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Bacillus spp dans leau

valuation des risques


sanitaires lis la prsence
de Bacillus spp dans leau
destine la consommation
humaine dlivre par lusine
de production deau
dAire-sur-la-Lys
(Nord-Pas-de-Calais)
Avis de lAnses
Rapport dexpertise collective
Novembre 2012

dition scientifique

Bacillus spp dans leau


valuation des risques
sanitaires lis la prsence
de Bacillus spp dans leau
destine la consommation
humaine dlivre par lusine
de production deau
dAire-sur-la-Lys
(Nord-Pas-de-Calais)
Avis de lAnses
Rapport dexpertise collective
Novembre 2012

dition scientifique

Avis de lAnses
Saisine n2011-SA-0147

Maisons-Alfort, le 20 novembre 2012

Le directeur gnral

AVIS
de lAgence nationale de scurit sanitaire de lalimentation,
de lenvironnement et du travail
relatif aux risques sanitaires lis a la prsence de Bacillus spp. dans l'eau destine
la consommation humaine dlivre par l'usine de production d'eau d'Aire-sur-laLys (nord-pas de calais)

LAnses met en uvre une expertise scientifique indpendante et pluraliste.


LAnses contribue principalement assurer la scurit sanitaire dans les domaines de lenvironnement, du
travail et de lalimentation et valuer les risques sanitaires quils peuvent comporter.
Elle contribue galement assurer dune part la protection de la sant et du bien-tre des animaux et de la
sant des vgtaux et dautre part lvaluation des proprits nutritionnelles des aliments.
Elle fournit aux autorits comptentes toutes les informations sur ces risques ainsi que lexpertise et lappui
scientifique technique ncessaires llaboration des dispositions lgislatives et rglementaires et la mise en
uvre des mesures de gestion du risque (article L.1313-1 du code de la sant publique).
Ses avis sont rendus publics.

LAnses a t saisie le 1er juin 2011 par la Direction gnrale de la sant (DGS) dune
demande d'valuation des risques sanitaires lis la prsence de Bacillus spp. dans l'eau
destine la consommation humaine (EDCH) dlivre par l'usine de production d'Aire-surla-Lys (Nord-Pas de Calais).

1. CONTEXTE ET OBJET DE LA SAISINE


Dans le cadre du contrle sanitaire des EDCH, la rglementation prvoit la recherche de
bactries sulfito-rductrices, y compris les spores, sur les points de mise en distribution et
aux points dusage. En pratique, les laboratoires agrs au titre du contrle sanitaire des
EDCH mettent en uvre les conditions opratoires dcrites dans la norme NF EN 264612 Qualit de l'eau - Recherche et dnombrement des spores de micro-organismes
anarobies sulfito-rducteurs (Clostridia) . Seules les colonies de couleur noire sont
prises en compte dans lexpression des rsultats. La norme nvoque pas le
dnombrement ou lidentification des colonies atypiques.
Le suivi hebdomadaire, effectu par le laboratoire de veilles sanitaire et cologique de Lille
mtropole communaut urbaine (LMCU), des EDCH produites par lusine dAire-sur-la-Lys
a mis en vidence la prsence de colonies atypiques lors de la recherche et du
dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs (Clostridia).
Cette constatation a t faite partir du mois daot 2010, sans constater de nonconformit pour les paramtres microbiologiques rglementaires prvus par larrt du 11
janvier 2007 relatif aux limites et rfrences de qualit des eaux brutes et des EDCH
mentionnes aux articles R. 1321-2, R. 1321-3, R. 1321-7 et R. 1321-38 du code de la
sant publique. Le LMCU a dcid de faire identifier les colonies atypiques observes.

Agence nationale de scurit sanitaire de lalimentation, de lenvironnement et du travail,


27-31 av. du Gnral Leclerc, 94701 Maisons-Alfort Cedex - Tlphone : + 33 (0)1 49 77 13 50 - Tlcopie : + 33 (0)1 49 77 26 26 - www.anses.fr

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Le laboratoire de lInstitut Pasteur de Lille (IPL), charg de lidentification des bactries
issues des colonies atypiques observes, a identifi plusieurs Bacillus : B.
thermoamylovorans, B. licheniformis, B. circulans, B. coagulans, B. vireti, B. borstelensis,
B. fucosivorans, et Roseomonas genomospecies, Staphylococcus epidermidis 1,
Paenebacillus spp. ainsi que des B. cereus dans deux prlvements deau brute
provenant de la Lys.
La prsence de Bacillus cereus dans certains aliments est connue pour provoquer des
symptmes diarrhiques et mtiques (Anses, 2011). Cependant, les Bacillus spp. ne font
pas partie des paramtres microbiologiques des limites et rfrences de qualit
rglementaires des EDCH.
La DGS a transmis lAnses une note qui prcise les lments attendus par lAgence
rgionale de sant (ARS) du Nord-Pas de Calais lorigine de la saisine. La dernire de
ces questions portant sur la conduite tenir en cas de dcouverte de toute autre
bactrie non recherche habituellement dans leau ne peut trouver de rponse gnrale.
Chaque situation doit tre tudie au cas par cas, en fonction du contexte et des bactries
mises en cause. La question ne sera donc pas traite dans le cadre de cette expertise.
LAnses a sollicit le ptitionnaire afin dobtenir des informations complmentaires sur
lvolution de la situation, sur lexistence dvnements particuliers survenus pendant lt
2010 et sur dventuelles amliorations de la filire de traitement. La demande est reste
sans rponse au 20 octobre 2012.
Lexpertise porte sur les risques sanitaires lis la prsence de Bacillus dans lEDCH
dlivre par l'usine de production d'eau d'Aire-sur-la-Lys et plus particulirement sur les
diffrentes espces de Bacillus identifies, vis--vis de la population gnrale et de la (ou
des) population(s) sensible(s) le cas chant. Elle a pris en compte les usages
alimentaires de leau. Les performances de la filire de traitement mise en uvre lusine
dAire-sur-la-Lys ont t examines notamment au regard des Bacillus spp.

2. ORGANISATION DE LEXPERTISE
Lexpertise a t ralise dans le respect de la norme NF X 50-110 Qualit en expertise
Prescriptions gnrales de comptence pour une expertise (Mai 2003) .
Les questions poses par lARS ont t examines et cadres avec le bureau de leau de
la DGS aprs transmission de la saisine.
Le prsent avis a t tabli sur la base dun rapport initial rdig par trois rapporteurs,
prsent au comit dexperts spcialis (CES) Eaux le 6 septembre 2012, puis valid
par voie lectronique.

3. ANALYSE ET CONCLUSIONS DU CES


3.1. Description du danger li aux Bacillus spp. et aux genres apparents
3.1.1.Les espces isoles dans les EDCH dAire-sur-la-Lys

Les Bacillus spp. sont des bacilles aro-anarobies facultatifs. Ils ont une importante
capacit produire des spores rsistant des conditions environnementales dfavorables
(Logan et De Vos, 2009a). Les spores de nombreuses espces de Bacillus spp.
1

Les experts souhaitent attirer lattention sur lincohrence de retrouver Staphylococcus epidermidis aprs un traitement
thermique 75C pendant 15 minutes.

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(notamment B. cereus) sont abondantes dans le sol (Guinebretiere et al., 2003; Stenfors
Arnesen et al., 2008).
Parmi les Bacillus isols dans les eaux non traites dAire-sur-la-Lys, le groupe B. cereus
rassemble plusieurs espces gntiquement trs proches, dfinies empiriquement sur des
critres phnotypiques (B. thuringiensis, B. anthracis, B. cereus au sens strict, B.
mycoides, B. weihenstephanensis). Mme sil est gntiquement et taxonomiquement trs
proche de B. cereus au sens strict, B. anthracis prsente une cologie totalement
diffrente et sa prsence dans lenvironnement est lie lexistence dinfection chez les
animaux (Fasanella et al., 2010). La prsence de spores de B. cereus ne prjuge pas de
la prsence de spores de B. anthracis.
B. licheniformis et B. subtilis sont frquemment lorigine daltration des aliments ayant
reu un traitement thermique. B. circulans est phylogntiquement trs proche de B.
lentus et B. firmus. B. thermoamylovorans est peu connu et na t dcrit qu partir dun
seul isolat. B. vireti a t isol dans des chantillons de sol de prairies (Logan et De Vos,
2009a).
Les Paenibacillus spp. et Brevibacillus spp. sont des bacilles coloration de Gram
positive, producteurs dendospores, aro-anarobies facultatifs (Logan et De Vos, 2009a;
Priest, 2009). Les deux genres font partie de la famille des Paenibacillaceae (Logan et De
Vos, 2009b).
Les spores de Bacillus spp. et genres apparents sont rsistants aux dsinfectants. A titre
dexemple, des spores de B. cereus exposes une concentration de 200 mg/L
dhypochlorite de sodium pendant 5 minutes 2 subissent une rduction de leur
concentration denviron 2 log (Beuchat et al., 2005).
3.1.2.Espces responsables de maladies chez l'Homme aprs ingestion

Les espces de Bacillus spp. lorigine de gastro-entrites


La plupart des gastro-entrites provoques par les Bacillus (4e cause de toxi-infections
alimentaires en France), le sont par B. cereus et des espces trs proches comme B.
thuringiensis (Delmas et al., 2010; EFSA, 2005; Invs, 2011). D'autres espces de Bacillus
sont aussi lorigine de gastroentrites d'origine alimentaire, bien que beaucoup plus
rarement : B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus, B. mojavensis, (Apetroaie-Constantin et
al., 2009; EFSA, 2005; From et al., 2007; From et al., 2005; Kramer et Gilbert, 1989;
Salkinoja-Salonen et al., 1999). Il ne peut tre exclu que dautres espces et sousespces trs proches de B. subtilis puissent aussi provoquer des gastro-entrites
(Nakamura et al., 1999; Priest et al., 1987; Roberts et al., 1996). Cependant, aucune autre
espce du genre Bacillus ou d'autres genres apparents n'a t identifie comme cause
de gastro-entrite (Logan et De Vos, 2009a).
Mcanismes des gastro-entrites provoques par Bacillus spp.
Les gastro-entrites provoques par B. cereus et les Bacillus spp. sont gnralement
bnignes, avec nanmoins de trs rares cas mortels (EFSA, 2005). Elles rsultent de deux
mcanismes diffrents :
Des toxi-infections dans le cas des syndromes diarrhiques. Les cellules libres ou
issues de spores ingres se multiplient dans l'intestin o elles produisent des
entrotoxines lysant les cellules de l'pithlium intestinal. La dure moyenne
dincubation est de 8 16 heures. Les principaux symptmes sont des diarrhes
aqueuses, des douleurs abdominales, des nauses, durant gnralement 24
heures (Anses, 2011; EFSA, 2005; Stenfors Arnesen et al., 2008).
2

Ce couple temps de contact / concentration est trs nettement suprieur celui utilis en dsinfection dEDCH (1 3 mg/L
pendant 30 minutes).

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Des intoxinations dans le cas des syndromes mtiques. La bactrie produit, lors
de sa croissance dans l'aliment, un peptide toxique, la creulide, trs stable la
chaleur et aux pH extrmes. L'ingestion de la toxine, mme en l'absence de
cellules bactriennes, provoque des nauses, vomissements, malaises, parfois
accompagns de diarrhes et douleurs abdominales (EFSA, 2011). Les
symptmes surviennent dans les 30 minutes 6 heures aprs ingestion (Stenfors
Arnesen et al., 2008).

Moins bien connu, le mcanisme conduisant aux gastro-entrites induites par les autres
espces de Bacillus semble tre aussi une intoxination (EFSA, 2011).
Doses rponse
Dans le cas des toxi-infections diarrhiques, la quantit de cellules ou spores de B. cereus
pathognes retrouve dans les aliments incrimins est gnralement gale ou suprieure
105 par gramme ou millilitre et dans de trs rares cas gale ou suprieure 103 par
gramme ou millilitre (EFSA, 2005; Kramer et Gilbert, 1989; Stenfors Arnesen et al., 2008).
Dans le cas des intoxinations mtiques, les toxines peptidiques sont trs stables et
peuvent persister dans l'aliment mme si les bactries ont disparu (EFSA, 2005). Un
minimum de 105 cellules de B. cereus par gramme ou millilitre de l'aliment un stade de
sa production est ncessaire pour produire suffisamment de toxines et provoquer une
intoxination.
De mme, les pathologies dorigine alimentaire provoques par B. subtilis, B. licheniformis,
B. pumilus, ont toujours t associes une population importante de ces bactries dans
les aliments responsables, de lordre de 105 cellules ou spores par gramme (Kramer et
Gilbert, 1989).
Sources des gastro-entrites causes par Bacillus spp.
Les aliments sont lunique source identifie dans la littrature lorigine de toxi-infections
et intoxinations Bacillus documentes (Anses, 2011; EFSA, 2005).
Aucune toxi-infection ni intoxination Bacillus spp. n'a t identifie dans la
littrature comme associe la consommation deau de boisson.
Les spores de B. cereus sont prsentes dans quasiment toutes les catgories daliments.
Les matires premires entrant dans la composition dun produit fini, sont des sources
potentielles de contamination.
La croissance de B. cereus (Rosenfeld et al., 2005) et la production de toxines dans le cas
dintoxinations mtiques (Agata et al., 1999) ncessitent des milieux riches en acides
amins. Ces conditions ne sont pas runies dans une matrice telle que leau de boisson.
Prsence de Bacillus spp. dans l'eau
Les spores de nombreuses espces de Bacillus (notamment B. cereus) sont abondantes
dans le sol (Guinebretiere et al., 2003; Stenfors Arnesen et al., 2008). Il est donc probable
quune fraction soit entrane vers les eaux de surface.
Selon plusieurs tudes (Baudin et al., 2008; Rice et al., 1996), les eaux de surface et les
eaux souterraines influences peuvent contenir entre 150 et 2,5.104 spores de bactries
arobies / 100 mL. Dans les eaux souterraines (Rice et al., 1996), les concentrations
varient entre <1 et 12 UFC/100 mL. Dans lenvironnement, ces bactries sont
majoritairement prsentes sous une forme sporule trs stable et capable de persister
plusieurs annes (Hendriksen et Hansen, 2002).
Parmi les espces susceptibles dtre lorigine de gastro-entrites, B. thuringiensis, B.
cereus et des souches cytotoxiques de B. subtilis ont t dcrites dans les eaux de

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surface au Japon et en Norvge (Ichimatsu et al., 2000; Ostensvik et al., 2004), des
concentrations comprises entre 15 et 140 UFC/100 mL.
Ostensvik et al. (2004) remarquent que les procds de traitement de l'eau mis en uvre
dans les filires tudies (filtration et chloration) nliminent pas compltement les spores
de Bacillus. Les chantillons d'eau du robinet rvlent la prsence de spores des
concentrations comprises entre 15 et 38 UFC/100 mL.
Par ailleurs, les Bacillus spp. et genres apparents peuvent tre identifis dans de lEDCH
issue de filires de traitement mettant en uvre des procds de dsinfection conformes
aux standards actuels (OMS, 2011). Ils ne sont pas recherchs spcifiquement mais
peuvent tre isols sur les milieux de culture utiliss pour le dnombrement des
Escherichia coli. Le genre Paenibacillus est galement souvent identifi dans ces
conditions.
Bacillus spp. responsable de maladies autres que des gastro-entrites chez l'Homme
Trs largement rpandus dans la nature, B. cereus et d'autres espces de Bacillus sont
responsables d'infections opportunistes chez des patients souffrant de pathologies graves
ou lors de contaminations de champs opratoires. L'ingestion de spores ou de bactries
ne semble pas tre la source de ces infections (EFSA, 2007; EFSA, 2008). La prsence
de B. cereus dans l'eau a t voque comme source de contamination dans des units
de soins des grands brls (Valentino et Torregrossa, 1995).
B. anthracis est lorigine de la maladie du charbon chez lHomme et les animaux, et peut
provoquer la mort aprs ingestion en labsence dun traitement adapt (OMS, 2011).
Linfection peut tre contracte par voie respiratoire, cutane, mais aussi par ingestion
daliments (Fasanella et al., 2010). En France, la fivre charbonneuse des mammifres est
une maladie rpute contagieuse qui donne lieu dclaration et l'application de
mesures sanitaires (Dcret n 65-697 du 16 aot 1965). Cependant la maladie du charbon
n'a plus une incidence majeure dans les pays occidentaux mme si quelques foyers sont
susceptibles d'apparatre occasionnellement (Fasanella et al., 2010).
Selon lavis de lAnses relatif aux mesures de gestion lors de suspicions de cas de fivre
charbonneuse, lapparition dun foyer peut tre due :
- un phnomne naturel
o rmergence des spores sur la parcelle o le foyer sest dclar ;
o apport de matriel contamin par des spores mais non issu dun foyer
(phnomne hydrologique, fourrage ou aliment du commerce contamin,
apport de terre contamine, etc.).
- un lien pidmiologique avec un foyer non identifi : dplacement/achat danimaux en
incubation ou malades, prt de matriel souill, achat daliments contamins, etc.
(Anses, 2010).
Innocuit de certaines espces de Bacillus identifies dans leau dAire-sur-la-Lys
Les B. licheniformis et B. coagulans, avec une qualification absence de production de
toxine sont inclues dans la liste QPS (Qualified Presumption of Safety) tenue jour par
lEFSA 3. Le principe de cette liste est didentifier les groupes de micro-organismes pour
lesquels toutes les proccupations sanitaires ventuelles ont pu tre cartes, en vue de
leur utilisation dans la chane de production des aliments. Lorsquun agent biologique de
cette liste est notifi lEFSA pour utilisation particulire, il nest plus ncessaire de
procder lvaluation complte de son innocuit (EFSA, 2007; EFSA, 2008; EFSA, 2009;
EFSA, 2010). Les espces non inscrites sur la liste aprs valuation peuvent avoir t
cartes en raison de lexistence de dangers, mais le plus souvent au motif dun manque
de connaissances disponibles permettant dtayer linnocuit de lespce.
3

European Food Safety Authority

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3.2. Mtrologie des Bacillus spp.
3.2.1.Les mthodes danalyse mises en uvre

