I.

INTRODUCCION
En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como
poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos,
necesitamos tenerlos como cultivos puros. Un cultivo puro es aquel en el que todos los
microorganismos provienen de una sola clula.
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de los
casos, mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos. El crecimiento
explosivo de las bacterias permite producir un gran nmero de ellas a partir de una nica
clula inicial de forma que, tras un periodo de incubacin en las condiciones ambientales
adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos
iguales.
El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento depender, entre otros factores,
de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la
presencia de microorganismos que, por sus caractersticas y/o por la cantidad en que se
encuentren en la muestra, dificulten la obtencin del microorganismo objeto del aislamiento.
En este ltimo caso, se deben utilizar medios de enriquecimiento y medios selectivos que
inhiban el desarrollo de grmenes contaminantes.
La temperatura y otras condiciones de incubacin, variarn segn los microorganismos,
usualmente la temperatura ptima de los microorganismos patgenos para el hombre oscila
entre 30 y 40C. Cuando el microorganismo que se intenta aislar es anaerbico, deben
tomarse las precauciones necesarias a fin de eliminar la presencia de oxgeno en el ambiente
donde se desarrollar el mismo.

II.

III.

IV.

V.

OBJETIVOS
a. Objetivo General
Aislar cultivos puros mediante la siembra por estras compuestas y en un tubo con
agar inclinado.
b. Objetivos Especficos
Describir la siembra para inoculacin y la siembra y la siembra para aislamiento.
Definir experimentalmente un cultivo puro de bacterias mediante su aislacin.
APARATOS E INSTRUMENTOS
Cmara de flujo laminar
Autoclave
Incubadora
Asa de horquilla
Mechero
Gradilla para tubos
MATERIALES Y REACTIVOS
Placas con Agar nutritivo de recuento (Plate Count Agar, PCA).
Tubos inclinados con PCA (colocar 5 ml de medio de cultivo fundido y estril,
inclinar el tubo y dejar enfriar).
Placa con cultivo o inculo a sembrar.
Aceite mineral esterilizado.
PROCEDIMENTO

Grfico N1: Siembra por estra compuesta

Grfico N2: Siembra en tubo con agar inclinado

VI.
VII.
VIII.

CALCULOS Y RESULTADOS
DISCUSION
CUESTIONARIO
1. Sealar un mtodo de identificacin de bacterias en el laboratorio.
Mtodos fenotpicos: actualmente, la identificacin bacteriana se realiza por
medio de mtodos convencionales, basados en las caractersticas fenotpicas,
puesto que su realizacin y coste los hace ms asequibles. Los mtodos
genotpicos suelen reservarse para las bacterias que no se pueden identificar
con mtodos convencionales.
2. Sealar la clasificacin de las bacterias en familias y gneros basado
principalmente en la tincin de Gram, forma y ordenamiento celular, y
requerimientos de oxgeno.
3. Describa un tipo de mantenimiento de largo perodo de un cultivo puro,
alternativo al de la prctica.

IX.

CONCLUSIONES
Es la separacin de un determinado microorganismo del resto de microorganismos
que le acompaan. El mtodo ms usual es la siembra por estra sobre un medio de
cultivo slido adecuado dispuesto en una placa de petri. El xito del aislamiento, de
la separacin sobre el medio de cultivo, depende de la superficie sobre la que se ha
distribuido la muestra. Es muy importante realizar el mayor nmero de estras posible.
En las primeras estras aparecern colonias confluentes o una masa continua de
microorganismos. En las estras finales debern aparecer colonias separadas unas de
otras. El aislamiento requiere un reducido inculo de partida. La sucesiva
disminucin del tamao de la poblacin sobre el asa (por descarga sobre el medio de
cultivo) al recorrer el medio de cultivo, debe asegurar que finalmente algunas clulas
queden suficientemente separadas (aisladas unas de otras) sobre la superficie.
Mediante la prctica se describi la siembra para inoculacin: la inoculacin consiste
en tomar una pequea porcin de la muestra y diluirla para dispersarla y que crezca
con ms facilidad en el medio de cultivo. Se puede inocular en medio lquido o en
medio slido. Siembra para aislamiento: la finalidad de este tipo de siembras es la de
obtener cultivos puros. Se siembra en placa de Petri que contienen medios de cultivo
slidos. Existen varios tipos de siembras para aislamiento: siembra en estra o zigzag,
siembra por estra mltiple, siembra de los cuatro cuadrantes, siembra de los tres
giros.
Se defini que los cultivos puros son aquellos que contienen un solo tipo de
microorganismo. El modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias

X.

aisladas, que provienen de una sola clula.

BIBLIOGRAFIA