Al agregar 2 gotas de ninhidrina a cada uno de los tubos de ensayo que
contenían 0,5mL de la solución de proteína, se pudo observar que cada una de ellas reaccionó de forma diferente al entrar en contacto con la ninhidrina y produjo una variación de color en cada una de estas como se puede observar en la tabla 1(Resultados de las pruebas de coloración). Debido a que la ninhidrina y el NaNO3 son reactivos que por medio de calorimetría reaccionan con las proteínas y los aminoácidos formando soluciones de tonalidades violetas. Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina. La ninhidrina reacciona rápidamente con el grupo amino, lo oxida y libera amonio el cual se condensa con la ninhidrina reducida, y con otra molécula de ninhidrina libre, para producir un aducto (producto formado por la unión de dos moléculas) púrpura de Ruhemann. Al observar los resultados obtenidos se puede notar que las pruebas que en este caso dieron positivas ante la presencia de aminoácidos libres fueron la albúmina de huevo, gelatina y la histidina ya que estas se tornaron de color azul con tendencia a morado y violeta respectivamente. Esto se debe a que la albúmina huevo es rica en sisteína, metionina y presenta grupos sulfihidrilo, la cual está constituida por alrededor de 585 aminoácidos con 17 puentes disulfuro, la concentración de estos aminoácidos en la albúmina de huevo hace que al encontrarse en presencia de ninhidrina se torne de un color azul con tendencia a morado además de que en su estructura presenta más de un grupo amino y carboxilo libre.
Estructura química de la albúmina.
Además de la albúmina de huevo, otra sustancia que presentó positividad en el momento de entrar en contacto con la ninhidrina fue la gelatina, esto se debe a que al ser una proteína compleja con gran presencia de aminoácidos y poseer un carácter anfótero, asociado con la presencia de los grupos amino y carboxílicos en los aminoácidos hace que la reacción con la ninhidrina sea positiva. Otra de las sustancias que dio una respuesta positiva al estar en presencia de ninhidrina fue la histidina, esto se debe a que su cadena lateral está cargada positivamente, este aminoácido esencial presenta una gran concentración de aminoácidos libres y como se puede observar en su estructura contiene un grupo amino y carboxilo lo cual permite la reacción positiva con la ninhidrina dando así un color violeta fuerte más que la presentada en la gelatina y el huevo, esto quiere decir que es este el que contiene mayor presencia de aminoácidos libres.
ESTRUCTURA HISTIDINA.
Siguiendo con las observaciones se puede detallar que la urea y el agua no
presentan ningún aminoácido libre ya que estos dos compuestos no cambiaron de color en el momento de entrar en contacto con la ninhidrina. Además la fenilalanina, asparagina, glicina, muestra problema y el triptófano tampoco reaccionaron positivamente ante la presencia de ninhidrina ya que presentaron un cambio a color a café en diferentes tonalidades, esto indica la poca concentración de los aminoácidos libres en las estructuras moleculares de estos compuestos.
Finalmente se puede decir que la reacción con ninhidrina identifica compuestos
que contengan grupo alfa amino libres y es una de las reacciones más sensibles para identificar aminoacidos en general, ya que detecta una parte de aminoacido en 500 000 partes de agua.
BIBLIOGRAFÍA.
Armstrong, F Bioquímica. Editorial Reverte, S.A. Barcelona España. 1982.
Feeney, R.E. Egg Proteins, en "Symposium on Foods: Proteins and Their Reactions". Ed. Schultz, H.D.; Anglemeier, A.F (1964). Aspinall, Gerald O. (2004). The polysaccharides. Academic Press. LEHNINGER: PRINCIPIOS DE BIOQUÍMICA / David L. Nelson y Michael M. Cox - 5ª edición - Barcelona: Ediciones Omega 2009. Traducido por: Claudi M. Cuchillo E. Kaiser, R. L. Colescott, C. D. Bossinger, P. I. Cook, Analytical Biochemistry 34 595 (1970)