UNIVERSIDAD

NACIONAL AGRARIA
LA MOLINA

MORFOLOGIA BACTERIANA Y COLORACION GRAM

NUMERO DE PRACTICA:

Practica N 4

ALUMNO:

Cabrera Espinoza, John

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME:

2016

7 de Octubre del

CURSO:
II

Operaciones unitarias Pesqueras

PROFESORA:

Ing. Martnez ordinal ,Nancy

I.

INTRODUCCIN

Dentro de la microbiologa pesquera se encuentran los microorganismos, en donde

presentan clulas; algunas son eucariotas y otras procariotas, dentro de las procariotas
tenemos a las bacterias y arqueas. Las bacterias se presentan como causantes de
enfermedades (patgenos); para su desarrollo necesitan de auto alimentacin, auto
replicacin, diferenciacin, y evolucin.
Existen dos tipos de bacterias, gram positivas y gram negativas; las primeras presentan
un peptidoglicano en la pared celular ms grueso que las negativas, esto hace que
cuando se sometan al mtodo de coloracin o tincin gram, las bacterias positivas no se
tian y las negativas si se decoloren y finalmente se tian con las gotas de safrandina.
Esto mtodo se desarroll en el laboratorio y a continuacin se explica y se analiza paso a
paso.

II.

REVISIN LITERARIA

MORFOLOGA, AGRUPACIONES Y ESTRUCTURAS:

Las bacterias son microorganismos unicelulares mucho ms simples que las

clulas eucariotas. Su tamao puede variar aproximadamente entre 0,2 y 5
milsimas de milmetro.
Las bacterias tienen una envoltura rgida o pared bacteriana que determina su
forma: cocos (esfrica), bacilos (cilndrica alargada), cocobacilos (bacilos cortos
redondeados), espiroquetas (helicoidales), etc.

En ocasiones, sobre todo dependiendo de las condiciones de cultivo (edad de

cultivo, tipo de medio slido o lquido, presencia de antibiticos, etc.) una misma
especie puede presentar una morfologa variable. A este fenmeno se le denomina
pleomorfismo.

Las bacterias pueden presentarse como clulas aisladas o formando grupos. Esta
caracterstica es tambin importante para poder identificarlas. En algunas casos la
aparicin de las bacterias formando agrupaciones no es una caracterstica de

estas in vivo sino un efecto de ciertas tcnicas de tincin (como en el caso del
gnero Staphylococcus que aparece formando racimos slo en preparaciones
fijadas y teidas; pero no en muestras vivas).

A veces las bacterias no se dividen totalmente, no se individualizan, y entonces

dan lugar a agrupaciones de diferentes formas: estreptococos y estreptobacilos
(cadenas de cocos o de bacilos, respectivamente), estafilococos (racimos),
diplococos (conjuntos de dos), difteroides (en ngulo o empalizada), sarcinas
(agrupaciones en ttradas o en grupos de ocho cocos dispuestos en forma de
cubo).

Formas bsicas en que se puede visualizar la morfologa bacteriana en una tincin

GRAM:

Cocos
Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la divisin celular. Diplococos,
aparecen por pares. Estreptococos, tienden a unirse formando cadenas.
Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamao.

Bacilos
Grandes variaciones morfolgicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos.

Forma
vara:
llaman
Bacilos

de
se

Dos
bacilos
juntos:
Diplobacilos

Cadenas
de
bacilos:
Estreptobacilos

Espirales (Treponemas, Borrelias)

Forma espiral
rgida se llama:
Espirilo

COLORACIN GRAM

Si la espiral es
flexible y ondulada
se
llama:
Espiroqueta

Empalizadas,
Bacilos lado con
lado o en figuras
en X, V o Y

Es una coloracin diferencial que permite dividir a las bacterias en Grampositivas,

