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COLESTEROL
Muestra: Suero o Plasma
Procedimiento
B
S
D
Estndar
---5 ul
---Muestra
-------5 ul
Rvo.Trabajo
0.5ml
0.5ml
0.5ml
Incubar 15 minutos a 37C y leer
Estandar = ..
TRIGLICERIDOS
Muestra: Suero o Plasma
Procedimiento
B
S
D
Muestra
------5ul
Estndar
---5ul
--Rvo.Trabajo
0.5ml
0.5ml
0.5ml
Mezclar, incubar 5 minutos a 37C y luego leer
Estandar = ..
ACIDO URICO
Muestra: Suero o Plasma
Procedimiento
B
S
D
Estndar
---20 ul
---Muestra
------20ul
Rvo.Trabajo
1ml
1ml
1ml
Mezclar, Incubar 5 minutos a 37C y luego leer
Estandar = 100mg/L
BILIRRUBINAS
Muestra: Suero o Plasma
Procedimiento
B
D
T
Muestra
200ul
200ul
200ul
Agua Destilad.
2.5ml
2.5ml
--Desarrollador
------2.5ml
Rvo.Sulfanilico
200ul
------Diazoreactivo
---200ul
200ul
Mezclar de inmediato cada tubo por inversin. Luego de
5 minutos exactos leer Bilirrubina Directa. Entre 5 y 15
Minutos leer la Bilirrubina total.
TGP O GPT
505nm
0.034
0.061
0.100
0.129
0.164
0.196
0.224
0.254
0.284
0.314
0.340
0.364
0.389
0.415
74
0.442
80
0.468
87
0.494
96
0.524
104
0.552
VALORES NORMALES
Glucosa
0.70 1.10 g/L
Urea . 0.20 0.45g/L
Creatinina. 0.80 1.40 g/L
Colesterol Total 1.50 2.50 g/L
HDLHombres.. 0.30 0.70 g/L
Mujeres 0.30 0.85 g/L
LDL. Hasta 1.40 g/L
VLDL Hasta 0.36 g/L
Triglicridos. 0.35 1.65 g/L
cido rico.. Hombres 25 60 mg/L
Mujeres 20 -50 mg/L
Protenas Totales... 6.50 8.0 g/L
Albmina... 3.4 4.5 g/L
Globulina 2.60 3.10 g/L
Relacin Albmina/Globulina (A/G) 1.2 2.2 g/L
Bilirrubina Directa... Hasta 0.20 mg%
Bilirrubina Total Hasta 1.0 mg%
Bilirrubina Indirecta. Hasta 0.80 mg%
Bilirrubina Total Recin Nacidos
Sangre de
Cordn
Hasta las 24
Hrs
Hasta las 48
Hrs
Del 3 al 5
da
Nacidos a
termino
25 mg%
Prematuros
60mg%
80mg%
75mg%
120mg%
120mg%
240mg%
VDRL
Muestra: Suero o plasma
Procedimiento
Tanto los reactivos como la muestra deben estar a
temperatura ambiente antes de realizar la prueba.
En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar
Muestra
Con gotero provisto colocar
Antigeno o Reactivo provisto
50 ul
1 gota o 50ul
GLUCOSA
Muestra: Suero, Plasma.
Reactivo de Trabajo: (Para 25 ml) En una probeta colocar
12.5 ml de agua destilada, 1.25 ml de Reactivo 4-AF, 1.25
ml de Reactivo Fenol y completar a 25 ml con agua
destilada. Agregar 75 ul de GOD/POD previamente
homogeneizadas. Mezclar por inversin, sin agitar. Rotular
y colocar fecha de preparacin.Guardar en refrigeracin y
en frasco de color caramelo siendo estable un mes a partir
de la fecha de preparacin (Duracin de 30 das).
Procedimiento
B
S
D
Estandar
---10 ul
---Muestra
------10 ul
Rvo,Trabajo
1ml
1ml
1ml
Incubar por 10 minutos a 37C; luego leer en
espectrofotmetro a 505 nm llevando el aparato a cero con
agua destilada.
