosis evaluadas variada 1,50,01 g / ml (las hojas de peso / volumen). Para los aceites esenciales, las dosis variaron
desde el equivalente de 40 a 0,31 l.microorganismos de ensayo se diluyeron
previamente a 0,5 turbidez estndar de McFarland para los aislamientos
bacterianos. Otros tubos que contienen slo caldo nutriente y los gentamicina
antibitico estndar tambin se sembraron con los organismos de ensayo para servir
como controles. Todos los tubos se incubaron a 35 C durante 24 h, mientras que los
tubos que contienen los cultivos de levadura se incubaron durante 48 h. Despus de la
incubacin, los tubos se examinaron para el crecimiento microbiano mediante la
observacin de la turbidez. Esas observaciones visuales fueron confirmados mediante la
medicin de la densidad ptica de la solucin a 620 nm en el espectrofotmetro antes
mencionado, el establecimiento de la concentracin mnima inhibitoria (MIC). Para
determinar la concentracin bactericida mnima (MBC), partes alcuotas de 100 l de
todas las diluciones no muestran ningn crecimiento se inocularon en placas de agar
Mueller-Hinton estriles. Las placas inoculadas se incubaron a 35 C durante 24 h para
todas las bacterias, mientras que los inoculados con hongos se incubaron durante 48
h. MBC se determinaron como la concentracin ms baja en la que el extracto
evaluados no permitir el crecimiento de organismos en la placa de agar. se tuvo en
cuenta la presencia de una o dos colonias.
anlisis estadstico

Una regresin lineal se llev a cabo con el fin de establecer una curva de calibracin
para la cuantificacin de metabolitos. Para mostrar las diferencias entre todos los
extractos en las concentraciones de fenoles totales y flavonoides, se realiz un anlisis
de varianza (ANOVA). Diferencias significativas entre medias se determinaron
mediante pruebas de rangos mltiples de Duncan. P valores <0,05 se considera como
significativa. Software empleado fue Estadstica versin 6.1 para Windows.
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RESULTADOS
caracterizacin fitoqumica
En los extractos acuosos, hojas frescas 'decocciones exhibieron una mayor
concentracin de fenoles, pero niveles menores de flavonoides en comparacin con las
hojas secas' decocciones que mostraron menor concentracin de fenoles, pero ms alta
de flavonoides. Diferencias con significaciones estadsticas superiores a 95% se
encontraron entre extractos acuosos slo en relacin con el contenido total de fenol. En
el caso de flavonoides totales, no se encontr diferencia estadstica entre los extractos
con el contenido mismas hojas, independientemente de si eran frescos o secados al
sol. Para los extractos fluidos, no se encontraron diferencias con significacin
estadstica superior a 95% entre ambos los extractos en relacin con fenol total y
flavonoides. Las diferencias entre los 30 y 10% decocciones varan en un intervalo de
2,34 a 1,54 en las hojas frescas o al sol, respectivamente, para polifenoles totales,
mientras que para los flavonoides que varan desde 2,2 hasta 2,03 [ Tabla 1 ].

tabla 1
Total de polifenoles y flavonoides concentracin promedio (g / ml)
En todos los casos, el extracto fluido con etanol 70% mostr la mayor concentracin de
fenoles totales y la concentracin de flavonoides. A pesar de estas diferencias
estadsticas, extractos obtenidos a partir de las hojas secados al sol (decoccin de 30% y
extractos fluidos) mostraron concentraciones de fenoles totales en el mismo orden, pero
en el caso de los flavonoides totales, estas diferencias entre los extractos evaluados eran
notablemente ms alto [ Tabla 1 ]. Los resultados de la caracterizacin de los aceites
esenciales de las hojas de tamarindo fueron similares a los obtenidos previamente por
nuestro grupo de investigacin, [ 10 ] con un total de 13 aceites esenciales
caracterizado, de los que el benzoato de bencilo es todava el principal constituyente
(40,9%), seguido de limoneno y hexadecanol [ Tabla 2 ].

Tabla 2
Composicin qumica del aceite esencial de hojas de tamarindo '
Actividad antimicrobiana
Extractos acuosos simples se activa frente a unos pocos microorganismos. Por otra
parte, el aceite esencial deT. indica L. y los extractos fluidos exhiben un amplio
espectro de actividad antimicrobiana [ Tabla 3 ]. La determinacin de MIC y MBC
mostr St. aureus con la ms alta MIC y MBC con la nica excepcin de 70% de etanol
extracto fluido, mientras que B. subtilis fue el microorganismo ms sensible a los
extractos de tamarindo. Todos los MBC podran calcularse para el petrleo y el 70% de
etanol esencial extracto fluido de tamarindo con las excepciones lgicas
de P. aeruginosa y Sa. typhimurium , respectivamente [ Tabla 4 ].

