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TTULO:
EFICACIA DE LA TIPIFICACIN SANGUNEA INVERSA PARA EVALUAR LA
REACCIN
HEMOLTICA
INMEDIATA
EN
TRANSFUSIONES
DE
AUTORAS:
Mayra Patricia Quinaluisa Patarn
Jacqueline Alejandra Villagrn Arvalo
TUTOR:
Lic. Fernando Jaramillo
RIOBAMBA ECUADOR
Junio - 2012
INVERSA
PARA
EVALUAR
LA
REACCIN
HEMOLTICA
DE
SUBGRUPOS
DEL
SISTEMA
ABO,
UTILIZANDO
.
Lcdo. Fernando Jaramillo
TUTOR
ii
CERTIFICA
(presidente)
______________________
______________________
______________________
iii
DERECHO DE AUTORA
iv
AGRADECIMIENTO
DEDICATORIA
A mis padres que depositaron toda su
confianza y esfuerzo en m, apoyndome da
a da en la valiosa tarea de mis estudios.
Infinitas gracias les doy por todos los
adelantos conseguidos,
Por regalarme la herencia incalculable que
solo ustedes pueden darme la educacin.
Mayra Quinaluisa
DEDICATORIA
La presente tesis se la dedico a mi familia que gracias a su
apoyo pude concluir mi carrera. A mi madre por hacer de
m una mejor persona a travs de sus consejos,
enseanzas y amor. A mis hermanos por estar siempre
presentes, acompandome para poderme realizar. A mi
esposo
por
estar
mi
lado
apoyndome,
por
darme
el
tiempo
para
realizarme
profesionalmente.
Jacqueline Villagrn
vi
RESUMEN
La Eficacia de la Tipificacin Sangunea Inversa para Evaluar la Reaccin
Hemoltica Inmediata en Transfusiones de Componentes Hemticos con
Derivaciones de Subgrupos del Sistema ABO, utilizando muestras de usuarias
transfundidas en el Servicio de Gineco Obstetricia y Centro Obsttrico del
H.P.G.D.R. Permite identificar la presencia o ausencia de Anticuerpos Naturales
del Sistema de Grupo ABO, causantes de reacciones hemolticas inmediatas o
tardas. Cada individuo posee unos determinados antgenos, los cuales se
conocen mediante la ejecucin de pruebas especficas como la tipificacin inversa,
prueba cruzada mayor, entre otras, las mismas que ayudaran a seleccionar el
componente sanguneo que tenga supervivencia aceptable en el organismo del
receptor, estas pruebas en conjunto se denominan pre transfusionales. La
aplicacin de la prueba inversa para evaluar anticuerpos ABO, permite
diagnosticar la reaccin hemoltica transfusional mediada por antgenos y
anticuerpos que derivan de los subgrupos. Los Centros Obsttricos y
Ginecolgicos del hospital, las emergencias de tipo quirrgicas demandan grandes
cantidades de la utilizacin de sangre. Durante el periodo de investigacin se
solicitaron varios hemoderivados siendo el de mayor peticin el Concentrado de
Glbulos Rojos Leucoreducidos en un nmero de 58 unidades, esto se da por su
alto beneficio en la transfusin ya que evita reacciones de carcter hemoltico.
Evitar estas lesiones es responsabilidad de los servicios de sangre o medicina
transfusional, es por ello la alta relevancia e importancia de valorar subgrupos
previo a la transfusin sangunea para evitar la sobre carga antignica y sus
posibles reacciones.
vii
SUMARY
viii
NDICE GENERAL
PORTADA.
ii
iii
DERECHOS DE AUTORA....
iv
AGRADECIMIENTOS.....
DEDICATORIAS...
vi
RESUMEN.
vii
SUMMARY. viii
NDICE GENERAL...
ix
NDICE DE ABREVIATURAS.
xii
xv
NDICE DE FOTOGRAFAS..
xv
NDICE DE IMGENES..
xvi
PROBLEMATIZACIN 4
1.1
1.2
1.3
OBJETIVOS.
1.3.1
Objetivo General.. 6
1.3.2
Objetivos Especficos.. 6
1.4
JUSTIFICACIN E IMPORTANCIA. 7
ix
CAPTULO II.
2.
MARCO TERICO....
2.1
ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIN.
2.2
FUNDAMENTACIN TERICA..
2.2.1
La Sangre.
2.2.2
Funciones de la Sangre.
10
2.2.2.1
Composicin de la Sangre
12
2.2.2.2
14
2.2.3
Principios de Inmunohematologa.
20
2.2.3.1
Antgenos..
20
2.2.3.2
Anticuerpos..
23
2.2.3.3
2.2.3.4
Sistema ABO
33
2.2.3.5
34
2.2.3.6
2.2.3.7
2.2.3.8
Sistema Rh 38
2.2.3.9
39
2.2.4
Componentes Sanguneos.
41
2.2.4.1
Sangre Total.
41
2.2.4.2
44
2.2.4.3
47
2.2.4.4
Plasma Refrigerado.
48
2.2.4.5
Concentrado Plaquetario
49
37
2.2.4.6
Crioprecipitado..
49
2.2.5
52
2.2.5.1
54
2.2.5.2
54
2.2.5.3
55
2.2.5.4
Determinacin de Subgrupos....
56
2.2.5.5
59
2.2.5.6
60
2.2.5.7
62
2.2.6
Transfusiones Obsttricas..
63
2.2.6.1
63
2.2.6.2
64
2.2.6.3
66
2.2.6.4
Reacciones No Hemolticas...
67
2.2.7
68
2.2.8.
Hiptesis y Variables...
70
2.2.8.1
Hiptesis................................
70
2.2.8.2
Variables
70
2.2.8.3
Operacionalizacin de Variables
71
CAPTULO III.
72
3.
MARCO METODOLGICO..
72
3.1
MTODOS
72
3.2
TIPOS DE INVESTIGACIN.
72
3.3
DISEO DE INVESTIGACIN..
73
3.4
POBLACIN Y MUESTRA.
73
xi
3.5
TCNICAS E INSTRUMENTOS
73
3.6
73
CAPTULO IV
84
4.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES..
