INFORME DE LABORATORIO # 2

ACTIVIDAD ENZIMATICA

INES HERNANDEZ

MARIA JOSE MALDONADO

CARLOS BARAJAS
CAMILO MENDEZ
KELLY PARRA

BUCARAMANGA
2017
 INTRODUCCION

Las enzimas son protenas y actan como catalizadores, facilitando las

trasformaciones qumicas de varias sustancias, ellas actan sobre sustancias
llamadas sustratos y las producidas a partir de este por accin enzimtica se
llaman productos. Las enzimas exhiben especificidad de sustrato; esto es, cada
enzima acta sobre una sustancia formando productos especficos.
La funcin principal de una enzima es hacer descender la energa de activacin
que necesita una molcula para poder intervenir en una reaccin, permitiendo que
las reacciones ocurra en los organismos a velocidades eficientes a condiciones
normales de pH, temperatura y concentracin.
 OBJETIVOS

Analizar los procesos bsicos de la actividad enzimtica.

Determinar el efecto ocasionado por los factores temperatura, especificidad
del sustrato etc.
Determinar la accin de las enzimas como son la catalasa, peroxidasa,
amilasa, etc.
 MARCO TEORICO

Una enzima es una protena que acta como catalizador de una reaccin
qumica acelerndola.
Las enzimas son protagonistas fundamentales en los procesos
del metabolismo celular.
Las enzimas unen su sustrato en el centro reactivo o cataltico, que suele
estar protegido del agua para evitar interacciones no deseadas. En el
centro reactivo la disposicin espacial y los tipos de cadenas laterales de
aminocidos son fundamentales para orientar correctamente el sustrato y
poder interaccionar de la forma deseada para llevar a cabo la catlisis de la
reaccin.
Las enzimas son muy selectivas en relacin a los sustratos que modifican.
Las enzimas suelen ser mucho ms grandes que sus sustratos y en
muchas ocasiones requieren de la participacin de otras molculas ms
pequeas no polipeptdicas como las coenzimas (biotina, NADH entre
otros) o los iones metlicos llamados cofactores.

PROPIEDADES

1. Son capaces de acelerar la velocidad de reaccin sin ser consumidas en el

proceso.

2. Algunas enzimas, como la pepsina y la tripsina, que intervienen en la

hidrlisis de muchos tipos de protenas, controlan muchas reacciones
diferentes, mientras que otras como la ureasa, son muy especficas y slo
pueden acelerar una reaccin. Otras liberan energa para la contraccin
cardiaca y la expansin y contraccin de los pulmones. Muchas facilitan la
conversin de azcar y alimentos en distintas sustancias que el organismo
precisa para la construccin de tejidos, la reposicin de clulas sanguneas
y la liberacin de energa qumica para mover los msculos.

3. La especificidad entre el sustrato y la enzima se ha concebido como la

relacin de una llave y su cerradura. La molcula del sustrato constituye
la llave y la protena constituye la cerradura; en la superficie de la protena
existe una zona especfica, denominada sitio activo o cataltico, a la cual se
une la molcula del sustrato para experimentar la transformacin cataltica.

4. La cintica de las reacciones enzimticas difiere de las reacciones

inorgnicas simples.

5. La actividad cataltica de una enzima est determinada sobre todo por su

secuencia de aminocidos y por la estructura terciaria, es decir, la
estructura de plegamiento tridimensional de la macromolcula.
FUNCIN DE LAS ENZIMAS

Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de activacin de una

reaccin qumica. Al disminuir la energa de activacin, se incrementa la velocidad
de la reaccin.
La mayora de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que
en ellas se establece el equilibrio qumico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la
formacin de equilibrio qumico, pero no afectan las concentraciones finales del
equilibrio.

CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

De acuerdo a su COMPLEJIDAD

Simples: Formada por una o ms cadenas polipeltdicas.

Conjugadas: Contiene por lo menos un grupo no proteico enlazado en la
cadena polipeltdica.

En las protenas conjugadas podemos distinguir dos partes:

Apoenzima: Es la parte polipeptdica de la enzima.
Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima.
La combinacin de la apoenzima y el cofactor forman la holoenzima.