Selon la norme NF EN 26461-2, le terme Clostridia dsigne les micro-organismes


anarobies formant des spores et sulfito-rducteurs, appartenant la famille des
Bacillaces et au genre Clostridium . La mthode consiste slectionner les spores de
bactries anrobies sulfito-rductrices (BASR) dans un chantillon deau, par chauffage
dune dure de 15 minutes la temprature de 75C (+/- 5C) pour dtruire les formes
vgtatives. Lchantillon est ensuite filtr sur membrane qui sera incube en anarobiose
selon la norme NF EN 26461-2. Les colonies noires, produisant de lhydrogne sulfur,
sont dnombres en tant que spores de micro-organismes sulfito-rducteurs.
Le LMCU, la Socit des eaux du nord (SEN) et lIPL mettent en uvre un protocole
correspondant la norme NF EN 26461-2. La SEN et lIPL ont ajout une incubation
supplmentaire de 24 48 h en arobiose pour permettre lidentification des bactries
formant des colonies atypiques.
Traitement
thermique
75 C, 15 min

Filtration sur
membrane
(0,2 m)

Incubation
37C, 20 h et 44 h
Sur milieu glos en
anarobiose

Incubation
37C, 24 h
lectures
Sur milieu glos
en anarobiose

Dnombrement des
colonies noires
Protocole de la norme NF EN 26 461-2
appliqu par le LMCU, le SEN et lIPL

lecture

Dnombrement des
colonies translucides
protocole additionnel
du SEN et de lIPL

Figure 1 Schma de la mthode danalyse mise en uvre


3.2.2.Les rsultats

Le suivi hebdomadaire, par le LMCU, des EDCH produites par lusine dAire-sur-la-Lys a
mis en vidence la prsence de colonies atypiques lors de la recherche et du
dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs selon la
norme NF EN 26461-2. Ces rsultats ont t confirms par la SEN et lIPL. Les analyses
montrent la prsence de colonies atypiques identifies comme tant des B.
thermoamylovorans pour la grande majorit. Par la suite, une pratique dviante de la
norme est intervenue en ajoutant une incubation complmentaire en arobiose favorisant
la croissance dun plus grand nombre de colonies atypiques.
Les identifications par squenage de lADN ribosomal 16S, ralises par lIPL sur les
colonies atypiques isoles par les diffrents laboratoires, ont galement mis en vidence
la prsence de B. licheniformis, B. borstelensis, B. fucosivorans, Roseomonas
genomospecies, B. vireti, Paenebacillus spp. et Staphylococcus epidermidis.
Daprs la bibliographie (OMS, 2011; Ostensvik et al., 2004) et selon lavis des experts
nomms sur cette saisine, la prsence de Bacillus spp. dans les EDCH nest pas
exceptionnelle. Elle est souvent observe lorsque les usines de production dEDCH
utilisent des eaux de surface. Cependant les spores de bactries arobies ne font pas
partie des indicateurs defficacit de traitement retenus par le lgislateur.
B. cereus, responsable de la majorit des cas de gastroentrites provoqus par la
prsence de la bactrie dans les aliments, na t trouve que dans les eaux brutes et non
dans les EDCH produites par lusine dAire-sur-la-Lys. La seule bactrie connue comme
pouvant provoquer des gastro-entrites qui ait t identifie dans les EDCH produites par
cette usine est B. licheniformis. Aucun cas de gastro-entrite associ la prsence de

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Bacillus dans leau produite par lusine dAire-sur-la-Lys et plus gnralement dans les
EDCH na cependant t rapport.
3.3. La filire de traitement de l'usine de production d'eau d'Aire-sur-la-Lys
(Nord-Pas de Calais)
Leau dlivre par lusine des eaux dAire-sur-la-Lys (SMAEL-Syndicat mixte dadduction
des eaux de la Lys) transite par une conduite de refoulement dune longueur de 45 km.
Les espces de Bacillus observes ont t mises en vidence partir dchantillons
prlevs en diffrents points de cette conduite partir du 19 aot 2010. La conduite arrive
la station de refoulement de Prmesques et les eaux sont notamment achetes par le
LMCU. Le rservoir de Prmesques est le point dentre des rseaux du syndicat de
communes dlgus la Socit des Eaux du Nord et au rseau du SMAEL.
3.3.1.Description de la filire de traitement

Leau brute pompe dans la Lys reoit une injection de permanganate de potassium pour
limiter la prsence dalgues et de matires organiques. En cas de forte augmentation des
matires en suspension, une injection de chlorure ferrique est prvue pour faciliter la
dcantation dans la rserve deau brute.
En sortie de cette rserve, leau passe par deux dcanteurs. Le coagulant utilis est du
chlorure ferrique. Il ny a pas dutilisation dadjuvant de floculation. Une injection de
charbon actif en poudre est possible ce stade.
Leau transite ensuite travers 8 filtres sable garnis dune hauteur de 1 m de matriau.
La vitesse de filtration varie entre 2,6 et 4,2 m/h lorsque tous les filtres sont en service.
Elle peut atteindre 5,2 8,3 m/h en cas de lavage ou dindisponibilit de certains filtres.
Les filtres sont lavs contre-courant lair et leau et les eaux de lavage sont
achemines dans un bassin de dcantation dont le surnageant est renvoy en tte
dusine.
Leau est ensuite dsinfecte par ozonation dans 2 tours parallles 2 compartiments de
6 minutes de temps de contact. Le taux de traitement en ozone est ajust de manire
maintenir un rsiduel de 0,4 mg/L en sortie des tours dozonation. Un pilotage bas sur le
maintien dune valeur de CT 4 est ralis afin de rduire la formation de bromates. Une
injection de bisulfite de sodium est ralise en sortie de tour dozonation afin de neutraliser
lozone rsiduel.
En dernire tape, du chlore est inject en amont dune bche de stockage de 5 000 m3
de faon obtenir un rsiduel de 0,4 mg/L en sortie. La bche est dimensionne pour
permettre un temps de contact de 1 h au dbit nominal de lusine et 2 h au dbit de
fonctionnement habituel, ce qui permet dassurer des CT suffisants pour induire un effet
bactricide et virucide. Leau est ensuite dchlore par injection de bisulfite de sodium
avant son refoulement vers le rservoir de Prmesques.
3.3.2.Amlioration prvue de la filire

La construction dun dbourbeur en amont du bassin de stockage deau brute tait prvue
avec une mise en service au 1er trimestre 2011. Il tait galement prvu linjection de
chlorure ferrique et de polymre (floculant) en amont de ce dbourbeur. Les informations
disponibles au moment de cette expertise ne permettent pas de savoir si cette modification
de la filire est effective la date de publication du prsent avis.

-1

La rgle du CT exprime en mgL min (C= concentration en dsinfectant, T=temps de contact)


est utilise pour optimiser la quantit de dsinfectant requise pour dsinfecter l'eau.

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3.3.3.Analyse critique de la filire de traitement et de son fonctionnement

La filire de traitement est dimensionne pour traiter 100 000 m3/j. Nanmoins :
- les vitesses de filtration peuvent parfois tre leves notamment en cas de lavage de
filtres, ce qui est susceptible de provoquer des -coups hydrauliques et des
dcrochements de micro-organismes retenus par les matriaux filtrants ;
- les eaux de lavage des filtres sont simplement dcantes sans ajout de ractif
chimique avant recyclage en tte de filire. Cette pratique soumet les filtres une
charge en micro-organismes plus importante que celle de leau brute, et limite les
capacits de rtention de ces micro-organismes par les filtres ;
- les rsultats des analyses de surveillance sur la priode considre montrent une
variation de la qualit de leau produite par lusine notamment pour ce qui concerne la
turbidit et le pH.
Le dnombrement des spores de BASR est un indicateur defficacit de filtration,
notamment vis--vis de Cryptosporidium. Larrt du 11 janvier 2007 5 fixe une rfrence
de qualit de 0 UFC / 100 mL pour les EDCH.
Aire-sur-la-Lys, les analyses de surveillance sur leau filtre ont mis en vidence dans 3
prlvements sur 4 la prsence de spores de BASR (entre 2 et 4 UFC/100 mL), ce qui
rvle une fragilit au niveau de ltape de filtration. Les variations de turbidit observes
peuvent galement tmoigner dun traitement de clarification non optimis.
Les tapes dozonation et de chloration de cette filire de traitement nont que peu deffets
sur les spores de BASR.
Mme si aucun oocyste de Cryptosporidium na t dtect dans leau traite par lusine,
des rserves sur la matrise de ltape de filtration de cette usine peuvent tre mises.
Les spores de bactries arobies sont souvent retrouves dans les filires de traitement
dEDCH. Leur grande rsistance aux traitements de dsinfection chimique classiquement
utiliss dans ces filires peut expliquer leur prsence dans des eaux traites. De plus, il a
t montr que ces bactries pouvaient se dvelopper au cours du processus de
traitement notamment lors des tapes de filtration (Baudin et al., 2008). Concernant lusine
de production deau dAire-sur-la-Lys, la filire de traitement ne semble pas avoir prsent
un fonctionnement optimal face la rtention de ces spores ainsi que celle de BASR.
Cependant, il est difficile den apprhender compltement les raisons sur la base des
lments disponibles. Aucune indication nest donne dans le dossier transmis en appuie
la saisine sur des interventions ventuelles (travaux, nettoyages, etc.) ayant pu avoir lieu
avant la priode de mise en vidence de bactries sporules cultivant aprs une
incubation complmentaire en arobiose, dans le cadre de la surveillance de lexploitant.

3.4. valuation du risque


3.4.1.Exposition

A ce jour, leau de boisson nest pas identifie comme une source dinfection par
des Bacillus spp. pathognes, incluant B. cereus. La possibilit de transmission de
Bacillus par voie hydrique nest pas prouve (OMS, 2011).
Les infections Bacillus spp. sont majoritairement associes la consommation de
certains aliments. Les pathologies rsultent gnralement de lingestion dune importante
quantit de cellules de la bactrie ou des toxines quelle peut produire (EFSA, 2005;
Stenfors Arnesen et al., 2008). Ces conditions sont susceptibles dtre runies en fin de
phase de croissance des Bacillus spp. pathognes. B. cereus est lune des espces
5

Arrt du 11 janvier 2007 relatif aux limites et rfrences de qualit des eaux brutes et des eaux destines la
consommation humaine mentionn aux articles R. 1321-2, R. 1321-3, R. 1321-7 et R. 1321-38 du code de la sant publique.

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pathognes de Bacillus les mieux documentes. Cest lespce la plus souvent mise en
cause dans les intoxications alimentaires provoques par des Bacillus.
Selon lEFSA (2005), les B. cereus sont ubiquitaires et leur prsence dans les matires
premires alimentaires apparat comme invitable.
LEFSA voque galement dautres Bacillus spp. identifis comme des causes de
dgradation des aliments et dintoxications alimentaires : B. subtilis, B. licheniformis, B.
pumilus (EFSA, 2005; Guinebretiere et al., 2003; Rodriguez et al., 1992).
Lavis de lEFSA de 2005 indique que le sol peut contenir entre 103 et 105 spores de B.
cereus par gramme (Christiansson et al., 1999; EFSA, 2005; Guinebretiere et al., 2003; Te
Giffel et al., 1995). Aussi, il nest pas surprenant de retrouver ces spores dans les eaux
continentales. Diffrentes espces de Bacillus peuvent tre identifies dans des eaux de
surface : B. cereus, B. subtilis, B. pumilus, B. licheniformis, B. brevis, B. megaterium, B.
mycodes, B. sphaericus, B. circulans, ainsi que dautres espces de Bacillus spp. non
identifies (Ostensvik et al., 2004). Baudin et al. (2008) ont notamment dnombr entre
1,5 et 2,5.102 spores de bactries arobies / mL dans des eaux brutes. Daprs les
rsultats fournis par le laboratoire charg des analyses dans le cas dAire-sur-la-Lys, leau
de la rivire la Lys contiendrait entre 1,2.102 et 2,4.103 spores de Bacillus spp. / mL.
Ltude de Ostensvik et al. (2004) montre galement la prsence de spores de Bacillus
spp., notamment B. cereus, dans les eaux de distribution, pralablement traites par
filtration et chloration, satisfaisant par ailleurs aux limites de qualit microbiologique dune
EDCH (absence de coliformes et dEscherichia coli dans 100 mL). Dans cette tude, les
spores de Bacillus spp. sont dnombres hauteur de 15 140 UFC/100 mL dans les
eaux brutes et entre 15 et 38 UFC/100 mL dans les EDCH. Il est ainsi mis en vidence le
faible effet de la filtration et de la chloration sur les spores de Bacillus spp.. Les auteurs
suggrent que leau de boisson traite par filtration et chloration puisse tre lorigine de
contaminations par des spores de Bacillus spp. dans les industries alimentaires (Ostensvik
et al., 2004).
Dans les rares chantillons deaux traites par lusine dAire-sur-la-Lys qui contenaient des
spores de Bacillus spp., les concentrations mesures taient de 9 >260 UFC/100 mL.
Ces valeurs semblent du mme ordre de grandeur que les rsultats de dnombrement des
spores obtenus par Ostensvik et al. (2004) en Norvge ou Francis et al. (Francis et al.,
2001) en Angleterre (1 41 UFC/100 mL).
Dans lhypothse o lEDCH contiendrait ponctuellement des Bacillus spp. susceptibles de
provoquer des toxi-infections humaines, il est opportun de mettre en perspective les
apports potentiels de ces bactries par leau de boisson au regard des autres apports
potentiels (aliments). Pour cela, la comparaison des concentrations en Bacillus spp. dans
les EDCH et celles mesures dans les autres sources potentielles est pertinente.
Selon les aliments, les valeurs observes sont comprises entre 10 UFC/mL (ou UFC/g)
(pour des plats cuisins rfrigrs) 106 UFC/mL (ou g) (pour des plats cuisins
conservs 10C, des herbes aromatiques ou des pices) (EFSA, 2005). La comparaison
entre les concentrations de Bacillus spp. retrouves dans les EDCH, que ce soit Airesur-la-Lys ou en Norvge, et de B. cereus dans les aliments, permet de constater que ces
eaux contiennent de lordre de 102 106 fois moins de Bacillus que les aliments. En
complment, il faut souligner que les Bacillus spp. ponctuellement dtects dans leau, ne
sont pas aussi pathognes que B. cereus, lorigine de la majorit des intoxications
alimentaires provoques par ce genre bactrien.
Aussi, lexposition humaine potentielle des Bacillus spp. par ingestion, principale
voie dintoxication pour cette bactrie, via leau de boisson, apparat extrmement
faible au regard de lexposition potentielle via les autres aliments.

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3.4.2.Estimation du risque

Les Bacillus spp. peuvent tre dtects dans des EDCH distribues, satisfaisant aux
limites ou aux rfrences de qualit microbiologique fixes par la rglementation. Cela est
d la rsistance des spores de Bacillus aux processus de dsinfection chimique
couramment utiliss pour le traitement des EDCH. Dans la littrature, il nexiste pas de
donnes soutenant lhypothse selon laquelle les Bacillus spp. seraient lorigine de
pathologies hydriques. La mise en uvre dune stratgie de gestion spcifique ces
bactries nest donc pas requise. Aussi lOMS ne prconise pas de concentration
maximale en Bacillus spp. admissible dans les EDCH, ni pour la population gnrale, ni
pour des populations sensibles (OMS, 2011).
Cependant, il est possible danalyser la situation dcrite dans le cas d'Aire-sur-la-Lys.
Selon les donnes fournies par lARS, dans les cas o la croissance en arobiose des
colonies atypiques a t constate aprs mise en culture dchantillons dEDCH prleve
en sortie de la station de reprise de Prmesques, les concentrations en spores mesures
sont de lordre de 0,09 2,6 UFC/mL deau. Ces concentrations sont trs infrieures la
dose infectieuse retenue par lAfssa 6 pour B. cereus : 105 UFC/g daliments, proche de
105 UFC/mL deau. En outre, leau tant pauvre en nutriments, il nest pas prouv que B.
cereus puisse produire la toxine mtique dans ces conditions (Agata et al., 1999;
Rosenfeld et al., 2005).
De mme, les pathologies dorigine alimentaire provoques par B. subtilis, B. licheniformis
et B. pumilus ont toujours t associes de fortes concentrations dans les aliments
responsables, de lordre de 105 cellules ou spores par gramme. Aussi, les risques
sanitaires lis la prsence de B. cereus ou de B. licheniformis dans les EDCH aux
concentrations maximales observes dans leau traite par lusine d'Aire-sur-la-Lys
semblent ngligeables.
En ce qui concerne les autres espces de Bacillus identifies dans les eaux dAire-sur-laLys, aucune dose infectieuse nest documente. Aussi, il nest pas possible de conclure
quant au niveau de risque sanitaire quimplique la prsence de ces espces dans les
EDCH pour lHomme. Cependant, aucun lment ne permet de penser que ces autres
espces reprsentent un danger en cas de prsence dans de leau.
Compte tenu du niveau de risque estim ngligeable dans le cas de scnarios dexposition
ralistes, il est ncessaire denvisager un scnario dexposition trs dfavorable, qui
maximise lestimation du risque, pour tester le pire des cas. Dans ce but, lexercice est
ralis selon lhypothse, trs peu probable, o une grave dfaillance de la filire de
traitement conduirait une injection accidentelle deau brute pompe dans la Lys,
directement dans le rseau de distribution dEDCH. Daprs les rsultats fournis par les
laboratoires, chargs des analyses dans le cas dAire-sur-la-Lys, les concentrations
maximales mesures dans leau de la rivire la Lys sont de 2,4.103 spores de Bacillus
spp./mL. A titre de comparaison, Ostensvik et al. (2004), ont mis en vidence, dans des
eaux brutes en Norvge, des concentrations en espces responsables de gastro-entrites,
B. thuringiensis, B. cereus et des souches cytotoxiques de B. subtilis, atteignant au
maximum 14 spores/mL. Aussi, mme en prenant comme deuxime hypothse,
galement particulirement dfavorable, que lintgralit des Bacillus prsents dans leau
brute soient des espces pathognes pour lHomme (B. cereus, B. subtilis, B. licheniformis
ou B. pumilus), il apparat que leau ne contient pas une concentration en Bacillus
suffisante pour provoquer habituellement des pathologies humaines par la consommation
dun aliment (105 spores de B. cereus/mL).
Ainsi, le risque sanitaire li la prsence de Bacillus dans leau apparat extrmement
faible. Il importe de rappeler, que leau brute est susceptible de contenir de nombreux
micro-organismes autrement plus pathognes que les Bacillus.
6

Dans la fiche Bacillus cereus de 2009, actuellement en cours de rvision, mais sans modification prvue sur ce point.

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Les populations sensibles, et particulirement les patients haut risque tels que
dfinis dans la Circulaire DGS 2002 243, du 22 avril 2002 7, doivent tre maintenus dans
un environnement adapt leur tat. Aussi, des mesures particulires sont ncessaires et
doivent tre appliques pour le traitement de leau qui leur est fournie, avec notamment
des mesures visant garantir une concentration en bactries infrieure aux limites de
dtection de la mthode par culture. Ceci est valable pour toutes les bactries, notamment
les Bacillus spp. Les experts considrent que lobservation rigoureuse de ces prcautions
sont de nature limiter le risque lis la prsence dans les EDCH de Bacillus spp., y
compris les plus pathognes comme B. cereus, pour les populations dites sensibles.
Concrtement, bien que les ventuels cas dinfection Bacillus lis la consommation
deau ne fassent pas lobjet dun recueil dinformation spcifique grande chelle, notons
labsence de cas de ce type recenss ce jour.
3.5. Conclusions et recommandations
3.5.1.Signification des rsultats analytiques

Il ressort du dossier fourni par le ptitionnaire qu Aire-sur-la-Lys, quels que soient les
milieux utiliss, la lecture des botes de culture soumises une incubation supplmentaire
en arobiose a montr la prsence de colonies atypiques translucides qui ne
correspondent pas aux caractristiques des colonies de BASR. Elles ont t identifies,
pour leur grande majorit, comme tant des B. thermoamylovorans. Selon la norme NF
EN 26461-2, seules les colonies noires doivent tre dnombres en tant que BASR aprs
incubation pendant 48h 37C.
Ces colonies ont donc t mises en vidence surtout aprs incubation
complmentaire de 24 48 h en condition darobiose, ce qui ne correspond pas au
principe de la norme.
Par ailleurs, la prsence de Bacillus spp. nest pas exceptionnelle dans lenvironnement.
Elle est souvent observe lors danalyse deaux, lorsque les usines de production dEDCH
utilisent des eaux de surface.
3.5.2.Risques sanitaires

Les espces de Bacillus mises en vidence dans les eaux produites par lusine dAire-surla-Lys sont des bactries ubiquistes. Certaines de ces espces sont pathognes ou
pathognes opportunistes pour lHomme par voie alimentaire.
Elles devraient tre limines par les filires de traitements, dans les mmes proportions
que les BASR. Les procds de traitement installs dans lusine dAire-sur-la-Lys
susceptibles dtre efficaces pour rduire les concentrations de spores de bactries du
genre Bacillus sont essentiellement la coagulation floculation, la dcantation et la
filtration. Les procds de dsinfection mettant en uvre des oxydants ont peu deffet sur
les formes sporules.
La quantification du risque li la prsence des espces de Bacillus dnombres dans les
eaux produites par lusine dAire-sur-la-Lys se heurte la faiblesse des donnes
disponibles, autant en ce qui concerne lexposition que les relations doses-rponses.
Cependant, il apparat que :

Circulaire DGS 2002 243, du 22 avril 2002 relative la prvention du risque li aux lgionelles dans les tablissements de
sant : les patients dits patients haut risque sont les immunodprims svres, et particulirement les
immunodprims aprs transplantation ou greffe d'organe et les immunodprims par corticothrapie prolonge (0,5 mg/kg
de prednisone pendant 30 jours ou plus, ou quivalent) ou rcente et haute dose (c'est--dire suprieure 5 mg/kg de
prednisone pendant plus de 5 jours).

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-

Les pathologies provoques par des Bacillus pathognes aprs infection par voie
alimentaire, ont ce jour t observes aprs consommation daliments contenant de
fortes concentrations en Bacillus pathognes (de lordre de 105 spores/g ou mL).
aucune donne ne permet de penser que ces fortes concentrations ont pu tre
atteintes dans des eaux traites par lusine dAire-sur-la-Lys.

Ainsi, au regard des donnes fournies, le risque sanitaire li la consommation deau


produite par cette usine et contenant des Bacillus spp. apparat ngligeable.
Cependant, dun point de vue technique, la prsence de spores de Bacillus spp. dans les
eaux produites par cette usine rvle que les micro-organismes prsents dans leau brute,
peuvent, dans certaines conditions (eau brute provenant de la Lys ponctuellement trs
charge en micro-organismes, arrt de certains filtres de linstallation, etc.), ne pas tre
compltement limins par la filire de traitement en place. En fonction de la frquence du
phnomne, cette constatation doit amener le gestionnaire de linstallation une
dmarche doptimisation de la filire de traitement pour limiter la survenue de ces
situations. Les informations transmises ne permettent pas de se prononcer sur linfluence
dautres lments que la filire de traitement sur la prsence des Bacillus observs dans
leau traite : intervention sur le rseau, etc.
3.5.3.Recommandations de gestion

Les lments fournis dans le dossier montrent que la filire de traitement de lusine dAiresur-la-Lys noffrait pas aux dates correspondant aux lments fournis dans le dossier
toutes les garanties defficacit vis--vis du paramtre bactries anarobies sulfitorductrices y compris les spores . Au cas o lefficacit de la filire naurait pas t
amliore, il est indispensable den optimiser le fonctionnement.

4. CONCLUSIONS ET RECOMMANDATIONS DE LAGENCE


LAnses adopte les conclusions et recommandations du CES Eaux .

Le directeur gnral

Marc Mortureux

MOTS-CLES
Eau destine la consommation humaine, contrle sanitaire, mthode analytique,
microbiologie, Bacillus.

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Saisine n2011-SA-0147
Anses (2010) Avis de lAgence nationale de scurit sanitaire de lalimentation, de lenvironnement et du travail
relatif une demande d'avis sur les mesures de gestion en sant animale et en scurit sanitaire des aliments
lors
de
suspicions
et
de
confirmations
de
cas
de
fivre
charbonneuse.
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Anses (2011) Bacillus cereus - Fiche de description de danger microbiologique transmissible par les aliments.
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Bacillus spp dans l'eau


valuation des risques sanitaires lis la prsence de Bacillus spp dans l'eau
destine la consommation humaine dlivre par l'usine de production d'eau
d'Aire-sur-la-Lys (Nord-Pas-de-Calais)

Saisine : 2011-SA-0147

Rapport

Septembre 2012

Agence nationale de scurit sanitaire de lalimentation, de lenvironnement et du travail,


27-31 av. du Gnral Leclerc, 94701 Maisons-Alfort Cedex
Tlphone : + 33 (0)1 49 77 13 50 - Tlcopie : + 33 (0)1 46 77 26 26 - www.anses.fr

Anses rapport des rapporteurs auprs du CES Eaux

Saisine n2011-SA-0147

Mots-cls
Bacillus spp, eau destine la consommation humaine, usine de production d'eau, Aire-sur-la-Lys

Septembre 2012

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Anses rapport des rapporteurs auprs du CES Eaux

Saisine n2011-SA-0147

Prsentation des intervenants


CONTRIBUTEURS SCIENTIFIQUES

Coordination scientifique
M. Rmi POIRIER Direction de lvaluation des risques Unit dvaluation des risques lis leau
Rapporteurs du CES Eaux
Mme Bndicte WELTE - Eau de Paris
M. Pierre LE CANN cole des hautes tudes en sant publique (EHESP)
M. Christophe NGUYEN-THE Institut national de recherche agronomique (INRA) Avignon

Septembre 2012

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Anses rapport des rapporteurs auprs du CES Eaux

Saisine n2011-SA-0147

SOMMAIRE
Prsentation des intervenants ................................................................................................................. 3
Rsum ................................................................................................................................................... 5
Sigles et abrviations .............................................................................................................................. 7
Dfinitions ................................................................................................................................................ 7
Introduction .............................................................................................................................................. 8
1
Description du danger li aux Bacillus spp et aux genres apparents ......................................... 10
1.1
Gnralits ............................................................................................................................... 10
1.2
Espces responsables de maladies chez l'Homme aprs ingestion ....................................... 11
1.2.1
Les espces de Bacillus spp lorigine de gastro-entrites ......................................... 11
1.2.2
Mcanismes des gastro-entrites causes par Bacillus spp ........................................ 11
1.2.3
Notions de doses rponse dans le cas des gastro-entrites causes par Bacillus spp 12
1.2.4
Sources des gastro-entrites causes par Bacillus spp................................................ 12
1.2.5
Prsence de Bacillus spp dans l'eau ............................................................................. 13
1.3
Bacillus spp responsables de maladies chez l'Homme autres que des gastro-entrites ........ 14
1.4
Donnes existantes concernant linnocuit des espces de Bacillus prsums non dangereux
identifies dans leau de lusine dAire-sur-la-Lys ................................................................................. 14
2
Mtrologie des Bacillus spp .......................................................................................................... 16
2.1
Mthode de recherche et dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfitorducteurs .............................................................................................................................................. 16
2.1.1
Principe de la mthode de recherche et dnombrement des spores de microorganismes anarobies sulfito-rducteurs (clostridia) ; Partie 2 - filtration sur membrane : Norme
NF EN 26461-2, juillet 1993 .......................................................................................................... 16
2.1.2
Protocole de la Norme NF EN 26461-2, juillet 1993 ..................................................... 16
2.1.3
Protocole ralis par le laboratoire LMCU, Veilles sanitaire et cologique (VSE) ........ 16
2.1.4
Protocole ralis par la Socit des eaux du nord (SEN) ............................................. 16
2.1.5
Protocole utilis par lIPL ............................................................................................... 17
2.2
Rsultats ................................................................................................................................... 17
2.2.1
Rsultats du laboratoire LMCU/VSE ............................................................................. 17
2.2.2
Rsultats du laboratoire des eaux du Nord ................................................................... 17
2.2.3
Rsultats de lIPL ........................................................................................................... 18
2.2.4
Informations complmentaires ...................................................................................... 18
2.3
Discussion ................................................................................................................................ 18
3
La filire de traitement de l'usine de production d'eau d'Aire-sur-la-Lys (Nord-Pas-de-Calais) ... 20
3.1
Contexte ................................................................................................................................... 20
3.2
La filire de traitement .............................................................................................................. 20
3.3
Amlioration de la filire prvue ............................................................................................... 21
3.4
Analyses de surveillance .......................................................................................................... 21
3.5
Analyse critique de la filire de traitement et de son fonctionnement ...................................... 25
3.5.1
Filire ............................................................................................................................. 25
3.5.2
Connaissances bibliographiques et aspect critique ...................................................... 25
3.6
Conclusion sur la filire de traitement et son fonctionnement ................................................. 27
4
valuation du risque. .................................................................................................................... 29
4.1
Exposition ................................................................................................................................. 29
4.2
Estimation du risque ................................................................................................................. 31
5
Conclusions et recommandations................................................................................................. 33
5.1
Signification des rsultats analytiques ..................................................................................... 33
5.2
Risques sanitaires .................................................................................................................... 33
5.3
Recommandations de gestion .................................................................................................. 34
Rfrences bibliographiques ................................................................................................................. 35
Annexe 1 : Courrier de saisine de lAnses ............................................................................................ 41
Annexe 2 : Constitution du dossier technique reu ............................................................................... 42
Annexe 3 : Dmarche QPS de lEFSA et espces de Bacillus inscrites sur la liste QPS ..................... 43
Annexe 4 : Schma de principe de la filire de traitement dAire-sur-la-Lys ........................................ 46
Annexe 5 : Prcisions concernant Bacillus anthracis ............................................................................ 47
Annexe 6 : Exemples dincidences de B. cereus dans diffrents aliments (EFSA 2005) ..................... 50

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Anses rapport des rapporteurs auprs du CES Eaux

Saisine n2011-SA-0147

Rsum
Lors danalyses ralises dans le cadre du contrle sanitaire des eaux destines la
consommation humaine (EDCH) produites par lusine dAire-sur-la-Lys (Nord-Pas-de-Calais),
alors que lensemble des rsultats relatifs aux paramtres microbiologiques suivis au titre du
Code de la sant publique ou de la surveillance des producteurs dEDCH taient conformes,
des colonies translucides atypiques ont t observes sur un milieu de culture utilis
pour la recherche des micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs. Selon la norme
danalyse NF EN 26461-2 relative au dnombrement des spores de micro-organismes
anarobies sulfito-rducteurs, ces colonies nauraient pas d tre prises en compte, car ne
correspondant pas aux colonies caractristiques telles que dcrites dans la norme.
Lidentification des bactries correspondant aux colonies atypiques a mis en vidence la
prsence de plusieurs espces de Bacillus (B. thermoamylovorans, B. licheniformis, B.
circulans, B. coagulans, B. vireti, B. borstelensis, B. fucosivorans, et Paenebacillus spp.)
dans les eaux traites. Par ailleurs, des B. cereus ont t identifis dans leau brute
provenant de la Lys.
Pour rpondre une demande de la Direction gnrale de la sant (DGS), lAnses a men
une expertise portant sur les risques sanitaires lis la prsence de Bacillus dans lEDCH
dlivre par l'usine d'Aire-sur-la-Lys.
Certaines espces de Bacillus sont connues pour tre responsables de cas de gastroentrites dorigine alimentaire chez l'Homme, B. cereus tant lespce dcrite comme
responsable de la plupart de ces cas. Dautres espces sont galement connues comme
tant lorigine de gastro-entrites : B. thuringiensis, B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus,
B. mojavensis. Les toxi-infections ou intoxinations attribues des Bacillus sont
majoritairement associes la consommation de certains aliments : riz, ptes, lgumes, etc.
Leau de boisson nest pas identifie comme une source dinfection par ce genre bactrien.
Les sols constituant lhabitat privilgi de ce genre ubiquitaire, il apparat invitable de les
retrouver dans les matires premires alimentaires et les eaux. Les bonnes pratiques
dhygine et la bonne conception des quipements de production sont essentielles pour en
maitriser la contamination. Ces bactries peuvent tre prsentes dans des eaux de boisson,
y compris celles satisfaisant aux limites de qualit microbiologiques dune EDCH. LOMS ne
prconise pas le suivi des Bacillus dans les EDCH tant donn labsence de rsultats
dtude les impliquant dans des pathologies hydriques.
Concernant lusine de production deau dAire-sur-la-Lys, ltape de filtration de la filire de
traitement ne semble pas avoir un fonctionnement optimal pour la rtention des spores et
formes vgtatives des bactries anarobies sulfito-rductrices. Cependant, il est difficile
den apprhender compltement les raisons au regard des lments disponibles dans le
dossier. Aucune indication nest donne sur les interventions ventuelles (vnements
dexploitation, travaux,) ayant eu lieu avant lobservation des Bacillus.
Selon les donnes fournies par lAgence rgionale de sant (ARS), les concentrations en
bactries atypiques retrouves dans lEDCH d'Aire-sur-la-Lys (0,09 2,6 UFC / mL deau)
sont trs infrieures la dose infectieuse retenue pour B. cereus, B. subtilis, B. licheniformis
et B. pumilus dans les aliments (105 UFC / mL). En outre leau tant pauvre en nutriments, il
nest pas prouv que B. cereus puisse produire la toxine mtique dans de telles conditions.
Aussi, le risque sanitaire li la prsence de Bacillus pathognes aux concentrations
maximales observes dans leau traite par lusine d'Aire-sur-la-Lys semble ngligeable.
Dans lhypothse trs peu probable o une dfaillance de la filire de traitement devait
conduire une injection accidentelle deau brute pompe dans la Lys directement dans le
rseau de distribution, les concentrations maximales mesures dans leau de cette rivire
(2,4.103 spores de Bacillus spp / mL) restent encore trs infrieures aux doses infectieuses
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Saisine n2011-SA-0147

retenues pour les Bacillus pathognes. L aussi, le risque sanitaire li la prsence de


Bacillus dans leau apparait extrmement faible.

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Saisine n2011-SA-0147

Sigles et abrviations
ADN :
Afssa :
Anses :

Acide dsoxyribonuclique
Agence franaise de scurit sanitaire des aliments
Agence nationale de scurit sanitaire de lalimentation, de lenvironnement et du
travail
ARS :
Agence rgionale de sant
CAE :
Centre d'analyses environnementales
CAG :
Charbon actif en grain
CES :
Comit dexperts spcialis
CSHPF :
Conseil suprieur dhygine publique de France
DGAl :
Direction Gnrale de lAlimentation
DGCCRF :
Direction gnrale de la concurrence, de la consommation et de la rpression des
fraudes
DGS :
Direction gnrale de la sant
DREAL :
Direction rgionale de lenvironnement, de lamnagement et du logement
EDCH :
Eau destine la consommation humaine
EFSA :
Autorit europenne de scurit des aliments / European Food Safety Authority
ERS :
valuation des risques sanitaires
IPL :
Institut Pasteur de Lille
LMCU :
Lille mtropole communaut urbaine
OMS / WHO : Organisation mondiale de la sant / World Health Organzation
PCR :
Raction en chane par polymrase / Polymerase Chain Reaction
QPS :
Qualified Presumption of Safety
SEN :
Socit des eaux du nord
SMAEL :
Syndicat mixte dadduction des eaux de la Lys
TCS :
Tryptone, Casine, Soja
UE :
Union europenne
UFC :
Unit formant colonie
VSE :
Veilles sanitaire et cologique

Dfinitions
CT :

correspond au produit du temps de contact entre le dsinfectant et le micro-organisme


-1
et de la concentration de dsinfectant, exprim en mgL min, ncessaire pour
dsinfecter spcifiquement un micro-organisme cible.
Colonies atypiques :
dsignent dans ce rapport toutes celles ne correspondant pas aux caractristiques
des colonies prendre en compte selon la norme NF EN 26461-2 relative au
dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs
(clostridia) : Compter toutes les colonies noires aprs incubation pendant 20 +/- 4h
et 44 +/- 4h.
Clostridia :
selon la norme NF EN 26461-2, ce terme dsigne les micro-organismes anarobies
formant des spores et sulfito-rducteurs, appartenant la famille des Bacillaces et au genre
Clostridium.