84
4.1
CONCLUSIONES.
84
4.2
RECOMENDACIONES......
85
BIBLIOGRAFA.......
86
LINCOGRAFA..
87
ANEXOS
88
xii
ABREVIATURAS
Anticuerpos...
Ac
Antgenos..
Ag
C.G.R
g/l
g/dl
Grados Celsius.
Hemoglobina.
Hb
Hematocrito..
Ht
Inmunoglobulina..
Ig
Kilogramos
Kg
Mililitro
ml
ml/kg
Micrones
um
Milmetro Cbico..
mm3
Porciento
P.F.C.
r.p.m.
Segundos..
seg.
SAB
xiii
NDICE DE ANEXOS
Anexo N 1
Muestras.....
88
Anexo N 2
Tubos Rotulados
88
Anexo N 3
89
Anexo N 4
Centrifugacin.
89
Anexo N 5
Decantacin....
90
Anexo N 6
Muestra Preparada....
90
Anexo N 7
91
Anexo N 8
91
Anexo N 9
Lectura de Resultados..
92
Anexo N 10
Reactivos Utilizados..
92
Anexo N 11
Dia Cell.
93
Anexo N 12
93
Anexo N 13
94
Anexo N 14
94
xiv
NDICE DE FIGURAS
Figura 2.1
Inmunoglobulina G....
25
Figura 2.2
Inmunoglobulina A.
26
Figura 2.3
Inmunoglobulina M...
26
Figura 2.4
Inmunoglobulina D....
27
Figura 2.5
Inmunoglobulina E....
27
Figura 2.6
Aglutinacin...
31
NDICE DE FOTOGRAFAS
42
45
47
49
49
Fotografa2.6
52
Crioprecipitado..........
xv
NDICE DE IMGENES
Imagen 2.1
Vasos Sanguneos..
10
Imagen 2.2
Composicin de la Sangre.
13
Imagen 2.3
Glbulos Rojos.
14
Imagen 2.4
Glbulos Blancos.
15
Imagen 2.5
Polimorfo Nucleares
17
Imagen 2.6
Mononucleares.
19
Imagen 2.7
Plaquetas..
19
Imagen 2.8
Antgenos..
21
Imagen 2.9
Anticuerpos..
23
xvi
NDICE DE TABLAS
Tabla 2.1
SistemaABO...
36
Tabla 2.2
Anticuerpos delSistemaABO....
37
Tabla 2.3
Sistema ABO..
37
74
TABLA N3.6.2
75
76
77
79
80
81
xvii
INTRODUCCIN
CAPTULO I
1.- PROBLEMATIZACIN
Toda transfusin sangunea o de sus derivados, debe ser indicada cuando los
beneficios superan claramente los posibles riesgos , antes de administrar una
transfusin es necesario tener presente y respetar ciertas normativas como son
consentimiento informado del paciente o de sus familiares, en el cual se da a
conocer los beneficios y los riesgos de una transfusin, la necesidad de presentar
en
los
servicios
de
sangre
la
solicitud
pedido
de
sangre
sus
sangre
hemocomponente,
implica
administrar
tejidos
inmunolgicamente activos, lo que conlleva a riesgos que tienen que ver con el
imponderable de la vida humana, existen criterios tcnicos que justifican la
administracin de hemocomponente, las necesidades transfusionales en el rea
de Gineco obstetricia son valoradas en nuestro pas dentro del programa de
maternidad gratuita con un listado especfico de atenciones, en el Hospital
Provincial de Riobamba, se registra un alto ndice de pacientes, transfundidos
sangre y sus derivados, se ha registrado que en este servicio se acompaa a un
alto ndice de unidades alistadas, pero mayores del ndice de transfusiones.
Existen situaciones emergentes que requieren de un alto nmero de unidades
para su transfusin, esto implica un mayor riesgo para la adquisicin de
anticuerpos o antgenos netamente extraos al organismo que puedan provocar,
algn tipo de reacciones inmediatas o tardas.
Se ha clasificado la entrega de sangre, en tres instantes que son, atencin
urgente, emergente y de rutina. Estos intervalos de tiempo que involucran para la
entrega de sangre permiten, cumplir ciertos protocolos de anlisis o ensayos
involucrados en la compatibilidad. Si el pedido fuese emergente, es evidente que
la evaluacin pre transfusionales, seria limitada, ya que no se dispone del tiempo
de rutina, en el cual se realiza toda la gama de pruebas por el tiempo extensivo,
que se tiene para la entrega de los derivados.
En este tiempo de rutina, se puede interpretar la posibilidad, de subgrupos
presentes, y de sus anticuerpos que son causantes de futuras reacciones
CAPTULO II
2. MARCO TERICO
2.1 ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIN
2.2.1 La Sangre
La sangre es un tejido lquido que recorre el organismo transportando clulas, y
todos los elementos necesarios para realizar sus funciones vitales (respirar, formar
sustancias, defenderse de agresiones) y todo un conjunto de funciones muy
complejas y muy importantes para la vida.
La cantidad de sangre de una persona est relacionada con su edad, peso, sexo y
altura, una persona adulta se puede considerar que tiene entre 4.5 y 6 litros de
sangre.
Todos los rganos del cuerpo humano funcionan gracias a la sangre que circula
por arterias, venas y capilares.
9
Fuente: www.monografias.com
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
Transporte de alimentos
10
Coagulacin
La sangre tapona las heridas tanto internas como externas, para evitar las
hemorragias. En esta funcin, las plaquetas se agrupan alrededor de la herida y
dan paso a la formacin del coagulo o trombo, que tambin incluye glbulos
blancos y glbulos rojos
Regulacin de la temperatura
alcance
valores
anormales.
La
temperatura
corporal
debe
ser
aproximadamente 37C.
Regulacin hormonal
Excretora
11
Mantenimiento del pH
Hemosttica
Cuando se produce una lesin de los vasos sanguneos, la sangre detiene sus
propias perdidas. Esto se produce mediante el llamado fenmeno de la
hemostasia. (1.- San Miguel, 2009).