Clculos: glucosa (g/L) = D x f donde f = 1.00g/L
S
D = Lectura en el equipo del D
S = Lectura en el equipo del S
UREA
Muestra: Suero o Plasma
Reactivo de Trabajo: No se prepara, se trabaja con los
reactivos que vienen listos en la caja para usar
Procedimiento
B
S
D
Estandar
---20 ul
--Muestra
-------20 ul
Ureasa
1 gota
1 gota
1 gota
Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C
Luego agregar:
Reactivo 1
1ml
1ml
1ml
Reactivo 2
1ml
1ml
1ml
Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C
Luego agregar:
Agua estilada
10ml
10ml
10ml
donde f = 2.00g/L
S
Procedimiento
B
S
D
Muestra
------10ul
Estndar
---10ul
--Rvo.Trabajo
1ml
1ml
1ml
Mezclar, incubar 10 minutos a 37C o 15 minutos a 2025C. Leer en espectrofotmetro a 505 nm Llevar a cero el
aparato con Blanco de reactivo (B)
Clculos: Absorbancia o lectura de D x 2 =g/L o mg%
Absorbancia o lectura de S
ACIDO URICO
Muestra: Suero o Plasma
Reactivo de Trabajo: Disolver el contenido de un vial de
Enzimas en un frasco de Buffer. Enjuagar varias veces el
vial con Buffer. Mezclar hasta disolucin completa.
Homogeneizar y fechar. Estable un mes a partir de la fecha
de su preparacin.
Procedimiento
B
S
D
Estndar
---20 ul
---Muestra
------20ul
Rvo.Trabajo
1ml
1ml
1ml
Mezclar suavemente e incubar 5 minutos en bao de agua a
37C o 20 minutos a temperatura ambiente (18-25C).
Retirar, enfriar y leer en espectrofotmetro a 505 nm,
llevando el aparato a cero con el Blanco (B).
Calculo: cido rico (mg/L) = D x f
Donde f = 100 mg/L
S
BILIRRUBINAS
Muestra: Suero o Plasma
Reactivos de Trabajo:
Desarrollador listo a usar
Reactivo Sulfanilico listo a usar
DIAZOREACTIVO de acuerdo al volumen de trabajo
mezclar una gota de Nitrito de Sodio con 1ml de Reactivo
Sulfanilico. Rotular y fechar. Estable en refrigerador y en
frasco color caramelo 3 meses a partir de la fecha de su
preparacin.
Procedimiento
B
D
T
Muestra
200ul
200ul
200ul
Agua Destilad.
2.5ml
2.5ml
--Desarrollador
------2.5ml
Rvo.Sulfanilico
200ul
------Diazoreactivo
---200ul
200ul
Mezclar de inmediato cada tubo por inversin. Luego de
5 minutos exactos leer Bilirrubina Directa en
espectrofotmetro a 530 nm, llevando el aparato a cero con
agua destilada. Entre 5 y 15 minutos leer Bilirrubina Total
Sueros Ictericos: (Sueros bien amarillos) debe emplearse la
tecnica descripta pero con menores cantidades de muestra,
de acuerdo a la severidad de la ictericia. De tal forma, en
caso de ictericia moderada se usaran 50 ul de suero
mientras que frente a una ictericia intensa se requieren solo
20 ul. Multiplicar los resultados obtenidos por 3.79 y 9.38
respectivamente.
Clculos:
Bilirrubina Total ( BT) (mg/L) = (T B) x f
Bilirrubina Directa (BD) (mg/L) = (D B) x f
Bilirrubina Indirecta (Libre) = BT BD
Factor (f) = 111
PROTEINAS TOTALES Y FRACCIONADAS
Muestra: Suero
Reactivos: El Reactivo Cuproalcalino y VBC se encuentran
a medio ambiente y listo a usar
Procedimientos
Determinacin de Protenas Totales
B
S
D
Estndar de Prot.Tot.