refirindose a aquellas que toman el primer colorante utilizado que tie las
bacterias de color violeta y las Gramnegativas, las que toman el ltimo colorante
utilizado en la tcnica como colorante de contraste que las tie de rojo o rosado.
La Tinticin de Gram, divide las bacterias en grampositivas y gramnegativas. Esta
tinticin constituye uno de los elementos ms importantes de la clasificacin de las
bacterias, pues el hecho de que una bacteria sea grampositiva o gramnegativa
depende de la presencia de elementos importantes de la composicin de la pared
bacteriana. Tambin existen algunas bacterias que no se tien irregularmente con
el mtodo de Gram, por ello no son visibles en las preparaciones cuando se utiliza
esta tinticin (las bacterias del gnero Legionella).
En las bacterias gramnegativas, la pared est formada por dos capas. La capa
interna est compuesta por peptidoglucano. La capa externa contiene fosfolipidos
y protenas y unas molculas llamadas lipopolisacaridos. Estos lipopolisacaridos
de las bacterias gramnegativas son sustancias especialmente txicas: se
denominan endotoxinas, y son responsables de algunas de las consecuencias
ms raves de las infecciones.
En las bacterias grampositivas, la capa de peptidoglucano es mucho ms gruesa y
la pared solo contiene una capa. El peptidoglucano existe en todas las clulas
procariotas, y su bloqueo por medio de antibiticos es un arma excelente contra
las infecciones bacterianas.

BACTERIAS GRAM +
Pared celular simple
Capa de peptidoglucano gruesa.
No capa externa de lipopolisacridos.
Retienen cristal violeta/iodo color
azul/violeta

BACTERIAS GRAM Pared celular compleja

Capa de peptidoglucano fina
Capa externa de lipopolisacridos.
Retienen safranina color rojo/rosado

POSIBLE TEORIA DEL MECANISMO DE TINCIN

El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca
insoluble en agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidratan las
paredes de los microorganismos grampositivos, tratados con mordiente, y forma
una barrera que la laca no puede atravesar. En las clulas gramnegativas, los
lpidos de la pared (ms abundantes que en las clulas grampositivas) se
disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo de cristal
violeta con yodo. Algunos autores objetan esta teora, pero es indudable la
importancia general de la pared celular.

COCOS GRAM-POSITIVOS

Racimos: forma tpica de Staphylococcus sp, como S. aureus

Cadenas: forma tpica de

Streptococcus grupo B

Streptococcus sp, como S. pneumoniae,

Tetradas: forma tpica de Micrococcus sp

BACILOS GRAM-POSITIVOS

Gruesos: forma tpica de Clostridium sp, como C. perfringens, C. septicum

Finos: forma tpica de Listeria sp

Ramificados: forma tpica de Actinomycetes y Nocardia, como A. israelii

COCOS GRAM-NEGATIVOS
Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N. meningitidis. Tambin Moraxella
sp y Acinetobacter sp aparecen con morfologa de diplococos. Acinetobacter
puede ser pleomrfico, y a veces aparece como coco Gram-positivo.

Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram-positivo o

Gram-negativo, y, a menudo, Gram-variable.

BACILOS GRAM-NEGATIVOS
Bacilos finos: forma usual de enterobacteriaceae, como E. Coli

Cocobacilos: forma usual de Haemophilus sp, como H. influenzae

Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V. cholerae, y Campylobacter sp,

como C. jejuni

Forma de aguja fina: forma usual de Fusobacterium sp

III.

MATERIALES:

Porta y cubreobjetos.

Placas Petri.
Tubos de ensayo.
Aguja y asa de Kolle.
Mechero.
Microscopio.
Papel toalla.

INSUMOS:

IV.

Muestra: 42-b
Cristal violeta.
Lugol.
Alcohol-acetona.
Safranina.
Aceite de cedro.
Agua destilada.

PROCEDIMIENTO:

FIJACIN DE LA CEPA:
a) Limpiar un portaobjeto con alcohol y papel filtro.
b) Colocar sobre el portaobjeto una pequea gota de agua destilada.
c) Colocar una pequea cantidad de cepa con el asa de Kolle en el agua y extenderla
suavemente.
d) Fijar la cepa con el calor del mechero hasta que se seque, teniendo cuidado de no
deformar la estructura bacteriana.
COLORACIN:

Se agrega cristal violeta de Hucker (colorante inicial) y se espera 1 minuto.