2.2.2.1
Composicin De La Sangre
Plasma Sanguneo
12
frente
las
infecciones.
Su
disminucin
acarreara
inmunodeficiencia.
Otras
protenas:
Transportan
sustancias
necesarias
para
el
normal
GOOGLE.
Fuente: www.quimbiotec.com
Elaborado por M. Quinaluisa, J. Villagrn
13
2.2.2.2
Fuente: www.drgen.com
Elaborado por M. Quinaluisa, J. Villagrn
transporte de oxigeno desde los pulmones a los diferentes tejidos del cuerpo para
que las clulas respiren y tambin eliminan los residuos producidos por la
actividad celular (dixido de carbono en la sangre).
Valores normales
Mujeres: 4500.000 por mm3
Hombres: 5000.000 por mm3
Imagen N 2.4: Glbulos Blancos
Fuente: www.wordpress.com
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
15
16
b) Eosinfilos
Son leucocitos que se activan en forma tarda en una inflamacin. Responden a
enfermedades alrgicas y por parsitos. Son de granulacin gruesa anaranjada o
acidfila.
Valor normal: 1 - 3%
c) Basfilos
Los basfilos tienen granos relativamente grandes pero escasos; se tien de color
prpura con colorantes bsicos; y sus ncleos tienen forma de S.
Intervienen en el proceso inflamatorio, estimulan la produccin de la histamina.
Son de coloracin azul.
Valor normal: 0 - 1%
Fuente: kike-algoparaelcap.blogspot.com
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
17
MONONUCLEARES O AGRANULOCITO:
a) Monocitos
Forma la segunda lnea de defensa del organismo; su ncleo tiene forma de
rin. Su funcin es de fagocitosis (eliminar cuerpos extraos) como macrfagos.
Valor normal: 2 -10 %
b) Linfocitos
Son los principales agentes del sistema inmunolgico, todos son formados en la
medula sea, solo se diferencian en cuanto a los lugares de maduracin.
Se distinguen varios tipos de linfocitos, dependiendo de su papel inmunolgico.
c) Linfocitos B.-
18
Fuente: http://saludmiguelschweiz.blogspot.com
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
Fuente: kike-algoparaelcap.com
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
19
Fuente: es.wikipedia.org
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
TIPOS DE ANTGENOS
XENOANTGENOS.- Son Ag o inmungenos que se origina en una especie
diferente
la
inmunizada.
Todos
los
procedentes
de
plantas,
21
22
el
Fuente: es.wikipedia.org
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
Los anticuerpos son protenas integradas por cadenas de aminocidos unidas por
puentes peptdicos. Los anticuerpos IgG poseen cuatro cadenas, dos pequeas o
livianas y dos ms grandes o pesadas. Por contraste, los IgM se componen de
10 cadenas livianas y 10 pesadas.
23
Activacin de linfocitos
24
TIPOS DE INMUNOGLOBULINAS
ANTICUERPOS NATURALES E INMUNES
Son inmunoglobulinas que aparecen independientemente de cualquier tipo de
estmulo y generalmente son IgM. Los anticuerpos IgM constituyen alrededor del
8% de las inmunoglobulinas totales. Tienen un peso molecular de 900.000. No
pueden atravesar la placenta, de manera que provocan Enfermedad Hemoltica
del Recin Nacido. Aglutina con facilidad los glbulos rojos suspendidos en
solucin salina y su sobrevida es de apenas 10 das.
Durante las reacciones antgeno-anticuerpo, a menudo activan el complemento y
en consecuencia, causan hemolisis de los eritrocitos, ms que aglutinacin.
Los anticuerpos inmunes de grupo sanguneo suelen ser IgG y se producen en
presencia de antgenos eritrocitarios extraos. Este evento puede tener lugar
como consecuencia de una transfusin de sangre o el caso de la embarazada, por
pasaje de sangre fetal a la circulacin materna.
Figura N 2.1: Inmunoglobulina G
Fuente: es.wikipedia.org
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
25
Fuente: es.wikipedia.org
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
Fuente: es.wikipedia.org
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
26
Fuente: es.wikipedia.org
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
Fuente: es.wikipedia.org
Elaborado por: M. Quinaluisa, J. Villagrn
27
28
Reactivos antiglobulnicos
Enzimas proteolticas
29
Algunos anticuerpos IgM y unos pocos IgG hemolizan los glbulos rojos, cuando
los anticuerpos se fijan a los antgenos, el complemento podra activarse e inducir
ruptura y destruccin de los glbulos rojos.
Por lo tanto, la lisis tambin indica la presencia de una reaccin antgeno
anticuerpo de grupo sanguneo y como la aglutinacin, debe consignarse.
La reaccin entre el antgeno y sus correspondientes anticuerpos pueden
producirse in vivo o in vitro, la reaccin in vivo, generalmente coincide con la
invasin del organismo por antgenos extraos a l, contra los que reacciona
produciendo anticuerpos, en estados de autoinmunidad, la reaccin antgeno
anticuerpo,
puede
como:
anemia
hemoltica
30
31
En el organismo (in vivo) o en un tubo de ensayo (in vitro), los glbulos rojos
nunca contactan entre s en condiciones fisiolgicas normales porque tienen carga
elctrica negativa. Como las cargas iguales se repelen y las opuestas se atraen,
los eritrocitos se rechazan y no se tocan.
La distancia que los separa es mnima, pero suficiente para evitar que las
molculas pequeas de IgG se interpongan entre las clulas y las aglutinen, sin
embargo, las molculas de IgM ms grandes, podran unirlas. En consecuencia,
los anticuerpos IgM pueden provocar aglutinacin directa de los glbulos rojos.
Pero los IgG solo recubren y sensibilizan.
La carga negativa de los eritrocitos deriva de los grupos de cido neuramnico de
la membrana. La fuerza que mantiene la separacin entre las clulas a veces se
denomina potencial zeta
Temperatura
Ph
32
Potencia inica
Cuando se reduce la potencia inica del medio en el que suspenden los glbulos
rojos, la reaccin antgena anticuerpo se acelera. Si se utiliza solucin salina de
baja fuerza inica (liss), el periodo de incubacin de la prueba antiglobulinica se
abrevia a 15 minutos.
