nutritivo, tras haber hecho esto se tom la muestra correspondiente al tiempo cero, iniciando de esta forma la Tiempo Dilucin Muestra DO cuantificacin bacteriana por t0 11:10 0 min 1.5 mL 1ra muestra 0.106 A el mtodo turbidimtrico t1 11:40 30 min 1.5 mL 2da muestra 0.101 A ra (ptico) se basa en la t2 12:10 60 min 1.5 mL 3 muestra 0.106 A t3 12:40 90 min 1.5 mL 4ta muestra 0.103 A capacidad de las clulas y t4 13:10 120 min 1.5 mL 5ta muestra 0.100 A partculas en general de tTabla 13:30 150 min 1.5 mL 6ta muestra 5 1 absorber y/o dispersar la luz que incide sobre ellas. Un cultivo celular aparece turbio porque las clulas dispersan la luz que atraviesa la suspensin. La turbidez es proporcional al nmero de clulas y puede medirse utilizando un espectrofotmetro. La D.O. del cultivo es pues proporcional a la densidad celular. Esto es as dentro de ciertos lmites puesto que a elevadas concentraciones pueden formarse agregados celulares o producirse un efecto "pantalla" de unas clulas sobre otras.
Como se aprecia en la Tabla 1, las lecturas fueron realizadas por espacio de
tiempo cada 30 min a excepcin de la muestra t 5 en la que slo se tomaron 20 min de lapso de tiempo. Para la muestra inicial t0 la densidad ptica tomada fue de 0.106 A, pasados los primeros 30 min se volvi a tomar una segunda lectura correspondiente a t 1 la cual arroj un valor de 0.101 A, un valor no esperado para el experimento, ya que la experiencia en estudios previos, debera haber una multiplicacin bacteriana mnima correspondiente a la fase de latencia (adecuacin al medio), la lectura tomada demuestra que el organismo no se est adaptando al medio como debera de ser, en cambio se induce a que el organismo se encuentra en una fase de muerte celular. En la muestra t2 la D.O. arroj un valor de 0.106 A, exactamente igual a la muestra inicial t0, valor que demuestra que la fase exponencial se alcanz y la pendiente de la curva de dicha fase es muy pronunciada, lo que indica que la bacteria se replic rpidamente, por lo que la fase de adaptacin fue muy crtica ya que la pendiente de crecimiento fue negativa, este valor puede explicarse a que la bacteria en un principio tuvo problemas en adaptarse al medio (caldo nutritivo), posiblemente al ajuste del metabolismo al Ph del medio. Cuando las condiciones son muy favorables, Escherichia coli es capaz de replicarse en 20 min. Sin embargo, si E. coli se multiplica en el entorno intestinal, el tiempo de generacin puede prolongarse hasta 12-24 h. La cintica de crecimiento de las bacterias es de tipo exponencial ya que, partiendo de un tiempo de generacin establecido, el nmero de clulas se va duplicando en ese espacio de tiempo, esto es lo que se ve relejado en la ilustracin 1 donde se muestra un crecimiento acelerado, una pendiente igual a la fase de latencia, pero positiva.
En la muestra correspondiente a t3 tomada pasados hora y media (90 min) el valor
tomado fue de 0.103 A, atravesada ya la fase de multiplicacin logartmica el valor tomado demuestra que el organismo se encuentra ya en la fase de muerte y lisis celular omitiendo de esta forma la fase estacionaria donde la multiplicacin de algunas clulas se equilibra con la muerte de otras. Debido a que en este perodo se agotan nutrientes esenciales y se acumulan sustancias de desecho aunado el agotamiento de las reservas y fuentes de energa gener que no hubiese un equilibrio entre bacteria y medio de cultivo por lo que hubo una entrada drstica a la muerte celular. La siguiente lectura confirma la muerte celular y degradacin de la bacteria dando un valor de 0.100 A. A continuacin, elegiremos dos valores que estn en plena fase exponencial. Para el clculo del tiempo de generacin utilizaremos la siguiente frmula: