LA CLULA DE CLARA: LA BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR CON

IMPLICACIONES FISIOPATOLGICAS.
En 1937 Max Clara describi un nuevo tipo de clula presente en el epitelio que
tapiza los bronquolos terminales y respiratorios, que caracteriz por sus grnulos
secretorios y una membrana apical con forma de domo y sin cilios; que luego seran
conocidas como Clulas de Clara.
Las clulas de Clara se encuentran ubicadas principalmente en el epitelio que
tapiza los bronquolos terminales y los bronquolos respiratorios. En estos conductos
las clulas de Clara aumentan en cantidad progresiva a medida que se avanza en
sentido distal.
Morfolgicamente las clulas de Clara tienen forma cilndrica o cuboide (en las vas
areas ms distales), se caracterizan por presentar una superficie apical con forma
de domo prominente hacia la luz, en la cual hay presencia de microvellosidades y
tpica ausencia de cilias. En el citoplasma se aprecia un ncleo ovalado de ubicacin
basal. Tienen una gran cantidad de mitocondrias, RER de ubicacin basal bien
desarrollado, un REL poco abundante, un aparato de Golgi prominente de ubicacin
lateral o supranuclear y grnulos de secrecin electrondensos de contenido
homogneo ubicados en el citoplasma apical que miden unos 500-600 nm de
dimetro y que se encuentran en nmero aproximado de unos 20 por cada clula;
ello refleja su funcin como clula secretora en esta porcin del rbol bronquial.
Todos los tipos celulares epiteliales de la va area, con excepcin de las clulas
neuroepiteliales, derivan del endodermo del intestino anterior. Las primeras clulas
CCSP+ han sido identificadas de manera consistente en los bronquolos, como
mnimo, a partir de la semana 12 de la gestacin y su actividad secretoria aumenta
conforme lo hace la edad gestacional del feto. Ello conduce a que la protena pueda
ser detectada en el lquido amnitico a partir de la semana 15 de la gestacin.
La CCSP es parte de la superfamilia de la secretoglobina. La CCSP consiste en dos
subunidades polipeptdicas orientadas de manera antiparalela, una en relacin a la
otra. En seres humanos cada subunidad est conformada por una cadena
polipeptdica de 70 aminocidos, que forman 4 hlices separadas por horquillas ;
estas subunidades estn unidas por 2 puentes disulfuro. En conjunto, las 8 hlices
del dmero forman un bolsillo hidrofbico, donde se almacena fosfatidilcolina y
fosfatidilinositol.
Las clulas de Clara secretan varias sustancias, entre las que destaca una protena
homodimrica a quien le han sido asignados varios nombres: CC10, CC16, protena
1/protena urinaria 1 y protena secretoria de la clula de Clara (CCSP). La CCSP se
emplea normalmente como marcador inmunohistoqumico para teir a la clula de
Clara de manera especfica en los cortes de tejido pulmonar; aunque se ha
demostrado que una poblacin de clulas caliciformes reacciona tambin frente a la
coloracin inmunohistoqumica para CCSP, presentndose ante todo en partes
proximales a los bronquolos terminales en el rbol bronquial
La protena CCSP es un potente inmunosupresor y agente antiinflamatorio. La CCSP
inhibe la actividad de la fosfolipasa A2 (enzima hidroltica que escinde el cido
graso). El cido graso es el cido araquidnico, sustancia precursora de
tromboxanos, leucotrienos y prostaglandinas, que son mediadores de la inflamacin
y la respuesta inmunitaria. Tambin la CCSP podra ejercer su efecto
antiinflamatorio a travs de la prevencin de la degradacin del surfactante
pulmonar.
Inhibe la produccin y la actividad biolgica del IFN-, un mediador de la
inflamacin que activa los macrfagos para ejercer su funcin fagoctica. Tambin
modula algunos aspectos de la cascada de la coagulacin. Inhibe la migracin
quimiotctica, la actividad fagoctica de los monocitos/macrfagos y de los
neutrfilos e inhibe la migracin de los eosinfilos.
Modula, de manera indirecta, el comportamiento de los macrfagos a nivel
pulmonar. Tambin media la comunicacin intercelular a corta distancia entre las
clulas de Clara y las clulas ciliadas del epitelio de revestimiento bronquiolar, y a
larga distancia entre las clulas de Clara y los macrfagos. Tiene la funcin de unir
sustancias como la progesterona, el calcio (produciendo su quelacin en solucin);
une fosfolpidos como fosfatidilcolina y fosfatidilinositol, y algunos compuestos
xenobiticos como los bifenilos policlorados; y por ltimo se encarga de la
modulacin del proceso de carcinognesis.
El gen que codifica la protena CCSP est ubicado en la regin 11q12.2-13.1 (regin
asociada con la regulacin de la respuesta inflamatoria). En el pulmn, la expresin
del gen que codifica la protena CCSP es regulado por los glucocorticoides, el
interfern- (IFN-), la interleucina-4 (IL-4), la interleucina-13 (IL-13), el factor de
necrosis tumoral (TNF-) y la hiperoxia. Los glucocorticoides regulan elementos
de respuesta ubicados en la regin promotora proximal del gen de la CCSP por
medio de los factores de transcripcin C/EBP y C/EBP. La IL-13, estimula la
produccin de la CCSP a travs de un mecanismo indirecto; implicando de esta
manera la migracin de leucocitos (neutrfilos) a la va area y la estimulacin de la
actividad tirosina quinasa del receptor del factor de crecimiento epidrmico (EGFR).
El TGF- tambin estimula la produccin de la CCSP en la va area, en un
mecanismo que implica al EGFR.35 El TNF- (citoquina multifuncional producida por
monocitos, macrfagos, linfocitos y otras clulas) induce incrementos en los niveles
de ARNm que codifican la protena CCSP, aumentando as su tiempo de vida media.
El IFN- incrementa los niveles del ARNm que codifica la protena CCSP
(incrementando su estabilidad a nivel postranscripcional). Se proponen dos
mecanismos a travs de los cuales el IFN- incrementa la expresin del gen 1)
unin de la protena STAT1 a GAS, presente en la regin promotora distal del gen,
aumentando la transcripcin del gen, y 2) activacin del factor de respuesta al
interfern 1 (mediada por STAT1) que puede unirse directamente a su propio
elemento de respuesta y activar la expresin del gen de la CCSP o puede activar la
expresin gnica del factor de transcripcin HNF3, incrementando la actividad de
ste sobre la regin promotora proximal aumentando as la expresin del gen.
El (O2) acta sobre ambas regiones promotoras, ejerciendo su efecto al nivel
transcripcional; sin embargo, tiene un efecto ms notorio sobre la regin promotora
proximal, que es casi totalmente responsable de la respuesta a las condiciones de
hiperoxia. Se proponen dos mecanismos principales donde el O2 acta en
condiciones de hiperoxia: 1) implica la unin de dos familias de factores de
transcripcin relacionadas, la familia AP-1 y la familia C/EBP. Bajo condiciones de
hiperoxia, c-Jun se une al sitio de unin del factor AP-1 (formado este factor por dos
subunidades Fos y Jun) disminuyendo la expresin del gen de la CCSP.
Paralelamente, el factor C/EBP, especficamente la protena activadora heptica
(LAP) que en condiciones de hiperoxia se mantiene constante, mientras que la
protena inhibitoria heptica (LIP) aumenta; por lo cual la expresin del gen de la
CCSP se ve atenuada. 2) el mecanismo implica al factor NKx 2.1, que es un
activador de la transcripcin del gen de la CCSP; en condiciones de hiperoxia parece
ser secuestrado en el citoplasma celular en forma de oligmeros, lo cual disminuye
su actividad transcripcional a nivel nuclear.
La CCSP es secretada principalmente por la clula de Clara en los bronquiolos, pero
esta tambin es secretada en menores cantidades en la trquea, rin, prstata. En
los pulmones la CCSP va desde el lquido que reviste la superficie luminal del
epitelio hacia la sangre atravesando el epitelio de revestimiento bronquiolar, el
intersticio pulmonar y el endotelio vascular.
Cierta parte de la protena permanece en el intersticio pulmonar y es drenada por
capilares linfticos en direccin a los ganglios linfticos regionales y derivada en
ltima instancia a la sangre donde iene una vida media de solo 2 a 3 horas y es
filtrada en el rin por el glomrulo renal; luego de ser filtrada es reabsorbida por el
tbulo proximal donde es catabolizada. Dos protenas estn involucradas en la
internalizacin y catabolismo de la CCSP a nivel del tbulo proximal: la cubilina y la
megalina.
En condiciones normales, en individuos adultos, slo pequeas cantidades de la
protena son expulsadas en la orina. Sin embargo, esto incrementa despus de la
pubertad y aporta niveles ms altos a la orina a partir de este perodo del
desarrollo. En contraste con esto, en fetos la protena es excretada libremente por
los riones desde la sangre hacia el lquido amnitico, donde puede ser medido.
Todo el metabolismo restante es igual que en individuos adultos.
En cuanto a la concentracin de la CCSP esta tiene diferentes concentraciones en
diferentes fluidos corporales las cuales mencionaremos a continuacin en la
siguiente tabla. Cabe recalcar que adicionalmente se ha demostrado que la protena
presenta una variacin circadiana con picos a las 7:00 am y niveles bajos a las 2:30
pm.

La

mayora de marcadores biolgicos de la lesin o la inflamacin del parnquima

pulmonar forman parte de la capa superficial que tapiza e epitelio de revestimiento
broncoalveolar y normalmente se pueden medir a travs del lquido del lavado
broncoalveolar. No obstante, la CCSP ha venido siendo utilizada en estudios para
legar a un diagnostico no invasivo de infecciones agudas o crnicas que alteren al
epitelio bronquiolar. Esto parte de que tambin podemos encontrar la CCSP en
plasma cuando existe una permeabilidad aumentada de la barrera epitelial o
cuando esta est intacta, pero hay una reduccin en la cantidad de clulas de Clara
o cuando su estructura est alterada (en cuyo caso se vera disminuida la
concentracin srica de la CCSP).
La exposicin prolongada a noxas como el ozono, el humo, etc ocasionan dao en el
epitelio que reviste las vas respiratorias, con el consiguiente aumento de la
permeabilidad de la barrera broncoalveolar/sangunea lo que genera una mayor
difusin de esta protena hacia el plasma sanguneo. La explicacin a esto descansa
en el menor peso molecular y el ms amplio gradiente de concentracin existente
entre el lquido que tapiza el epitelio broncoalveolar y la sangre, tanto para la CCSP
como para la albumina.
El dao pulmonar agudo es un sndrome grave caracterizado por falla pulmonar
hipoxmica aguda, acompaada de infiltrados pulmonares, se ha encontrado que
los niveles de la CCSP tanto en el plasma como en el fluido de edema pulmonar de
pacientes afectados con dao pulmonar agudo o con sndrome de dificultad
respiratoria aguda, estn notablemente disminuidos en relacin con los hallados en
el edema agudo pulmonar cardiognico, lo cual podra ser til en el diagnstico
diferencial de estas entidades clnicas. Tambin los pacientes afectados con dao
pulmonar agudo o con sndrome de dificultad respiratoria aguda presentan una
relacin CCSP/protenas de fluido de edema pulmonar, menor a la encontrada en
pacientes con edema agudo pulmonar cardiognico, otra caracterstica til en el
diagnstico diferencial de estas entidades clnicas. Los autores proponen que los
bajos niveles de la protena encontrados en el dao pulmonar agudo son debidas a
tres mecanismos principales: 1) alteraciones en la permeabilidad del epitelio
alveolar, 2) muerte de las clulas de Clara y 3) cambios en la actividad
transcripcional de las clulas de Clara sobrevivientes.
En el caso de dao pulmonar crnico se realiz un estudio para el caso del humo del
cigarrillo donde se demostr lo siguiente: En fumadores la clulas claras
representaron el 4.3% del total de las clulas epiteliales del bronquiolo
propiamente dicho en contraste con el 8.3 % de los no fumadores. Lo mismo ocurri
en el epitelio que reviste los bronquolos terminales y respiratorios donde las clulas
de Clara representaban el 8% en los pacientes fumadores, mientras que en
pacientes no fumadores representaban el 14.5%.
Enfermedades ocupacionales
En pacientes con neumoconiosis (aspiracin de material indigerible por los fagocitos
como cristales), presentan una activacin de macrfagos alveolares, con secrecin
de factores fibrognicos, factores txicos y factores proinflamatorios. No se han
encontrado reportes en la literatura acerca de niveles de CCSP en neumoconiosis,
dato que podra arrojar informacin acerca del diagnstico de la patologa
En la exposicin constante a inhalacin de polvo rico en cristales de slice, se
presentan niveles reducidos de Protena Secretoria de Clulas de Clara (CCSP). Esto
demuestra la alta sensibilidad de la protena como biomarcador en diagnstico de
enfermedades incurables como la silicosis. La tasa de CCSP tambin permite
diferenciar entre un paciente con asbestosis y uno con fibrosis pulmonar idioptica.
Los primeros presentan un lquido de lavado broncoalveolar con mayor nivel de
CCSP.
En pacientes con asbestosis, los niveles de CCSP son elevados comparativamente
con pacientes sanos. Tambin presentan mayores niveles de lquido del lavado
broncoalveolar.
Otras enfermedades y complicaciones respiratorias
 Los cambios que suceden en las concentraciones de CCSP han sido analizados para
evaluar su uso como marcador frente a mltiples enfermedades que afectan al
sistema respiratorio, as como marcador del tbulo proximal a nivel renal. Estos
cambios que presenta la concentracin de CCSP en suero, lquido del lavado
broncoalveolar y orina, es til como un marcador diferencial y para realizar un
diagnstico temprano de diferentes enfermedades, entre las cuales se incluyen:
asma, bronquiolitis obliterante, cncer de pulmn, derrame pleural, disfuncin
tubular proximal renal, displasia broncopulmonar, enfermedad pulmonar obstructiva
crnica, entre otras.
Otras protenas secretadas por las clulas de Clara
Las clulas de Clara tambin tienen otros productos proteicos:

Protena de 55kDa funcin desconocida. En lquido de lavado broncoalveolar.

Inhibidor de proteasa leucocitaria 11.7kDa. Inhiben enzimas presentes en grnulos
de los neutrfilos.
Lectina fijadora de -galactosidasa lquido del lavado broncoalveolar en ratas.
Fosfolipasa A secretoria enzima que hidroliza el enlace ster glicerol-grupo acilo
de las membranas bacterianas. 14kDa. Probable importancia en catabolismo de
Surfactante.
Triptasa de clula de Clara Enzima similar a la tripsina. 30 kDa.
Protena del Surfactante Pulmonar (SP) A la SP-A es hidroflica. 650 kDa. Producida
tambin por neumocitos tipo II. Importante en defensa contra invasores como virus
(influenza, herpes simple, Sincitial respiratorio) y bacterias (staphylococcus aureus,
Streptococcus pneumoniae, etc).
SP-B Protena altamente hidrofbica. Importante componente proteico del
surfactante. Producida tambin por Neumocitos tipo II
SP-D Lectina dependiente de calcio. Producida tambin por neumocitos tipo II.
Juega papel en defensa inmunolgico al igual que SP-A.

Papel de la Clula de Clara en renovacin y regeneracin del epitelio bronquiolar

La renovacin epitelial pulmonar es lenta, siendo menor a 1% por da. Sin embargo,
esta capacidad se ve potenciada tras sufrir una lesin. Esto se debe a las clulas
progenitoras en el epitelio. Una de estas poblaciones celulares ms abundantes son
las clulas de Clara. Este hecho permite conocer la estabilidad alta de las clulas
del epitelio pulmonar. Slo al momento de una lesin, se activa la capacidad
mittica y regenerativa de estas clulas.
En los humanos, las clulas de Clara ocupan el 15% y 44% de los compartimientos
de clulas en proliferacin de los bronquiolos terminales y los bronquiolos
respiratorios. Sin embargo, tambin existen otras poblaciones celulares que
tambin expresan CCSP variantes (vCE), clulas que expresan el factor de
transcripcin-4 de unin a octmeros y la protena CCSP (OCT-4+/CCSP+), clulas
madre broncoalveolares (BASC) y neumocitos tipo II. En conjunto, estas clulas
pueden dar lugar a: clulas de Clara, Clulas ciliadas, neumocitos tipo I y
neumocitos tipo II.
Las vCE se encuentran a nivel de la unin de los conductos broncoalveolares (BADJ).
Esta poblacin juega un papel central en la regeneracin del epitelio tras una lesin.
Se pueden diferenciar en Clulas de Clara propiamente dichas, las cuales adquieren
una capacidad mittica (CC-A), que a su vez se diferencian en clulas ciliadas o a
clulas de Clara tipo B, que tambin se diferencian en clulas de Clara.
Las clulas OCT-4+/CCSP+ tienen la capacidad de dar origen a neumocitos tipo II y
tipo I.
Las BASC coexpresan CCSP y SP-C. Estudios indican que estas clulas no
contribuyen de manera significativa al mantenimiento del epitelio alveolar. Sin
embargo, s muestran capacidad de autorrenovarse y de dar origen a nuevas
clulas ciliadas durante el periodo del desarrollo posnatal.
Los neumocitos tipo II tienen una gran capacidad para regenerar el epitelio alveolar.
Coexpresan SP-C y CCSP. Estn presentes cerca a las BADJ y pueden autorrenovarse
y dar origen a Neumocitos tipo I.
Las clulas neuroepiteliales sufren un proceso de hiperplasia y conforman una
poblacin de clulas autorrenovables, con capacidad para regenerar algunos tipos
celulares de la zona. Esta capacidad es observable especialmente en dao a las
clulas de Clara.
Finalmente, es importante notar que el ambiente definir la velocidad a la que se
regenerar el epitelio y la diferenciacin celular que tenga la clula de Clara.