Los cofactores pueden ser:

Iones metlicos: Favorecen la actividad cataltica general de la enzima, si
no estn presentes, la enzima no acta. Estos iones metlicos se
denominan activadores. Ejemplos: Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+.

La mayora de los otros cofactores son coenzimas las cuales generalmente son
compuestos orgnicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las vitaminas del
complejo B son coenzimas que se requieren para una respiracin celular
adecuada.

De acuerdo a su ACTIVIDAD

Hidrolasas: Catalizan reacciones de hidrlisis. Rompen las biomolculas

con molculas de agua. A este tipo pertenecen las enzimas digestivas.
Isomerasas: Catalizan las reacciones en las cuales un ismero se
transforma en otro, es decir, reacciones de isomerizacin.
Ligasas: Catalizan la unin de molculas.
Liasas: Catalizan las reacciones de adicin de enlaces o eliminacin, para
producir dobles enlaces.
 Oxidorreductasas: Catalizan reacciones de xido-reduccin. Facilitan la
transferencia de electrones de una molcula a otra. Ejemplo; la glucosa,
oxidasa cataliza la oxidacin de glucosa a cido glucnico.
Tansferasas: Catalizan la transferencia de un grupo de una sustancia a otra.
Ejemplo: la transmetilasa es una enzima que cataliza la transferencia de un
grupo metilo de una molcula a otra.

REACCIONES DE LAS ENZIMAS

El hecho de que una reaccin qumica sea termodinmicamente favorable

depende de la diferencia de energa libre que haya entre los sustratos y los
productos.
Si esta diferencia es negativa, la reaccin es espontnea. Aunque una
reaccin sea espontnea no significa que la velocidad de la reaccin sea
elevada, existiendo reacciones espontneas que tardan segundos y otras
que tardan horas.
En las reacciones qumicas sencillas la transformacin de un sustrato en un
producto suele pasar por un estado intermedio llamado estado de transicin.
Este estado de transicin es muy inestable y suele necesitar aporte de energa.

La velocidad de una reaccin qumica depende de esta energa de

activacin. Para que se produzca una reaccin qumica, sin intervencin de
enzimas, es necesario que los reactivos entren en contacto, para lo que es
necesaria una concentracin suficiente, y que el choque de molculas tenga
energa para superar la barrera de activacin. Este es el motivo por el que la
temperatura influye en el equilibrio qumico. La enzima acelera la reaccin qumica
disminuyendo la energa de activacin. La enzima lleva a cabo esta disminucin
de la barrera energtica interaccionando con los elementos que participan en la
reaccin qumica estabilizndolos en el centro reactivo. As, aumenta
enormemente la probabilidad de que se produzca la reaccin qumica ya que
concentra y pone en contacto los elementos necesarios para la reaccin. En
algunas reacciones enzimticas participan coenzimas que permiten que durante la
reaccin la enzima no sufra modificaciones qumicas que le impidan repetir el
proceso.

La actividad enzimtica se restaura con slo reemplazar la coenzima y el

complejo enzimtico queda listo para catalizar una nueva reaccin.
Adems de las enzimas de naturaleza puramente proteica existen molculas no
proteicas capaces de catalizar reacciones como las ribozimas, formadas por
molculas de ARN.

REGULACIN ENZIMTICA

La regulacin del metabolismo celular se lleva a cabo regulando la actividad

enzimtica. Existen varias formas de regular la actividad de una enzima que no
son excluyentes entre s. Se puede regular su concentracin, modificar su
conformacin con ligandos activadores o inhibidores, modificar su localizacin
celular o introducir modificaciones covalentes como metilacin o fosforilacin que
incluso pueden llegar a alterar la enzima de forma irreversible.
No todas las enzimas tienen la misma importancia en la regulacin de una ruta.
Suele ser especialmente clave la regulacin de las enzimas que catalizan
reacciones poco favorables con energa de activacin elevada. En muchos casos
las reacciones termodinmicamente desfavorables se acoplan a reacciones
espontneas favorables que les aportan energa. ste es el caso de la hidrlisis
del ATP (reaccin favorable) asociada a los procesos de biosntesis.
 PROCEDIMIENTO

