Ann, Soc. beige Méd. trop. 1985, 65, Suppl. 1, 95-09 USO DE TUBOS DE MICROHEMATOCRITO PARA EL DIAGNOSTICO RAPIDO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS Y MALARIA por ©. LA FUENTE, R. URJEL, C. DARRAS & E. SAUCEDO CENETROP, Casilla 2974, Santa Cruz, Bolivia Resumen — Se estudiaron 1502 pacientes sospechosos de Chagas agudo mediante la técnica clésica de Strout y la técnica de concentracién en tubos de microhematocrito. De 162 casos positivos para T. cruzi, 177 (97 por ciento) fueron reconocidos por las dos técnicas, mientras que los 5 otros casos fueron detectados sélo por la técnica de microhematocrito. Ademas, esta técnica permitid el diagndstico de 24 casos de malaria (Plasmodium sp.). Por la pequefia cantidad de sangre, su ejecucién rapida, su costo bajo y la posibilidad de Giagnéstico de mas de un hemoparasito en la misma muestra, asi como su facil aplicacién, se recomienda esta técnica en el diagnéstico parasitologico de la fase aguda de la enfermedad de Chagas y malaria. KEYWORDS : Chagas’ Disease; Malaria; Diagnosis; Microhaematocrit Technique. Introduccién La técnica de concentracién de Strout (Cerisola et a/., 1972) es usada tradicionalmente para el diagnéstico parasitolégico en la fase aguda de la enfermedad de Chagas. Su sensibilidad es buena (95,2 por ciento), pero su tiempo de ejecucién demora mas a menos 4 horas y requiere 5 ml de sangre. Esta cantidad es normaimente dificil obtener en lactantes y menores que son los mas afectados por la forma aguda de la enfermedad. Los trabajos de Lumsden et al. (1978) y Woo & Rogers (1974) mostraron la posibilidad de utilizar pequefas cantidades de sangre en tubos de microhematocrito para la concentracién de tripanosomas africanos. Pos- teriormente, Freilij et a/. (1983) utilizaron la misma técnica en el diagnéstico de los casos agudos de la enfermedad de Chagas para la deteccién de T. cruzi. EI presente trabajo se ha comparado la técnica de Strout con la con- centracién en tubos de microhematocrito para el diagndstico parasitolé- gico en la Infeccién aguda por T. cruzi y Plasmodium sp. Material y métodos Se examinaron 1.502 muestras de pacientes clinicamente sospechosos de Chagas agudo en base a criterios establecidos por Recacoechea et al., (1978). La sangre fué recolectada del dedo de los pacientes en cuatro tubos capilares heparinizados de 75 ml de capacidad cada uno, segtin la técnica clasica utilizada para la determinacién del microhematocrito. 95Los tubos fueron Ilenados hasta las 2/3 partes de su capacidad y luego cerrados a la llama del mechero, teniendo la precaucién de calentar sdlo la parte vacia del tubo. Posteriormente se centrifugaron inmediatamente con una centrifuga para microhematocrito (Microfuge-Heraeus Christ) a 12.000 r.p.m. durante 7 minutos y se mantuvieron los tubos en posicién vertical hasta el momento de la lectura, Para ésta ultima, se colocé el tubo en un soporte hecho de 2 piezas de vidrio de portaobjetos (1,2 mm de espesor), colocados uno al lado de otro y a 2 mm de distancia sobre un portaobjeto standard de vidrio (Woo, 1969) (Figura 1). Fugura 1. Colocacién del tubo de microhematocrito sobre el soporte. El tubo fué colocado en la ranura y cubierto con una gota de aceite de inmersién a nivel de la zona donde los glébulos rojos se enencuentran con los glébulos blancos (« buffy coat layer») y el plasma. La lectura se hizo a nivel de la interfase glébulos blancos/plasma (Figura 2) buscando las formas moviles de 7. cruzi que se encuentran por encima del paquete de glébulos blancos y ademas observando el pigmento caracteristico de Plasmodium sp. dentro de los glébulos rojos, situados por debajo de la capa de glébulos blancos. La lectura se hizo sistemati- camente hasta revisar por completo la zona de estudio, en los cuatro tubos. En los casos de infeccién por Plasmodium sp., la confirmacién de especie se hizo luego a través de la tincién de Giemsa el contenido del mismo tubo cortado por debajo de la porcién del « buffy coat» y vaciado sobre un portaobjeto. Para cada paciente, se realizo de manera totalmente independiente un examen por la técnica de Strout (1962). 96Figura 2. Zona de lectura en ei tubo de microhematoerito. Resultados El examen mediante la técnica del tubo de microhematocrito permitio la deteccién de 182 casos de pacientes con T. cruzi circulante del total de 1.502, 0 sea una tasa de infeccién del 12 por ciento. Con la técnica de Strout, se detectaron 177 casos, todos fos cuales fueron positivos a la primera técnica, quedando 5 casos que fueron positivos solo a la técnica tel tubo de microhematocrito. Los 1.296 casos restantes fueron negativos a ambos métodos (Tabla 1). La tasa de concordancia entre las dos técnicas en las condiciones indicadas de prevalencia, fué del 99 por ciento (1.497/1.502). Es de hacer notar que simulando una disminucién de la tasa de infeccién hasta un 3 por ciento, no se modifican los resultados de concordancia. TABLA 1 Comparacién entre las tecnicas de Strout y ef mlcrometodo Strout (4) Strout (=}_Total Micrometodo (+) 17 102 Micrometodo (—} ° 1320 Totat 7 1502 Se