INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

INGENIERA EN SISTEMAS AMBIENTALES

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA
BIOQUMICA FUNDAMENTAL
LABORATORIO DE BIOQUMICA

PRCTICA 1
PROPIEDADES DE AMINOCIDOS Y PROTENAS

PRESENTAN
BONILLA BONILLA VANESA
VILLA MENDOZA JORGE ERIK EMMANUEL

MARZO, 2017

INTRODUCCN
Protenas y aminocidos
Las protenas son polmeros de alto peso molecular, que estn compuestos por unidades ms pequeas
llamadas aminocidos y, se encuentran unidos por enlaces covalentes de tipo peptdico. Los
aminocidos son molculas orgnicas que contienen un grupo amino (NH2) en uno de los extremos de
la molcula y un grupo cido carboxlico (COOH) en el otro extremo (Gutirrez, ).
Las protenas son los principales polmeros estructurales y funcionales en los seres vivos. La
composicin de aminocidos de una cadena peptdica tiene un profundo efecto en sus propiedades
fsicas y qumicas observables en las protenas (Taniguichi, 2011).
Propiedades fsicas y qumicas de los aminocidos
Las protenas ricas en grupos amino aromticos son relativamente insolubles en agua y, generalmente
se encuentran en membranas celulares. Las protenas ricas en aminocidos polares son ms solubles
en agua. Los grupos de aminocidos con cadena lateral cida (Glu, Asp) o bsica (Lys, His, Arg)
conferirn una carga y una capacidad de amortiguacin a la protena. El equilibrio entre cadenas
laterales cidas y bsicas en una protena determina su punto isoelctrico (pI) y la carga neta en
disolucin. Las protenas ricas en lisina y arginina son bsicas en disolucin y tienen carga positiva a
pH neutro, mientras que las protenas cidas, ricas en aspartato y glutamato, son cidas y tienen carga
negativa. Debido a los grupos funcionales de su cadena lateral, todas las protenas estn ms cargadas
positivamente a pH cido y ms cargadas negativamente en pH bsico (Taniguichi, 2011).
Reacciones qumicas para la identificacin de protenas
Existen diferentes mtodos para la determinacin de aminocidos, los cuales
pueden ser generales para determinar si se encuentran o no en una solucin o
especficos para un aminocido en particular.
Mtodo de Biuret: Consiste en la formacin de un complejo colorido entre
enlaces peptdicos, y, ion cprico en medio alcalino. Es una prueba general para
pptidos de cadena no menor a 3 aminocidos y los cambios de color dependen
del tamao de la protena y son de color purpura.
Reaccin de la Ninhidrina: Los aminocidos pueden cuantificarse mediante la
reaccin del grupo alfa/amino con Ninhidrina. Este reacciona rpidamente con el
grupo amino y lo oxida para producir una coloracin purpura.
Reaccin de Millon: Es especfico para grupos fenlicos (tirosina). La reaccin es
positiva cuando se observa un color rojo ladrillo.
Desnaturalizacin de protenas
La precipitacin irreversible de protenas se llama desnaturalizacin. Puede ser
causada por diferentes factores como el incremento de temperatura o cambios
en el pH del medio en el que se encuentren (Boyd,). Tambin suelen precipitar
por la adicin de metales pesados como sales de mercurio, plata, plomo, cobre,
entre otros.
Punto isoelctrico
Cuando el pka de una protena es igual su pH se conoce como punto isoelctrico
en ese punto las protenas presentan su menor solubilidad, mayor viscosidad y
no pueden migrar en un campo elctrico.
OBJETIVOS
1. Realizar algunas reacciones coloridas especficas para la identificacin de los aminocidos
que constituyen a una protena
2. Observar el efecto que producen algunos agentes fisicoqumicos sobre la solubilidad de las
protenas como el cambio del pH, metales pesados y por modificacin de la
constante dielctrica
3. Determinar el punto isoelctrico de la insulina
MATERIALES
o Gradilla
o Tubos de ensayo(diferentes tamaos)
o Pipetas de 1,5 y 10 mL
o Vasos de precipitado
o Baos maria de 70 y 95 C Aproximadamente
o Agitador de vidrio
o Pinzas para tubo de ensayo