MATERIALES

INSTRUMENTAL SOLUCIONES Y MATERIAL BIOLOGICO

REACTIVOS
Tubos de ensayo Perxido de hidrogeno Papa en trozos
Pipetas de 2,5 y 10 mL Buffers pH 4 , 7, 10 Extracto de papa
Pipeteadores Solucin de almidn Hgado o rio
Mechero Catecol saliva
Vasos de precipitado 50 , Lugol
100,250,600 y 1000 ml
Bao Maria
Gradilla
Pinzas
Mortero con pistilo
Embudo
Gasa
Papel indicador de pH
Termmetro
Nevera o bao de hielo
Placa de calentamiento

DESAROLLO

1. En la primera fase se observara la variacin del sustrato , para ello se

contara con cuatro tubos de ensayos , y en cada uno de ellos se tomara
sustrato y enzima durante un tiempo determinado .
2. En la segunda fase se observara la variacin de la enzima , para ello se
contara con 3 tubos de ensayos , y en cada uno de ellos se tomara sustrato
y enzima durante un tiempo determinado
3. En la tercera fase se observara la influencia del pH, jugando con tres tipos
pH, (bsico, cido y neutro) durante cierto tiempo en condiciones climticas
diferentes.
4. En la cuarta parte se observara la influencia de la temperatura en las
enzimas y el sustrato durante cierto tiempo en condiciones climticas
diferentes.

CONCLUSIONES
 SUSTRATO ENZIMA
EXPERIMENTO AGUA (AGUA (EXTRACTO DE
OXIGENADA) PAPA)
1 3 mL
2 2 mL 1mL 1 mL
3 1mL 1mL 2mL
4 1mL 3mL
EXPERIMEN ALMIDON SALIVA LUGOL BUFFER TIEMPO
TO 1%
PH 4 2 ml 2 ml 4 gotas 2 ml pH 4 30 min
PH 7 2 ml 2 ml 4 gotas 2 ml pH 7 30 min
PH 10 2 ml 2 ml 4 gotas 2 ml pH 10

SUSTRATO ENZIMA
EXPERIMENTO AGUA (AGUA (EXTRACTO DE
OXIGENADA) PAPA)
1 3 mL 1 mL
2 2 mL 1mL 1 mL
3 1mL 2mL 1 mL
4 3mL 1 mL
SUSTRATO ENZIMA
EXPERIMENTO AGUA (AGUA (EXTRACTO DE
OXIGENADA) PAPA)
1 3 mL 1 mL
2 2 mL 1mL 1 mL
3 1mL 2mL 1 mL
4 3mL 1 mL

SUSTRATO
ENZIMA
XPERIMENTO (AGUA TEMPERATURA
(EXTRACTO DE PAPA)
OXIGENADA)
1 2.5 mL 2.5 mL 0
2 2.5 mL 2.5 mL 25 C
3 2.5 mL 2.5 mL 37 C
4 2.5 mL 2.5 mL 90 C

GRAFICAS DE RESLTADO
Variacin del sustrato
Variacin de la enzima
Influencia de la temperatura

DISCUSION
En los primeros tubos de ensayo se entro a discutir la especificidad del sustrato
1. El primer tubo de ensayo contenia agua (2mL) y (3) trocitos de papa al
mantenerlo a temperatura ambiente , muestra su control negativo esto se
debe a que la enzima no entra en contacto con sustrato , y queda inhibida.
2. El segundo tubo de ensayo contena perxido de hidrogeno (2mL) y
trocitos de papa (3) al mantenerlo a temperatura ambiente, muestra
liberacin de oxgeno, esto se debe a que la enzima peroxidasa
descompone el perxido de hidrogeno en el agua y el oxigeno. Este trabajo
se llama especificidad enzima sustrato.
3. El tercer tubo de ensayo contena agua (2mL) y trocitos de rin (2) al
mantenerlo a temperatura ambiente , muestra su control negativo esto se
debe a que la enzima no entra en contacto con sustrato , y queda inhibida.
4. El segundo tubo de ensayo contena perxido de hidrogeno (2mL) y
trocitos de rin (2) al mantenerlo a temperatura ambiente, muestra
liberacin de oxgeno, esto se debe a que la enzima peroxidasa
descompone el perxido de hidrogeno en el agua y el oxigeno. Este trabajo
se llama especificidad enzima sustrato.