encontraron también 24 casos de infeccién por Plasmodium sp., que fueron luego confirmados por coloracién como P. vivax (22) y P. fal- ciparum (2), Hubieron 3 casos de infecciones mixtas a 7. cruzi y Plamo- dium sp. 7Discust6n Tradicionalmente se utilizan la gota gruesa y la técnica de Strout como métodos de diagnéstico en la fase aguda de la enfermedad de Chagas. Sin embargo, la gota gruesa tiene una baja sensibilidad : 47 por ciento (Cerisola et a/., 1972). Con relacién a la técnica de Strout, su sensi- bilidad es buena: 95 por ciento (Cerisola et a/., 1972) pero la realizacién de este examen necesita tiémpo (4 horas) y una cantidad de sangre bas- tante grande (5 ml). Esta cantidad es dificil obtener en nifios, quienes son los mas afectados por la fase aguda de la enfermedad de Chagas. El examen de concentracién en tubos de microhematocrito mostré una sensibilidad igual a la de la técnica de Strout en las infecciones agudas por T. cruzi y tiene la ventaja que requiere solamente una pe- quefia cantidad de sangre, que se puede obtener facilmente por puncion capilar. Ademas, el resultado se obtiene en media hora, lo que facilita el tratamiento inmediato para los pacientes que provienen de areas alejadas. Esta técnica tiene un costo comparativamente bajo y puede ser realizada en un laboratorio rural por un auxiliar debidamente adiestrado. Por otra parte, mientras que a la técnica del Strout sdlo permite la deteccién de T. cruzi, la técnica en tubos de microhematocrito ademas de detectar al T. cruzi, sirve para el hallazgo de Plasmodium sp. y micro- filarias, al mismo tiempo. Este hecho es interesante, ya que la misma técnica permite asi hacer el diagnéstico diferencial entre las enfermedades que pueden presentar una sintomatologia semejante (fiebre de origen desconocido) pero cuyo tratamiento especifico es distinto. Por ultimo, otra ventaja que presenta esta tecnica es su aplicacién en el contro! de la parasitemia en animales de laboratorio inoculados expe- rimentalmente. Use of the haematocrit centrifuge technique for rapid diagnosis of Chagas’ disease and malaria. Summary — 1502 patients suspected of acute Chagas’ disease were examined by the Strout and. the microhaematocrit concentration technique. From 182 positive cases for 7. cruzi, 177 (97 per cent) were diagnosed by both methods and the remaining 5 were datected only by the microhaematocrit concentration technique. Furthermore, the latter permitted the detection of 24 cases of malaria (Plasmodium sp.) Because of the small quantity of blood needed, the rapid execution, the low cost, the possibility of detecting more than one haemoparasite in the seme sample and its easy application in rural areas, the microhaematocrit concentration technique is recommended for the parasitological diagnosis of acute Chagas’ disease and malari Utilisation de la technique de concentration en tubes microhémacrotites pour le diagnostic rapide de la maladie de Chagas et du paludisme. Résumé — 1502 patients suspects de maladie de Chagas aigué furent examinés par la technique classique de Strout et par la technique de concentration en tubes microhémato- crites. De 182 cas positifs a T. cruzi, 177 (97 p. cent) furent reconnus par les deux techni- ques; les 5 autres cas furent détectés seulement par la technique du microhématocrite. Par ailleurs, cote derniore technique permit le diagnostic de 24 cas de paludisme (Plasmodium 8p) En raison de la faible quantité de sang qu'elle nécessite, de la rapidité de son exécution, de son cotit réduit et de la possibilité qu'elle offre de diagnostiquer plus d'un parasite dans le méme échantillon sanguin, cette technique s‘indique pour le diagnostic parasitologique de la phase aigué de la maladie de Chagas et du paludisme, 98REFERENCIAS Corisola, J. A. Russo, M.C., Del Prado, C.E., Jozami, L.B. & Rohwedder, R.W. (1972) : Estudio comparativo de diversos métodos parasitolégicos en la enfermedad de Chagas agudo. in Simposio internacional sobre Enfermedad de Chagas. Buenos Aires, Sociedad Argentina de Parasitologia, 97-100. Freilij, H., Muller, L. & Cappa, G. S. (1983) : Direct micromethod for diagnosis of acute and congenital Chagas’ disease. J. Clin. Microbiol., 18 : 327-330. Lumsden, W.H.R., Kimba, C.0. Evans, D.A. & Doigt, D.J. (1979) : Trypanosoma bruce! miniature ion exchange centrifugation technique for detection of low parasitemias : adaptation for field use. Trans. R. Soc. Trop, Med. Hyg., 73: 309-311. Recacoechea, M., De Muynck, A., Zuna, H., Romero, A., Bermudez, H., Melgar, B. & Ribera, B. (1979) ; Estudio epidemioidgico, ‘clinico y terapeiitico det Chagas agudo en Santa Cruz, Bolivia. Bol, infor. CENETROP, § : 2-16. Strout, R.G. (1962): A method for concentrating hemoflagellates. J. Parasit., 48: 100. Woo, P. T. K. (1969) : The haematocrit centrifuge for the detection of trypanosomes in blood. Can. J. Zool., 47: 921-923, Woo, P.T.K. & Rogers, D. J. (1974) : A statistical study of the sensitivity of the haematoorit centrifuge technique in the detection of trypanosomes in blood. Trans. R. Soc, Trop. Med. Hyg.,68 : 919-326. 99