Enzimas

Protenas

Catalizar una reaccin biolgica

capacidad de acelerar las reacciones qumicas

sin alterarse al final de stas y sin modificar el
equilibrio qumico; slo acortan el tiempo en
que se alcanza dicho equilibrio.

Generalidades
Protenas globulares

Cadenas polipptidicas
plegadas que crean una
superficie hondada

Encaja el sustrato y
tiene lugar la reaccin

La configuracin tridimensional del

centro activo es complementaria a la
del sustrato

Especficas

Especficas

Tripsina

Slo rompe en carboxilo

de lisina y arginina

Especficas

Propiedades generales

Mayores velocidades
de reaccin
Enzima

Velocidad de
reaccin no
enzimtica (s-1)

Velocidad de
reaccin
enzimtica (s-1)

Incremento de
velocidad

Anhidrasa
carbnica

1,3 x 10-1

1 x 106

7,7 x 106

Metaloenzima (Zn2+), conversin de CO2 y

H2O a NaHCO3 y protones

Corismato mutasa

2,6 x 10-5

50

1,9 x 106

Sntesis de fenilalanina y tirosina

Triosa fosfato
isomerasa

4,3 x 10-6

4300

1,0 x 109

GADP DHA

Carboxipeptidasa

3,0 x 10-9

578

1,9 x 1011

Hidroliza enlace peptdico solo del extremo

carboxilo terminal de una protena

Propiedades generales
Temperatura
Condiciones suaves de
reaccin

Presin
pH
Sustratos

Mayor especificidad de
reaccin
Productos
Control alostrico
Capacidad de
regulacin

Modificacin covalente
Variacin de las cantidades de
enzimas

Cmo actan las

enzimas?

Cmo actan las

enzimas?

Cmo actan las

enzimas?

Formacin complejo
enzima-sustrato

Conversin
enzima-producto

Liberacin
producto

Clases de enzimas de acuerdo al

tipo reaccin
1. Oxidorreductoras

2. Transferasas
3. Hidrolasas
4. Liasas
5. Isomerasas
6. Ligasas

1. Oxidorreductoras

2. Transferasas

3. Hidrolasas

4. Liasas
Catalizan la adicin de dos grupos a un doble enlace o la remocin
de dos grupos desde tomos adyacentes para crear un doble
enlace.

5. Isomerasas

6. Ligasas
Cataliza la unin de dos molculas. Generalmente sucede junto con la hidrlisis
de un compuesto de alta energa como el ATP

NOMENCLATURA
Nombres particulares

Nombres sistemtico

Cdigo de la comisin
enzimtica

Tripsina

NOMENCLATURA

Cdigo de la comisin
enzimtica

Clase del enzima (1-6)

Subclase dentro de
cada grupo

Grupos qumicos
especficos

NOMENCLATURA

Cdigo de la comisin
enzimtica

E.C 4.3.1.7
Clase 4: liasa
Subclase 3: rompe
un enlace C-N

Subclase 1:
desprende
amonaco

Acta sobre la
etanolamina

NOMENCLATURA

Cdigo de la comisin
enzimtica

E.C 1.11.1.6
Clase 1: oxido-reductasa
Subclase 11: usa H2O2 como aceptor de electrones
Subclase 1: como donador otra molcula de H2O2.
6: le toc el sexto lugar

NOMENCLATURA

Cdigo de la comisin
enzimtica

E.C 5.2.1.1

Clase 5: isomerasa
Subclase 2: interconvierte ismeros cis-trans
Subclase 1: formados a travs de enlace C-C.
1: lugar 1.

NOMENCLATURA
Cdigo de la comisin
enzimtica

EC 1.1 Acta sobre CH-OH

EC 1.1.1 NAD+ o NADP+ como aceptor

EC. 1.1.2 citocromo como aceptor
EC 1.1.3 con oxgeno como aceptor

EC 1.2 Acta sobre grupos

aldehido o cetona

EC 1.2.1 NAD+ o NADP+ como aceptor

EC. 1.2.2 citocromo como aceptor
EC 1.2.3 con oxgeno como aceptor

EC 1.3 Acta sobre grupos

donadores CH-CH

EC 1.4 Acta sobre grupos

NH2

EC 5.1 Racemasas (sobre el

nico centro asimtrico) y
Epimerasas (uno y tiene ms
de un centro)

EC 5.2 cis-trans-Isomerasas
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/

Definiciones importantes

Cofactor: porcin no
proteca de la enzima para
su actividad cataltica.

Iones metlicos: Zn2+ o Mg 2+.

Apoenzima: porcin
proteca (polipeptido de la
enzima.

No puede catalizar la reaccin sin

su cofactor o al contrario.

Cofactores orgnicos = coenzimas

Activacin: cualquier proceso que inicia o incrementa la accin

de una enzima.