En los segundos tubos de ensayo se entro a discutir la variacin del sustrato

1. El primer tubo de ensayo contena agua (3mL) y extracto de papa (1mL) a
temperatura ambiente , muestra un control negativo esto se debe a que la
enzima no encuentra sustrato con que reaccionar.
2. El segundo tubo de ensayo contena (2mL) de agua, perxido de oxigeno
(1mL) y (1mL) de extracto de papa, muestra liberacin de oxgeno, esto se
debe a que a mayor concentracin la velocidad de la de la reaccin
aumenta.
3. El segundo tubo de ensayo contena agua (1mL) , (2mL) de perxido de
oxgeno y de extracto de papa (1mL) , muestra liberacin de oxigeno , esto
se debe a que a mayor concentracin la velocidad de la de la reaccin
aumenta y se obtienen mas productos
4. El segundo tubo de ensayo contena (3mL) de perxido de oxigeno y
extracto de papa (1mL), muestra liberacin de oxgeno, esto se debe a que
a mayor concentracin la velocidad de la de la reaccin aumenta y se
obtienen mas productos.

En los terceros tubos de ensayo se entro a discutir la variacin de la enzima

1. El primer tubo de ensayo contena agua (3mL), perxido de hidrogeno
(1.0mL), muestra un control negativo esto se debe a que le sustrato no
entra en contacto con la enzima.
2. El segundo tubo de ensayo contena agua (2mL), perxido de hidrogeno
(1mL) y extracto de papa (1mL), muestra un control positivo es decir si hay
liberacin de oxigeno pero poco esto se debe a que la concentracin de la
enzima es menor que la del sustrato, la enzima se vuelve un factor limitante
en la reaccin.
3. El tercer tubo de ensayo contena agua (1mL), perxido de hidrogeno (1mL)
y extracto de papa (2mL), muestra un control positivo es decir si hay
 liberacin de oxgeno, esto se debe a que la enzima cumple con la
formacin de complejos enzimas-sustrato.
4. El cuarto tubo de ensayo contena perxido de hidrogeno (1mL) y extracto
de papa (3mL), muestra un control positivo es decir si hay liberacin de
oxgeno, esto se debe a que la enzima cumple con la formacin de
complejos enzimas-sustrato.

En los cuartos tubos de ensayo se entro a discutir la influencia del pH

1. El primer tubo de ensayo contena solucin del almidn al (1%) , saliva
(2 mL) diluida en agua , reactivo lugol (4 gotas) y el pH 4 , muestra una
cada en el minuto 39,32 , por las altas temperatura el almidn
desaparece y el lugol no tiene con que unirse y tiende a precipitarse.
2. El segundo tubo de ensayo contena solucin del almidn al (1%) ,
saliva (2 mL) diluida en agua , reactivo lugol (4 gotas) y el pH 7 ,
muestra una cada en el minuto 24,58 , por las altas temperatura el
almidn desaparece y el lugol no tiene con que unirse y tiende a
precipitarse
3. El tercer tubo de ensayo contena solucin del almidn al (1%), saliva (2
mil) diluida en agua, reactivo lugol (4 gotas) y el pH 10, muestra una
cada en el minuto 10,35, un cambio significativo en los niveles de pH, la
enzima y el sustrato pueden someterse a la desnaturalizacin. En tales
casos, no pueden identificarse. Por consiguiente, no habr reaccin
como tal y se precipitara el lugol.