2.2.3.3 Sistemas de Grupos Sanguneos
En cada uno de los grupos descubiertos, los hemates tienen en su superficie una
sustancia (antgeno), que es diferente a cada grupo.
El grupo A tiene el antgeno A, el grupo B tiene el antgeno B, el grupo AB tiene los
dos antgenos y el grupo O no tiene antgeno.
Caractersticas del Sistema ABO
Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan
antgenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el
plasma de su sangre.
Las personas con sangre del tipo B tiene la combinacin contraria, glbulos
rojos con antgenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los
antgenos A en el plasma de su sangre.
Los individuos con sangre del tipo O 0 (cero) no expresan ninguno de los dos
antgenos (A o B) en la superficie de sus glbulos rojos pero tienen anticuerpos
contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos
antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos.
34
Cada individuo posee dos cromosomas, uno del padre y otro de la madre, de
modo que podemos encontrar los genotipos siguientes: AA, AB, BB, AO, BO, OO.
Estos genes productores de Ag estn relacionados con el sistema Hh, que tiene
dos alelos: el gen H, el ms frecuente en la poblacin mundial, y el gen h, amorfo
o nulo.
De este modo podemos explicar la composicin qumica de los Ag del Sistema
ABO.
Los genotipos HH y Hh son capaces de sintetizar una enzima, del tipo de las
transferasas, que aade un residuo de L- fucosa a una sustancia precursora,
formndose as la sustancia H.
La presencia del gen A codifica la sntesis de otra enzima transferasa que aade
un resto de N- acetil-galactosamina a la sustancia H y la transforma en la
sustancia A.
Por su parte el gen B codifica la sntesis de otra transferasa que aade un residuo
de D-galactosa a la sustancia H, transformndola en sustancia B.
El gen O es amorfo y no altera la estructura de la sustancia H.
En resumen, existen unas molculas de glucolpidos sobre la membrana de los
hemates que tiene una cadena de oligosacridos en su superficie.
Segn cual sea el azcar en su extremo terminal tendremos sustancias H,
sustancia A o sustancia B.
Debemos tener en cuenta que no toda la sustancia H se transforma en A o B, por
lo que siempre encontramos sustancia H en los hemates.
35
Sustancias en Hemates
Grupo Sanguneo
HyA
HyB
H,A y B
AB
Tabla 2.1: Sistema ABO
Fuente: http://www.slideshare.net//grupos-sanguineos
El sistema ABO tiene un gran inters transfusional debido a que en el suero de las
personas aparecen, de manera natural, anticuerpos frente a los antgenos que no
poseen sus hemates.
En otro sistema de grupo sanguneo debe producirse una inmunizacin previa, por
embarazo o transfusin para que se formen en el organismo los Ac frente al Ag.
Estos Ac suelen ser de tipo Ig G e Ig M.
36
IgM
IgG
Multivalente
Bivalente
Aglutinante
Bloqueante
Temperatura
optima
de
reaccin
37C
No atraviesa la placenta
Si atraviesa la placenta
Grupo ABO
Antgenos
Anticuerpos
Anti-B
Anti-a
AB
A,B
Ninguno
Ninguno
Anti-AB
1. Anti-A
Se encuentra en pacientes del grupo B y contiene 2 tipos de anticuerpos Anti-A y
Anti-A1 que pueden ser separados en el laboratorio por adicin de clulas
apropiadas.
2. Anti-A1
Como se anot anteriormente este suero se obtiene al tratar el suero Anti-a con
clulas A2, que no son capaces de remover el anticuerpo Anti-A1, siendo esta la
forma de preparacin de los reactivos como clulas existentes.
3. Anti-AB
Se obtiene de individuos seleccionados del grupo O este suero tiene la
caracterstica de reaccionar aun con muy dbiles grupos de A.
Las diferencias en la reaccin, entre Anti-A y Anti-AB se deben a la presencia de
un tercer anticuerpo existente en forma normal en individuos del grupo o que
posee actividad con clulas A y B.
2.2.3.8
Sistema Rh
En 1940 junto con Alexander Salomn, Wiener descubre otro antgeno en los
hemates al que bautiza como Factor Rh, al haberse hallado en el suero de
conejos inmunizados con sangre procedente de un mono de la India, el Macacus
Rhesus.
Se denomina Rh positivo a los hemates que son aglutinados por este anticuerpo y
tienen, por tanto, el antgeno Rh en la superficie. Se denominan Rh negativos los
que no son aglutinados y que, por tanto, no poseen el antgeno Rh en su
superficie.
38
39
40
A diferencia de los anticuerpos del sistema ABO los anticuerpos que se producen
frente a los antigenos del sistema Rh son de carcter inmune, es decir, se
necesita una estimulacion previa para su aparicion en la sangre. Esta estimulacion
puede producirse por una transfusion o por contacto feto-materno.
Suelen ser de tipo Ig G, y se emplea para su deteccion la prueba de la
antiglobulina humana debido a que reaccionan en medio albuminoso.
Tambien se emplean con frecuencia ezimas, como la papaina, ficina, y tripsina,
para favorecer la aglutinacion de los hematies con los antisueros anti Rh. Por
ejemplo el autoanticuerpo anti-e suele eatar implicado en la mayor parte de los
casos de anemias hemoliticas autoinmunes.
(5.www.alipso.com).
Est constituida por la sangre obtenida del donante y la solucin utilizada para
mantenerla incoagulada y conservada en condiciones ptimas.
La sangre total contiene todos los elementos sanguneos y se conserva en
cmaras frigorficas a 4 C durante 28 das.
41
CONTENIDO:
Una unidad de sangre total contiene 450 ml de sangre ms aproximadamente 63
ml de solucin anticoagulante - conservadora, con lo que su volumen final est en
torno a los 500ml.