Se lava con agua destilada

Se agrega lugol (mordiente) y se espera 1 minuto.

Se decolora con alcohol-cetona (decolorante).

Se lava con agua destilada.

Se
coloca
contraste).

Se lava con agua.

safranina

(colorante

de

Se seca suavemente y sin frotar con papel de filtro.

Una vez que la preparacin ya est totalmente seca, poner una gota de aceite de
cedro y observar al microscopio con el objetivo de inmersin.

1. Observar al microscopio con el objetivo de inmersin (100X).

Staphylococcus aureus

Salmonella shigella

V.

CONCLUSIONES

En la figura corresponden a las bacterias tipos cocos Staphylococcus aureus son del tipo
gramnegativos.
En la figura 2 corresponde a las bacterias Salmonella shigella no presenta agrupaciones
especificas ya que presenta coloracin son gramnegativos.
Se pudo determinar cada cepa de bacterias con el procedimiento y se pudo diferenciar
gram negativas con positivas.

VI.

CUESTIONARIO

Cules son las tcnicas de tincin?

Segn la manipulacin que efectuemos sobre la muestra a observar y segn los
colorantes que empleemos durante el proceso, podemos hablar de diferentes
modalidades de tincin.

Sin Tincin
No se utiliza ningn tipo de colorante.
Es el montaje directo hmedo o examen en fresco: las muestras se extienden
directamente sobre la superficie de un portaobjetos para su observacin. El material que
es demasiado espeso para permitir la diferenciacin de sus elementos puede diluirse con
igual volumen de solucin salina fisiolgica estril.
Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del material. Este tipo de
preparacin se emplea para detectar trofozotos mviles de parsitos intestinales como
Giardia, Entamoeba, huevos y quistes de otros parsitos, larvas y gusanos adultos,
Trichomonas, hifas de hongos, etc.

Tincin Simple
Es la tincin en que se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares
se tien con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol).
El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de hongos ya
que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la clula
husped, pero no acta sobre los polisacridos de las paredes celulares de los hongos.

Esta tcnica permite observar la morfologa y tamao de las bacterias, as como los tipos
de agrupaciones que forman.

Tincin diferencial
Con esta tincin vas a poder ver morfologa, tamao, organizacin de las bacterias y
adems categorizar los microorganismos en varios grupos, segn su afinidad con el
colorante que tu estas utilizando. Estas tinciones utilizan los colorantes diferenciales, que
se componen de ms de una sustancia tintrea. En algunas tcnicas de coloracin, las
tinciones diferenciales ms importantes que se emplean en bacteriologa son las de Gram
y la tincin cido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para obtener informacin acerca
de la composicin de las capas de la pared celular de las clulas bacterianas.
Los ejemplos clsicos seran la tincin de GRAM o la de Ziehl-Neelsen

Con la tincin de gram t puedes diferencias las bacterias en dos grupos: bacterias
gram positivas y bacterias gram negativas. Eso va a depender de si retienen o no el
colorante cristal violeta o el colorante safranina. La capacidad que tengan de retener
un colorante o no va a depender de la composicin de la pared celular de la bacteria.
Las gram positivas cuando realizar el procedimiento de tincin de gram, puede ver que
luego de aadir lugol, el colorante cristal violeta se mantiene en el interior de la
bacteria. Las gram negativas al aadir lugol pierden la coloracin del cristal violeta y si
le aades otro colorante, por ejemplo la safranina, adoptaran ese color.

La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y

econmica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias
contienen cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico) de cadena larga (50 a 90
tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con
alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan
bacilos cido-alcohol resistentes o BAAR. Las microbacterias como M. tuberculosis y
M. marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus
propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que
contiene ceras.

VII.

BIBLIOGRAFA

Collins C. 1999. Mtodos microbiolgicos. 5ta edicin. Espaa. Ed Acribia.

Granados R. 1996. Microbiologa. 1ra edicin. Madrid. Editorial Paraninfo. 323

pginas.
Montoya H. 2000. Microbiologa bsica para el rea de la salud y afines. 1 ed.
Colombia. Ed Universidad de Antioquia.