Angel garcia Ninaja 08-32419

Henry garcia Ninaja 08-32416

 1. INTRODUCCION

1.1. FIJACIN BIOLGICA DE NITRGENO

El nitrgeno es uno de los elementos qumicos esenciales para todos los seres vivos
ya que forma parte de los cidos nucleicos y de las protenas y, por lo tanto, es
fundamental en la estructura y el metabolismo celular (Paerl, 1998). Las plantas toman
el nitgeno directamente desde el suelo en forma de nitratos (NO3-) o amonio (NH4+),
algo que no pueden hacer los animales, que precisan tomarlo en forma de compuestos
orgnicos. Slo algunos procariotas pueden tomar el nitrgeno directamente desde la
atmsfera, via fijacin de nitrgeno, convirtiendo el nitrgeno molecular en nitrgeno
asimilable por otros seres vivos.
Teniendo en cuenta que este elemento es muy abundante en la atmsfera, la obtencin
de nitrgeno directamente desde sta es una de las vas ms importantes para el
mantenimiento del ciclo del nitrgeno, del que forman parte las bacterias fijadoras de
nitrgeno, junto con otros grupos de bacterias que llevan a cabo procesos intermedios
de transformacin de compuestos nitrogenados y de desnitrificacin, que devuelve
finalmente el nitrgeno a la atmsfera. Por lo tanto, la existencia de un equilibrio en el
ciclo del nitrgeno es fundamental para la vida en la tierra y esto conlleva el
mantenimiento de los ecosistemas microbianos presentes en los medios terrestres y
acuticos.
La fijacin biolgica de nitrgeno supone ms del 60% de la fijacin global del
nitrgeno en la tierra y los microorganismos que llevan a cabo este proceso se
denominan diazotrofos (Lloret y Martnez-Romero, 2005; Raymond et al., 2004). La
enzima responsable de la fijacin de nitrgeno se denomina nitrogenasa y est
compuesta por dos metaloprotenas, una con Fe (ferroprotena o nitrogenasa
reductasa) y otra con Fe y Mo (ferromolibdoprotena o nitrogenasa propiamente dicha)
como grupos activos.
Dentro de los diazotrofos hay muchas especies que llevan a cabo la fijacin de
nitrgeno en vida libre, mientras que otras lo hacen a travs de asociaciones
simbiticas con plantas. Los fijadores de vida libre estn distribuidos en numerosos
grupos de bacterias que comprenden bacterias anaerobias como Clostridium,
anaerobias facultativas como Klebsiella y aerobias como Azospirillum, Azotobacter o
Beijerinckia (De Felipe, 2006).
Algunos de estas bacterias fijadoras en vida libre son endofticas de plantas y
colonizan los espacios intercelulares radiculares de la planta hospedadora. En algunas
de estas asociaciones se ha demostrado la incorporacin del nitrgeno fijado a la
planta, como ocurre con Gluconacetobacter (Muoz-Rojas y Caballero-Mellado, 2003),
Azospirillum (Berg et al., 1980) y Herbaspirillum (Vargas et al., 2003) que son endofitos
de caa de azcar y contribuyen a su fertilizacin nitrogenada. Existen tambin
estudios que muestran que algunas especies de bacterias pertenecientes a los
gneros Azoarcus, Azospirillum y Burkholderia (Govindarajan et al., 2007; Hurek y
Reinhold-Hurek, 2003; Kao et al., 2003; Reinhold-Hurek y Hurek 1998) penetran en las
races del arroz y aumentan la presencia de compuestos nitrogenados.

Varios grupos de procariotas son capaces de establecer simbiosis fijadoras de

nitrgeno con plantas superiores y dentro de stas cabe destacar la simbiosis
establecida por cianobacterias del gnero Anabaena y el helecho Azolla que tiene una
gran importancia para los cultivos de arroz (Peters, 1977), la establecida entre Frankia
y plantas actinorrizas que supone un gran aporte de nitrgeno en sistemas forestales
(Benson y Silvester, 1993) y, sobre todo, la establecida entre diferentes grupos de
bacterias, englobados en el trmino rhizobia, y las leguminosas (Velzquez et al.,
2010).