CONSERVACIN:
La sangre total puede ser almacenada refrigerada entre 21 y 35 das dependiendo
de la solucin conservante anticoagulante utilizado. Durante la conservacin a 4C
las plaquetas y los leucocitos dejan de funcionar al cabo de pocas horas despus
de la extraccin, y se produce una reduccin gradual de la viabilidad de los
hemates.
Los hemates conservados durante 5 semanas en CPD A1 presentan una
recuperacin madia del 70%, la recuperacin mnima aceptable. Los niveles de
factores V y VIII tambin descienden. La tasa de factor VIII experimenta una
42
medicina
Transfusional
moderna
est
basada
en
la
terapia
por
DEFINICIN:
Componente obtenido tras la extraccin de aproximadamente 200ml de plasma de
una unidad de sangre total despus por centrifugacin. Son el componente
sanguneo ms frecuentemente usado para incrementar la masa de clulas rojas.
44
CONTENIDO:
Contiene los hemates correspondientes a una unidad de sangre total, ms unos
100 ml de plasma residual.
CONSERVACIN:
Cuando las sangre se recoge en bolsa que contienen CPD A, estos
concentrados pueden conservarse durante 35 das a 4C.
INDICACIONES:
Los concentraciones de hemates estn bsicamente indicados en enfermos
normovolmicos, con anemia crnica sintomtica, refractaria al tratamiento
etiolgico, aunque su uso asociado a otros componentes celulares y plasma o
sustitutos plasmticos es hoy
hemorrgica.
45
suficientemente severa como para causar signos y sntomas que han anoxia. Es el
producto ideal para tratamiento de pacientes anmicos que no tolera un aumento
brusco de la bulimia como sucede en la insuficiencia cardaca congestiva, en
ancianos, en recin nacidos, nefropata y en general en anmicos crnicos, que
fcilmente llegan a la descompensacin.
La composicin en cuanto a los elementos de la sangre en este tipo de
hemoderivados es en un volumen de 250 a 300 ml,
una concentracin de
47
(7.booksgoogle.com)
El plasma llamado refrigerado tiene una similitud al plasma fresco congelado, esta
similitud est en relacin a que se extrae de la sangre total por centrifugacin o
por sedimentacin.
Para fraccionarlo ya no se debe considerar un tiempo mximo de reposo de la
sangre total hasta ocho horas debido a que el componente que justifica para ser
llamado plasma refrigerado, es el contenido de albmina, esta protena presente
en el plasma refrigerado en la actualidad ya no es frecuentado su utilizacin, ya
que esta protena tambin la podramos encontrar en el plasma fresco congelado
su vigencia como tal est limitado hasta un ao y entre cuando se preserve
temperaturas menores a 20 C.(8.www.slideshare.net)
48
49
CONTENIDO:
Los concentrados de plaquetas contienen aproximadamente 6 x 10 9 plaquetas, lo
que representa el 60 80 % de los contenidos en una unidad de sangre total, en
un volumen reducido de plasma (50 70 ml).
CONSERVACIN:
Segn la bolsa de plstico utilizada las plaquetas son viables durante 5 das o ms
si se mantienen a 22C sometidas a una agitacin horizontal constante.
DSIS:
El clculo de la dosis de concentrado de plaquetas se debe realizar calculando 1
unidad de concentrado de plaquetas por cada 10 Kg de peso.
Cuando en un paciente se observa un bajo recuento plaquetas, debe confirmarse
que se trata de una trombocitopenia real y por tanto se debe excluir un recuento
falseado o pseudotrombocitopenias presentes en el 1% de los pacientes,
50
INDICACIONES:
Presencia de hemorragia en paciente trombocitopnico.
Trastornos cualitativos plaquetarios con presencia o con datos sugestivos de
hemorragia inminente de riesgo vital, o cuando estos pacientes vayan a someterse
a ciruga.
En las trombocitopenias secundarias a quimioterapia es clsico el umbral de
20.000 plaquetas/ml como cifra por debajo de la cual se incrementa el riesgo
hemorrgico y por tanto debe iniciarse la transfusin de concentrado de plaquetas.
Actual es ms restrictiva y bascula entre 2 tendencias:
Uso profilctico.
Transfusin teraputica.
Para el uso del concentrado de plaquetas no se requiere de la realizacin de
pruebas de compatibilidad y deben transmitirse unidades ABO compatibles, la
51
DEFINICIN:
Es la parte insoluble en frio del plasma que resulta de la descongelacin entre 1 y
6C del PFC.
CONTENIDO:
Contiene un 50% del factor VIII, un 20 40% del fibringeno y un 30% del factor
XIII que estaban presente originalmente en el PFC.
Fotografa N 2.6: Crioprecipitado
52
DURACIN:
Congelado a -40C tiene una duracin de 1 ao, pero una vez descongelado debe
usarse antes de las 4 horas.
INDICACIONES:
Su efecto es restaurar el factor VIII y el fibringeno (factor I), siendo por tanto sus
principales indicaciones la enfermedad de Von Willebran y la hipofibrinogenemia.
Aunque en estas enfermedades puede utilizarse el PFC como tratamiento de
reposicin temporal, es ms apropiado el crioprecipitado debido a su menor
volumen (25 30 ml).
DOSIS:
La dosis a administrar depender del volumen sanguneo del receptor y de su
situacin clnica. De forma orientativa puede indicarse 1 bolsa de crioprecipitado
por cada 6 -7 Kg de peso.
Su empleo no requiere de la realizacin de las pruebas de compatibilidad y deben
ser transfundidas unidades ABO compatibles.
Una unidad cada 10 kg peso cada 12 a 24 horas dependiendo de la etiologa hay
intensidad desangrado.
Su obtencin se lo hace a partir del plasma fresco congelado quin aporta con
factores especficos de la coagulacin que por descongelamiento y centrifugacin
inmediata reserva factores fros y especficos para tratar trastornos hematolgicos
que cursan con deficiencia de factores de la coagulacin. (5. Rodrguez 2003).
53
Material
Tubos de ensayo
Muestra de sangre
Solucin salina
Mtodo
Centrifugar la muestra para separar el suero o plasma de los glbulos rojos, pasar
el suero o plasma a otro tubo limpio y rotulado.
