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TEMA 3: AISLAMIENTO Y SELECCIN DE MICROORGANISMOS

INDUSTRIALES
Dr. Pedro F. Mateos

I. OBJETIVOS 3.- Suelo: es el mayor almacn, pero


tambin el ms difcil de manejar ya
Los microorganismos presentan una que se pueden encontrar todo tipo de
gran variedad metablica por lo que en microorganismos y en una
distintos aislados microbianos concentracin de 100 millones por
podemos encontrarnos una amplia gramo de suelo (gran variedad y
variedad de compuestos. Una de las cantidad).
tareas de la Microbiologa Industrial es
desarrollar procedimientos que
permitan el aislamiento y seleccin de
microorganismos de inters industrial.
A fin de tener xito, los mtodos de
seleccin deben constituir una
actividad interdisciplinaria que
combine actividades de microbiologa,
qumica, bioqumica, ingeniera y
bibliografa. El xito de un programa
de seleccin depende de la fuente
utilizada para la obtencin de los
microorganismos y del mtodo elegido
para detectar la actividad deseada.

Aislamiento de microorganismos a
II. FUENTES DE OBTENCION DE partir de suelo
MICROORGANISMOS
4.- Colecciones internacionales de
1.- Fermentaciones naturales: vino, cultivos tipo.
pan, queso, materiales en
descomposicin. Para el aislamiento de nuevos
productos metablicos, los
investigadores intentan aislar cepas a
partir de ambientes extremos o poco
corrientes con la esperanza de que tales
cepas sean capaces de producir nuevos
metabolitos. Por ejemplo, se estn
examinando microorganismos de las
grandes altitudes, hbitats fros, aguas
marinas, profundidades de los ocanos,
desiertos, giseres, campos de petrleo,
etc.
Fermentacin de mosto

2.- Animales y plantas enfermos:


vacunas.

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III. AISLAMIENTO DE Screening Secundario: Estudio de los
MICROORGANISMOS microorganismos aislados en el
screening primario para separar los que
El aislamiento de cepas puede llevarse tienen inters potencial de los que
a cabo utilizando las tcnicas tienen inters real y mejorar estas
empleadas normalmente en cepas seleccionadas.
microbiologa, siguiendo el siguiente
esquema a partir de una muestra de Para llevar a cabo un screening
suelo: primario generalmente se parte de una
poblacin mixta (suelo, fermentaciones
1.- La muestra de suelo se resuspende naturales, etc.) donde existe tanto una
en agua estril. gran cantidad como variedad de
microorganismos potencialmente tiles
2.- La suspensin se diluye 10-1 a 10-10 que debemos seleccionar. Para ello lo
veces. primero que hacemos es utilizar
medios selectivos donde crezca el tipo
3.- Muestras de estas series de de microorganismo que nos interesa
diluciones (c.a. 100 L) se siembran aislar. A este medio se le pueden
sobre varios medios de cultivo aadir inhibidores para eliminar los
(dependiendo del tipo de que no nos interesan. Por ejemplo, si
microorganismos que queramos aislar) queremos obtener un microorganismo
y luego se incuban. aerobio lo creceramos en presencia de
O2 con lo que los anaerobios no
4.- Se aislan colonias separadas de creceran; o bien si queremos
distinta morfologa y se purifican por seleccionar hongos, aadiramos
resiembra. cloranfenicol, antibitico que acta
frente a bacterias pero que no afecta a
5.- Los cultivos puros se mantienen en los hongos. Los parmetros generales
tubos de ensayo como cultivos en que tenemos que tener en cuenta son la
medio slido listos para realizar las fuente de carbono, fuente de nitrgeno,
pruebas de seleccin. aireacin, temperatura, pH e
inhibidores. Posteriormente se reaislan
El procedimiento de seleccin puede en cultivo puro aquellos
ser acelerado frecuentemente probando microorganismos que hemos aislado
la actividad biolgica de los aislados para su posterior estudio.
iniciales directamente.
1.- Seleccin de microorganismos
IV. SELECCION DE productores de antibiticos y otros
MICROORGANISMOS agentes inhibidores del crecimiento

Screening (Bsqueda): Deteccin y Los microorganismos productores de


aislamiento de microorganismos de antibiticos se encuadran dentro de las
inters industrial de entre una bacterias (Bacillus, Pseudomonas y
poblacin compleja de organismos fundamentalmente actinomicetos) y
utilizando procedimientos selectivos. hongos (Penicillium). Los parmetros
que se utilizaran para seleccionar estos
Screening Primario: Deteccin y microorganismos productores de
aislamiento de microorganismos antibiticos seran:
potencialmente tiles.

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Temperatura: Hongos 20-22C; de crecimiento que nos interesa
Actinomicetos 28C (auxtrofos). Estos microorganismos
pueden ser bien mutantes naturales o
pH: Hongos pH cido; Bacterias pH mutantes provocados por la accin de
neutro agentes mutgenos. El screening se
realiza de forma similar al de la
Oxgeno: Todos los productores son produccin de antibiticos, aunque en
aerobios este caso al medio de cultivo le falta el
factor de crecimiento buscado, de tal
Carbono: Actinomicetos glicerol, manera que el microorganismo test
quitina, almidn slo crecer alrededor de las colonias
que produzcan este factor de
Nitrgeno: Actinomicetos caseina, crecimiento (halo de crecimiento).
arginina, asparragina; En general
amonio o nitrato. A escala industrial y de forma general
se utilizan como microorganismos
Una vez crecidas las colonias que nos productores de aminocidos a las
interesan, se utiliza un medio que bacterias y como microorganismos
contenga el microorganismo que sea productores de vitaminas a los
susceptible de inhibirse su crecimiento eucariotas (levaduras y hongos
por los antibiticos que queramos filamentosos). Esta premisa nos sirve
seleccionar: Gram +, Gram -, amplio de orientacin para elegir los medios
espectro, etc. Se aislan, para ensayos selectivos y de enriquecimiento para
posteriores, aquellas colonias que aislar inicialmente a los
produzcan halos de inhibicin. microorganismos productores,
bacterias u hongos.

3.- Seleccin de microorganismos


productores de enzimas

Debido a la dificultad que entraa el


manejo de microorganismos, siempre
que sea posible, se recurre a utilizar las
enzimas producidas por stos en lugar
de las clulas enteras. A la hora de
realizar el screening se debe utilizar en
el medio de enriquecimiento como
fuente de carbono el sustrato del
enzima que buscamos (Amilasas ---->
Almidn; Celulasas ----> Celulosa).
Antibiograma

2.- Seleccin de microorganismos


productores de vitaminas y otros
factores de crecimiento

Necesitamos, al igual que para la


deteccin de antibiticos, un
microorganismo test que posea un
requerimiento absoluto para el factor

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