SUSTANCIAS

NaOH al 10%
Acetato de plomo al 5%
Solucin de ninhidrina 1% en etanol
Insulina
Clara de huevo diluida 1:3
Etanol 96
cido actico 0.2M
cido clorhdrico 0.1N
Reactivo de biuret
Gelatina al 5%
Acetato de sodio 0.2M
Albmina al 5%
Tirosina al 1%
Fenilalanina al 1%
Nitrato de sodio al 30%
Nitrato de plata al 2%
Cloruro de sodio al 5%
Etanol al 96%
Cistena al 1%
Aspartame al 0.5%
Cloruro mercrico al 5%
Hidrxido de sodio 0.1 N
RESULTADOS OBTENIDOS
De acuerdo con las determinaciones cualitativas y cuantitativas, realizadas en el laboratorio se
obtuvieron los siguientes resultados

I. Reaccin de ninhidrina

PROCEDIMIENTO REALIZADO

Se adiciono a 1 mL de las soluciones problema (Gelatina, Albmina, Aspartame, Tirosina,

Fenilalanina, Agua) de 2-3 gotas de la solucin de ninhidrina en etanol. Se observ que a
temperatura ambiente, la aparicin de colores azules o violetas daba positivo a la presencia de
grupos amino libres. En algunos tubos no fue posible percibir la presencia de coloracin y
tuvieron que calentarse en bao mara a 70C algunos minutos ms.

Cuadro 1. Soluciones problema expuestas a Ninhidrina y resultado de prueba

Gelatin Albumi Asparta Tirosi Fenilalan Ciste Agu
a na me na ina na a
Observac Positiva Positiva Positiva Positiv Positiva Positiv /
iones a a

INTERPRETACION

La reaccin para la deteccin de aminocidos se realiza con ninhidrina . La ninhidrina es un

oxidante energtico . La molcula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina, condensa a
travs del amoniaco produciendo una estructura denominada indanona o prpura de Ruhemann.
Al ser el aspartame, la tirosina y la fenilalanina aminocidos, es lgico que estos den positivo. La
gelatina, al ser una protena, al igual que la albumina, tienden a dar positivo por que esta
conformado por aminocidos. En esta reaccin, la nica que dio negativa es el agua, ya que en su
conformacin qumica no tiene aminocidos. Como nota agregamos que el Aspartame tardo
mucho en llegar a la coloracin, esto despus de someterlo a temperaturas altas, con el fin de
estimular la reaccin. La explicacin de esto es que estaba en una concentracin muy pequea
dentro de la dilucin .
II. Reaccin de Millon
PROCEDIMIENTO REALIZADO

Se adiciono a 1 mL de las soluciones problema (Gelatina, Albumina, Tirosina, Fenilalanina, Agua)

2-3 gotas del reactivo de millon y se calent en el bao mara a 70C algunos minutos. La
aparicin del color rojo en las sustancias fue la prueba positiva de que est presente el grupo
fenlico.

Cuadro 2. Soluciones problema expuestas a la reaccin de Millon y resultado de

prueba
Gelati Albumi Tirosi Fenilalan Agu
na na na ina a
Observacion Positiva / Positiv Positiva /
 es a

INTERPRETACION

La reaccin de millon sirve para comprobar la presencia del grupo fenlico en los aminocidos o
protenas. El que de positivo en la tirosina y en la fenilalanina, quiere decir que posen a este
grupo y revisando su formula qumica, es correcto esto. Al dar positivo en la gelatina, nos dice
que tambin contiene un aminocido con este grupo. La albumina no contiene ningn aminoacido
con el grupo fenil, y por lgicas razones, el agua tampoco, por lo que no se vera ningn color
rasa o rojo en estas reacciones, lo que dio en el resto de las reacciones positivas.

III. Reaccin de plomo para cistena

PROCEDIMIENTO REALIZADO

Se adiciono a 1 mL de cada una de las soluciones problema(Gelatina, Albumina, Tirosina,

Fenilalanina, Cistena y agua), 2 ml de NaOH al 10% y de 2-3 gotas de acetato de plomo al 5%,
se calent en bao mara a 95C algunos minutos, hasta que se aprecio un precipitado color
Grisceo negro.