1.2. SIMBIOSIS RHIZOBIUM-LEGUMINOSA

La asociacin mutualista de rhizobia y leguminosas ha sido desde siempre la ms

estudiada por la importancia agronmica, econmica y social que tiene el cultivo de
estas plantas a escala mundial. Ambos partcipes son capaces de vivir
independientemente, sin embargo, los dos se benefician mutuamente de la interaccin
que se caracteriza por la formacin de ndulos fijadores de nitrgeno que, en la
mayora de las leguminosas, se forman en la raz. Los ndulos son rganos
especializados que se desarrollan como resultado de un dilogo molecular por parte de
los rhizobia y de las plantas (Gibson 2008).
El establecimento de una simbiosis rhizobia-leguminosa eficiente conlleva una serie de
etapas que comienzan con un intercambio de seales entre ambos organismos: las
races de la planta liberan a la rizosfera flavonoides (Spaink et al., 1998), molculas de
naturaleza fenlica que promueven la expresin en las bacterias de los genes nod, lo
cual origina la sntesis y secrecin de lipo-oligoquitinas llamadas factores nod (Geurts
et al., 2005; Lerouge et al., 1990; Spaink et al., 1998). stas son percibidas por la raz
de la planta, la cul experimentar diversos cambios dependiendo del tipo de
leguminosa (Bauer y Mathesius, 2004).

2. METODOLOGA

Para realizar la practica se debe seguir el siguiente protocolo

Primero:

Seleccionar una planta, de preferencia una leguminosa para obtener los ndulos de
sus races.

segundo:

Esterilizar la superficie de los ndulos con HgCl2 al 2,5 % durante 2 min

Tercero:

Escoger una raz que tenga los ndulos y lavarlo con agua de la llave para eliminar la
mayor cantidad de suelo.

Cuarto:

Desprender cuidadosamente el ndulo de la raz y colocarlo en una caja Petri.

Quinto:

Colocar en dos cajas petri alcohol y en otra caja agua destilada.

Sexto:
Con ayuda de una pinza flamearla en el mechero para esterilizarla, coger el ndulo y
colocarlo en la caja con agua y dejarlo por 1 minuto. Repetir el procedimiento en las
otras dos cajas con alcohol.

Sptimo:

.Colocar el ndulo en otra caja y machacarlo con un estilete o un hisopo hasta obtener
un lquido de color rosado.

Octavo:

Inocular un 1ml del lquido obtenido en una caja de agar manitol con extracto de
levadura y con ayuda de una asa sembrar por estras.

Noveno:

Igual procedimiento hacer en la caja con agar manitol sin extracto de levadura.

Decimo:

.Invertir las cajas e incubar a temperatura ambiente de 3 a 4 das.(Antonio Daz

Alcntara, 2010).
 3. BIBLIOGRAFA

Aarons, S. R. y Graham, P. H. (1991). Response of Rhizobium

leguminosarum bv. phaseoli to acidity. Plant Soil 134, 145-151.

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lvarez Martnez, E. R. (2007). Coevolucin de Plantas Leguminosas

Herbceas de la Provincia Corolgica Mediterrnea Ibrica Occidental y de
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doctoral. Universidad de Salamanca.

Alvarez-Martnez, E. R., Valverde, A., Ramrez-Bahena, M. H., Garca-

Fraile, P., Tejedor, C., Mateos, P. F., Santillana, N., Ziga, D., Peix, A. y
Velzquez, E. (2009). The analysis of core and symbiotic genes of rhizobia
nodulating Vicia from different continents reveals their common phylogenetic
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Allen, O. N. y Allen, E. K. (1981). The Leguminosae, a Source Book of

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