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RADICALES LIBRE Y ANTIOXIDANTES

RADICALES LIBRES
Los radicales libres son molculas inestables y muy reactivas. Para
conseguir la estabilidad modifican a molculas de su alrededor provocando
la aparicin de nuevos radicales, por lo que se crea una reaccin en cadena
que daar a muchas clulas y puede ser indefinida si los antioxidantes no
intervienen. Los radicales libres producen dao a diferentes niveles en la
clula:
Atacan a los lpidos y protenas de la membrana celular por lo que la
clula no puede realizar sus funciones vitales (transporte de nutrientes,
eliminacin de deshechos, divisin celular). El radical superxido, O2, que
se encuentra normalmente en el metabolismo provoca una reaccin en
cadena de la lipoperoxidacin de los cidos grasos de los fosfolpidos de la
membrana celular.
Atacan al DNA impidiendo que tenga lugar la replicacin celular y
contribuyendo al envejecimiento celular. Los procesos normales del
organismo producen radicales libres como el metabolismo de los alimentos,
la respiracin y el ejercicio. Tambin estamos expuestos a elementos del
medio ambiente que crean radicales libres como la polucin industrial,
tabaco, radiacin, medicamentos, aditivos qumicos en los alimentos
procesados y pesticidas. No todos los radicales libres son peligrosos pues,
por ejemplo, las clulas del sistema inmune crean radicales libres para
matar bacterias y virus, pero si no hay un control suficiente por los
antioxidantes, las clulas sanas pueden ser daadas.
ANTIOXIDANTES
Un antioxidante es aquella sustancia que presenta bajas concentraciones
respecto a la de un sustrato oxidable (biomolcula) que retarda o previene
su oxidacin. Los antioxidantes que se encuentran naturalmente en el
organismo y en ciertos alimentos pueden bloquear parte de este dao
debido a que estabilizan los radicales libres. Son sustancias que tienen la
capacidad de inhibir la oxidacin causada por los radicales libres, actuando
algunos a nivel intracelular y otros en la membrana de las clulas, siempre
en conjunto para proteger a los diferentes rganos y sistemas. Existen
diferentes tipos de oxidantes:
Antioxidantes endgenos: mecanismos enzimticos del organismo
(superxidodismutasa, catalasa, glutatin peroxidasa, glutatin y la
coenzima Q-). Algunas enzimas necesitan cofactores metlicos como
selenio, cobre, zinz y magnesio para poder realizar el mecanismo de
proteccin celular.
Antioxidantes exgenos: son introducidos por la dieta y se depositan en
las membranas celulares impidiendo la lipoperoxidacin (vitaminas E y C y
del caroteno).

En el caf existen unos excelentes antioxidante que son los flavonoides,


compuestos polifenlicos.

Clasificacin de los antioxidantes

Un nutriente tiene propiedades antioxidantes cuando es capaz de


neutralizar la accin oxidante de la molcula inestable de un radical libre sin
perder su propia estabilidad electroqumica. El organismo est luchando
contra radicales libres a cada momento del da, pero el problema se produce
cuando tiene que tolerar de forma continuada un exceso de radicales libres.
El exceso es producido sobre todo por contaminantes externos que entran a
nuestro cuerpo. La contaminacin atmosfrica, el humo del tabaco, los
herbicidas, pesticidas o ciertas grasas son algunos ejemplos de elementos
que generan radicales libres que ingerimos o inhalamos. Este exceso no
puede ya ser eliminado por el cuerpo y, en su labor de captacin de
electrones, los radicales libres daan las membranas de nuestras clulas,
llegando finalmente a destruir y mutar su informacin gentica, facilitando
as el camino para que se desarrollen diversos tipos de enfermedades. La
accin de los radicales libres est ligada al cncer as como al dao causado
en las arterias por el colesterol "oxidado", lo que relaciona directamente
estas molculas con las enfermedades cardiovasculares.
ESTRS OXIDATIVO
Especies reactivas del oxgeno (ERO) es el trmino que se aplica
colectivamente a las molculas radicales y no radicales que son agentes
oxidantes y/o son fcilmente convertidos a radicales. En la ltima dcada se
han acumulado evidencias que permiten afirmar que los radicales libres y el
conjunto de especies reactivas que se les asocian juegan un papel central
en nuestro equilibrio homeosttico, que es el normal funcionamiento de los
mecanismos de regulacin que conservan el estado normal fisiolgico de los
organismos. En mamferos son muchos los procesos fisiopatolgicos
causados por estas especies tales como los mecanismos patognicos
asociados a virus, bacterias, parsitos y clulas anormales, constituyendo
un mecanismo de defensa del organismo frente a estos agresores. Cuando

el aumento del contenido intracelular de ERO sobrepasa las defensas


antioxidantes de la clula se produce el estrs oxidativo, a travs del cual se
induce dao a molculas biolgicas como lpidos, protenas y cidos
nucleicos. El estrs oxidativo se presenta en diversos estados patolgicos en
los cuales se altera la funcionalidad celular, contribuyendo o
retroalimentando el desarrollo de enfermedades degenerativas como la
aterosclerosis, cardiomiopatas, enfermedades neurolgicas y cncer
(Gutteridge y Halliwell, 1999).