Con una pipeta de Pasteur, colocar 0,5 ml de glbulos rojos a un tubo limpio y
rotulado.
Complementar con solucin salina hasta 1 cm del borde.
Centrifugar por 1 minuto 2000 a 2500 rpm para sedimentar las clulas
Decantar la solucin salina sobrenadante.
Agitar los tubos para resuspender los glbulos rojos.
Repetir los lavados por tres veces
En el ltimo lavado la solucin salina debe ser clara sin signo de hemlisis.
2.2.5.2
Suspensin Celular Al 5%
54
2.2.5.3
GRUPO ABO
Se utiliza la tcnica de la solucin salina a temperatura ambiente.
Rh D
El mtodo depende del reactivo anti D disponible, algunos Anti-D monoclonales
operan en solucin salina a temperatura ambiente, pero otros requieren
incubacin a 37C o agregado a albmina.
MATERIALES
Tubos
MTODO
Centrifugar
OBSERVACIN
Aplicar procedimiento de lavado y suspensin realizado en prcticas anteriores.
55
2.2.5.4
Determinacin De Subgrupos
PRINCIPIO
Cuando el resultado es Grupo A, se procede a valorar el Subgrupo, con el uso de
anti - Lectina A1y A2.
MATERIALES
Tubos
Lectina A1y A2
MTODO
1. Rotular tubos A1y A2
2. Colocar 1 gota de clulas (lavadas y suspendidas)
3. Colocar 1 gota de Lectina A1yA2
4. Centrifugar a 3000-3500 rpm durante 15-20 segundos
5. Lectura
INTERPRETACIN
Si reacciona en A1, es Subgrupo A1
Si reacciona en A2, es Subgrupo A2.
TCNICA DE PANTALLAS 1-2-3
PRINCIPIO
Tcnica utilizada para detectar Ac irregulares que ocasionaran reacciones
transfusionales o sensibilizacin de los hemates, es de gran utilidad para detectar
Ac que ocasionan hemolisis extravascular o intravascular.
56
Se requiere para este ensayo suero o plasma del paciente o receptor de sangre,
las clulas 1 y2 conocidas como pantallas estn destinadas a utilizarse en
donantes de sangre, esto garantizara con un resultado negativo, que el
componente plasmtico del donante carece de Ac, cuyo plasma o componentes
plasmticos podrn utilizarse en la terapia transfusional.
REACTIVOS, SUMINISTROS Y EQUIPOS
Pantallas 1-2-3
Liss
Tubos
Lmpara de Blancos
Centrifuga
FASE SALINA
1. Identifique los tubos de ensayo correspondientes a los distintos hemates
reactivos de Pantalla1, 2 y 3.
2. Aada a cada tubo 1 gota (50ul) de los hemates reactivo correspondiente.
3. Aada a cada tubo 2 gotas (100ul) del suero o plasma que debe analizarse.
4. Mezcle cuidadosamente e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente
(18-25C).
5. Centrifugar 20 segundos a 3500 rpm.
7. Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observacin
macroscpica sobre una lmpara de luz blanca comprobando si existe
aglutinacin o hemolisis.
57
FASE LISS
7. Aada a cada tubo 2 gotas (100ul) de LISS
8. Agite suavemente e incube durante 15 minutos a 37C.
9. Centrifugar 20 segundos a 3500 rpm.
10. Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observacin
macroscpica sobre una fuente de luz directa comprobando si existe aglutinacin
o hemolisis.
FASE COOMBS
11. Lave 3 veces al contenido de los tubos con solucin salina isotnica y elimine
al sobrenadante.
12. Aada a cada tubo 2 gotas (100ul) de Coobs-serum.
13. Mezclar suavemente y centrifugar durante 20 segundos a 3500 rpm.
14. Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observacin
macroscpica sobre una fuente de luz directa comprobando si existe aglutinacin
o hemolisis.
15. Confirme los resultados negativos con Coombs-Control IgG.
INTERPRETACIN
La presencia de aglutinacin o hemolisis en cualquiera de las fases constituye un
resultado positivo de las pruebas e indica la presencia del anticuerpo dirigido al
antgeno presente en las clulas rastreadoras de anticuerpos.
La interpretacin del resultado se basa en la lectura de la aglutinacin en cada uno
de los tubos y la comparacin con la tabla de lectura que viene en cada uno de los
sets.
58
2.2.5.5
PRINCIPIO
Consiste en enfrentar el suero del receptor con GR del donante. Esta se estudia
en diferentes temperaturas en un medio de reaccin adecuado (potenciador). Si
en el suero del receptor hubiera un anticuerpo dirigido contra un antgeno sobre
los GR del donante, se observar aglutinacin y/o hemolisis.
REACTIVOS, SUMINISTROS Y EQUIPOS
Suero de Coombs
Pipetas Pasteur
Centrifuga
Lente de Magnificacin
Microscopio
PROCEDIMIENTO
FASE I: CENTRIFUGACIN SALINA INMEDIATA
1. Preparar una suspensin de GR del donante (paquete globular)
2. Rotular con PC
3. Colocar 2 gotas del suero problema
4. Colocar una gota de los GR del donante suspendido
5. Mezclar, centrifugar los tubos a 3500 rpm durante 15 segundos
6. Observar la presencia de hemolisis y/o aglutinacin, hacer la lectura por cruces
y anotar los resultados.
59
60
Tubos de 12x75
Pipetas Pasteur
Centrifuga
PROCEDIMIENTO
1. Colocar una gota de hemates reactivos del grupo A1 en un tubo limpio y
rotulado.
2. Colocar una gota de hemates reactivos del grupo B en un segundo tubo limpio
y rotulado.
3. Colocar una gota de hemates del grupo O en un tercer tubo limpio y rotulado.
4. Aadir a cada tubo dos gotas de suero problema.
5. Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugar 15 segundos a 20
con 3500r.p.m.
6. Resuspender suavemente el botn celular y examinar buscando aglutinacin.
7. Anotar los resultados de la prueba.
REPORTE DE RESULTADOS
La aglutinacin o hemlisis indica que un anticuerpo especfico contra el antgeno
A o B est presente en el suero problema y se consideran un resultado positivo.