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Saisine n2011-SA-0147

Introduction
Contexte
Dans le cadre du contrle sanitaire des eaux destines la consommation humaine (EDCH),
la rglementation prvoit la recherche de bactries sulfito-rductrices y compris les spores
sur les points de mise en distribution (entre de leau traite dans le rseau de distribution)
et en distribution (au robinet du consommateur). La norme NF EN 26461-2 Qualit de l'eau
- Recherche et dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfitorducteurs (Clostridia) prvoit le dnombrement des colonies caractristiques de couleur
noire des bactries recherches, dans des conditions opratoires bien dfinies. La norme
nvoque pas le dnombrement ou lidentification des colonies atypiques.
Le suivi hebdomadaire, effectu par le laboratoire de veilles sanitaire et cologique de Lille
mtropole communaut urbaine (LMCU), des EDCH produites par lusine dAire-sur-la-Lys a
mis en vidence la prsence de colonies atypiques lors de la recherche et du dnombrement
des spores de micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs (Clostridia). Cette
constatation a t faite partir du mois daot 2010, sans constater de non-conformit pour
les paramtres microbiologiques rglementaires prvus par larrt du 11 janvier 2007 relatif
aux limites et rfrences de qualit des eaux brutes et des EDCH mentionnes aux articles
R. 1321-2, R. 1321-3, R. 1321-7 et R. 1321-38 du code de la sant publique. Le LMCU a
dcid de faire identifier les colonies atypiques observes.
Le laboratoire de lInstitut Pasteur de Lille (IPL), charg de lidentification des bactries
correspondant aux colonies atypiques observes lors des analyses deau traite, a identifi
B. thermoamylovorans, B. licheniformis, B. circulans, B. coagulans, B. vireti, B. borstelensis,
B. fucosivorans, Roseomonas genomospecies, Staphylococcus epidermidis et Paenebacillus
spp.,
Le laboratoire de lIPL, a galement identifi des B. cereus dans deux prlvements deau
brute provenant de la Lys.
La prsence de Bacillus cereus dans certains aliments est connue pour provoquer des
symptmes diarrhiques et mtiques (Anses, 2011).
Les Bacillus spp ne font pas partie des paramtres de qualit microbiologique
rglementaires des EDCH.

Objet de la saisine
Lexpertise porte sur les risques sanitaires lis la prsence de Bacillus dans lEDCH
dlivre par l'usine de production d'eau d'Aire-sur-la-Lys.
La DGS a transmis lAnses une note qui prcise les lments attendus par lAgence
rgionale de sant (ARS) du Nord-Pas de Calais lorigine de la saisine. La dernire de ces
questions portant sur la conduite tenir en cas de dcouverte de toute autre bactrie non
recherche habituellement dans leau ne peut trouver de rponse gnrale. Chaque
situation doit tre tudie au cas par cas, en fonction du contexte et des bactries mises en
cause. La question ne sera donc pas traite dans le cadre de cette expertise.
Lvaluation des risques sanitaires portera tout particulirement sur les Bacillus identifis
dans l'usine de production d'eau d'Aire-sur-la-Lys, vis--vis de la population gnrale et de la
ou les populations sensibles le cas chant. Elle prendra en compte les usages alimentaires
de leau. Les performances de la filire de traitement mise en uvre lusine dAire-sur-laLys seront examines notamment au regard de Bacillus.

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Saisine n2011-SA-0147

Modalits de traitement : moyens mis en uvre et organisation


Les questions poses par lARS ont t examines avec le bureau de leau de la DGS aprs
transmission de la saisine. Sur la base du cadrage de la saisine, la modalit de travail
retenue est la nomination de rapporteurs rattachs au Comit dexperts spcialis (CES)
Eaux .
Le prsent rapport, a t soumis au CES Eaux pour discussion et adoption les 5 juillet et
6 septembre 2012.

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Saisine n2011-SA-0147

1 Description du danger li aux Bacillus spp et aux genres


apparents
1.1

Gnralits

Les Bacillus spp (4 10 m) sont des bactries Gram positifs, arobies stricts ou anarobies
facultatives, rattaches la famille des Bacillaceae. Elles ont une importante capacit
produire des spores trs rsistantes des conditions environnementales dfavorables
(Logan et De Vos, 2009a). Les spores de nombreuses espces de Bacillus spp (notamment
B. cereus) sont abondantes dans le sol (Guinebretiere et al., 2003; Stenfors Arnesen et al.,
2008).
Parmi les Bacillus spp isols des eaux non traites dAire-sur-la-Lys, le groupe B. cereus
ressemble plusieurs espces gntiquement trs proches, dfinies empiriquement sur des
critres phnotypiques (B. thuringiensis, B. anthracis, B. cereus au sens strict; B. mycoides,
B. weihenstephanensis).
Mme sil est gntiquement et taxonomiquement trs proche de B. cereus au sens strict, B.
anthracis a une cologie totalement diffrente et sa prsence dans lenvironnement est lie
lexistence dinfection chez les animaux (Fasanella et al., 2010). La prsence de spores de
B. cereus ne prjuge pas de la prsence de spores de B. anthracis.
Bacillus licheniformis et Bacillus subtilis sont des causes frquentes daltration des aliments
ayant reu un traitement thermique. Toutes deux sont anarobies facultatives. Bacillus
licheniformis est phylogntiquement trs proche de Bacillus subtilis. (Logan et De Vos,
2009a).
B. circulans est phylogntiquement trs proche de Bacillus lentus et Bacillus firmus.
Lespce Bacillus thermoamylovorans est peu connue et na t dcrite qu partir dun seul
isolat. B. vireti, a t isol de prairies et dcrit avec un ensemble dautres espces trs
proches telles que B. novalis, B. bataviensis, B. drentensis. Lespce Bacillus circulans a
longtemps regroup des bactries trs diffrentes, dont beaucoup sont dsormais classes
dans le genre Paenibacillus. Ce changement de classification peut tre source de mauvaise
identification disolats (Logan et De Vos, 2009a).
Les Paenibacillus spp et Brevibacillus spp sont des bacilles Gram positifs, producteurs
dendospores, anarobies facultatifs ou arobies stricts. Ils faisaient partie du genre Bacillus
spp jusqu ce que ltude de leur phylognie les fasse ressortir comme des genres distincts
(Logan et De Vos, 2009a; Priest, 2009). Les deux genres Paenibacillus et Brevibacillus font
partie de la famille des Paenibacillaceae. Brevibacillus borstelensis a t dcrite en 1995
lorigine comme Bacillus borstelensis partir de souches divergentes de lespce Bacillus
brevis, puis rattach au genre des Brevibacillus. Les souches ayant servi dcrire lespce
proviennent du sol (Logan et De Vos, 2009b).
Les spores de Bacillus spp et genres apparents sont rsistantes aux dsinfectants. A titre
dexemple des spores de B. cereus exposes 200 mg/L dhypochlorite de sodium pendant
5 minutes 1 subissent une rduction denviron 2 log10 de leur concentration (Beuchat et al.,
2005).

Ce couple temps de contact / concentration est trs nettement suprieur celui utilis en dsinfection dEDCH (1 3 mg/L
pendant 30 minutes).

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1.2

Saisine n2011-SA-0147

Espces responsables de maladies chez l'Homme aprs


ingestion

Lensemble des Bacillus spp sont abords dans le prsent chapitre, mme si B. cereus,
espce qui fait lobjet de nombreuses publications, est plus particulirement dcrite.
1.2.1 Les espces de Bacillus spp lorigine de gastro-entrites
Plusieurs espces de Bacillus spp ont t lorigine de gastro-entrites et seront brivement
prsentes dans ce paragraphe, mme si elles ne correspondent pas aux espces
retrouves dans les chantillons deau traite par l'usine de production d'eau d'Aire-sur-laLys.
La plupart des gastro-entrites provoques par les Bacillus, sont causes par Bacillus
cereus et des espces trs proches comme B. thuringiensis (EFSA, 2005). B. cereus au
sens large (incluant B. thuringiensis) reprsente la 4me cause de toxi-infections alimentaires
en France (Delmas et al., 2010; Invs, 2011). D'autres espces de Bacillus sont galement
lorigine de gastro-entrites d'origine alimentaire, bien que beaucoup plus rarement. Il s'agit
de B. subtilis, B. licheniformis, B. pumilus, B. mojavensis, (Apetroaie-Constantin et al., 2009;
EFSA, 2005; From et al., 2007; From et al., 2005; Kramer et Gilbert, 1989; Salkinoja-Salonen
et al., 1999).
B. pumilus et B. licheniformis sont phylogntiquement proches de B. subtilis (Logan et De
Vos, 2009a). B. mojavensis a t dfini partir de souches de B. subtilis particulires
(Roberts et al., 1994). Aussi, en raison de leur proximit et de leur faible discrimination en
termes didentifications vis--vis de B. subtilis, il ne peut tre exclu que dautres espces et
sous-espces trs proches de B. subtilis, comme B. amyloliquefaciens (Priest et al., 1987),
B. atrophaeus (Nakamura, 1989), B. vallismortis (Roberts et al., 1996), B. subtilis subsp.
spizizenii (Nakamura et al., 1999) et B. subtilis subsp. subtilis, puissent aussi causer des
gastroentrites.
Jusqu' prsent, aucune autre espce du genre Bacillus ou d'autres genres apparents n'ont
t identifis comme cause de gastro-entrite (Logan et De Vos, 2009a).
1.2.2 Mcanismes des gastro-entrites causes par Bacillus spp
Les gastro-entrites causes par B. cereus et les Bacillus spp sont gnralement bnignes,
avec nanmoins de trs rares cas mortels (EFSA, 2005). Elles rsultent de deux
mcanismes diffrents.

Des toxi-infections dans le cas des syndromes diarrhiques causs par B. cereus.
Les cellules libres ou issues de spores ingres se multiplient dans l'intestin o elles
produisent des entrotoxines lysant les cellules de l'pithlium intestinal. La dure
moyenne dincubation est de 8 16 heures. Les principaux symptmes sont des
diarrhes aqueuses, des douleurs abdominales, des nauses, durant gnralement
24 heures (Anses, 2011; EFSA, 2005; Stenfors Arnesen et al., 2008).

Des intoxinations dans le cas des syndromes mtiques causs par B. cereus. La
bactrie produit lors de sa croissance dans l'aliment un peptide toxique, la creulide,
trs stable la chaleur et aux pH extrmes. L'ingestion de la toxine, mme en
l'absence de cellules bactriennes, produit les symptmes de gastro-entrites (EFSA,
2011). Les symptmes, nauses, vomissements, malaises, parfois accompagns de
diarrhes et douleurs abdominales, surviennent dans les 30 minutes 6 heures
aprs ingestion de la toxine (Stenfors Arnesen et al., 2008). Bien que moins bien
connu, le mcanisme conduisant aux gastroentrites causes par les autres espces
de Bacillus semble tre aussi une intoxination provoque par des lipopeptides
(EFSA, 2011), avec des dures dincubation et des symptmes similaires ceux

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induits par la toxine mtique de B. cereus (Kramer et Gilbert, 1989).


1.2.3 Notions de doses rponse dans le cas des gastro-entrites causes par Bacillus
spp
Pour certaines espces du genre Bacillus, les quantits de bactries ou de spores
susceptibles de provoquer le dveloppement de pathologies peuvent tre estimes, pour des
voies dexposition et des populations bien dfinies.
Dans le cas des toxi-infections diarrhiques, la quantit de cellules ou spores de B. cereus
pathognes retrouve dans les aliments incrimins est gnralement gale ou suprieure
105 par gramme ou millilitre et dans de trs rares cas gale ou suprieure 103 par gramme
ou millilitre (EFSA, 2005; Kramer et Gilbert, 1989; Stenfors Arnesen et al., 2008).
Dans le cas des intoxinations mtiques, les toxines peptidiques sont trs stables et peuvent
persister dans l'aliment mme si les bactries ont disparu. Nanmoins, elles ne sont
produites qu'en fin de phase de croissance de Bacillus cereus (EFSA, 2005). Un minimum
de 105 cellules de Bacillus cereus par gramme ou millilitre de l'aliment un stade de sa
production est ncessaire.
De mme, les pathologies dorigine alimentaire provoques par B. subtilis, B. licheniformis,
B. pumilus, ont toujours t associes une population importante de ces bactries dans les
aliments responsables, de lordre de 105 cellules ou spores par gramme (Kramer et Gilbert,
1989).
Compte tenu des quantits de spores ou cellules de B. cereus, B. subtilis, B. licheniformis ou
B. pumilus prsentes dans les matires premires alimentaires, il est admis qu'une phase de
multiplication dans l'aliment avant sa consommation est ncessaire pour conduire une
gastro-entrite (EFSA, 2005).
La multiplication de B. cereus et la production de toxine mtique ncessitent la disponibilit
dacides amins (Agata et al., 1999; Glatz et Goepfert, 1976; Glatz et Goepfert, 1977). Pour
les autres Bacillus pathognes les conditions ncessaires la toxinognse ne sont pas
connues, mais il est peu probable que cette dernire puisse se produire dans de leau de
boisson.
1.2.4 Sources des gastro-entrites causes par Bacillus spp
Les aliments lunique source identifie dans la littrature lorigine de toxi-infections et
intoxinations Bacillus (Anses, 2011; EFSA, 2005).
Les spores de B. cereus sont prsentes dans quasiment toutes les catgories daliments.
Des produits secs ou dshydrats, tels que les pices, les herbes aromatiques, certains
lgumes, les crales et les farines, sont frquemment contamins des niveaux variables
par B. cereus. Ces matires premires rentrant dans la composition dun produit fini, sont
des sources potentielles de contamination. Par ailleurs, les spores de B. cereus possdent
de fortes capacits dadhsion aux surfaces en acier inoxydable et peuvent saccumuler
dans les quipements de transformation qui peuvent alors devenir des rservoirs de spores.
Les risques pour le consommateur sont le plus souvent lis une multiplication de B. cereus
lors de lexposition des aliments des tempratures inappropries. Les aliments associs
des toxi-infections B. cereus sont frquemment, mais non exclusivement, traits
thermiquement et/ou ne sont pas refroidis de manire adquate aprs leur prparation et
avant la consommation. Plusieurs intoxinations avec symptmes mtiques ont t causes
par des produits amylacs (plats base de riz ou de ptes). Sans tre exhaustif, les plats
cuisins, les produits agrments dpices, dherbes ou aromates, les aliments dshydrats
reconstitus par addition deau chaude (potages en poudre, pures de pommes de terre
prpares partir de flocons, lait en poudre, etc.) ou cuits leau (ptes, riz, semoule)
conservs une temprature permettant la croissance de B. cereus, comprises entre 4C et
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Anses rapport des rapporteurs auprs du CES Eaux

Saisine n2011-SA-0147

55C, et avec une consommation diffre, figurent parmi les aliments redouter, dans le cas
de B. cereus (EFSA, 2005; Kramer et Gilbert, 1989).
La croissance de B. cereus (Rosenfeld et al., 2005), et la production de toxines dans le cas
dintoxinations mtiques (Agata et al., 1999), ncessitent des milieux riches en acides
amins. Ces conditions ne sont pas runies dans une matrice telle que leau de boisson.
Aucune toxi-infection ni intoxination Bacillus spp n'a t identifie dans la littrature
comme associe la consommation deau de boisson.
1.2.5 Prsence de Bacillus spp dans l'eau
Les spores de nombreuses espces de Bacillus spp (notamment B. cereus) sont abondantes
dans le sol (Guinebretiere et al., 2003; Stenfors Arnesen et al., 2008). Il est donc probable
quune fraction soit entraine vers les eaux de surface. Il est probable que ce phnomne
soit amplifi en cas de fortes prcipitations et que les Bacillus spp se retrouvent alors en
abondance dans les eaux de surface. Baudin et al. dans leur tude portant sur une quinzaine
de filtres, quipant diffrentes filires de traitement, ont dnombr de 150 2.104/100 mL de
bactries arobies sporules dans les eaux brutes (Baudin et al., 2008).
Rice et al. (1996) ont rapport des dnombrements de spores arobies (Bacillus spp) dans
des eaux de surface allant de 200 23 000 UFC/100 mL alors que les dnombrements dans
les eaux souterraines variaient de <1 12 UFC/100 mL (Rice et al., 1996). La saisonnalit
de la prsence de Bacillus spp dans les eaux na pas t spcifiquement tudie.
Cependant, dans lenvironnement ce genre de bactries est majoritairement prsent sous
forme sporule, trs stable et peut rsister plusieurs annes (Hendriksen et Hansen, 2002).
Aussi, il est probable que leur population volue peu dune saison lautre.
Parmi les espces susceptibles de causer des gastro-entrites, B. thuringiensis, B. cereus et
des souches cytotoxiques de B. subtilis ont t dcrites dans les eaux de surface au Japon
et en Norvge (Ichimatsu et al., 2000; Ostensvik et al., 2004), avec des concentrations
comprises entre 15 et 140 UFC/100mL. Ostensvick et al. (2004) remarquent que les
procds de traitement de l'eau mis en uvre dans les filires tudies (chloration et
filtration) nliminent pas compltement les spores de Bacillus. Les chantillons d'eau du
robinet rvlent la prsence de spores des concentrations comprises entre 15 et 38
UFC/100mL.
Bacillus rigui, une espce proche de B. solisalsi, B. barbaricus, B. macauensis, B. arsenicus
et B. gelatini, a t dcrite dans les eaux de surface en Core du sud (Baik et al., 2010) et B.
macauensis dans les eaux brutes en entre dune usine de production d'eau potable en
Chine (Zhang et al., 2006).
Par ailleurs, les Bacillus spp et genres apparents peuvent tre identifis dans de leau de
boisson distribue en rseau, aliment par des filires de traitement mettant en uvre des
procds de dsinfection conformes aux standards actuels (OMS, 2011). Ils ne sont
cependant pas spcifiquement recherchs et dnombrs, et sont gnralement identifis
aprs ensemencement des milieux de culture utiliss pour le dnombrement dEscherichia
coli. Le genre Paenibacillus est souvent identifi dans ces conditions.
Enfin, en France, en cas de suspicion de contaminations intentionnelles B. anthracis peut
galement tre recherch dans les eaux destines la consommation humaine. La
technique utilise pour cela est la Polymerase Chain Reaction (PCR) quantitative.