ERO
El oxgeno es una molcula bsicamente oxidante, hasta el punto que en las
clulas que lo utilizan para su metabolismo es el principal responsable de la
produccin de especies reactivas del oxgeno (ERO). Sin embargo, no todas
las especies oxidantes tienen un origen endgeno; la existencia de factores
exgenos, como la radiacin solar, toxinas fngicas, pesticidas o
xenobiticos, pueden incrementar su nivel. En condiciones normales, las
clulas metabolizan la mayor parte del oxgeno (O2) con la formacin de
agua sin formacin de intermediarios txicos, mientras que un pequeo
porcentaje (en torno al 5%) forman tres intermediarios altamente txicos,
dos de los cuales son literalmente radicales libres (el anin superxido y el
hidroxilo). En situaciones en las que exista una mayor actividad metablica
(etapas del crecimiento, desarrollos activos o procesos inflamatorios) ocurre
una mayor demanda tisular de O2 y parte de l se metaboliza, generndose
un alto nmero de sustancias oxidantes.
La segunda gran fuente de ERO tambin es endgena y est constituida por
el metabolismo de las clulas defensivas tales como los polimorfonu cleares,
los monocitos sensibilizados, los macrfagos y los eosinfilos. Para que
stas puedan cumplir su misin, estn dotadas de diversas protenas as
como de vas metablicas que generan varias especies qumicamente
agresivas como perxido de hidrgeno, radicales superxido e hidroxilo,
cuyo fin ltimo es lesionar y destruir elementos extraos. En condiciones
normales estas especies reactivas son producidas y utilizadas en
compartimentos celulares como los lisosomas que, aunque en el interior de
los fagocitos, no tienen por qu daar a las clulas siempre y cuando los
mecanismos antioxidantes de stas funcionen adecuadamente.
Los oxidantes pueden tambin proceder del exterior, bien sea directamente
o como consecuencia del metabolismo de ciertas sustancias. Algunos
ejemplos lo constituyen la contaminacin ambiental, la luz solar, las
radiaciones ionizantes, una concentracin de oxgeno demasiado elevada,
los pesticidas, metales pesados, la accin de ciertos xenobiticos
(cloroformo, paracetamol, etanol, tetracloruro de carbono, violeta de
genciana) o el humo de tabaco. Sin embargo el papel de los radicales libres

no ha de ser abordado slo desde una perspectiva negativa o patolgica.


Estos compuestos cumplen tambin una funcin fisiolgica al participar, en
condiciones normales, en la defensa frente a las infecciones, en el
metabolismo normal, en la fagocitosis e inflamacin.

PEROXIDACION LIPIDICA
Todas las clulas estn rodeadas por una membrana que las separa del
medio extracelular. La membrana celular contiene protenas que juegan
papeles vitales en la interaccin de la clula con otras clulas, hormonas y
agentes reguladores del lquido extracelular. La estructura bsica de todas
las membranas biolgicas es la bicapa lipdica, la que funciona como una
barrera de permeabilidad selectiva (Goodam, 1998). stas son ricas en
cidos grasos poliinsaturados (PUFAs) y por lo tanto vulnerables al ataque
de radicales libres que traen como consecuencia la peroxidacin lipdica.
Esta es generalmente inducida por un radical hidroxilo que sustrae un
hidrgeno a la cadena lateral de un cido graso formando un radical
carbonado, lo que genera una cadena de reacciones oxidativas. Los
antioxidantes, pueden formar complejos estables impidiendo la accin
catablica de los radicales libres en la membrana celular (Halliwell, 1990).
Los mecanismos homeostticos con que el organismo enfrenta el dao
oxidativo que habitualmente causan estas especies son numerosos y
diversos, reflejando la multiplicidad de formas de radicales libres y especies
reactivas, como tambin los numerosos compartimientos donde actan en
el organismo y las propiedades fsicas de stos (Kinsella et al., 1993).