Inhibicin: cualquier proceso que hace menos activa a un

enzima.

Compuesto sobre el cual la enzima

trabaja.

Definiciones importantes

Cofactor

Apoenzima (inactiva)

Sitio activo: porcin de la enzima a

la cual el sustrato se enlaza.

Holoenzima (activa)

COFACTOR

Metlicos

Inorgnico

Fe2+, Cu2+, K+, Mg2+, Mn2+

Centro cataltico

Orgnico

coenzima

Vitaminas y derivados

Activar la enzima catalticamente

Grupo puente
Agente estabilizante

Se transforman durante la
reaccin

Especificidad del sustrato

Esteroespecificidad en la fijacin del sustrato

Especificidad de grupo

Reaccin
especfica

Reaccin sobre
grupos fosfatos

MODELO LLAVE CERRADURA

Substrato y enzima se acoplan de forma estereospecfica, de la misma

manera que una llave se ajusta a su cerradura.
Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy se considera insuficiente
al no explicar algunos fenmenos de la inhibicin enzimtica.

MODELO AJUSTE INDUCIDO

Tanto la enzima como el substrato sufren una alteracin en su estructura

por el hecho fsico de la unin.
Est mucho ms de acuerdo con todos los datos experimentales
conocidos hasta el momento.

Sitio activo

Piruvato kinasa

Factores que afectan la velocidad de una reaccin

Concentracin del sustrato
Temperatura

pH

Concentracin del sustrato y enzima

A mayor concentracin de sustrato es mayor
la velocidad

La velocidad no aumenta indefinidamente,

cuando no hay ms enzima para unirse al sustrato
se alcanza la velocidad mxima.

pH
Cada enzima tiene un pH ptimo en el cual la actividad enzimtica es
mxima

Temperatura
Cada enzima tiene una temperatura ptima en la cual su actividad es mxima

Cintica enzimtica

Cintica enzimtica
La cintica estudia la
velocidad de cambio
entre el estado inicial de
reactantes y productos y
su estado final.

En todos los procesos enzimticos, la velocidad de la reaccin depende de la

concentracin de enzima y de su sustrato.

Orden de reaccin

Cintica enzimtica
Reactivos

Catalizador
Proximidad y
orientacin que
favorece la
formacin del
estado de transicin

Enlace fuerte de
estado de
transicin

Producto liberado

Se asume saturacin por el sustrato, es decir

ocupacin de los centros activos de todas
las molculas de enzima

Cintica enzimtica

La velocidad no depende de [S]o

Vo [S]o

La velocidad de la reaccin va
disminuyendo

Cintica mixta

Al avanzar la reaccin
disminuye la concentracin
del sustrato y aumenta la del
producto

Vo = velocidad inicial de la reaccin

Pendiente de la curva a t = 0

Antes de consumirse el 10% del sustrato, la

concentracin se considera constante y no se
considera la reaccin inversa

Cintica enzimtica

Concentracin baja de sustrato, la velocidad de la reaccin es directamente

proporcional a la concentracin del sustrato (relacin lineal).

Concentracin alta de sustrato, la velocidad de la reaccin es independiente y no

depende de la concentracin del sustrato.

Orden cero

Concentracin intermedia del sustrato, la velocidad deja de ser lineal.

Cintica mixta

Orden uno

Modelo Michaelis-Menten

Modelo Michaelis-Menten
Cada reaccin con su ecuacin de
velocidad

Los valores de K son las constantes

cinticas individuales de cada proceso

Constantes microscpicas.

Modelo Michaelis-Menten

Hiptesis de estado
estacionario

Es constante y pequea a
lo largo de toda la
reaccin

V de formacin ES es
igual a la de disociacin

V1 = V-1 + V2

La velocidad de formacin de los

productos es constante

Modelo Michaelis-Menten

Concentracin de sustrato
elevados [S] >> KM
Concentracin de sustrato
pequeas [S] <<KM

Representacin de
Linewaver-Burk

Modelo Michaelis-Menten
Clculo de los parmetros cinticos

Vmax

Vmax
Velocidad de reaccin se hace
independiente a la
concentracin del sustrato
de Vmax
Independiente de la
concentracin de enzima

Caracterstico de enzima
segn el sustrato

La importancia de Km
El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato: A menor KM, mayor
afinidad del enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad
Valores de KM de muchos enzimas son prximos a los de la concentracin fisiolgica de
sus sustratos

Si dos sustratos del mismo enzima tienen distinta KM, el que presente mayor KM tiene
menor afinidad por el enzima, y la reaccin transcurre siempre a menor velocidad que con
el sustrato de menor KM

Actividad Enzimtica
Unidades de actividad enzimtica
(U)

Actividad especfica

Micromoles de sustrato consumidos por 1 min

U mol S/min mol P/min

U por miligramo o militros de protenas

Cantidad de enzima necesaria para transformar

un mol de sustrato por segundo
katal(kat)
Como 1 mol son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos,
resulta que 1 katal equivale a 60 x 106U.