Una suspensin uniforme de hemates despus de la resuspensin del botn es
un resultado negativo.
61
2.2.5.7
SE DEBE CONSIDERAR:
No confiar en el color de los antisueros para identificar el antisuero.
Todos los tubos deben estar debidamente.
No realizar pruebas a temperaturas muy altas.
Realizar la observacin de aglutinacin con un fondo bien iluminado, no sobre una
caja visora de temperatura alta.
Anotar los resultados inmediatamente observados.
Recordar que muestras, reactivos o material contaminado interfieren en los
resultados de prueba.
Si el paciente fue recin transfundido con sangre compatible pero de grupo
diferente (grupo O a un paciente de grupo A), se aprecia aglutinacin de campo
mixto.
Las discrepancias de grupo globular puede deberse a antgenos debilitados,
expresin antignica alterada debido a enfermedad, quimerismo o exceso de
sustancia de grupo sanguneo.
Se puede encontrar falso-negativo en tubo si la suspensin de hemates es muy
concentrada.
62
63
Peditricas
De 0 a 28 das
Sufrimiento fetal
Asfixia perinatal
Sepsis
Prematurez extrema
En otros casos que se requiera en recin nacidos referidos a hospitales, por
cualquier patologa, como seala el casillero "evaluar otros problemas" de
AIEPI (literal b, artculo 2 de la Ley).
64
Obsttricas:
Hemorragias de la primera mitad del embarazo
Aborto
Amenaza de aborto
Aborto Completo
Aborto Diferido
Aborto en curso
Aborto Incompleto
Aborto Sptico
Embarazo Ectpico
Mola Hidatiforme
Marginal, placenta cuyo borde contacta con el orificio interno del cuello
Oclusiva parcial, cuando la placenta obstruye parte del orificio interno
Centro total, cuando la placenta cubre todo el orificio
Desprendimiento normoplacentario
Ruptura uterina
2.2.6.3
HEMOLTICAS
Consiste en la hemlisis o destruccin de los hemates del donante por los
anticuerpos del receptor.
Puede ser ms o menos grave segn el tipo de anticuerpo que intervengan.
El caso ms grave es el que cursa con hemolisis intravascular, suele producirse
por incompatibilidad del sistema ABO, y la causa es un error en la administracin
de la sangre por identificacin incorrecta.
Aparece de forma inmediata, ya que unos pocos mililitros de sangre bastan para
que aparezcan los sntomas del shock transfusional, sensacin de quemadura en
la vena de perfusin, dolor lumbar, cefaleas, escalofros, hipotensin taquicardia.
Los anticuerpos responsables suelen ser el anti-A, anti-B,anti- AB.
En otros casos, la hemolisis aparece al cabo de algunos das de la transfusin.
Se manifiesta con escalofros, fiebre, y anemia.
Generalmente se debe a anticuerpos que aparecen despus de la transfusin con
una posible inmunizacin previa por embarazos o transfusiones anteriores.
66
SEPTICEMIA:
Ocurre
por
contaminacin
del
hemoderivado
durante
el
almacenamiento.
Es ms frecuente en los concentrados de plaquetas, ya que deben mantenerse a
22 C para conservarla.
TRANSMISIN DE ENFERMEDADES
A pesar de todas las pruebas a que se someten la sangre antes de ser
considerada vlida para transfundir es posible descartar el riesgo de transmisin
de ciertas enfermedades.
Los agentes infecciosos que pueden transmitirse por esta va son:
1.- Hepatitis C: Es el ms frecuente, con un riesgo post-transfusional del 0.5-1 %
.se debe a que las tcnicas para su deteccin no estn todava, bien
desarrolladas.
3. Hepatitis B: El riesgo es muy bajo 0.2% y se corresponde con los donantes
que se encuentran en la primera fase de la enfermedad en las que no se
detecta el antgeno, pero si existe poder infeccioso.
3.- VIH: El riesgo es el mnimo que en la hepatitis B; y por el mismo motivo.
4.- Sfilis: Las pruebas realizadas en la sangre hacen que el riesgo sea casi nulo.
5.-Citomegalovirus:
Su
importancia
clnica
se
reduce
a los
pacientes
inmunodeprimidos o trasplantados.
67
68
69
3.2.8.1
Hiptesis
2.2.8.2 Variables
VARIABLE INDEPENDIENTE
Tipificacin Sangunea Inversa
VARIABLE DEPENDIENTE
Evaluacin de la Reaccin Hemoltica Inmediata
70
VARIABLE
TCNICAS
INDEPENDIENTE CONCEPTO
Prueba
CATEGORA
INDICADORES
INSTRUMENTOS
Prueba
Reaccin
TCNICA
Tipificacin
sangunea
que
inversa
identificar
la
presencia
Tipificacin
los
Sangunea
del
Inversa
permite
ausencia
de
anticuerpos
negativa
y Tcnica para la
de realizacin de la
hemaglutinacin. prueba
sistema ABO
de
INSTRUMENTOS
Gua
de
observacin
Evaluacin de la Efectos
adversos Reacciones
Reaccin
Hemoltica y no TCNICA
Hemoltica
o posterior
Hemoltica
Inmediata
transfusin
a la
de
sangre o derivados
Ficha de reporte
de
reacciones
hemolticas y no
hemolticas.
INSTRUMENTOS
Gua
de
observacin
71
CAPTULO III
4. MARCO METODOLGICO
3.1 MTODO
En la presente investigacin se utiliz el mtodo inductivo deductivo con un
procedimiento analtico, sinttico y explicativo.
MTODO INDUCTIVO - DEDUCTIVO: Utilizamos este mtodo ya que nos ayud al
estudio de cada uno de los ensayos, para obtener resultados generales que nos llev
a sacar conclusiones particulares de nuestro tema de investigacin.
LA APLICACIN DEL MTODO ANALTICO: Nos permiti analizar las muestras de
sangre de las usuarias atendidas en el servicio de G-O del H.P.G.D.R.