Tabla 3
Los resultados obtenidos en el ensayo microbiolgico por el mtodo de difusin en
placa

Tabla 4
MIC y MBC para los extractos de tamarindo (hojas peso / volumen)
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DISCUSIN

Desde el punto de vista qumico, hojas de tamarindo se consideran como una fuente
importante de polifenoles y sus derivados, incluso cuando los disolventes y mtodos
empleados para su extraccin son menos que ideales, en particular, para los compuestos
de tipo flavonoides. En el extracto de aceite esencial, la presencia de nerol y linalool
puede ofrecer potencial actividad antimicrobiana de aceite esencial, pero estas
sustancias aparecen en concentraciones bajas. En contraste, el benzoato de bencilo
predominante no se reconoce como un buen agente antimicrobiano contra la cepa
bacteriana utilizada.
La actividad antimicrobiana del aceite esencial puro fue mayor que los encontrados en
los extractos acuosos o hidroalcohlicos y fue similar al aceite de tomillo (nuestra
referencia como agente antimicrobiano natural).B. subtilis fue la bacteria ms sensibles
contra cualquier tipo de Tamarindus extracto, mientras
que P.aeruginosa y C. albicans se mantuvo resistente a un gran parte de los extractos
naturales evaluados. En el caso de P. aeruginosa , esta resistencia se encontr incluso
con la sustancia de referencia natural, aceite de tomillo. No obstante, todos los
microorganismos ensayados fueron sensibles a al menos a uno de los extractos
evaluados, que denota un amplio espectro de accin de los metabolitos de las hojas de
tamarindo.
En un sentido general, los extractos acuosos e hidroalcohlicos son ms eficaces contra
bacterias gram positivas que las bacterias gram negativas. Este comportamiento fue
observado por Melndez 2006 por el tamarindo se retira demasiado; sin embargo, una
tendencia diferente se ha observado para E. coli , contra el cual extractos fluidos son
poco eficaces, pero sus proporciones de inhibicin estn demasiado lejos de los
reportados en los muy similares flora de Puerto Rico. [ 4 ] Por otra parte, el aceite
esencial de tamarindo exhibe un dimetro inhibicin aceptable contra Es. coli y este
comportamiento coincide con la actividad de limoneno, [ 21 ] uno de los principales
constituyentes de la esencia de las hojas de tamarindo. Otros aceites esenciales
presentes en tamarindo hojas tales como y -pineno, linalol y nerol han demostrado
actividad contra Es. coli y otras bacterias, pero son predominantemente inactiva
contra P. aeruginosa como ocurre con esencia de hojas de tamarindo.
Con respecto a la naturaleza diversa de los disolventes empleados en esta investigacin,
es evidente que una disminucin de la polaridad ayuda a extraer los metabolitos
bioactivos. Por otra parte, para obtener un extracto de amplio espectro a partir de hojas
de tamarindo, es necesario desarrollar mtodos de extraccin con un cierto nivel de
complejidad (extractos de fluido o de aislamiento de aceite esencial), que no son
comunes en la poblacin media.
Correlacin entre la composicin qumica y la actividad antimicrobiana
Slo para B. subtilis , todos los micrfonos y casi todos los MBC se calcularon en los
extractos que se caracterizan por niveles de fenol y de flavonoides, lo que permite una

correlacin. Para correlacionar la influencia de fenoles totales y flavonoides ms de esta

