LABORATORIO 2: CURVA DE CALIBRACIN Y

CUANTIFICACIN DE PROTENAS
POR EL MTODO DE BIURET
Nombres: ________________________________________________
Fecha: __________________
Seccin: _____________________
Puntaje total: 70 pts.

Puntaje Obtenido: ____________ pts.

Nota: _______________
Instrucciones Generales: Conteste con lpiz de pasta azul o negro, las
respuestas (incluyendo los clculos) con lpiz de mina NO sern corregidas.

TRABAJO PREVIO

1) La finalidad de este ejercicio es comprender el concepto de Curva

de Calibracin y su aplicacin.
(10 ptos)
Para cuantificar el cido pirvico (alfa cetocido producido en la glicolisis), se
utiliza su conversin a 2,4-dinitrofenilhidrazona, la que luego de la adicin de
lcali produce una coloracin rojiza, que puede medirse colorimtricamente y
que es proporcional a la cantidad de cido pirvico inicial.
Se realiza una curva de calibracin, para lo cual se dispone de 9 tubos con
diferentes concentraciones conocidas de solucin de piruvato, la que fue
agregada en un volumen de solucin de 1.0 mL. En la tabla siguiente se
muestra la cantidad de piruvato y los respectivos valores de lectura de
Absorbancia, para cada tubo.
N tubo

Piruvato
(g)

20

40

60

70

80

100

125

150

0.01

0140

0.267

0.400

0.750

0.525

0.638

0.760

0.775

Absorban
cia

Al analizar por este mtodo, soluciones desconocidas de piruvato (1 ml de

cada una), se obtuvieron las lecturas de absorbancia que se muestran en la
tabla a continuacin.

Calcule la concentracin de las soluciones desconocidas usando la

curva de calibracin previamente realizada y complete la tabla.
Absorbancia

Concentracin de
piruvato (g/mL)

0.565
0.125
0.683
0.889
2)Usted necesita determinar la concentracin de protenas totales
de dos sueros rotulados (suero A y suero B) utilizando el mtodo de
Biuret.
Para ello, se realiz una curva de calibracin. Grafique la curva de
calibracin utilizando los datos de la tabla 1.
Abs

Concentracin (g/dL)

546 nm

0,200

10,0

0,400

20,0

0,600

30,0

1,00

50,0

Las Absorbancias que presentan los sueros A y B son 0,300 y 0,500,

respectivamente.
Responda: cul es la concentracin proteica de cada uno de los
sueros ? Seale como obtuvo esos valores.
(10 ptos)
3)Investigue
importancia.
(2 ptos)

el

significado

de

tubo

blanco

cul

es

su

4)Investigue en la bibliografa acerca de las causas de las siguientes

disproteinemias:
(6 ptos)
a)Hipoalbuminemia
b)Hipogammaglobulinemia
c)Hiperglobulinemia

INFORME:
5)Complete la siguiente tabla con los datos obtenidos, determine
matemticamente la curva de Calibracin e interpole los valores de
las muestras incgnitas para obtener la concentracin de protenas
respectivas.
Mencione las condiciones en las cuales realiz el procedimiento y la
lectura.
(8 ptos)
Tubo n

Absorbanci
a
546 nm

Concentracin
de protenas
(g/dL)

2
3
4
5
6(muestra N)
7(muestra P)
6)Grafique los datos obtenidos en la pregunta 1, e indique:
a) Variable dependiente:

(6 ptos)

b) Variable independiente:
c) Ecuacin de la recta obtenida
7)Seale el rango de concentracin normal de protenas en el suero.
Seale las concentraciones determinadas, para ambas muestras.
A partir de esta informacin, indique si las muestras incgnitas son
normales o patolgicas. En caso de que la proteinemia determinada
est fuera de los valores de referencia, indique la probable
patologa que puede tener el paciente del cual proviene ese suero.
(8 ptos)
8)Responda las siguientes preguntas:
a) Cul es el fundamento de la reaccin de Biuret?

(4 ptos)

b) Si no se adiciona un reactivo que permita desarrollar color, de qu otra

forma se podra cuantificar a las protenas por espectrofotometra?
(4 ptos)
c) Cmo se denominan las partes de la molcula que permiten realizar
esta cuantificacin?
(4
ptos)
d) Qu equipo utiliz para la medicin de la absorbancia?

(4 ptos)

e) Qu es la Ley de Lambert-Beer?, Cules son los conceptos relevantes

que se relacionan en la ecuacin?
(4 ptos)