Septembre 2012

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Anses rapport des rapporteurs auprs du CES Eaux

1.3

Saisine n2011-SA-0147

Bacillus spp responsables de maladies chez l'Homme


autres que des gastro-entrites

Trs largement rpandus dans la nature, Bacillus cereus et d'autres Bacillus spp sont
galement responsables d'infections opportunistes chez des patients souffrant de
pathologies graves ou lors de contaminations de champs opratoires. L'ingestion de spores
ou de bactries ne semble pas tre la source de ces infections (EFSA, 2007; EFSA, 2008),
cependant la prsence de B. cereus dans l'eau a t propose comme hypothse de source
de contamination dans des cas trs particuliers comme les units de soins des grands bruls
(Valentino et Torregrossa, 1995).
Chez l'Homme on note principalement des infections oculaires (parfois extrmement graves),
des infections respiratoires, des infections du systme nerveux central, des bactrimies,
des septicmies, des endocardites et exceptionnellement des pricardites, des abcs et des
gangrnes ncrotiques entranant parfois l'amputation, des ostomylites, des surinfections
des plaies, des arthrites et des infections des prothses articulaires, des infections gnitales
chez la femme (Bottone, 2010).
B. anthracis est lorigine de la maladie du charbon chez lHomme et les animaux, et peut
provoquer la mort aprs ingestion en labsence dun traitement adapt (OMS, 2011).
Linfection peut tre contracte par voie respiratoire, cutane, mais aussi par ingestion
daliments (Fasanella et al., 2010).
En France, la fivre charbonneuse des mammifres de toutes les espces est une maladie
rpute contagieuse qui donne lieu dclaration et l'application de mesures sanitaires
(Dcret n 65-697 du 16 aot 1965). Cependant la maladie du charbon n'a plus une
incidence majeure dans les pays occidentaux mme si quelques foyers sont susceptibles
d'apparatre occasionnellement (Fasanella et al., 2010)
Selon lavis de lAnses relatif aux mesures de gestion lors de suspicions de cas de fivre
charbonneuse, lapparition dun foyer peut tre due :
- un phnomne naturel
o rmergence des spores sur la parcelle o le foyer sest dclar ;
o apport de matriel contamin par des spores mais non issu dun foyer
(phnomne hydrologique, fourrage ou aliment du commerce contamin, apport
de terre contamine, etc.).
- un lien pidmiologique avec un foyer non identifi : dplacement/achat danimaux en
incubation ou malades, prt de matriel souill, achat daliments contamins, etc.
(Anses, 2010).
Lannexe 5 apporte des prcisions sur Bacillus anthracis. Dans le contexte d'Aire-sur-la-Lys,
rien ne semble justifier des investigations particulires vis--vis de cette espce.

1.4

Donnes existantes concernant linnocuit des espces de


Bacillus prsums non dangereux identifies dans leau de
lusine dAire-sur-la-Lys

B. licheniformis, B. coagulans, avec une qualification absence de production de toxine


(c'est--dire en excluant les rares souches produisant des toxines pouvant conduire des
gastro-entrites), font partie de la liste QPS (Qualified Presumption of Safety) tenue jour
par lEFSA (European Food Safety Authority). Le principe de cette liste est didentifier les
groupes de micro-organismes, gnralement au niveau de lespce, ne suscitant pas
dinquitude en matire de scurit ou pour lesquels toutes les proccupations sanitaires
ventuelles ont pu tre cartes, en vue de leur utilisation dans la chane de production des
aliments. Ainsi, lorsquun agent biologique de cette liste est notifi lEFSA pour utilisation
particulire, il nest plus ncessaire de procder lvaluation complte de son innocuit,
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dj considre comme suffisante (EFSA, 2007; EFSA, 2008; EFSA, 2009; EFSA, 2010).
Par contre, les espces non inscrites sur la liste aprs valuation peuvent avoir t cartes
en raison de lexistence de dangers (par exemple production de toxine), mais le plus souvent
au motif dun manque de connaissances disponibles permettant dtayer linnocuit de
lespce. Le dtail de cette approche et les argumentaires relatifs lintroduction de Bacillus
spp sur cette liste est synthtis en annexe 3.
B. circulans nest pas inscrit sur cette liste car certaines souches de cette espce suscitent
des inquitudes en termes de scurit sanitaire (production d'antibiotiques, signalement
d'infection humaine, production potentielle de toxines) et car les connaissances actuelles sur
son utilisation dans la chaine alimentaire ne sont pas suffisantes. Cela nexclut pas
lintroduction ultrieure de B. circulans sur la liste QPS si lvolution des connaissances
permet de prouver son innocuit dans le cadre dune notification lEFSA pour une
utilisation particulire (EFSA, 2010).
B. thermoamylovorans, B. vireti, B. borstelensis, B. fucosivorans, nont pas fait lobjet dune
apprciation de leur innocuit dans lapproche QPS. Parmi les nombreuses espces de
Paenebacillus spp, seule P. macerans a t value selon lapproche QPS, et na pas t
ajoute la liste par manque de connaissances.

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2 Mtrologie des Bacillus spp


Le suivi hebdomadaire, par le laboratoire de Veille sanitaire de Lille mtropole communaut
urbaine (LMCU), des EDCH produites par lusine dAire-sur-la-Lys a mis en vidence la
prsence de bactries atypiques lors de la recherche et du dnombrement des spores de
micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs (Clostridia). Cette constatation a t faite
partir du mois daot 2010, sans quil ny ait de nonconformit sur les paramtres
rglementaires microbiologiques prvus par larrt du 11 janvier 2007 relatif aux limites et
rfrences de qualit des eaux brutes et des eaux destines la consommation humaine
mentionnes aux articles R. 1321-2, R. 1321-3, R. 1321-7 et R. 1321-38 du code de la sant
publique.

2.1

Mthode de recherche et dnombrement des spores de


micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs

2.1.1 Principe de la mthode de recherche et dnombrement des spores de microorganismes anarobies sulfito-rducteurs (clostridia) ; Partie 2 - filtration sur
membrane : Norme NF EN 26461-2, juillet 1993
Selon la norme NF EN 26461-2, le terme Clostridia dsigne les micro-organismes anarobies
formant des spores et sulfito-rducteurs, appartenant la famille des Bacillaces et au genre
Clostridium.
La mthode consiste slectionner les spores de micro-organismes sulfito-rducteurs dans
un chantillon deau, par chauffage pour dtruire les formes vgtatives. Lchantillon est
ensuite filtr sur membrane qui sera incube en anarobiose sur milieu de culture glos
37C (+/- 1C) pendant 44h. Les colonies noires, produisant un prcipit de sulfure de fer
(FeS), sont dnombres en tant que spores de micro-organismes sulfito-rducteurs.
2.1.2 Protocole de la Norme NF EN 26461-2, juillet 1993
Lchantillon deau doit tre chauff 15 minutes 75C+/- 5C. 100 mL sont filtrs sur une
membrane de porosit 0,2 m. La membrane est ensuite dpose au fond dune bote de
Ptri, face suprieure vers le bas et recouverte de 18 mL de milieu de culture slectif (glose
sulfite-fer ou tryptose-sulfite). Lincubation est ralise 37C en anarobiose pendant 20h
+/- 4h et 44h +/- 4h (avec une premire lecture 20h +/- 4h). Si un incubateur anarobie est
utilis, la membrane filtrante peut tre place sur la surface de la glose face suprieure
tourne vers le haut. Les colonies noires sont alors dnombres.
2.1.3 Protocole ralis par le laboratoire LMCU, Veilles sanitaire et cologique (VSE)
Lanalyse est ralise selon les modalits de la norme, avec chauffage de lchantillon 15
minutes 75C, filtration sur membrane 0,2 m, dpt de la membrane sur glose TryptoneSulfite-Cyclosrine (TSC) sans cyclosrine (BioRad, rfrence 54419). La membrane est
dpose sur glose et incube en anarobiose pendant 24h. Aprs lecture, la membrane
est rincube pendant 24h supplmentaires en anarobiose. Les colonies noires sont de
nouveau dnombres.
2.1.4 Protocole ralis par la Socit des eaux du nord (SEN)
Lanalyse est ralise sur la base de la norme, avec chauffage de lchantillon 15 minutes
75C, filtration sur membrane 0,45 m au lieu de 0,2 m, dpt de la membrane sur glose
au sulfite de fer (Biomrieux, rfrence 42603). La membrane est dpose sur glose et
incube en anarobiose en jarre ou en sachet muni dun dispositif Genbag anaer (sachet
avec gnrateur danarobiose) de Biomrieux et contrl par un tmoin danarobiose
pendant 24h, suivie dune lecture et dune rincubation pendant 24h supplmentaires en

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anarobie. Les colonies noires sont dnombres. Pour faciliter lobservation des colonies
atypiques, la SEN a ajout ce protocole une incubation de 24 heures en arobiose.
2.1.5 Protocole utilis par lIPL
Lanalyse est ralise selon la norme avec chauffage de lchantillon 15 minutes 75C,
filtration sur membrane 0,2 m, dpt de la membrane sur glose TSC sans cyclosrine
(BIOKAR, rfrence non prcise dans le dossier). La membrane est dpose sur glose et
incube en anarobiose pendant 24h. Aprs lecture, la membrane est rincube pendant
24h supplmentaires en anarobiose. Les colonies noires sont de nouveau dnombres.
Pour pouvoir observer des colonies atypiques, lIPL a ajout ce protocole une incubation
de 24 48 heures en arobiose.
La figure 1 illustre les tapes analytiques mises en uvre par les diffrents laboratoires
sollicits.
Traitement
thermique
75 C, 15 min

Filtration sur
membrane
(0,2 m)

Incubation
37C, 20 h et 44 h
Sur milieu glos en
anarobiose

Incubation
37C, 24 h
lectures
Sur milieu glos
en anarobiose

Dnombrement des
colonies translucides

Dnombrement des
colonies noires
Protocole de la norme NF EN 26 461-2
appliqu par le LMCU, le SEN et lIPL

lecture

protocole additionnel
du SEN et de lIPL

Figure 1 Schma de la mthode danalyse mise en uvre

2.2

Rsultats

2.2.1 Rsultats du laboratoire LMCU/VSE


Des colonies blanches non caractristiques (ne formant pas de prcipit de sulfure de fer)
sont observes de faon rcurrente des concentrations autour de 2 log pour 100 mL
depuis fin aot 2010 au niveau des points de prlvement de Prmesques en sortie du
rservoir (19 >200 spores pour 100 mL), vanne VRK (9 261 spores pour 100mL) et
vanne VE19 (9 >260 spores pour 100mL).
La communaut de communes a aussitt transmis ces rsultats au traiteur deau (Veolia
Eau) qui a entrepris des analyses rglementaires (B3) sur leau en sortie dUsine. Tous les
rsultats taient conformes. Paralllement, le laboratoire LMCU/VSE a caractris les
colonies atypiques comme tant majoritairement des bactries du genre Bacillus.
Une identification gnomique par squenage de lADN ribosomal 16S, ralise par lInstitut
Pasteur de Lille (IPL) aprs repiquage sur milieu TCS (Tryptone-Casine-Soja) 37C
pendant 48 h en arobiose a t ralise sur 34 souches. Bacillus thermoamylovorans a t
identifi pour 21 souches (62%), Bacillus licheniformis pour 5 souches (15%), Paenebacillus
spp pour 4 souches, Bacillus vireti pour 1 souche (3%) et Brevibacillus borstelensis pour 1
souche (3%).
2.2.2 Rsultats du laboratoire des eaux du Nord
Des analyses sur les eaux de distribution, en diffrents points du rseau ont t ralises
suivant la norme NF EN 26461-2, juillet 1993 montrant la prsence de colonies atypiques
blanches (2 186 UFC/100mL), aprs incubation supplmentaire de 24h en arobiose. Les
colonies blanchtres sont repiques sur glose TSA et identifies sur galerie API 20E 2 et
2

La galerie API 20E est ddie lidentification des bacilles gram ngatifs.

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API 50CHB 3. Trois souches de Bacillus licheniformis, B. circulans et B. coagulans ont t


identifies.
Une identification gnomique par squenage de lADN ribosomal 16S de trois souches
isoles les 10, 13 et 20 dcembre 2010, ralise par lInstitut Pasteur de Lille (IPL) a permis
de montrer que ces bactries correspondaient lespce Bacillus thermoamylovorans.
2.2.3 Rsultats de lIPL
Des analyses ralises sur les eaux de distribution, prleves en diffrents points du rseau
selon la norme NF EN 26461-2 (juillet 1993), montrent la prsence de colonies atypiques
blanches (prs de 100 UFC/100mL) aprs incubation supplmentaire de 24h 48h en
arobiose.
Une identification par galerie API 20A 4 a permis de mettre en vidence B. licheniformis sur
une souche isole partir du prlvement du 15/11/2010 ralis sur le rseau. Une
identification gnomique par squenage de lADN ribosomal 16S a permis de montrer que
les colonies atypiques taient reprsentes majoritairement par lespce B.
thermoamylovorans (34/51 identifications). Les autres souches isoles tant : Paenebacillus
spp (6/51), B. licheniformis (5/51), B. borstelensis (2/51), B. fucosivorans 5 (1/51),
Roseomonas genomospecies (1/51), B. vireti (1/51), Staphylococcus epidermidis (1/51).
2.2.4 Informations complmentaires
Le laboratoire CAE de Veolia a galement ralis des analyses en utilisant un milieu de
culture de chez AES laboratoires et deux types dincubation : membrane dpose au fond de
la bote recouverte de glose et membrane la surface de la glose et incubation en jarre en
anarobiose. Le protocole nest pas dtaill dans le document fourni (Document SMAEL, 14
janvier 2011). Les rsultats obtenus avec les deux mthodes sont comparables. Il faut noter
que toutes les analyses rglementaires ralises par les diffrents laboratoires taient
satisfaisantes.
Des analyses complmentaires ralises par le laboratoire IPL sur des eaux brutes
prleves par Veolia dans la Lys ont montr la prsence de spores de Bacillus dans deux
prlvements (eaux de la rivire La Lys, les 15/11 et 22/11). Les dnombrements de spores
de Bacillus spp dans leau brute sont respectivement de 2400/mL et 120/mL. Les
identifications des souches isoles aprs culture des spores (le rapport entre le nombre de
souches identifies et le nombre de souches isoles nest pas prcis) par galerie API 20A
ont montr la prsence de B. licheniformis et de B. cereus.

2.3

Discussion

Le suivi hebdomadaire, par le LMCU, des EDCH produites par lusine dAire-sur-la-Lys a
mis en vidence la prsence de colonies atypiques lors de la recherche et du dnombrement
des spores de micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs selon la norme NF EN 264612. Ces rsultats ont t confirms par la SEN et lIPL. Les analyses montrent la prsence de
colonies atypiques identifies comme tant des B. thermoamylovorans pour la grande
majorit. Par la suite, une pratique dviante de la norme est intervenue en ajoutant une

La galerie API 50CHB est ddie ltude du mtabolisme de 49 sucres. Elle est adapte
lidentification des Bacillus.
4
La galerie API 20A, ddie lidentification des bactries anarobies, comporte 20 microtubes
contenant des substrats dshydrats. Les microtubes sont inoculs avec une suspension bactrienne
qui reconstitue les tests.
5
Bacillus fucosivorans nest ni rfrenc dans le manuel de bactriologie systmatique Bergeys (De
Vos et al., 2009), ni dans la liste des noms des procaryotes rpertoris dans la nomenclature
(http://www.bacterio.cict.fr/).
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incubation complmentaire en arobiose favorisant la croissance dun plus grand nombre de


colonies atypiques.
Les identifications par squenage de lADN ribosomal 16S, ralises par lIPL sur les
colonies atypiques isoles par les diffrents laboratoires, ont galement mises en vidence
la prsence de B. licheniformis, B. borstelensis, B. fucosivorans, Roseomonas
genomospecies, B. vireti, Paenebacillus spp. et Staphylococcus epidermidis.
Daprs la bibliographie (OMS, 2011; Ostensvik et al., 2004) et selon lavis des experts
nomms sur cette saisine, la prsence de Bacillus spp. dans les EDCH nest pas
exceptionnelle. Elle est souvent observe lorsque les usines de production dEDCH utilisent
des eaux de surface. Cependant les spores de bactries arobies ne font pas partie des
indicateurs defficacit de traitement retenus par le lgislateur.
B. cereus, responsable de la majorit des cas de gastroentrites provoqus par la prsence
de la bactrie dans les aliments, na t trouve que dans les eaux brutes et non dans les
EDCH produites par lusine dAire-sur-la-Lys. La seule bactrie connue comme pouvant
provoquer des gastro-entrites qui ait t identifie dans les EDCH produites par cette usine
est B. licheniformis. Aucun cas de gastro-entrite associ la prsence de Bacillus dans
leau produite par lusine dAire-sur-la-Lys et plus gnralement dans les EDCH na
cependant t rapport.

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3 La filire de traitement de l'usine de production d'eau


d'Aire-sur-la-Lys (Nord-Pas-de-Calais)
3.1

Contexte

Leau dlivre par lusine des eaux dAire-sur-la-Lys (SMAEL - Syndicat mixte dadduction
des eaux de la Lys) transite par une conduite de refoulement de 45 km de long et dun
diamtre de 1 000 mm. Cette conduite comporte 2 postes de rechloration, 108 dcharges et
114 ventouses. Des spores ont t observes sur des chantillons prlevs dans la conduite
partir du 19 aot 2010 en diffrents points. La conduite arrive la station de refoulement
de Prmesques et ces eaux sont notamment achetes par LMCU (Lille mtropole
communaut urbaine). Le rservoir de Prmesques est le point dentre des rseaux du
syndicat de communes dlgus la Socit des Eaux du Nord et au rseau du SMAEL.