bacteria, es necesario para estimar la concentracin real en el que estos metabolitos
estn presentes en el MIC y MBC calculado previamente. Como todas las
concentraciones evaluadas fueron de una serie de doble dilucin de una solucin ms
concentrada y bien caracterizado, una sola operacin matemtica da una oportunidad de
estimar los niveles en los que estas sustancias estn presentes. Contra esta bacteria, los
niveles de fenoles totales en el MIC en los extractos de la decoccin de hojas frescas y
secadas al sol eran 2.788 y 3.666 mg / ml, respectivamente, y para el 30 y el 70% de
etanol extractos fluidos, los niveles fueron 3,088 y 3,458 mg / ml, respectivamente. En
el caso de MBC, se obtuvieron valores de 22.246, 24.774 y 27.741 mg / ml para la
decoccin con hojas frescas, 30 y 70% de etanol extractos fluidos,
respectivamente. Como se encontr una concentracin similar de fenoles totales en el
MIC calculado y MBC, sugiere, por lo menos algn papel para estos compuestos en la
actividad antimicrobiana frente a esta bacteria. Del mismo modo, los niveles de
flavonoides en MIC fueron 0,009 y 0,022 mg / ml para decocciones de hojas frescas o al
sol, respectivamente, mientras que para el 30 y el 70% de etanol extractos fluidos, los
niveles fueron 0,207 y 0,690 mg / ml, respectivamente. Los niveles de CBM de la
decoccin de hojas frescas 'y 30 y un 70% de etanol extractos fluidos fueron 0,074,
1,658 y 5,537 mg / ml, respectivamente. Estos valores diferentes sugieren una mala
influencia de los flavonoides en la actividad antimicrobiana frente a esta bacteria.
En esas bacterias en las que se reportaron tres ensayos positivos ( St. aureus y Es. Coli ),
los valores distintos de fenol y la concentracin de flavonoides se han obtenido, lo que
sugiere una baja influencia de estos compuestos sobre la actividad. Este tipo de anlisis
se limita slo a estas bacterias, porque otros mostraron slo dos o ensayos de menos
positivos, sin embargo, en P. aeruginosa los valores de concentracin de fenol en el
MIC y MBC estuvo cerca de los dos extractos positivos (extractos fluidos en etanol a 30
y 70%), lo que indica una posible relacin con la actividad.
A pesar de estos resultados, el ms valioso actividad antimicrobiana de cualquier
extracto de la planta est relacionada con su espectro microbiolgico. El hecho de que
en las hojas frescas 'decoccin la cantidad de polifenoles es comparativamente mayor
que en secados al sol hojas' decoccin y es ms o menos del mismo nivel en los
extractos fluidos, pero con un espectro antimicrobiano que es peor, parece que este tipo
de compuestos se no la fuerza impulsora detrs del espectro antimicrobiano de extractos
de tamarindo. Por otra parte, las concentraciones de flavonoides similares en extractos
decoccin no exponen una clara relevancia en los diferentes espectros observada entre
dom seca y decocciones hojas de tamarindo frescos ', as como los espectros
microbiolgica similar de los dos extractos fluidos, mientras que tienen diferente
flavonoide concentraciones.
Los aceites esenciales de hojas de tamarindo revelaron un amplio espectro
antimicrobiano, pero las pequeas cantidades en las que se ha determinado en nuestros

cultivos de tamarindo, no fueron suficientes para mostrar cualquier actividad

importante. Por lo tanto, la actividad antimicrobiana baja en decoccin de hojas frescas
de extractos podran estar relacionados con la muy baja concentracin de estos
compuestos en la preparacin, y como se mencion antes, la decoccin es la manera
ms popular para preparar bebidas medicinales tradicionales.
En nuestras condiciones experimentales, no podemos declarar que, o bien flavonoides o
polifenoles son los compuestos responsables de espectro antimicrobiano de tamarindo,
como se ha sugerido anteriormente por Doughari en 2006. [ 16 ] Por otra parte, los
aceites esenciales de tamarindo se ven como buenos agentes antimicrobianos, pero su
baja concentracin en las condiciones climticas cubanos no favorecen su presencia en
las preparaciones comunes de agua.
Ir:

CONCLUSIONES
hojas de tamarindo se utilizan tradicionalmente en todo el mundo como un agente
antimicrobiano. Esta aplicacin no es bien aceptado por la poblacin cubana, incluso
cuando se han reportado mltiples variedades de metabolitos con actividad
antimicrobiana reconocido antes.
A la luz de nuestros resultados, podemos sugerir que algunos compuestos que se
encuentran en los aceites esenciales de las hojas de la T. indica L. que crece en Cuba
podra ser responsable de su actividad antimicrobiana. De todos modos, en nuestras
condiciones climticas, el pobre rendimiento de la produccin de aceite esencial, y,
adems, los bajos niveles de los ms prominentes compuestos antimicrobianos
detectados en esencia, las hojas de tamarindo 'nos da una posible explicacin a los
informes etnobotnicos relativamente pobres en Cuba. Sin embargo, no se puede
rechazar el hecho de que otros compuestos como los fenoles pueden mostrar cierta
actividad contra determinados tipos de microorganismos. Tambin, una combinacin de
algunos de los metabolitos que se encuentran con otros tipos de compuestos extrados
por otras preparaciones remedio popular podra formar una mezcla natural que alcanza
el espectro antimicrobiano final mediante algn tipo de sinergia, como podra haber
sucedido con los extractos hidroalcohlicos.
Ir:

Notas al pie
Fuente de financiacin: Ninguna
Conflicto de intereses: Ninguno declarado

Ir:

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