En quintos tubos de ensayo se entr a discutir la influencia de la temperatura

1. El primer tubo de ensayo estaba a temperatura de 0 grados, la actividad
enzimtica para temporalmente.
2. La segunda tubo de ensayo estaba a temperatura de 25 grados, la enzima
mostro liberacin de oxgeno y se mantuvo contante sin cambios.
3. El tercer tubo de ensayo lo mantuvo a 37 grados, la enzima mostr su
especificidad a temperatura y puedo completar la formacin de enzima
sustratos, es decir productos.
4. El cuarto tubo de ensayo estaba a temperatura 90 grados, la enzima
present sufri un cambio en su estructura terciaria por sus altas
temperaturas provocando as que la enzima se desnaturalizara

CONCLUSIONES
 Las enzimas son molculas catalticas que incrementan las velocidad de las
reacciones qumicas que energticamente son posibles, dichas no son
consumidas en la reaccin. Ellas cuentan con un sitio activo, alta especificad,
eficiencia cataltica, sistema de regulacin y una localizacin especfica en las
clulas, sin embargo cuentan con factores que afectan su actividad enzimtica,
como es el caso del pH, la concentracin del sustrato y la temperatura.

Durante los distintos experimentos pudimos observar que al aumentar de sustrato

la enzima completa la formacin de complejos enzima-sustrato acelerando su
velocidad. La formacin de complejo enzima-sustrato, tambin est influenciada
por la temperatura y el pH. En el caso de una temperatura muy alta, puede tener
lugar la desnaturalizacin de las enzimas. Asimismo, el pH del medioambiente
afecta a la actividad de la enzima. Por lo tanto, para controlar la velocidad de una
reaccin qumica en particular, la temperatura y el pH deben regularse
adecuadamente.
 PREGUNTAS ADICIONALES

1. En la reaccin del extracto de papa y el perxido de hidrogeno seale

cul es la enzima y donde esta? Y cual es su sustrato?
La enzima se llama peroxidasa , se encuentra en la papa y su sustrato
es el perxido de oxigeno.
2. Cuando se aplica perxido de hidrogeno sobre una herida, se produce
burbuje a qu se debe?
El agua oxigenada o perxido de hidrogeno es un compuesto qumico ,
es conocido por ser un poderoso oxidante antisptico , y desinfectante
de uso externo de corta duracin que al entrar en contacto con heridas
de la piel , realizan un desbridamiento de las heridas , produce OH y
radicales libres que atacan una variedad de compuestos orgnicos
entre ellos lpidos y protenas que componen la membrana celular de los
microorganismos , la enzima catalasa presente en los tejidos degrada
rpidamente el perxido de hidrogeno que produciendo oxgeno lo que
dificulta la germinacin de esporas anaerobias , El agua oxigenada
cuando la ponemos en contacto con una herida por que esta se
descompone en oxgeno y agua.
3. Cul es el pH al que trabaja mejor la amilasa salival? Compare este
valor con el obtenido en el laboratorio y explquelo
La amilasa salival o ptialina trabaja en pH cidos-base (6-7), con los
resultados obtenidos en el laboratorio podra trabajar eficazmente en el
pH 7, mientras que en los pH 4 y 10, su velocidad es inactiva ya que
para reaccin se necesitan una concentracin y un pH ptimo.

4. Discuta lo que ocurre cuando la pepsina pasa del estomago al intestino

y cuando la amilasa salival o la ptialina pasa del esfago al estmago.
A que se debe el fenmeno?
La pepsina se inactiva en el estmago, por el cido gstrico, en el jugo
gstrico se inactiva a pH 3.3 y se inactiva en 20 min a 37 * de
temperatura, luego en 150 minutos en el jugo gstrico de pH 4,3.
La amilasa salival tiene un pH acido-base (6-7) en el estmago podra
trabajar con menos eficacia, ya que su pH se adopta a las condiciones
acidas del estmago. El estmago tiene un pH de (4-6).
 BIBLIOGRAFIA
LEHNINGER, A., NELSON, D., COX, M., Principios de Bioqumica, 4
Edicin, Ed. Omega, Barcelona, 2006, p. 212
ALDABE, J., HUETO, A., JUNI, J., LPEZ, P., Biologa, Ed. Erein, 1998,
p. 126.
LEHNINGER, A., NELSON, D., COX, M., Principios de Bioqumica, 4
Edicin, Ed. Omega, Barcelona, 2006, p. 193
Koshland D.E.,JR(Protein shape biological control) separata num
1280 , octubre , 1973.