3.2

La filire de traitement

Les donnes concernant la filire de traitement sont les suivantes :


Leau brute est pompe dans la Lys (annexe 4 : Schma de la filire). A la sortie des
pompes, une injection de permanganate de potassium est prvue afin de limiter la prsence
dalgues et de matire organique.
En cas de forte augmentation des matires en suspension, une injection de chlorure ferrique
est prvue pour faciliter la dcantation dans la rserve deau brute.
Leau passe ensuite dans une rserve deau brute dun volume utile de 100 000 m3, ce qui
reprsente une autonomie dun jour de fonctionnement de la filire.
Leau est ensuite dcante dans deux dcanteurs. Le coagulant utilis est du chlorure
ferrique. Il ny a pas dutilisation dadjuvant de floculation. Une injection de charbon actif en
poudre est possible ce stade.
Leau transite ensuite travers 8 filtres sable garnis dune hauteur de 1 m de matriau. La
taille effective du matriau filtrant est de 0,95 mm et le coefficient duniformit est infrieur
1,4 ce qui est tout fait classique pour de la filtration rapide.
La vitesse de filtration varie entre 2,6 et 4,2 m/h lorsque tous les filtres sont en service, en
fonction du dbit de lusine. Ces vitesses peuvent atteindre 5,2 8,3 m/h en cas de lavage
ou dindisponibilit de certains filtres, ce qui peut entrainer ponctuellement de fortes
variations de vitesse.
Les filtres sont lavs contre-courant lair et leau, des dbits respectifs de 5 680 m3/h
et 1 400m3/h, modalit classique. Les eaux de lavage des filtres sont achemines dans un
bassin de stockage, laisses dcanter et le surnageant est renvoy en tte dusine.
Leau est ensuite dsinfecte par ozonation dans 2 tours parallles 2 compartiments de 6
minutes de temps de contact. Le taux de traitement en ozone est ajust de manire
maintenir un rsiduel de 0,4 mg/L en sortie des tours dozonation. Un pilotage de lozonation
est fait par lexploitant (pilotage au CT 6 afin de rduire la formation de bromates).
Une injection de bisulfite de sodium est ralise en sortie de tour dozonation afin de
neutraliser lozone rsiduel.

La CT correspond au produit du temps de contact entre le dsinfectant et le micro-organisme et de la


-1
concentration de dsinfectant, exprim en mgL min, ncessaire pour dsinfecter spcifiquement un
micro-organisme cible.

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La dernire tape de traitement est une chloration. Le chlore est inject en amont dune
bche de stockage de 5 000 m3 de faon obtenir un rsiduel de 0,4 mg/L en sortie de la
bche. La bche est dimensionne pour permettre un temps de contact de 1 h au dbit
nominal de lusine et 2 h au dbit de fonctionnement habituel, ce qui permet dassurer des
CT suffisants pour induire un effet bactricide et virucide.
Leau est ensuite dchlore par injection de bisulfite de sodium avant son refoulement vers
le rservoir de Prmesques.

3.3

Amlioration de la filire prvue

La construction dun dbourbeur en amont du bassin de stockage deau brute tait prvue
avec une mise en service au 1er trimestre 2011. Il tait galement prvu linjection de
chlorure ferrique et de polymre (floculant) en amont de ce dbourbeur. Les informations
disponibles au moment de cette expertise ne permettent pas de savoir si cette modification
de la filire est effective la date de publication du prsent rapport.

3.4

Analyses de surveillance

Le Syndicat mixte dadduction des eaux de la Lys (SMAEL) a transmis un rapport concernant
la qualit de leau Prmesques. Lexploitation de lusine est confie Veolia depuis janvier
2004.
Des analyses de surveillance sont effectues tous les jours par lexploitant dans le
laboratoire de lusine diffrentes tapes de la filire de traitement (eau brute, eau
dcante, eau filtre et eau traite). Certains paramtres sont analyss des frquences
diffrentes et des analyses microbiologiques sont ralises par le LMCU 2 fois par mois.
La figure 2 permet de localiser les diffrents points de prlvement ralise au titre de la
surveillance de lexploitant.

Figure 2 : Localisation des points de prlvements.


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Les tableaux suivants donnent la frquence de surveillance.


Tableaux 1 et 2 : Frquences de surveillance.

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Les rsultats des diverses analyses de surveillance ne montrent pas de non-conformits


(germes tests de contamination fcale notamment) sur les eaux produites par lusine.
Plusieurs campagnes danalyses spcifiques ont t effectues par le laboratoire du CAE
(centre de recherches de Veolia) partir du 1er novembre 2010. Les rsultats montrent que
la prsence de bactries anarobies sulfito-rductrices est importante dans leau brute :
dnombrement de 20 300 UFC /20 mL. La prsence de bactries anarobies sulfitorductrices dans leau filtre a galement t mise en vidence dans 3 prlvements sur 4
(dnombrement 2 4 UFC /100 mL).
La prsence de spores de Bacillus a t dtecte dans leau brute avec des dnombrements
variant entre 120 et 2,4 x 103 UFC /mL dans leau brute et dans leau filtre avec des
dnombrements compris entre < 1 et 3 UFC / mL (analyses ralises par le laboratoire IPL).
La dtection des bactries arobies sporulantes ayant t observe en diffrents points du
rseau, une analyse plus fine des rsultats des paramtres de surveillance de lusine a t
ralise.
Les rsultats de surveillance en diffrents points du rseau montrent :
-

une prsence de chlore constante avec des rsiduels de chlore levs (0,4 0,5 mg/L
de chlore libre) ;

une variation de pH, lie daprs lexploitant, un problme dinstrumentation ;

Figure 3 : Variations de pH observes en fonction du temps.

une variation de turbidit significative aux points VRK et Prmesques notamment autour
du 10 aot 2010.

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Figure 4 : Variations de turbidit observes en fonction du temps.

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3.5

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Analyse critique de la filire de traitement et de son


fonctionnement

3.5.1 Filire
La filire de traitement classique de clarification est dimensionne pour traiter 100 000 m3/j.
Nanmoins:
-

les vitesses de filtration peuvent tre parfois leves notamment en cas de lavage de
filtres et les variations brutales de vitesse de filtration sont susceptibles de provoquer
des coups hydrauliques pouvant conduire au dcrochement de micro-organismes,
notamment les spores de bactries anarobies sulfito-rductrices et dautres microorganismes retenus majoritairement par les matriaux filtrants (Oocystes de
Cryptosporidium notamment) ;

les eaux de lavage des filtres sont simplement dcantes sans ajout de ractif chimique.
Le recyclage des eaux de lavage entraine une charge plus importante en microorganismes dans leau brute, qui augmente la charge en micro-organismes dans les
filtres et limite les capacits de rtention de ces micro-organismes par les filtres ; lors de
variations brutales de vitesse ;

les rsultats des analyses de surveillance sur la priode considre montrent une
variation de la qualit de leau produite par lusine notamment pour ce qui concerne la
turbidit et le pH.

Dans cette filire de traitement, la seule barrire contre les Cryptosporidium est la filtration.
Les analyses de surveillance sur leau filtre ont mis en vidence une prsence quasiment
systmatique de bactries anarobies sulfito-rductrices, ce qui met en vidence une
fragilit de cette tape de filtration. Les variations de turbidit observes peuvent galement
tmoigner dun traitement de clarification pas toujours optimis.
Les tapes dozonation et de chloration de cette filire de traitement sont des procds de
dsinfection qui nont que peu deffet sur les bactries anarobies sulfito-rductrices.
Mme si aucun oocyste de Cryptosporidium na t dtect dans leau traite par lusine, des
rserves sur la matrise de ltape de filtration de cette usine peuvent tre mises.
3.5.2 Connaissances bibliographiques et aspect critique
Les bactries anarobies sulfito-rductrices sont aujourdhui considres comme un
indicateur defficacit de filtration. Larrt du 11 janvier 2007 donne une rfrence de qualit
de 0 UFC / 100 mL et permet de vrifier labattement de la filire de traitement sur le
paramtre Cryptosporidium.
De nombreux micro-organismes indignes tels que les spores arobies et les Clostridia
sulfito-rducteurs / Clostridium perfringens ont galement souvent t considrs comme
indicateur defficacit de traitement de Cryptosporidium et Giardia (Chung et al., 2004; Hall et
al., 2000; Lechevallier, 2004; Nieminski, 1997).
Labattement moyen de spores de Bacillus par filtration dans 22 installations de traitement
correspond celui des oocystes de Cryptosporidium (1,6 1,8 log) (Nieminski, 1997).
Lechevallier et al. ont dtermin linactivation de cultures de Bacillus subtilis et autres spores
arobies par lozone et ont compar ces cintiques dinactivation celles de
Cryptosporidium 20-22 C. Le produit de la concentration en dsinfectant et du temps de
contact (CT) ncessaire pour linactivation de 2 log de spores arobies tait de 1,72
mg.min.L-1 pH 6,3 et 3,58 mg.min.L-1 pH 8,2 (Lechevallier, 2004). Ceci est comparable au
CT de 3,5 report par Finch en 1994 pour labattement de Cryptosporidium pH 6,9 et
22 C (Finch et al., 1994).

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Par ailleurs, B. subtilis est un des micro-organismes utiliss pour les tests de biodosimtrie
utiliss pour valider les doses dlivres dans les racteurs UV utiliss pour la dsinfection
des eaux (US EPA et rglementations Autrichiennes et Allemandes).
Il a t montr que B. subtilis tait un bon indicateur de linactivation de C. parvum par
ozonation temprature de 20 C. Cependant, pour des tempratures plus faibles, B. subtilis
est inactiv par lozone avant C. parvum (Driedger et al., 2001) (Figure 5).

Figure 5 : Comparaison de linactivation de C. parvum et de B. subtilis par ozonation en fonction de la


temprature (Driedger et al., 2001).

Brown et Cornwell ont montr en 2007 que les spores arobies taient galement un bon
indicateur defficacit des traitements physiques traditionnels de clarification tels que la
coagulation, la floculation et la filtration. Ces micro-organismes sont faciles analyser et ces
trois types de traitement permettent de les abattre de 4 5 log (Brown et Cornwell, 2007).
Sommer et al. ont montr que les spores de B. subtilis sont de bons indicateurs defficacit
de traitement de dsinfection mettant en uvre lozone, le chlore et le peroxyde
dhydrogne. Ces spores sont plus rsistantes que les indicateurs de contamination fcale et
les Cryptosporidium (Sommer et al., 2002).
A noter cependant que les spores arobies peuvent se dvelopper dans les filtres,
contrairement aux spores de bactries anarobies sulfito-rductrices. Dans une tude sur les
diffrents micro-organismes prsents dans diffrentes filires comprenant des procds de
filtration varies (filtration sur sable, filtration sur charbon actif en grain (CAG),), Baudin et
al. ont montr que les bactries arobies sporulantes sont les plus prsentes sur les filires
quils ont tudies. La filtration peut contribuer labattement des bactries arobies
sporulantes. Cependant, il est souvent observ une colonisation des mdias de filtration par
ces bactries (Baudin et al., 2008).

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Hijnen et al. ont galement tudi llimination des spores de bactries sulfito-rductrices et
ont montr quelles taient un bon indicateur defficacit de filtration aprs une tape de
coagulation. Ces spores sont mal limines par simple dcantation. Le recyclage des eaux
de lavage des filtres en tte de traitement aprs une simple dcantation peut donc conduire
une charge supplmentaire en Clostridium (Hijnen et al., 1997).

Figure 6 : limination des spores de Clostridium sulfito-rducteurs par diffrents types de procds de
coagulation filtration (Hijnen et al., 1997; OMS, 2011).

Les spores de Clostridium perfringens tant plus petites que celles des oocystes de
protozoaires, leur prsence dans leau traite est un indicateur de prsence ventuelle de
Cryptosporidium. (OMS, 2011). Elles sont donc de bons indicateurs de lefficacit de la
filtration.
Par ailleurs, la rsistance de Bacillus aux traitements de chloration est importante. Des CT
levs (40 400 mg.min/L) permettent dabattre 2 log de B. globiglis (Shane et al., 2011).

3.6

Conclusion sur la filire de traitement et son


fonctionnement

Les spores de bactries arobies sont souvent retrouves dans les filires de traitement
deau destine la consommation humaine. Leur grande rsistance aux traitements de
dsinfection chimique classiquement utiliss dans ces filires peut expliquer leur prsence
dans des eaux traites. De plus, il a t montr que ces bactries pouvaient se dvelopper
au cours du processus de traitement notamment lors des tapes de filtration.
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Concernant lusine de production deau dAire-sur-la-Lys, la filire de traitement ne semble


pas prsenter un fonctionnement optimal face la rtention de ces spores ainsi que celle de
bactries anarobies sulfito-rductrices. Cependant, il est difficile den apprhender
compltement les raisons sur la base des lments disponibles dans le dossier. Aucune
indication nest donne dans le dossier transmis en appuie la saisine sur des interventions
ventuelles (travaux, nettoyages, etc.) ayant pu avoir lieu avant la priode de mise en
vidence de bactries sporules cultivant aprs une incubation complmentaire en
arobiose, dans le cadre de la surveillance de lexploitant.

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4
4.1

Saisine n2011-SA-0147

valuation du risque.
Exposition

A ce jour, leau de boisson nest pas identifie comme une source dinfection par des
Bacillus spp pathognes, incluant Bacillus cereus. La possibilit de transmission de
Bacillus par voie hydrique nest pas prouve (OMS, 2011).
Les infections Bacillus spp sont majoritairement associes la consommation de certains
aliments, spcialement le riz, les ptes et les lgumes, ainsi que des produits base de lait
et de viandes crues. Les pathologies rsultent gnralement de lingestion dune importante
quantit de cellules de la bactrie ou des toxines quelle peut produire (EFSA, 2005; Stenfors
Arnesen et al., 2008). Ces conditions sont susceptibles dtre runies en fin de phase de
croissance des Bacillus spp pathognes. B. cereus est lune des espces pathognes de
Bacillus les mieux documentes. Cest lespce la plus souvent mise en cause dans les
intoxications alimentaires provoques par des Bacillus.
Lavis de lEFSA de 2005 indique que le sol peut contenir entre 103 et 105 spores de B.
cereus par gramme (Christiansson et al., 1999; EFSA, 2005; Guinebretiere et al., 2003; Te
Giffel et al., 1995). Le dveloppement de souches de B. cereus et de souches despces
apparentes comme B. thuringiensis a t mis en vidence dans la rhizosphre des plantes
et dans le tube digestif de lombrics (EFSA, 2005; Halverson et al., 1993; Hendriksen et
Hansen, 2002). Le climat est galement cit comme ayant une influence sur la population de
B. cereus prsente dans le sol (EFSA, 2005; von Stetten et al., 1999).
Le sol est la premire source de contamination des aliments par des spores de B. cereus. A
titre dexemple, les mmes gnotypes ont t trouvs dans le sol de coopratives laitires et
dans le lait quelles collectent (Christiansson et al., 1999; EFSA, 2005), ou dans le sol
dexploitation de maraichage et dans des aliments cuits frais contenant des lgumes issus
de ces exploitations (EFSA, 2005; Guinebretiere et al., 2003). Des contaminations
secondaires sont galement constates pendant les processus de transformation. Elles
seraient favorises par les proprits dadhsion des B. Cereus, qui peuvent former des
biofilms et persister sur les surfaces des quipements de production (Andersson et al., 1995;
EFSA, 2005). Aussi, les matires premires lactes peuvent tre contamines par des
souches de B. cereus qui persistent dans les tanks de lait (EFSA, 2005; Svensson et al.,
2004). Les spores de B. cereus rsistent aux processus de pasteurisation et de
dshydratation (EFSA, 2005; Eneroth et al., 2001; Svensson et al., 1999; Te Giffel et al.,
1996).
Dans les aliments complexes, certains ingrdients sont identifis comme des sources
importantes de contamination par des spores de B. cereus, notamment les agents de texture
(EFSA, 2005; Guinebretiere et al., 2003), les ufs liquides, les herbes aromatiques et les
pices (EFSA, 2005; International Commission on Microbiological Specification for Foods,
2005). Les produits de boulangerie seraient trs souvent contamins par B. cereus, des
concentrations relativement faibles 102 UFC / g (Te Giffel et al., 1996).
Les spores de B. cereus sont aussi dtectes dans les industries de papeterie et de
packaging (EFSA, 2005; Pirttijarvi et al., 2000), ce qui constitue une voie supplmentaire de
contamination des aliments.
Ainsi, selon lEFSA (2005), les B. cereus sont ubiquitaires et leur prsence dans les matires
premires alimentaires apparat comme invitable. Les bonnes pratiques dhygine et la
bonne conception des quipements de production apparaissent comme essentielles pour en
limiter la contamination.
Dans son avis de 2005, lEFSA voque galement dautres Bacillus spp identifis comme
des causes de dgradation des aliments et dintoxications alimentaires : B. subtilis, B.
licheniformis, B. pumilus (EFSA, 2005; Guinebretiere et al., 2003; Rodriguez et al., 1992).
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Certaines souches sont capables de se multiplier dans des jus de tomate en conserve
(EFSA, 2005; Rodriguez et al., 1992), ou impliques dans les fermentations traditionnelles
de haricots plats en Afrique et en Inde (EFSA, 2005; Ogbadu et Okagbue, 1988; Sarkar et
al., 2002).
Les Bacillus tant trs prsents dans les sols, il nest pas surprenant den retrouver dans les
eaux continentales. Comme le montrent stensvik et al. (2004), en Norvge, diffrentes
espces de Bacillus peuvent tre identifies dans des eaux de surface : B. cereus, B.
subtilis, B. pumilus, B. licheniformis, B. brevis, B. megaterium, B. mycodes, B. sphaericus,
B. circulans, ainsi que dautres espces de Bacillus spp non identifies (Ostensvik et al.,
2004). Baudin et al. ont notamment dnombr entre 1 et 2.102 spores de bactries arobies /
mL dans des eaux brutes (Baudin et al., 2008). Daprs les rsultats fournis par le laboratoire
de lIPL, charg des analyses dans le cas dAire-sur-la-Lys, leau de la rivire la Lys
contiendrait entre 1,2.102 et 2,4.103 spores de Bacillus spp / mL.
Ltude de stensvik et al. montre galement la prsence de Bacillus spp, notamment B.
cereus, dans les eaux de distribution, pralablement traites par filtration et chloration,
satisfaisant par ailleurs aux limites de qualit microbiologiques dune eau destine la
consommation humaine (absence de coliformes et dEscherichia coli dans 100 mL). Les
spores de Bacillus spp sont dnombrs hauteur de 15 140 UFC/ 100 mL dans les eaux
brutes et entre 15 et 38 UFC/ 100 mL dans les eaux de distribution. Il est ainsi mis en
vidence le peu deffet de la filtration et de la chloration sur les spores de Bacillus spp. Les
auteurs ne concluent pas sur la part de lexposition aux Bacillus que peut reprsenter leau
de boisson. En revanche, ils suggrent que leau de boisson traite par filtration et chloration
puisse tre lorigine de contaminations par des Bacillus spp dans les industries
alimentaires (Ostensvik et al., 2004).
Dans les rares chantillons deau traite par lusine dAire-sur-la-Lys qui contenaient des
Bacillus spp, les concentrations mesures taient de lordre de 9 >260 UFC/100mL. Ces
valeurs semblent du mme ordre de grandeur que les rsultats de dnombrement obtenus
par stensvik et al. en Norvge ou Francis et al. (Francis et al., 2001) en Angleterre (1 41
spores/100mL).
Dans lhypothse o leau de boisson contienne des Bacillus spp susceptibles de provoquer
des infections humaines, il semble opportun de mettre en perspective les apports potentiels
de ces bactries par leau de boisson et les autres apports potentiels, commencer par ceux
des aliments. Pour cela, la comparaison des concentrations en Bacillus spp dans les eaux
de boisson et celles mesures dans les autres sources potentielles est pertinente.
Lannexe 6, issue du rapport de lEFSA de 2005 donne des rsultats de dnombrement de
B. cereus obtenus aprs analyse de diffrents types daliments. Selon les aliments, les
valeurs observes sont comprises entre 10 UFC/ mL (ou UFC/g) (pour des plats cuisins
rfrigrs) 106 UFC/mL (pour des plats cuisins conservs 10C, des herbes
aromatiques ou des pices).
La comparaison entre les concentrations de Bacillus spp. retrouves dans les eaux de
boisson, que ce soit Aire-sur-la-Lys ou en Norvge, et de Bacillus cereus dans les
aliments, permet de constater que ces eaux contiennent de lordre de 102 106 fois moins de
Bacillus que les aliments. En complment, il faut souligner que les Bacillus spp
ponctuellement dtects dans leau, ne sont pas ncessairement des espces aussi
pathognes que les B. cereus, connus comme tant lorigine dintoxications alimentaires.
Aussi, lexposition humaine potentielle des Bacillus spp par ingestion, principale
voie dintoxication pour cette bactrie, via leau de boisson, apparat extrmement
faible au regard de lexposition potentielle via les autres aliments.