Cuadro 3. Soluciones expuestas a solucin de Acetato de plomo

Gelatin Albumi Tirosi Fenilalan Ciste Agu
a na na ina na a
Observacion / Positiva / / Positiv /
es a

INTERPRETACION

la reaccin entre los aminocidos

IV. Reaccin de biuret

PROCEDIMIENTO REALIZADO

Se adiciono a 1 mL de las soluciones problema (Gelatina, Albmina, Aspartame, Tirosina,

Fenilalanina, Agua), 2 mL de NaOH al 10% y de 3-5 gotas del reactivo de biuret, Mezclar
perfectamente. La formacin de un color violceo o de la precipitacin del hidrxido cprico fue
la prueba positiva de que existen cadenas no menores a 3 unidades de aminocidos( con 2 o mas
enlaces peptdicos). En algunos tubos no se aprecioapreci enseguida la aparicin de estos
fenmenos, as que se dejo reposar de 10-15 minutos.
Cuadro 4. . Soluciones expuestas a solucin de sulfato de cobre
Gelatin Albumi Asparta Tirosi Fenilalan Agu
a na me na ina a
Observacion Positiva Positiva / / / /
es
INTERPRETACION
La coloracin prpura de una reaccin positiva se debe a un complejo de
coordinacin entre el Cu+2 y cuatro tomos de nitrgeno proveniente de enlaces
peptdicos.

V. Precipitacin por efecto del pH

PROCEDIMIENTO REALIZADO

Se prepar una serie de tubos con la siguiente composicin:

4 mL de Clara de huevo diluida 1:3 (blanco)
3 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 mL de HCl 0.1 N
3 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 mL de NaOH 0.1N
3 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 mL de regulador de acetatos 0.1 M pH= 4.7 mL
3 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 mL de Agua destilada

Se observ lo que suceda en los tubos, respecto al blanco.

Cuadro 5. Soluciones de clara de huevo diluida expuestas a soluciones (ml) a
diferente pH
Soluciones HCl NaOH Acetatos Agua
adicionadas
Observaciones Precipita Se Sin cambio Se
diluye observable diluye

VI. Precipitacin por modificacin de la constante dielctrica

PROCEDIMIENTO REALIZADO

Se preparo una seria de tubos con la siguiente composicin:

Clara de huevo diluida 1:3 (blanco)
3 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 2 mL de Etanol 96%
3 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 2 mL de Agua destilada

Se observ lo que suceda en los tubos, respecto al blanco.

Cuadro 6. Soluciones de clara de huevo expuestas a soluciones (ml) con

diferente constante dielctrica
Soluciones EtOH Agua
 adicionadas
Observaciones Precipita Se
diluye

VII. Efecto de adicin de metales

PROCEDIMIENTO REALIZADO

Se preparo una serie de tubos con las siguientes composiciones:

0.5 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 gota de Cloruro mercrico 5%
0.5 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 gota de Nitrato de plata 2%
0.5 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 gota de Acetato de sodio 5%
0.5 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 gota de Cloruro de Sodio 5%
0.5 mL de Clara de huevo diluida 1:3 y 1 gota de Agua destilada

Cuadro 7. Solucin de clara de huevo diluida expuesta a soluciones (ml) de

metales pesados, de metal alcalino (NaCl) y agua
Soluciones Cloruro Nitrato Acetato Cloruro de sodio Agua
adicionadas de de de (5%)
mercri plata plomo
co (5%) (2%) (5%)
Observacion Precipita Precipita Precipita Sin cambio Se
es observable diluye

VIII. Determinacin del punto Isoelctrico de la Insulina

PROCEDIMIENTO REALIZADO

En una serie de tubo de ensayo pequeos se prepararon 5 tubos con las composiciones dadas.
Se dejaron reposar y se anotaron las observaciones finales (despus de 10 min).
Cuadro 8. Solucin de clara de huevo diluida expuesta a soluciones (ml) de
metales pesados, de metal alcalino (NaCl) y agua
Soluciones 1 2 3 4 5
adicionadas
Observacio Poca Poca Precipit Precipita Sin
nes precipitaci precipitaci a cambio
n n observab
le
DISCUSION
Los sistemas biolgicos son susceptibles a variaciones pequeas que puedan ocurrir en el entorno. A
las condiciones de pH y temperatura en que los aminocidos asumen una conformacin especfica se
le conoce como conformacin nativa, que corresponde a una estructura termodinmicamente estable y
organizado.

BIBLIOGRAFA
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/4-PROTEINAS-2_31898.pdf
http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_5.pdf
http://bioq9c1.fmedic.unam.mx/coordinacion/pdf/Cap2Baynes.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Proteinas_8075.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/estructura/EPamm2.html