--50 ul
---Muestra
----50 ul
Rvo Cuproalcalino
3.5ml 3.5ml
3.5ml
Mezclar. Incubar a 37C por 15 minutos y luego leer en
espectrofotometro a 540 nm llevando a cero el aparato con
reactivo de trabajo o reactivo cuproalcalino
Clculos: Factor de calculo =
Absorbancia de Estndar (S)
g de PT/dl = Absorbancia del Desconocido x Factor
Determinacin de Albmina
B
S
D
Estndar de Albmina
--10ul
--Muestra
----10ul
Rvo. de VBC
3.5ml 3.5ml 3.5ml
Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente por 15
minutos luego leer en espectrofotmetro a 625 nm, llevando
el aparato a cero con reactivo de trabajo o reactivo VBC
Calculo: Factor de Calculo =
Absorbancia Estndar (S)
g de Alb./dl = Absorbancia Desconocido x Factor
Globulina: = Protenas Totales - Albmina
AMILASA
Muestra: Suero, Plasma u Orina
Reactivos de Trabajo:
Buffer listo a usar (en refrigerador)
Sustrato preparado y listo a usar (en refrigerador)
Procedimiento
- En un tubo pequeo colocar 2ml de de Sustrato
reconstituido que se halla en refrigeracin.
- Preincubar a 37C por 3 a 4 minutos. Luego agregar 50ul
de muestra
- Mezclar inmediatamente y luego leer en absorbancia a
405nm, luego de 1 y 2 minutos, llevando previamente el
aparato a cero con agua destilada.
- Determinar la diferencia entre la segunda y la primera
lectura. Utilizar este valor para los clculos
Clculos: Amilasa (U/I) =Lectura de Absorbancias x Factor
2
Lectura de Absorbancias = Lectura 1 min. + Lectura 2 min.
Factor = 3.178
Valor Normal en Suero Hasta 1250 U/I
FOSFATASA ALCALINA
Muestra: Suero
Reactivos de Trabajo:
- Sustrato: Se encuentra preparado y listo a usar. Guardado
en refrigeracin
- Reactivo de Color: Se encuentra preparado y listo a usar.
Guardado en medio ambiente en frasco color caramelo
Procedimiento
B
S
D
Sustrato
0.5ml
0.5ml
0.5
Preincubar en bao de agua a 37C unos minutos, luego
agregar:
Suero
--------50ul
Standard
----50ul
---Mezclar. Incubar exactamente 10 minutos (cronometro) y
agregar:
Reactivo de
2.5ml
2.5ml
2.5ml
Color
Mezclar de inmediato cada tubo. Retirar los tubos del bao
y leer en espectrofotmetro a 520 nm. llevando el aparato a
cero de absorbancia con agua destilada.
Clculos: Fosfatasa Alcal. (UI / I) = factor x (D B)
Donde factor = 200 UI / I
(S B)
S = Lectura en el equipo de absorbancia del Estndar
D = Lectura en el equipo de absorbancia del Desconocido
B = Lectura en el equipo del Blanco
Valores Normales:
Adultos: 68 -240 UI/I
Nios : 100 400 UI/I
TRANSAMINASAS
Muestra: Suero
D
Sustrato (GOT o GOP)
0.125ml o 125ul
Colocar en bao de agua a 37C unos minutos, luego
agregar:
Suero
25ul
Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30
minutos y agregar:
Reactivo 2,4-DNFH
0.125ml o 125ul
Mezclar, dejar 10 minutos a 37C. Luego agregar
47
52
57
62
68
74
80
87
96
104
TGO o GOT
505nm
0.034
0.047
0.061
0.080
0.100
0.115
0.129
0.146
0.164
0.180
0.196
0.210
0.224
0.239
0.254
0.269
U/I
5
9
14
18
23
27
32
37
42
TGP O GPT
505nm
0.034
0.061
0.100
0.129
0.164
0.196
0.224
0.254
0.284
0.314
0.340
0.364
0.389
0.415
0.442
0.468
0.494
0.524
0.552
VALORES NORMALES
Glucosa .... 0.70 1.10 g/L
Urea...0.20 0.45g/L
Creatinina. 0.80 1.40 g/L
Colesterol Total. 1.50 2.50 g/L
HDL... 0.30 0.70 g/L
LDL. Hasta 1.40 g/L
VLDL.. Hasta 0.36 g/L
Triglicridos. 0.35 1.65 g/L
cido rico.. Hombres 25 60 mg/L
Mujeres 20 -50 mg/L
Protenas Totales.. 6.50 8.0 g/L
Albmina... 3.4 4.5 g/L
Globulina.. 2.60 3.10 g/L
Relacin Albmina/Globulina (A/G). 1.2 2.2 g/L
Bilirrubina Directa.. Hasta 0.20 mg%
Bilirrubina Total.. Hasta 1.0 mg%
Bilirrubina Indirecta.... Hasta 0.80 mg%
Bilirrubina Total Recin Nacidos
Sangre de
Cordn
Hasta las 24
Hrs
Hasta las 48
Hrs
Del 3 al 5
Nacidos a
termino
25 mg%
Prematuros
60mg%
80mg%
75mg%
120mg%
120mg%
240mg%
da
Amilasa. Hasta 1250 U/I
Fosfatasa Alcalina. Adultos 68-240 UI/I
Nios 100 - 400UI/I
Transaminasa TGO Hasta 12 U/I
Transaminasa TGP Hasta 12 U/I
Calcio 8.5 10.5 mg/dl
THEVENON EN HECES
(Sangre Oculta En Heces)
Procedimiento
En un tubo colocar 2 ml de Agua destilada + 1 porcin de
heces. Luego agregar 4 gotas de cido Actico + 4 gotas de
Piramidon por las paredes + 4 gotas de Agua Oxigenada.