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4.2

Saisine n2011-SA-0147

Estimation du risque

Les Bacillus spp peuvent tre dtects dans des EDCH, satisfaisant aux limites de qualit
microbiologiques exiges par la rglementation. Cela est d la rsistance des spores de
Bacillus aux processus de dsinfection chimique couramment utiliss pour le traitement des
eaux destines la consommation humaine. Dans la littrature, il nexiste pas de donnes
soutenant lhypothse selon laquelle les Bacillus spp. seraient lorigine de pathologies
hydriques. La mise en uvre dune stratgie de gestion spcifique ces bactries nest
donc pas requise.Aussi lOMS ne prconise pas de concentration maximale en Bacillus spp
admissible dans les EDCH, ni pour la population gnrale, ni pour des populations sensibles
(OMS, 2011).
Cependant, il est possible danalyser la situation dcrite dans le cas d'Aire-sur-la-Lys. Selon
les donnes fournies par lARS, dans le cas o la croissance en arobiose des colonies
atypiques a t constate aprs mise en culture dchantillons dEDCH prleve en sortie de
la station de reprise de Prmesques, les concentrations en spores mesures sont de lordre
de 0,09 2,6 UFC / mL deau. Ces concentrations sont trs infrieures la dose infectieuse
retenue par lAfssa 7 pour B. cereus :105 UFC / g daliments, proche de 105 UFC / mL deau.
En outre leau tant pauvre en nutriments, il nest pas prouv que B. cereus puisse produire
la toxine mtique dans ces conditions (Agata et al., 1999; Rosenfeld et al., 2005).
De mme, les pathologies dorigine alimentaire provoques par B. subtilis, B. licheniformis et
B. pumilus, ont toujours t associes de fortes concentrations dans les aliments
responsables, de lordre de 105 cellules ou spores par gramme. Aussi, les risques sanitaires
lis la prsence de B. cereus ou de B. licheniformis dans les EDCH aux concentrations
maximales observes dans leau traite par lusine d'Aire-sur-la-Lys semblent ngligeables.
En ce qui concerne les autres espces de Bacillus identifies dans les eaux dAire-sur-laLys, aucune dose infectieuse nest documente. Aussi, il nest pas possible de conclure
quant au niveau de risque sanitaire quimplique la prsence de ces espces dans les EDCH
pour lHomme. Cependant, aucun lment ne permet de penser que ces autres espces
reprsentent un danger en cas de prsence dans de leau.
Compte tenu du niveau de risque estim ngligeable dans le cas de scnarios dexposition
ralistes, il est ncessaire denvisager un scnario dexposition trs dfavorable, qui
maximise lestimation du risque, pour tester le pire des cas. Dans ce but, lexercice est
ralis selon lhypothse, trs peu probable, o une grave dfaillance de la filire de
traitement conduirait une injection accidentelle deau brute pompe dans la Lys,
directement dans le rseau de distribution deau destine la consommation humaine, peut
tre envisage. Daprs les rsultats fournis par les laboratoires de lIPL et de Veolia,
chargs des analyses dans le cas dAire-sur-la-Lys, les concentrations maximales mesures
dans leau de la rivire la Lys sont de 2,4.103 spores de Bacillus spp./mL. A titre de
comparaison, Ostensvick et al., ont mis en vidence, dans des eaux brutes en Norvge, des
concentrations en espces responsables de gastro-entrites, B. thuringiensis, B. cereus et
des souches cytotoxiques de B. subtilis, atteignant au maximum 14 spores / mL (Ostensvik
et al., 2004). Aussi, mme en prenant comme deuxime hypothse, galement trs
dfavorable, que lintgralit des Bacillus prsents dans leau brute soient des espces
pathognes pour lHomme (B. cereus, B. subtilis, B. licheniformis ou B. pumilus), il apparat
que leau ne contient pas une concentration en Bacillus suffisante pour provoquer
habituellement des pathologies humaines par la consommation dun aliment (105 spores de
Bacillus cereus / mL). L aussi le risque sanitaire li la prsence de Bacillus dans leau
apparat extrmement faible. Il faut rappeler, que leau brute est susceptible de contenir de
nombreux micro-organismes autrement plus pathognes que Bacillus, susceptibles de
provoquer des pathologies hydriques.

Dans la fiche Bacillus cereus de 2009, actuellement en cours de rvision, mais sans modification prvue sur ce point.

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Saisine n2011-SA-0147

Concernant spcifiquement les usages et les populations sensibles, particulirement les


patients haut risque tels que dfinis dans la Circulaire DGS 2002 243, du 22 avril 2002 8,
ils doivent tre maintenus dans un environnement adapt leur tat. Aussi des mesures
particulires sont ncessaires et doivent tre appliques pour le traitement de leau qui leur
est fournie, avec notamment des mesures visant garantir une concentration en bactries
infrieure aux limites de dtection de la mthode par culture. Ceci est valable pour toutes les
bactries, notamment les Bacillus spp. Les experts considrent que lobservation rigoureuse
de ces prcautions sont de nature limiter le risque lis la prsence dans les EDCH de
Bacillus spp., y compris les plus pathognes comme B. cereus, pour les populations dites
sensibles.
Plus concrtement, certains faits semblent appuyer les hypothses et les rsultats de la
prsente estimation de risque. Bien que les ventuels cas dinfection Bacillus lis la
consommation deau ne fassent pas lobjet dun recueil dinformation spcifique grande
chelle, il faut en effet insister sur labsence de cas de ce type recenss ce jour.

Circulaire DGS 2002 243, du 22 avril 2002 relative la prvention du risque li aux lgionelles dans les tablissements de
sant : les patients dits patients haut risque sont les immunodprims svres, et particulirement les immunodprims
aprs transplantation ou greffe d'organe et les immunodprims par corticothrapie prolonge (0,5 mg/kg de prednisone
pendant 30 jours ou plus, ou quivalent) ou rcente et haute dose (c'est--dire suprieure 5 mg/kg de prednisone pendant
plus de 5 jours).

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5 Conclusions et recommandations
5.1

Signification des rsultats analytiques

Il ressort du dossier fourni par le ptitionnaire qu Aire-sur-la-Lys, quels que soient les
milieux utiliss, la lecture des botes de culture soumises une incubation supplmentaire
en arobiose a montr la prsence de colonies atypiques translucides qui ne correspondent
pas aux caractristiques des colonies de BASR. Elles ont t identifies, pour leur grande
majorit, comme tant des B. thermoamylovorans. Selon la norme NF EN 26461-2, seules
les colonies noires doivent tre dnombres en tant que BASR aprs incubation pendant
48h 37C.
Ces colonies ont donc t mises en vidence surtout aprs incubation
complmentaire de 24 48 h en condition darobiose, ce qui ne correspond pas au
principe de la norme.
Par ailleurs, la prsence de Bacillus spp. nest pas exceptionnelle dans lenvironnement. Elle
est souvent observe lors danalyse deaux, lorsque les usines de production dEDCH
utilisent des eaux de surface.

5.2

Risques sanitaires

Les espces de Bacillus mises en vidence dans les eaux produites par lusine dAire-sur-laLys sont des bactries ubiquistes. Certaines de ces espces sont pathognes ou
pathognes opportunistes pour lHomme par voie alimentaire.
Elles devraient tre limines par les filires de traitements, dans les mmes proportions
que les bactries anarobies sulfito-rductrices. Les procds de traitement installs dans
lusine dAire-sur-la-Lys susceptibles dtre efficaces pour rduire les concentrations de
bactries du genre Bacillus sont essentiellement la coagulation floculation, la dcantation
et la filtration. Les procds de dsinfection mettant en uvre des oxydants ont peu deffet
sur les formes sporules.
La quantification du risque li la prsence des espces de Bacillus dnombres dans les
eaux produites par lusine dAire-sur-la-Lys se heurte la faiblesse des donnes disponibles,
autant en ce qui concerne lexposition que les relations doses rponses. Cependant, il
apparat que :
-

Les pathologies provoques par des Bacillus pathognes aprs infection par voie
alimentaire, ont ce jour t observes aprs consommation daliments contenant de
fortes concentrations en Bacillus pathognes (de lordre de 105 spores / g ou mL).

aucune donne ne permet de penser que ces fortes concentrations ont pu tre atteintes
dans des eaux traites par lusine dAire-sur-la-Lys.

Ainsi, au regard des donnes fournies, le risque sanitaire li la consommation deau


produite par lusine dAire-sur-la-Lys et contenant des Bacillus spp apparat ngligeable.
Cependant, dun point de vue technique, la prsence de spores de Bacillus spp dans les
eaux produites par cette usine rvle que les micro-organismes prsents dans leau brute,
peuvent, dans certaines conditions (eau brute provenant de la Lys ponctuellement trs
charge en micro-organismes, arrt de certains filtres de linstallation,), ne pas tre
compltement limins par la filire de traitement en place. En fonction de la frquence du
phnomne, cette constatation doit amener le gestionnaire de linstallation une dmarche
doptimisation de la filire de traitement pour limiter la survenue de ces situations. Les
informations transmises ne permettent pas de se prononcer sur linfluence dautres lments
que la filire de traitement sur la prsence des Bacillus observs dans leau traite :
intervention sur le rseau, etc.
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5.3

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Recommandations de gestion

Les lments fournis dans le dossier montrent que la filire de traitement de lusine dAiresur-la-Lys noffrait pas aux dates correspondant aux lments fournis dans le dossier toutes
les garanties defficacit vis--vis du paramtre bactries anarobies sulfito-rductrices y
compris les spores . Au cas o lefficacit de la filire naurait pas t amliore, il est
indispensable den optimiser le fonctionnement.

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Annexe 1 : Courrier de saisine de lAnses

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Annexe 2 : Constitution du dossier technique reu

Lettre de la DGS date du 01/06/2011 demandant la prise en charge du dossier.

Lettre de transmission de la socit des Eaux du Nord adresse au Directeur gnral


de lAgence rgionale de sant Nord-Pas-de-Calais date du 13/01/2011
accompagne de la synthse des actions ralises par les Eaux du Nord suite la
dcouverte de bactries atypiques sur le rseau.

Lettre de transmission de la socit IPL adresse au Directeur gnral de lAgence


rgionale de sant Nord-Pas-de-Calais date de janvier 2011 accompagne dun
rapport sur la question des colonies atypiques apparues sur le milieu TSC ainsi que
la description des prlvements et rsultats des analyses.

Lettre de transmission du Syndicat mixte dadduction des eaux de La Lys (SMAEL)


adresse au Directeur gnral de lAgence rgionale de sant Nord-Pas-de-Calais
date du 14/01/2011 accompagne de ltude de la qualit de leau Prmesques.

Lettre de transmission de la socit Lille mtropole au Directeur gnral de lAgence


rgionale de sant Nord-Pas-de-Calais date du 31/01/2011 accompagne de
lensemble des lments analytiques relatifs la dcouverte de bactries atypiques
dans leau en provenance du rservoir de Prmesques et de lusine de production
deau dAire-sur-la-Lys ainsi quune note sur lidentification de bactries thermophiles
trouves dans les eaux de production de lusine dAire-sur-la-Lys.

Le dossier de consultation administrative : produits et procds de traitement des eaux


fourni par la socit HYDRATEC dat de novembre 2010.

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Annexe 3 : Dmarche QPS de lEFSA et espces de Bacillus


