Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud

Microbiologa
General BF57

PRCTICA 6. CUANTIFICACIN DE
MICROORGANISMOS: TURBIDIMETRA Y RECUENTO
DIRECTO

Dra. Volke Seplveda Tania Lorena

Equipo 6
Garca Domnguez Mara Fernanda
Gonzlez Jimnez Eduardo
Orozco Carbajal Francisco
Vela Baldamis Paulina

Resultados
 En el cuadro 1 se observan los resultados obtenidos al observar la morfologia
microscopia de las muestras problema.

Cuadro 1. Observacin morfolgica y caractersticas generales de los

microorganismos
Muestra
Caracterstica
Muestra A Muestra B
Morfologa
Ovalados, en forma de gota Puntos, bacillos
microscpica
Tamao celular (m) - -
Color de las clulas Azul muy claro Azul
Movilidad (si/no) No No
Agrupacin (si/no) Si Si
Caractersticas
Turbia transparente Turbia rosada
de la suspensin
Tipo de clula
Eucariota Procariota
(procariota/eucariota)
Tipo de microorganismo
Hongo Bacteria
(hongo/bacteria)
Solo las bacterias tienen forma
Tiene una forma muy similar a
Justificacin de cocos tan definidos adems
una levadura ya estudiada con
Cmo llego a esa conclusin? del tamao muy inferior a la
anterioridad
muestra A

En el cuadro 2 se observan los resultados obtenidos en el espectrofotmetro, y el

conteo directo en cmara de Neubauer.
Turbidimetra Camara de Neubauer
Microorganism Nmero
Nmero de
o DO (560nm) promedio de DS FD
Clulas/mL
clulas/cuadro
Muestra A 0.643 23.4 - - 5.8x106
Muestra B 0.421 Incontables - - -
* DS: desviacin estndar; FD: factor de dilucin; DO: densidad ptica

La ecuacin para la obtencin del nmero de clulas por mL fue:

Clulas
=23.42510 4=5.8106
mL

Discusin
 La literatura seala que para que puedan visualizarse las primeras trazas de turbidez
debe haber ms de un milln de clulas por mililitro y se precisan de 10 a 100 millones por
mililitro para que la suspensin se vuelva lo bastante turbia como para ser medida en un
espectrofotmetro. Por lo tanto, la turbidimetra no es un mtodo til para medir la
contaminacin de lquidos por un nmero relativamente pequeo de bacterias. (Ocaa
2011)

En una suspensin microbiana la cantidad de microorganismos est

directamente relacionada con la turbiedad o densidad ptica. La metodologa es
til con suspensiones de densidad microbiana baja y con cultivos en donde los
microorganismos son unicelulares y con un tamao de unos cuantos micrmetros,
caractersticas que les permiten mantenerse suspendidos y homogneamente distribuida; en
tanto que con microorganismos de mayor tamao y con aquellos productores de
polisacridos esta metodologa no es adecuada. (Ocaa 2011)
Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de
diferentes tipos de bacterias, independientemente del tamao celular, tienen casi la misma
absorbancia por unidad de concentracin de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones
diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del
tamao celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy
diferentes por partcula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaos de
las clulas bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de
microorganismos totales o el nmero de microorganismos viables de una suspensin
bacteriana debe realizarse una "curva de calibracin" con cada tipo de microorganismo,
slo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Optica) con el nmero de
microorganismos totales o con UFC. (Microinmuno, 2017)
Debido a lo anterior se puede observar que se observa en primer lugar que la
turbidimetra es un metodo valido para el conteo microbiano si se realiza una curva de
calibracin, pues sin esta lo nico que podemos saber al medir la DO de una muestra es un
nmero muy al azar de microorganismos generales en una determinada suspensin, pues a
mayor DO mayor ser le nmero de microorganismos presentes en la suspensin, debido a
que estos impedirn el paso de luz en el espectrofotmetro, adems este mtodo como ya lo
menciona la literatura solo sirve con un numero grande de microorganismos por mililitro de
muestra, pues en muestras con pocos microorganismos por mililitro, no se genera turbidez.
Al momento de observar los microrganismos de cada muestra bajo el microscopio
en la cmara de Neubauer, se puedo notar que este no es un buen mtodo para
microrganismos mviles, pues dificulta su conteo, tampoco es vlido para microorganismos
muy pequeos, pues es imposible de contar, por ejemplo, en la muestra B que al observarla
en la cmara las clulas se vean demasiado pequeas, la cmara tiene un lmite de zoom a
40x y para microorganismos donde se necesita el zoom en 100x para observar las clulas
este mtodo no es viable. Adems de lo anterior en la muestra B tambin se observaba
cierta translucidez en las clulas, lo cual dificulta an ms el conteo de este tipo de clulas
por este mtodo debido a la luz que requiere el microscopio para poder observar cualquier
tipo de muestra, por lo cual este mtodo tambin es descartable para clulas translucidas,
que no hayan tenido algn tratamiento anterior para su mejor visualizacin.
Conclusin
Se logr el conteo directo de clulas en cmara Neubauer , adems se entendi la
importancia de ocupar el mtodo especfico para el tipo de microorganismo a estudiar, pues
no todos los mtodos sirven para todos los microorganismos debido a las caractersticas
morfolgicas de cada uno de ellos, como el tamao o estructura. Adems se logr
configurar de manera correcta el espectrofotmetro para medir turbidez.
Referencias
Cavalcante V. A., Dbereiner J. 1988. A new acid-tolerant nitrogen fixing bacterium
associated with sugarcane. Plant and Soil. 108 (1): 23-31.
Clark D. S. 1967. Comparison of pour and surface plate methods for determination of
bacterial counts. Canadian Journal of Microbiology. 13 (11): 1409-1412.
Cervantes, M. C., & Pedroza, A. R. (Julio - Diciembre de 2007). El pulque: caractersticas
microbiolgicas y contenido. NOVA - PUBLICACIN CIENTFICA EN CIENCIAS
BIOMDICAS, 5(8), 139-140. doi:101-212
Microbiologa Outside. (12 de 03 de 2017). Microbiologia! Obtenido de
http://www.microbiologia.com.ar/bacteriologia/fisiologia.php?Mostrar=medida
Microinmuno. (12 de 03 de 2017). Microinmuno. Obtenido de
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
Ocaa, E. J. (17 de 04 de 2011). Universidad Central de Ecuador. Obtenido de
http://books.google.com.ec/books?
id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA182&lpg=PA182&dq=MICROBIOLOGIA
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