Nmero de reacciones elementales que realiza el

enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo
Nmero de recambio (Kcat o K2)
K2 = Vmax/[ET]

Inhibicin enzimtica
Un inhibidor enzimtico es cualquier agente qumico capaz de disminuir la velocidad de una
reaccin sin desnaturalizar la enzima. Los inhibidores son compuestos que tienen la
capacidad de unirse a enzimas de tal forma que impiden la combinacin enzima-sustrato.

Puede darse inhibicin reversible o irreversible

Inhibicin competitiva
Una sustancia de estructura similar al sustrato.
El inhibidor reduce la velocidad de reaccin, pero la velocidad mxima
(concentraciones de sustrato grandes) sigue siendo la misma.

Inhibicin competitiva

Inhibicin no competitiva
El inhibidor reduce la velocidad mxima pero Km (la afinidad del enzima por
el sustrato) sigue siendo el mismo.
El inhibidor puede combinarse tanto con
enzima libre como con el complejo enzima
sustrato, sin afectar el sitio activo.

Inhibicin no competitiva

Inhibicin acompetitiva
Reacciona con la enzima en un punto distinto
al centro activo, pero slo en el caso de que
sta est unida al sustrato formando el
complejo ES

Impide que la enzima

desarrolle su actividad
cataltica.

Ejercicio

La hidrlisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida (GPNA) para dar p-nitroanilina y

N-glutaril-L-fenilalanina, est catalizada por la enzima a-quimotripsina. En unas
determinadas condiciones de pH y temperatura, los datos cinticos obtenidos han sido los
siguientes

a) Asumiendo una cintica de tipo Michaelis-Menten,

calclense grficamente los valores de Vmax y KM .
b) Determine el valor del n de recambio (k2) sabiendo que la
concentracin de enzima empleada fue de 4.00 x 10-6 M.

Nmero de recambio

Una molcula de enzima hidroliza 52

molculas de sustrato por segundo

Interprete la grfica adjunta considerando que se ha representado la cintica de una

enzima sin inhibidor y con inhibidor (aclare el significado de las letras A, B, C, d, e).

Regulacin enzimtica

Modificacin covalente

Modificacin covalente:
fosforilacin, unin a varios
lpidos, etc.

Ej: Protenas reguladoras

Otras protenas estimulan o inhiben la actividad de
una enzima.
Un cambio en la estructura primaria, tpicamente
por adicin de un grupo funcional enlazado
covalentemente a la apoenzima

Activacin protelica
Algunos enzimas son expresados como precursores
inactivos.
Proenzimas o zymgenos enzima acYva a travs de la
remocin del exceso de cadena polipeptdica.

Tripsina

Tripsingeno
Un fragmento de 6
aminocidos es
removido del final
del N-terminal.

Cataliza la hidrlisis de
enlaces peptdicos.

Alosterismo

Una sustancia (regulador) se enlaza de forma

no covalente y reversible a un sitio diferente
al sitio activo, afectando la enzima

Modulacin negativa: inhibe la accin

del enzima.

Modulacin positiva: estimula la accin

del enzima.

Las enzimas reguladas por este tipo se conocen como

alostricas.

Contienen ms de una cadena polipeptdica, y el sitio de

reaccin es una de esas cadenas.
Un regulador se enlaza a un sito
diferente al sitio activo para cambiar
la forma de ste.

Alosterismo
Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R
(relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms
afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio.

Ciertas sustancias tienden a estabilizar la

forma R. Son los llamados moduladores
positivos.

Las sustancias que favorecen la forma T y

disminuyen la actividad enzimtica son los
moduladores negativos.

Alosterismo
Las molculas que favorecen la forma
R pero que actan sobre una regin del
enzima distinta del centro activo son
los activadores alostricos.

Si los moduladores negativos actan en

lugares distintos del centro activo del
enzima (inhibicin no competitiva) se
llaman inhibidores alostricos.

Alosterismo

Existen dos tipos de control alostrico: el control

heterotrpico que se da cuando el modulador es
una molcula diferente del sustrato, y el control
homotrpico que se da cuando el modulador es
el propio sustrato. En ambos casos el modulador
puede ser positivo o negativo.

Alosterismo

Cintica sigmoidea

Inhibicin de retroceso
(feedback)
Se inhibe el enzima que participa que un primer
paso biosinttico por el producto final del proceso.

Cul de las siguientes grficas representa la velocidad de reaccin frente a

la concentracin de sustrato para una enzima alostrica, en ausencia y
presencia de un inhibidor alostrico?