SISTEMAS DE DEFENSA ANTIOXIDANTE CELULAR


La capacidad antioxidante celular est dada por mecanismos a travs de los
cuales la clula anula la reactividad y/o inhibe la generacin de radicales
libres (Thornalley y Vasak, 1985; Greenwald, 1990; Palamanda y Kehrer,
1992). Estos mecanismos son adecuados a la muy corta vida media de los
radicales libres y comprenden molculas pequeas, endgenas y exgenas
con capacidad antioxidante. Los antioxidantes exgenos provienen de la
dieta, y dentro de este grupo se incluyen la vitamina E, la vitamina C y los
carotenoides. La vitamina C constituye el antioxidante hidrosoluble ms
abundante en la sangre, mientras que la vitamina E es el antioxidante
lipoflico mayoritario. El selenio, el ms txico de los minerales incluidos en
nuestra dieta, acta junto con la vitamina E como antioxidante (Kinsella et
al., 1993). La vitamina E se encuentra presente en aceites vegetales,
aceites de semilla, germen de trigo, man, carnes, pollo, pescados y algunas
verduras y frutas, en tanto la vitamina C se puede encontrar en frutas y
verduras. Los carotenoides son compuestos coloreados tales como los
betacarotenos, presentes en verduras y frutas amarillas y anaranjadas, y en
verduras verdes oscuras, los alfacarotenos en la zanahoria, los licopenos en

el tomate, las lutenas y xantinas en verduras de hojas verdes como el


brcoli, y las beta criptoxantinas en frutas ctricas.
Recientemente se han descubierto en algunos alimentos otros antioxidantes
no nutrientes, los compuestos fenlicos. Algunas fuentes son los frijoles
(isoflavonas), ctricos (flavonoides), cebolla (quercetina) y polifenoles
(aceitunas). Tambin se han encontrado algunos antioxidantes fenlicos en
el caf, vino tinto y t. Por esta razn, la forma de suplir los antioxidantes
para proteger al organismo del efecto oxidativo producido por los radicales
libres es el consumo de alimentos ricos en vitamina E, vitamina C,
carotenoides y otras sustancias que tienen funcin antioxidante, tales como
los compuestos fenlicos (Tabla I).

COMPUESTOS FENOLICOS

Se trata de un gran grupo de compuestos presentes en verduras y frutas, en


los que ejercen una potente accin antioxidante necesaria para el
funcionamiento de las clulas vegetales (Tabla II).

Un producto con contenido importante en polifenoles es el vino,


componente esencial de la dieta mediterrnea y que puede ser uno de los
factores responsables de la baja incidencia de enfermedad coronaria en las
poblaciones mediterrneas (Renaud & De Lorgeril, 1992; Renaud & Ruf,
1994). Varios estudios han analizado las posibles explicaciones de la as
llamada "paradoja francesa" y el efecto de la dieta mediterrnea (De
Lorgeril & Salen, 1999; Renaud & Ruf, 1994), los que demostraron que la
correlacin entre la mortalidad coronaria y el consumo de diferentes
alimentos, en un conjunto de 21 pases, es mucho mayor en el vino que
para otras fuentes, como verduras y grasas vegetales. Por otra parte, la
correlacin positiva para grasas derivadas de productos lcteos es alta, de
modo que estos autores priorizan el papel del vino sobre el de frutas y
verduras (Renaud & Ruf, 1994). La capacidad antioxidante del vino est
directamente relacionada con su contenido en polifenoles. El tipo de
polifenoles determina en ltimo trmino su capacidad antioxidante y su
concentracin cambia segn su variedad, rea de produccin, tcnicas
agrarias, proceso de vinificacin, vendimia, ao y edad.

La contribucin de cada compuesto en particular depende no slo de su


concentracin y de su calidad antioxidante sino que tambin de su
interaccin con otros componentes. Estudios in vitro demuestran el efecto
protector del vino sobre la oxidacin de las lipoprotenas de baja densidad
(LDL), lo que podra explicar su efecto in vivo. La LDL es un transportador de
colesterol que lo lleva desde el hgado hacia los tejidos, es el llamado
colesterol malo. Los estudios indican que la ingestin de vino tinto est
asociada a un aumento de la capacidad antioxidante del plasma, vale decir
que en algn grado ser necesario determinar qu componentes
antioxidantes del vino son absorbidos en el tubo digestivo, alcanzando
concentraciones plasmticas suficientes para proteger a las LDL de la
oxidacin, ya que al oxidarse el organismo las encapsula, depositndose en
las arterias, constituyendo la placa aterosclertica. Los estudios de
intervencin a largo plazo demuestran que el consumo moderado y regular
de vino eleva la capacidad antioxidante del plasma, la resistencia de las LDL