Dejar reposar por 1 minuto y observar:
Resultados:- Color Morado o Lila es una reaccin positiva
- Si no hay presencia del color lila es negativa.
TIEMPO DE PROTROMBINA
Muestra: Plasma
Reactivo de Trabajo: Soluplastin reconstituido en
refrigerador. Es estable 5 dias a partir del momento de su
reconstitucin
Recoleccin de Muestra: Obtener sangre cuidadosamente y
colocar en un frasco con anticoagulante (Citrato de Sodio al
3.8%) en proporcin 9+1 exacta (4.5ml de sangre + 0.5ml
de anticoagulante). Mezclar suavemente. Centrifugar y
separar el plasma antes de los 30 minutos.
Procedimiento
1. Colocar el plasma en bao de agua a 37C durante 2 a 3
minutos (no mas de 10 minutos)
2. En un tubo de hemolisis, colocar 0.2ml 0 200ul de
Soluplastin reconstituido y preincubar a 37C durante 2 a 3
minutos (no mas de 10 minutos)
3. Pipetear 100 ul del plasma preincubado y agregar
rapidamente al tubo conteniendo 0.2ml o 200ul de
Soluplastin, disparando simultneamente el cronometro
4. Mantener el tubo dentro del bao maria y cerca de una
fuente de luz. Previo al tiempo estimado de coagulacin,
sacar el tubo del bao, inclinar suavemente una o dos veces
20 ul
20 ul
50 ul
1 gota o 50ul
0.020 u 20 ul
0.010 u 10ul
0.005 u 5 ul
1:80 o 1/80
1:160 o 1/160
1:320 o 1/320
GLUCOSA
Muestra: Suero, Plasma.
Reactivo de Trabajo: (Para 25 ml) En una probeta colocar
12.5 ml de agua destilada, 1.25 ml de Reactivo 4-AF, 1.25
ml de Reactivo Fenol y completar a 25 ml con agua
destilada. Agregar 75 ul de GOD/POD previamente
homogeneizadas. Mezclar por inversin, sin agitar. Rotular
y colocar fecha de preparacin.Guardar en refrigeracin y
en frasco de color caramelo siendo estable un mes a partir
de la fecha de preparacin (Duracin de 30 das).