inscrites sur la liste QPS
Une grande varit dagents biologiques tels que des espces bactriennes et fongiques
ou des virus utiliss des fins phytosanitaires peuvent tre autoriss dans lUnion
europenne pour une utilisation dans la chane alimentaire humaine et animale. LEFSA est
charge dvaluer la scurit dagents biologiques notifis dans le cadre des demandes
dautorisation. Le comit scientifique de lEFSA a recommand que ses groupes
scientifiques adoptent la prsomption dinnocuit reconnue ou QPS (Qualified Presumption
of Safety) afin de garantir une approche cohrente. Cette approche vise harmoniser
lvaluation des risques et permettre aux valuateurs des risques de se focaliser sur les
micro-organismes prsentant les incertitudes ou les risques les plus importants. Linnocuit
dun groupe dagents biologiques est value en fonction de quatre critres :
la dfinition du groupe taxonomique (tablissant lidentit du groupe) ;
les connaissances disponibles ;
les ventuelles inquitudes en matire de scurit (pathognicit) ;
lutilisation finale prvue.
Si un groupe dfini ne suscite pas dinquitude en matire de scurit ou si toutes les
proccupations ventuelles ont pu tre cartes, lapproche QPS peut sappliquer et
linscription de ce groupe sur la liste QPS peut alors tre recommande. Lorsquun agent
biologique de ce groupe sera ensuite notifi lEFSA, il ne sera plus ncessaire, pour
le groupe scientifique concern, de procder lvaluation complte de son innocuit.
Les agents biologiques qui ne sont pas considrs comme adapts une approche QPS
seront, pour leur part, soumis une valuation complte des risques sanitaires par le groupe
scientifique responsable.
Lapproche QPS est utilise pour des micro-organismes issus de quatre grandes catgories
auxquelles appartiennent la majorit des espces notifies lEFSA et pour des virus utiliss
des fins phytosanitaires :
bactries Gram positives non sporulantes
espces du genre Bacillus
levures
champignons filamenteux
virus des familles Potyviridae et Baculoviridae (depuis 2009)
Selon lavis de lEFSA du 19 Novembre 2007 (EFSA, 2007)
B. licheniformis et B. coagulans sont proposs pour une introduction dans la liste
QPS, mais la condition davoir vrifi labsence de production de toxines comme
pour toutes les espces de Bacillus introduites dans la liste QPS ;
B. cereus ne doit pas tre introduit dans la liste QPS, compte tenu de labondante
littrature son sujet indiquant une forte proportion de souches pathognes.
Selon lannexe B de lavis de lEFSA du 19 Novembre 2007 (EFSA, 2007) :
Le prsent document concerne les espces du groupe B. subtilis qui sont, ou taient
prcdemment classes comme B. subtilis (B. amyloliquefaciens, B. atrophaeus, B.
mojavensis, B. subtilis et B. vallismortis), slectionne des espces dans le groupe des B.
cereus (B. cereus, B. mycodes, B. pseudomycoides, B. thuringiensis et B.
weihenstephanensis, B. anthracis), suite une amlioration des connaissances relatives
ces deux groupes. Dautres espces galement notifies lEFSA, et pour lesquelles des
connaissances suffisantes existent, sont galement considres (B. clausii, B. coagulans B.
fusiformis, B. lentus B. licheniformis, B. megaterium, B. pumilus et Geobacillus
stearothermophillus).
Ces diffrentes espces peuvent tre identifies en utilisant la squence drARN 16S. La
squence du gne gyraseA permet didentifier les espces du groupe des B. subtilis (Chung
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et al., 2004). Les espces du groupe des B. cereus sont plus difficiles identifier
correctement. Cependant, les bactries du groupe des B. cereus ne synthtisent pas de
protine cristal parasporal et peuvent ainsi se distinguer des crystallifereux B. thuringinesis.
Diffrentes espces de Bacillus - B. clausii, B. coagulans, B. licheniformis, B. megaterium, B.
pumilus, B. subtilis et B. cereus (excluant B. anthracis) sont utilises comme probiotiques,
aliment pour animaux, ou dans laquaculture (Hong et al., 2005; SCAN, 2000). En outre,
diffrentes espces de Bacillus sont impliques dans la prparation de plats ferments
traditionnels en Afrique et en Asie (Sarkar et al., 2002). B. thuringiensis, qui fait partie du
groupe des B. cereus et est caractris par la production dune protine toxique pour les
insectes est utilis depuis longtemps pour la protection des plantes. Des espces de B.
cereus (Halverson et Handelsman, 1991) et de B. subtilis (Cavaglieri et Orlando, 2005; Kahn
et Kahn, 2002; Krebs et al., 1998) sont utilises pour le traitement de graines et de racines
pour protger ou promouvoir la croissance des plantes. Diffrentes espces de Bacillus,
comme Geobacillus stearothermophilus, est une source majeure denzymes commerciales
(SCAN 2000).
Certaines de ces espces de Bacillus, sont connues comme agents toxiques pour
lalimentation (Granum et Baird-Parker, 2000; Kramer et Gilbert, 1989). B. cereus and B.
thuringiensis sont lorigine dintoxications alimentaires. Des B. thurigiensis, identiques
ceux prsents dans des produits de protections des plantes, ont t isols des chantillons
de fces dindividus travaillants dans des exploitations utilisant ces produits (Jensen et
Larsen, 2002).
Des souches de B. fusiformis, B. licheniformis, B. mojavensis, B. pumilus, et B. subtilis
peuvent galement exceptionnellement provoquer des intoxications alimentaires (Kramer
1989). Certaines de ces espces produisent des produits cytotoxiques (From et al., 2005;
Salkinoja-Salonen et al., 1999). Des souches dautres espces ont t recenses comme
produisant des toxines similaires celles de B. cereus, mais lidentification des bactries
ralise dans le cadre des ces tudes est incertaine (B. amyloliquefaciens, B. circulans, B.
lentimorbis, B. lentus, and B. megaterium).
Par ailleurs, aucun problme sanitaire li lutilisation volontaire de bactries du genre
Bacillus pour lalimentation na t recens.
Bacillus anthracis est lune des bactries les plus toxiques, qui cause lanthrax chez
lHommes et les animaux, et qui fait partie du groupe des Bacillus cereus. Dautres membres
de ce groupe portant les gnes encodant pour des toxines similaire lanthrax ont dj t
observes (Hoffmaster et Ravel, 2004).
Comme toutes les espces numres possdent potentiellement des traits toxiques,
l'absence d'activit toxique doit tre vrifie pour leur qualification.
Les Bacillus spp Appartenant au groupe des Bacillus cereus (B. cereus sensu stricto, B.
mycodes, B. pseudomycoides, B. thuringiensis and B. weihenstephanensis) ne sont pas
proposes pour la dmarche QPS, car la majorit des bactries de ce groupe sont maintenant
connues comme productrices de toxines et ne peuvent tre classes dans la liste QPS.
Selon lavis de lEFSA du 10 dcembre 2008 (EFSA, 2008)
Les Bacillus spp autres que Bacillus cereus sont rarement lorigine dintoxications
alimentaires dues la production de toxines par certaines souches. Le Statut QPS des
espces de Bacillus listes dans les prcdents avis de lEFSA (EFSA, 2007) est maintenu,
avec la qualification absence de toxines empoisonnant les aliments, absence dactivit
surfactante, absence dactivit entrotoxique . Aussi, labsence de la capacit produire
des protines ou des peptides avec des activits entrotoxiques ou cytotoxiques a t
proposes comme bases dune qualification en QPS pour les Bacillus spp autres que B.
cereus dans les prcdant avis de lEFSA (EFSA, 2007). Cependant, il reste possible que de
nouveaux facteurs de virulence, non pris en compte par les qualifications proposes,
puissent tre dcouverts et doivent faire lobjet dune attention particulire. Les Bacillus spp
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Saisine n2011-SA-0147

causent galement des quelques infections locales ou systmiques qui doivent faire lobjet
dune surveillance.
Les publications parues depuis le dernier avis de lEFSA donnent plus dindications sur la
nature de certaines toxines produites par des espces de Bacillus QPS.
Bacillus thuringiensis, un membre du groupe des B. cereus, dont certaines souches sont
utilises comme agents de protection des plantes, nest pas inclus dans la liste QPS.
Les connaissances sur les effets, sur la sant des consommateurs, de lutilisation
intentionnelle de B. circulans et B. firmus dans la chaine alimentaire, ne sont pas suffisantes
pour justifier le statut QPS.
Selon un avis de lEFSA de 2009 (EFSA, 2009)
Aucune nouvelle toxine produite par Bacillus spp et qui pourrait tre implique dans des
intoxications alimentaires na t identifie depuis le prcdent avis de mise jour de la liste
QPS (EFSA, 2008).
Une publication dcrit une souche de Bacillus pumilus isole dans les sols, qui porterait le
gne codant pour la synthse de creulide, la toxine mtique de B. cereus (Parvathi et al.,
2009). Malgr tout, les connaissances actuelles, notamment labsence de signalement
dintoxication alimentaire cause par Bacillus pumilus, ne justifient pas son exclusion de la
liste QPS.
En conclusion, compte tenu des publications actuellement disponibles, aucune modification
de la liste QPS concernant les Bacillus spp, telle que dcrite dans lavis de lEFSA de 2008,
nest justifie.
Selon un avis de lEFSA de 2010 (EFSA, 2010)
Labsence de la capacit produire des protines ou des peptides avec des activits
entrotoxiques ou cytotoxiques a t proposes comme bases dune qualification en QPS
pour les Bacillus spp autres que B. cereus dans les prcdents avis de lEFSA (EFSA,
2007). Le Statut QPS des espces de Bacillus listes dans les prcdents avis de lEFSA
(EFSA, 2007; EFSA, 2008; EFSA, 2009) avait t associs la qualification absence de
toxines empoisonnant les aliments, absence dactivit surfactantes, absence dactivit
entrotoxique . Compte tenu de lamlioration des connaissances, cette qualification est
remplace par absence de potentiel toxique . Cela inclut les toxines produites dans les
aliments et les entrotoxines produites dans le tractus digestif. La rfrence lactivit
surfactante avait t introduite en 2007, dans lhypothse quelle fournisse une indication sur
la production de toxines alimentaires. Les connaissances les plus rcentes montrent que
cette hypothse ntait pas fonde.
Par ailleurs, compte tenu des publications actuellement disponibles, aucune modification de
la liste QPS concernant les Bacillus spp, telle que dcrite dans lavis de lEFSA de 2008,
nest justifie.
Bacillus brevis (maintenant appel Aneurinibacillus spp ou Brevibacillus spp), Bacillus firmus,
Bacillus circulans ont t prcdemment valus (EFSA, 2008; EFSA, 2009) et ne sont pas
recommands pour la liste QPS car quelques inquitudes de scurit ont t identifies pour
certains souches de ces espces (production d'antibiotiques, rapport d'infection humaine,
production de toxines potentielles) et car les connaissances actuelles sur leur utilisation dans
la chne alimentaire ne sont pas suffisantes. Ces espces ne seront pas rvaluer pour une
ventuelle entre dans la liste QPS moins quelles soient nouveau notifies lEFSA.

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Annexe 4 : Schma de principe de la filire de traitement dAire-surla-Lys

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Saisine n2011-SA-0147

Annexe 5 : Prcisions concernant Bacillus anthracis


Bacillus anthracis a t mis en vidence au 19me sicle par Koch (1876). Il est responsable
du charbon bactrien (autrement appele la fivre charbonneuse, la maladie charbonneuse,
le charbon ou, en anglais, lanthrax), une maladie mondialement rpandue, atteignant de
nombreuses espces animales domestiques ou sauvages et transmissible l'homme. Le
charbon bactrien est inscrit sur la liste B de l'OIE (Office international des pizooties). En
France, la fivre charbonneuse des mammifres de toutes les espces est une maladie qui
donne lieu dclaration et l'application de mesures sanitaires (Dcret n 65-697 du 16
aot 1965). En raison du risque d'infection pour l'Homme, Bacillus anthracis est class parmi
les bactries prsentant un niveau de risque 3 (Euzby, 1998; Fasanella et al., 2010).
Le charbon n'a plus une importance conomique majeure dans de nombreux pays
dvelopps mme si quelques foyers sont susceptibles d'apparatre occasionnellement. En
revanche, l'infection est endmique dans le cheptel des pays de l'Est, du pourtour
mditerranen, de l'Asie du Sud Est, d'Afrique et d'Amrique du Sud. Le nombre de cas
humains est estim par l'OMS entre 100 000 et 200 000 par an (Euzby, 1998).
Selon Vaissaire et al., les risques de voir apparatre des cas de charbon chez l'Homme et
l'animal dans les pays dvelopps sont lis aux facteurs suivants (Vaissaire, 1997) :
- abandon de la vaccination animale dans certaines rgions ;
- moins bonne connaissance de la maladie par les jeunes vtrinaires et les jeunes
leveurs ;
- raisons conomiques qui conduisent ne pas rechercher de manire systmatique les
causes de la mort lorsque la mortalit apparat sporadique ;
- non-enlvement des carcasses par l'quarrisseur lors de mort d'tiologie non dfinie
et, tout particulirement, non-enlvement des carcasses des petits ruminants en raison
du cot ;
- oubli de l'emplacement exact des "champs maudits" ;
- rintroduction de certains rapaces comme les vautours, insensibles au charbon mais
capables de dissminer les spores (principalement dans leurs fces) et nourris avec
des carcasses non contrles ;
- reprise des enfouissements clandestins dans certaines rgions ;
- reprise des abattages clandestins avec consommation familiale de la viande ou
consommation de la viande entre voisins et amis.
Selon le mode de contamination, le charbon peut tre interne (ingestion ou inhalation de
spores) ou externe (inoculation des spores au travers de la peau et des muqueuses). Le
charbon interne est une maladie redoutable et d'volution rapide (Euzby, 1998).
La transmission vectorielle de l'infection par des insectes hmatophages (Stomox, Aedes,
Tabanids) est galement possible. Elle conduit de nombreux cas de charbon externe et
entraine une transmission entre espces animales ou une transmission de l'animal
l'Homme (Fasanella et al., 2010).
Du fait de la gravit de l'infection et de la relative facilit dissminer les spores, Bacillus
anthracis est une des bactries qui a fait lobjet de tentatives dutilisation pour la guerre
bactriologique ou pour des actes de terrorisme (Fasanella et al., 2010).

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Charbon animal
La sensibilit des animaux cette bactrie varie beaucoup dune espce lautre. Les
herbivores et en particulier les ruminants sont la fois les plus exposs et les plus sensibles
l'infection, mais les omnivores (notamment les porcs) et moins frquemment les carnivores
sont susceptibles d'tre infects. L'infection des animaux sauvages (tels que les bisons ou
les lphants) peut conduire secondairement des cas d'infections chez les animaux
domestiques (Euzby, 1998; Fasanella et al., 2010).
Les formes aigus ou septicmiques sont classiques chez les quids et les Bovids et elles
rsultent, le plus souvent, de l'ingestion de spores. Elles dbutent par une atteinte
brusque de l'tat gnral puis, en 12 24 heures, on note une dyspne, une acclration du
rythme cardiaque, une congestion suivie d'une cyanose des muqueuses, des ptchies,
souvent des coliques et des diarrhes sanguinolentes et, plus tardivement, des hmorragies
vsicales. La mort intervient en 1 3 jours chez les bovins et en 3 6 jours chez les quids
(Euzby, 1998).
Les formes suraigus, frquentes chez les petits ruminants, se traduisent par des
symptmes similaires mais plus prononcs et par une mort rapide en quelques heures. Ces
formes suraigus sont galement observes chez les bovins et les chevaux : les animaux
meurent brutalement et prsentent parfois des saignements localiss aux orifices naturels
(Euzby, 1998).
Les formes externes s'observent chez les Suids et les carnivores et parfois chez les
herbivores. Elles sont toutefois exceptionnelles chez les ovins. Elles consistent dans le
dveloppement d'une masse dmateuse (la tumeur charbonneuse), localise autour des
nuds lymphatiques superficiels drainant le point d'inoculation des spores. L'dme s'tend
aux rgions adjacentes, une septicmie apparat en 12 48 heures et l'infection volue vers
un charbon interne (Euzby, 1998).
Les lsions, pratiquement identiques chez toutes les espces, sont caractristiques (Euzby,
1998) :
- sang noirtre, pais et incoagulable ;
- splnomgalie importante avec une pulpe de consistance boueuse ;
- hmorragies vsicales et rnales ;
- congestion et parfois hmorragies intestinales ;
- tumeur charbonneuse interne ou externe.
De plus, le cadavre ne prsente pas une rigidit complte et il se dcompose trs
rapidement (Euzby, 1998).
Charbon humain
Chez l'Homme, le charbon est souvent une maladie professionnelle, svissant aussi bien en
zone rurale qu'en zone urbaine et rsultant, le plus souvent, de la manipulation
d'animaux morts de charbon ou de leurs produits. Les principales professions exposes
sont les leveurs, les vtrinaires, les ouvriers d'abattoir, les quarrisseurs, les bouchers, les
tanneurs, les ouvriers travaillant les os (fabrication de glatine), les poudres d'os, les
poudres de sang, la laine ou les autres phanres d'origine animale, les dockers manipulant
les poudres d'os, les employs des entreprises de travaux publics (percement de routes ou
d'autoroutes et autres travaux de terrassements), les artisans travaillant l'ivoire, les
personnels de laboratoire. La consommation de viandes mal cuites, provenant
d'animaux morts de charbon, est galement l'origine de cas humains notamment,
dans les pays en voie de dveloppement. Les risques lis la consommation de lait
contamin sont considrs comme faibles, mais l'excrtion dans le lait se produit au
moment de la septicmie et, en cas de gurison, elle peut se poursuivre pendant plusieurs
semaines (Euzby, 1998).

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Le charbon humain se prsente sous trois formes refltant la voie de contamination : une
forme cutane, le charbon d'inhalation et le charbon d'ingestion. Chacune de ces trois
formes est susceptible de se compliquer en mningite ou de septicmie trs graves (Euzby,
1998).
La forme cutane est la plus frquente et reprsente 90 95 % des cas de charbon chez
l'homme. Elle rsulte de la contamination d'une plaie ou d'une simple abrasion cutane par
des spores. Elle se traduit aprs 2 5 jours d'incubation (avec des extrmes allant de 12
heures 2 semaines) par l'apparition d'une papule rouge puis d'une vsicule prurigineuse
avec un dme envahissant les tissus voisins puis laissant place une escarre noirtre (
l'origine du nom de la maladie) qui progresse de faon centrifuge. Dans 80 90 % des cas,
la gurison est spontane. Dans les formes svres, on note une adnite rgionale et parfois
une septicmie frquemment mortelle en l'absence de traitement (Euzby, 1998).
Le charbon d'inhalation ou charbon pulmonaire rsulte de l'inhalation de spores (cette forme
tait frquente chez les ouvriers travaillant la laine). La forme clinique associe des signes
gnraux et respiratoires, elle se complique en mdiastinite hmorragique et d'hmoptysie
et, en l'absence de traitement, son volution est mortelle dans plus de 95 % des cas
(Euzby, 1998).
Le charbon d'ingestion ou charbon gastro-intestinal, rare dans les pays dvelopps, se
traduit par des troubles gnraux (fivre, tat de choc) et digestifs (douleurs abdominales,
vomissements, diarrhe sanglante) qui apparaissent aprs une incubation de 2 7 jours.
Comme pour le charbon pulmonaire, le taux de mortalit est lev (Euzby, 1998; Fasanella
et al., 2010).

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Annexe 6 : Exemples dincidences de B. cereus dans diffrents


aliments (EFSA 2005)
Food categories

% of positive
samples (limit of
detection cfu g-1)

Spices

42 % (102)

Herbs and spices

100% (102)

Ready to eat chilled


foods
in self service
restaurants

6 to 21% (all
categories
positive: vegetables,
rice,
pasta, meat and fish)
0 to 100% (10)
2 % (102)

103 to 105

Cooked chilled foods


(unstored)
(stored at 4C until
use by
date)
(stored at 10C until
use
by date)
Flour

0% (10)

< 10

0% (10)

< 10

0 to 100%

104 to 106

55% (102)

103

Liquid egg yolk


pasteurised
Bakery product

24% (102)

< 103

90% (102)

103 to 104

Pasteurised milk
after
storage at 7C until
best
before date
Pasteurised milk
after 8
days at 7C
Milk powder

8% (102)

From < 103 to > 105

56% (10)

From 103 to 3 x 105

(Larsen et
Jrgensen, 1997)

27% (10)

(van Netten et al.,


1990)

Powdered infant
formulae

75% (0.04)

4 spores g-1 (mean),


up to
40 spores g-1
0.04 to 1 MPN g-1

Fresh vegetables
Vegetable salads

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Numbers of B.
cereus in
positive samples
(cfu g-1 or ml-1)
most samples < 104 few
samples >104
102 to 106

102 to 8 x 103
< 103

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References

(van Netten et al.,


1990)
(Te Giffel et al.,
1996)
(Amodio-Cocchieri et
al., 1998)

(Valero et al., 2002)


(van Netten et al.,
1990)
(Choma et al., 2000)

(Te Giffel et al.,


1996)
(van Netten et al.,
1990)
(Te Giffel et al.,
1996)
(van Netten et al.,
1990)

(Harmon et Kautter,
1991)

27-31 avenue du gnral Leclerc


94701 Maisons-Alfort Cedex
www.anses.fr

ISBN 978-2-11-129715-9 Dpt lgal: novembre 2012 Anses ditions: mars 2013 Date de publication: mars 2013 Couverture: Parimage Crdit photo: Anses

Agence nationale de scurit sanitaire


de lalimentation, de lenvironnement et du travail

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