a la oxidacin y el contenido total de polifenoles plasmticos. En otros


estudios se ha observado que una dieta rica en grasas induce dao
oxidativo en el ADN, mientras que una dieta rica en frutas y verduras lo
protege. Claramente el consumo moderado y regular de vino tinto previene
el dao oxidativo al ADN, inducido por una dieta rica en grasas, y confiere
proteccin adicional una dieta rica en frutas y verduras. Estos resultados
concuerdan con evidencias epidemiolgicas que muestran el rol protector
de frutas, verduras y vino en la reduccin de ciertos tipos de cncer. Se
puede agregar, adems, que el consumo moderado y regular de vino tinto
protege la funcin endotelial. El endotelio es la capa celular arterial que est
en directo contacto con la sangre. Cada vez hay ms evidencias que asocian
la disfuncin endotelial con hipercolesterolemia, hipertensin, tabaquismo,
diabetes y otros factores de riesgo de enfermedad cardiovascular. Se ha
postulado a la disfuncin endotelial como el evento primordial en la cadena
de fenmenos que lleva a la formacin de placas degeneradas presentes en
la aterosclerosis. La explicacin causal probablemente est relacionada con
el aporte de antioxidantes que hace el vino tinto, los que protegeran al
oxido ntrico, principal regulador de la funcin endotelial y que es producido
por las clulas endoteliales. Los antioxidantes del vino tinto, compuestos
fenlicos, particularmente flavonoides, seran los responsables de la
mantencin de la actividad vascular, especialmente en los individuos que
ingieren dieta grasa, la que induce estrs oxidativo.
ANTIOXIDANTES PLASMATICOS
Existen evidencias epidemiolgicas que sustentan el papel patognico de
los radicales libres en procesos biolgicos (Maxwell, 1995). Los principales
antecedentes surgen de estudios que muestran la correlacin entre la
incidencia de enfermedades inflamatorias y degenerativas y las bajas
concentraciones de antioxidantes en la sangre (Sohal y Weindruch, 1996).
La relacin entre la presencia de algunas enfermedades, como las
cardiovasculares y cncer entre otras, se puede establecer con la elevacin
de marcadores de dao oxidativo y disminucin de los niveles plasmticos
de antioxidantes, los que pueden ser modificados al aumentar la ingesta de
antioxidantes (Meydani, 2001; Laurin et al., 2004). El plasma puede
estabilizar especies reactivas del oxgeno de vida media mayor, como el
anin superxido o el perxido de hidrgeno, previniendo reacciones con
iones metlicos catalticos que pueden generar especies an ms nocivas
(Halliwell y Gutteridge, 1989). Debido a esto, el estatus antioxidante del
plasma es el resultado concomitante de muchos compuestos e interacciones
metablicas sistmicas. La medicin de esta capacidad antioxidante
combinada puede ser ms relevante que la determinacin individual de los
antioxidantes presentes en la sangre. A lo anterior se suma el hecho que la
capacidad antioxidante celular est principalmente determinada por
sistemas enzimticos, mientras que las plasmticas estn asociadas a la
concentracin de antioxidantes de bajo peso molecular suplementados por
la dieta. Estos compuestos son rpidamente consumidos y necesitan ser
recambiados para mantener el balance frente a las especies oxidantes.

Generalmente se investiga su efecto en el estatus antioxidante plasmtico


de voluntarios sanos sometidos a la ingestin de stos.
Es posible concluir que la complejidad de los productos naturales con
capacidad antioxidante constituye uno de los ms grandes desafos para los
fitoqumicos, tanto en el aislamiento y elucidacin estructural de principios
activos como en el estudio de stos en medios biolgicos. En nuestros
laboratorios hemos estado estudiando la capacidad antioxidante de una
planta chilena, la Ugni molinae Turcz, conocida como Murtilla, cuyas hojas a
la forma de infusiones eran originalmente utilizadas por pueblos nativos
para tratar la diarrea y disentera (Hoffmann, 1991). Es un arbusto de gran
follaje que crece en el sur del pas, de hojas pecioladas aovado-oblongas
con pice agudo de 2-2,5 centmetros de longitud; sus frutos, consistentes
en bayas rojizas de sabor dulce y aromtico, son comestibles (ver figuras).
Estudios sobre la composicin qumica de las hojas sealan la presencia de
polifenoles (Rubilar et al., 2006), compuestos que se caracterizan por tener
propiedades antioxidantes y bajas toxicidades (Devany, et al., 1997). En
efecto, nuestros trabajos experimentales demostraron que los extractos de
sus hojas poseen dicha propiedad (Suwalsky et al., 2006a). Cabe tambin
destacar que los mecanismos moleculares de la accin antioxidante no
estn del todo aclarados y an es materia de debate. Sin embargo, se ha
sugerido que las molculas con propiedades antioxidantes se ubicaran en
las membranas que rodean las clulas afectando su fluidez, impidindose de
este modo la difusin de los radicales libres al interior de las clulas (Arora
et al., 2000). Los resultados de nuestros estudios demostraron que,
efectivamente, los extractos de las hojas de Murtilla perturbaban las
estructuras de membranas celulares (Suwalsky et al., 2006b). Estos
resultados permiten concluir que dado a que las hojas de Murtilla contienen
compuestos con capacidad antioxidante, podran utilizarse con fines
preventivos frente al estrs oxidativo.