Procedimiento
B
S
D
Estandar
---10 ul
---Muestra
------10 ul
Rvo,Trabajo
1ml
1ml
1ml
Incubar por 10 minutos a 37C; luego leer utilizando la
tecla del test de GLUC. Estndar = 1.00g/L
UREA
Muestra: Suero o Plasma
Reactivo de Trabajo: No se prepara, se trabaja con los
reactivos que vienen listos en la caja para usar
Procedimiento
B
S
D
Estandar
---20 ul
--Muestra
-------20 ul
Ureasa
1 gota
1 gota
1 gota
Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C
Luego agregar:
Reactivo 1
1ml
1ml
1ml
Reactivo 2
1ml
1ml
1ml
Mezclar por agitacin suave e incubar 5 minutos a 37C
Luego agregar:
Agua estilada
10ml
10ml
10ml
Mezclar por inversin y retirar del bao. Despus de 10
minutos realizar lectura en equipo utilizando la tecla del
test de UREA. Estndar = 0.60g/L
CREATININA
Muestra: Suero u Orina
Reactivo de trabajo: Mezclar en frasco plstico partes
iguales de cido Pcrico (Color amarillo) y Buffer/PLE
(incoloro).Rotular y colocar fecha de preparacin. El
RETICULOCITOS
Estndar
---5 ul
---Muestra
-------5 ul
Rvo.Trabajo
0.5ml
0.5ml
0.5ml
Incubar 15 minutos a 37C y leer en equipo calibrado
utilizando tecla de test CHOL. Estandar = 2.00g/L
TRIGLICERIDOS
Muestra: Suero o Plasma
Reactivo de Trabajo: Reconstituir el contenido de un vial de
Enzimas con una porcin de Buffer y luego transferir al
frasco de Buffer enjuagando varias veces. Homogenizar y
fechar. Es estable en refrigerador 30 das a partir de su
preparacin.
Procedimiento
B
S
D
Muestra
------5 ul
Estndar
---5 ul
--Rvo.Trabajo
0.5ml
0.5ml
0.5ml
Mezclar, incubar 5 minutos a 37C y luego leer en equipo
calibrado utilizando tecla test TRIG. Estandar = 2.00g/L
ACIDO URICO
Muestra: Suero o Plasma
Reactivo de Trabajo: Disolver el contenido de un vial de
Enzimas en un frasco de Buffer. Enjuagar varias veces el
vial con Buffer. Mezclar hasta disolucin completa.
Homogeneizar y fechar. Estable un mes a partir de la fecha
de su preparacin.
Procedimiento
B
S
D
Estndar
---20 ul
---Muestra
------20ul
Rvo.Trabajo
1ml
1ml
1ml
Mezclar, Incubar 5 minutos a 37C y luego leer en equipo
calibrado utilizando la tecla test URIC. Estandar = 100mg/L
BILIRRUBINAS
Muestra: Suero o Plasma
Reactivos de Trabajo:
Desarrollador listo a usar
Reactivo Sulfanilico listo a usar
-----
-----
50ul
Standard
----50ul
---Mezclar. Incubar exactamente 10 minutos (cronometro) y
agregar:
Reactivo de
2.5ml
2.5ml
2.5ml
Color
Mezclar de inmediato cada tubo. Retirar los tubos del bao
y leer en equipo calibrado presionando tecla test N 6 y
luego ENTER
TRANSAMINASAS
Muestra:
Suero
D
Sustrato (GOT o GOP)
0.125ml o 125ul
Colocar en bao de agua a 37C unos minutos, luego
agregar:
Suero
25ul
Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30
minutos y agregar:
Reactivo 2,4-DNFH
0.125ml o 125ul
Mezclar, dejar 10 minutos a 37C. Luego agregar
Diluyente para Enzimas
1.25 ml
Mezclar por inversin y retirar del bao mara. Despus
de 2 minutos leer la absorbancia en equipo presionando
tecla de Absorbance, buscar 405nm con y luego
1 presionar
ENTER. Clculos empleando tablas segn absorbancia
leda en el equipo.