LA UTILIZACIN DEL MTODO SINTTICO: Nos permiti unificar todos los
conceptos ms relevantes en torno al estudio de la Eficacia de la Tipificacin
Sangunea Inversa, y los diversos elementos. Detallados ampliamente en el presente
trabajo investigativo con el fin de formular la teora.
CON LA APLICACIN DEL MTODO EXPLICATIVO: Determinamos que la prueba
de Tipificacin Sangunea Inversa es muy til ya que permite evaluar y prevenir
reacciones transfusionales hemolticas, manifestando de esta manera las causas y
consecuencias
4.2
de
nuestro
tema
de
estudio.
TIPO DE INVESTIGACIN
DISEO DE INVESTIGACIN
4.4
POBLACIN Y MUESTRA
4.5
TCNICAS
Observacin Directa
INSTRUMENTOS:
GUIA DE OBSERVACIN: Hoja gua para reporte de resultados.
73
CANTIDAD
146
21
GRUPOS SANGUNEOS
IDENTIFICADOS JUNIO A
NOVIEMBRE DE 2012
12%
4%
O
84%
A
B
GRUPO A1
GRUPO A2
21
14
Series1
GRUPO A
21
GRUPO
A1
GRUPO
A2
GRUPO A1
14
GRUPO A2
7
75
Junio - Noviembre
2012.
CGRN
CGRLR
PFC
Plaquetas
Crioprecipitados
27
58
42
15
32
de
Gineco
Obstetricia
Ginecologa,
se
solicitaron
los
siguientes
76
ANTI-A1
ANTI-B
A1
14
A2
DETERMINACIN DE ANTICUERPOS
EN MUESTRAS DE SANGRE A1
15
10
5
0
A1
ANTI-A1
0
ANTI-B
14
77
78
RECEPTOR
SALINA
LISS
COOMBS
A1
A2
POSITIVO
POSITIVO
POSITIVO
79
RECEPTOR
SALINA
A2
POSITIVO
LISS POSITIVO
COOMBS POSITIVO
CGRLR
NEGATIVO
NEGATIVA
NEGATIVA
INTERPRETACIN.-
80
ENSAYOS
O
A
B
146
21
7
SUBGRUPOS
A
A
A1
A2
21
14
7
HEMODERIVADOS
DESPACHADOS
CGRLR
PFC
Crioprecipitado
58
42
32
ANTICUERPOS EN
SUBGRUPOS DEL
A
A2 -anti a1
A1- anti -b
A2 -anti -b
3
14
7
ENSAYOS
INCOMPATIBLES
ENSAYOS
COMPATIBLES
A1 + A2 (anti - a1)
3 Ensayos
"O" 3
CGRLR
81
INTERPRETACIN
Durante el periodo de investigacin el grupo sanguneo de mayor frecuencia
porcentual es el O Rh D positivo con un 84%, seguido al 12% de ensayos con tipo
de sangre A Rh D positivo, y en menor porcentaje tenemos al grupo B Rh D positivo
con un 4%.
En la valoracin del subgrupo A se identific A1 igual 14
respectivamente.
y A2 en 7 ensayos
82
COMPROBACIN DE LA HIPTESIS
Hi: La prueba de Tipificacin Inversa que evala anticuerpos del Sistema ABO es
muy til ya que permite en in vitro evaluar y prevenir in vivo reacciones
transfusionales hemolticas.
Tomando en cuenta las tablas 5,6 y las grficas respectivas se puede evidenciar que
la aplicacin de la tcnica de Tipificacin Sangunea Inversa, asegura la no
expresin de efectos adversos a la trasfusin de componentes hemticos, por lo
tanto queda comprobada la hiptesis.
83
CAPTULO IV
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1 CONCLUSIONES
Ante ensayos de incompatibilidad por grupo ABO, las de relacin con el antgeno
A, es la ms frecuente, ya que este grupo genera aproximadamente 45
subgrupos de los cuales los ms frecuentes en nuestro medio son los A1, A2 y
A3.
84
4.2 RECOMENDACIONES
inversos, empleado para este ltimo, clulas A1, ya que contienen mayor carga
antignica y mejora la sensibilidad al entrar en contacto con el suero o plasmas
del receptor.
para
prevenir
reacciones transfusionales
hemolticas
y sus
complicaciones.
85
BIBLIOGRAFA:
1.- San Miguel, (2009). Hematologa Manual Bsico Razonado: Editorial Masson,
pg. 24-25-26.
2.- Rodak, (2005). Hematologa Fundamentos y Aplicaciones Clnicas: Editorial
Panamericana, pg.31-32
3.- Dp. Jaramillo F., (2010). La Prctica Transfusional y la Inmunohematologa, Gua
Prctica, 18-19-20-34-35.
4.- Nieto, (2005). Manual de Inmunohematologa y Grupos Sanguneos: Editorial
Paraninfo.
5.- Rodrguez, (2003).Manual de Banco de Sangre: Editorial Mdica Panamericana,
pg. 32-33.
86
LINCOGRAFA:
1. Google. [Online] Cited: DICIEMBRE 20, 2011.
http://books.google.com.ec/books?id=f61Mvdvl60C&pg=PA274&dq=funcionesdelasangre&hl=es
2. http://es.wikipedia.org/wiki/Reaccin_antgeno-anticuerpo
2008 - 2012 Centro Regional de Transfusin Sangunea de Granada y Almera
perso.wanadoo.es/sergioram1/plasma_fresco_congelado.htm
3. www.cienciadigital.es
4. www.es.scribd.com/doc/3288380/Antigeno-inmunogeno
5. www.alipso.com/monografias/anticuerpos
6. www.redclinica.cl/HospitalClinicoWebNeo/Controls/Neochannels/
7.
www.books.google.com.ec/books?id=f61Mvdvl60C&pg=PA274&dq=funcionesdelasa
ngre&hl=es
8. www.slideshare.net/faquitero/taller-bancodesangre-inmunohematologia.
87
ANEXOS
Anexo N 1: Muestras
88
Anexo N 4: Centrifugacin
89
Anexo N 5: Decantacin
90
91
92
93
94