TRANSAMINASAS (TABLAS)
TGO o GOT
U/I
505nm
5
0.034
7
0.047
10
0.061
14
0.080
19
0.100
23
0.115
26
0.129
31
0.146
36
0.164
41
0.180
46
0.196
50
55
61
67
74
0.210
0.224
0.239
0.254
0.269
U/I
5
9
14
18
23
27
32
37
42
47
52
57
62
68
74
80
87
96
104
TGP O GPT
505nm
0.034
0.061
0.100
0.129
0.164
0.196
0.224
0.254
0.284
0.314
0.340
0.364
0.389
0.415
0.442
0.468
0.494
0.524
0.552
HDL
Muestra: Suero o Plasma
Reactivo de Trabajo: Reactivo precipitante preparado para
su uso en la caja. Para realizar el proceso en si se utiliza el
reactivo de trabajo de Colesterol
Procedimiento
En un tubo medir 0.25ml o 250ul de muestra y agregar 25
ul de reactivo precipitante.Homogenizar agitando sin
invertir durante 20 segundos y dejar 30 a 40 minutos en
refrigerador.Centrifugar luego por 15 minutos a
3000rpm.Usar el sobrenadante como muestra
En tres tubos colocar B (Blanco), S (Estandar) y D
(Desconocido) y colocar:
Sobrenadante
Estandar
Reactivo De
Trabajo de
Collesterol
B
--0.5ml o
500ul
S
-5ul
0.5ml o
500ul
D
25ul
---0.5ml o
500ul
Urea...0.20 0.45g/L
Creatinina. 0.80 1.40 g/L
Colesterol Total. 1.50 2.50 g/L
HDL... 0.30 0.70 g/L
LDL. Hasta 1.40 g/L
VLDL.. Hasta 0.36 g/L
Triglicridos. 0.35 1.65 g/L
cido rico.. Hombres 25 60 mg/L
Mujeres 20 -50 mg/L
Protenas Totales.. 6.50 8.0 g/L
Albmina... 3.4 4.5 g/L
Globulina.. 2.60 3.10 g/L
Relacin Albmina/Globulina (A/G). 1.2 2.2 g/L
Bilirrubina Directa.. Hasta 0.20 mg%
Bilirrubina Total.. Hasta 1.0 mg%
Bilirrubina Indirecta.... Hasta 0.80 mg%
Bilirrubina Total Recin Nacidos
Nacidos a
termino
25 mg%
Prematuros
Sangre de
Cordn
Hasta las 24
60mg%
80mg%
Hrs
Hasta las 48
75mg%
120mg%
Hrs
Del 3 al 5
120mg%
240mg%
da
Amilasa. Suero < 120UA/dl
Orina < 260UA/dl
Fosfatasa Alcalina. Adultos 68-240 UI/I
Nios 100 - 400UI/I
Transaminasa TGO Hasta 12 U/I
Transaminasa TGP Hasta 12 U/I
THEVENON EN HECES
(Sangre Oculta En Heces)
Procedimiento
En un tubo colocar 2 ml de Agua destilada + 1 porcin de
heces. Luego agregar 4 gotas de cido Actico + 4 gotas de
Piramidon por las paredes + 4 gotas de Agua Oxigenada.
Dejar reposar por 1 minuto y observar:
Resultados:- Color Morado o Lila es una reaccin positiva
- Si no hay presencia del color lila es negativa.
TIEMPO DE PROTROMBINA
Muestra: Plasma
20 ul
20 ul
50 ul
1 gota o 50ul
20 ul
Antgeno de Latex
20 ul
Mezclar con palillo hasta obtener una suspensin uniforme
en toda la superficie del circulo. Inmediatamente, disparar
un cronometro, balancear suavemente la placa y observar
macroscopicamente el resultado dentro de los dos minutos.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
NEGATIVO: Suspensin homogenea
POSITIVO : Aglutinacin que aparece dentro de los dos
minutos.
ANTIGENOS FEBRILES o AGLUTINACIONES
Muestra: Suero
Procedimiento
1. Dividir una placa de vidrio en sectores de 4 cm2
aproximadamente.
2. Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos
sectores 80ul, 40ul, 20ul, 10ul y 5ul de suero
3. Colocar una gota de antigeno previamente agitado sobre
cada gota de suero.
4. Mezclar el suero y el antigeno utilizando una varilla.
Debe emplearse una varilla distinta para cada dilucin de
suero.
5. Agitar la placa durante 2 minutos en forma circular.
6. Observar la aglutinacin utilizando luz indirecta sobre
fondo oscuro.
7. Las diluciones del suero en la titulacin en placa
equivalen aproximadamente a las de la prueba en tubo
como se muestra a continuacin:
Volumen de suero(ml o ul)
Dilucin aprox. En tubo
0.080 u 80ul
1:20 o 1/20
0.040 u 40 ul
1:40 o 1/40
0.020 u 20 ul
1:80 o 1/80
0.010 u 10ul
1:160 o 1/160
0.005 u 5 ul
1:320 o 1/320
Resultados: En cualquiera de las diluciones que salga
positivo se reporta Positivo con la dilucin correspondiente
RETICULOCITOS