IDENTIFICACIN DE HONGOS DEL MEDIO

AMBIENTE
MARCO TEORICO

Tcnicas de Cultivo:

Los microorganismos son ubicuos, por lo que la preparacin de un cultivo puro

implica no solo el aislamiento de un determinado microorganismo a partir de
una poblacin microbiana natural mixta, sino tambin el mantenimiento del
individuo aislado y de su descendencia, en un ambiente artificial al que se
impide el acceso de otros microorganismos. Los microorganismos no requieren
mucho espacio para su desarrollo; de ah que se pueda crearse un ambiente
artificial dentro de los confines de un tubo de ensayo, de un matraz o de un
aplaca Petri, los tres tipos de recipientes ms comnmente utilizados para
cultivar microorganismos. El recipiente de cultivo debe estar inicialmente
estril (libre de microorganismos vivos) y despus de la introduccin del tipo de
microorganismo deseado debe de estar protegido de una posterior
contaminacin externa. La fuente primaria de contaminacin externa es la
atmosfera, que siempre contiene microorganismos en suspensin. La forma de
una placa Petri con su tapadera que la recubre est especialmente diseada
para evitar la contaminacin procedente de la atmosfera. (Stainer ,1996)

Medio de Cultivo:

El medio de cultivo ms usado es el Agar Sabouraud cuya formulacin es la

siguiente:

Frmula Original
Glucosa 20g
Peptona 10g
Agar agar 20g
Agua
1000ml
destilada

El cultivo de Agar Sabouraud es utilizado para hongos patgenos y no

patgenos, particularmente dermatofitos, levaduras y microorganismos
acidricos con rangos de pH de 5.6 0.2. El Agar Sabouraud es
un medio peptonado suplementado con carbohidratos, en el que las peptonas
proporcionan factores de crecimiento y fuentes de nitrgeno. Los carbohidratos
con la fuente de energa para el crecimiento .El pH cido favorece el
crecimiento de hongos, e inhibe otros microorganismos. Para realizar el
muestreo del aire generalmente se debe de exponer al aire por 15 minutos y
despus incubarla. (Tuttobello ,1969)

Los mohos pueden estudiarse por los mismos mtodos generales del cultivo
empelados para las bacterias. Casi todos crecen en condiciones aerobios sobre
los medios bacteriolgiocs comunes a temperaturas de 20 a 30C. Los mohos
suelen crecer ms lentamente que las bacterias y, por este motivo, en los
medios contaminados por bacterias, el crecimiento ms rpido de estas puede
llegar a sofocar el de los mohos. Cuando se intente aislar mohos, es buena
prctica utilizar un medio que favorezca el crecimiento del hongo, pero que no
sea ptimo para el de las bacterias. Los medios cidos (pH 5,6) con elevadas
concentracin de azcar son toleradas por los mohos, pero son inhibitorios
para muchas bacterias.

Examen morfolgico de los hongos

Como la identificacin de los hongos depende de gran medida de los

caracteres morfolgicos tales como el tipo y disposicin de las esporas, es
preciso realizar con gran cuidado las preparaciones destinadas a su
observacin microscpica. En general, los cultivos lquidos no son satisfactorios
para este objeto. Los cultivos en medio slidos, especialmente en placa, se
examinan superficialmente al microscopio con poco aumento. Muchas veces
este examen de orientacin proporciona datos suficientes para identificar el
gnero del moho. Se hace una inspeccin ms detallada recogiendo con una
esptula fina un poco de micelio en crecimiento, y disponindolo en una gota
de solucin de hidrxido de sodio entre el porta y cubre. En esta preparacin se
permite observar el tabicado de las hifas, si existe, y las estructuras de las
esporas y del micelio en general. Sin embargo, la manipulacin necesaria para
hacer la extensin desorganiza la conformacin del organismo, de forma que
las disposiciones especficas de que depende la identificacin, y en su caso el
diagnstico no son posibles. (Pelczar y Raid, 1966)

Un procedimiento mucho mejor para el estudio de los hongos es el cultivo en la

cmara de un portaobjetos, lo cual permite la manipulacin y observacin sin
alterar el crecimiento ni modificar la estructura y organizacin, que
permanecen intactas. Los portaobjetos con cmara de cultivo se encuentran en
el comercio, pero pueden prepararse satisfactoriamente con los materiales que
se disponen en todo laboratorio de microbiologa o botnica. Se prepara con un
portaobjetos corriente al que se fija un cubre por medio de parafina, cemento
dental, o la cera de un lpiz de marcar vidrios. Este adhesivo se dispone segn
los tres lados de un cuadrado en la parte central del porta y con la altura de 1 a
2 mm, calentando previamente al vidrio para que se fije bien. A continuacin
se coloca el cubreobjetos, tambin calentado, y se adapta firmemente,
ejerciendo una presin suave. Se funde el medio de cultivo de agar adecuado,
y cuando se ha enfriado a 50, se siembra con las esporas del hongo o el
material sospechoso de contenerlas, despus de mezclado, y todava fundido,
se deja fluir por el lado abierto de la cmara de cultivo. El porta de cultivo se
coloca en una placa Petri esterilizada que contiene en el fondo una rodaja de
papel de filtro humedecido, y despus de 24 a 72 horas de incubacin puede
examinarse al microscopio con objetivo de gran aumento sin alterar la
estructura del hongo. (Pelczar y Raid, 1966)

Identificacin de un hongo:

Un hongo se identifica en primer lugar por la morfologa macroscpica de la

colonia, color, textura y velocidad de crecimiento. Para observar la estructura
microscpica puede tomarse un pequeo fragmento de cultivo y montarlo
entre cubre y porta, en fresco o contrastado con un colorante para su posterior
observacin, lo que permitir confirmar la sospecha de hongo levaduriforme o
filamentoso basada en la morfologa colonial.

Los hongos filamentosos se identifican a nivel de gnero especie por la

morfologa del micelio, pero sobre todo por las caractersticas microscpicas de
sus esporas asexuales y los elementos que la originan. Para conseguir la
produccin de esporas a veces se requieren medios de cultivo especiales que
facilitan la esporulacin. Las estructuras reproductoras asexuadas
(conidiforos) son muy frgiles y para poder observarlas al microscopio sin
distorsionarlas o destruirlas se emplean tcnicas especiales (microcultivo), los
hongos no esporulados (micelio estril) son difcilmente identificables.

Morfologa

Los diferentes hongos parecen presentar estructuras completamente distintas,

pero no obstante, existe entre ellos gran semejanza fundamental. La diferencia
morfolgica principal entre los mohos y los dems hongos es que los aparatos
fructferos de los mohos y los dems hongos es que los aparatos fructferos de
los mohos son distintamente filamentosos, mientras que los hongos que no
pertenecen e este grupo, como las setas, forman estructuras frtiles carnosas.
Las levaduras se incluyen tambin entre los hongos y son, en general,
organismos monocelulares no filamentosos. El organismo de los mohos est
constituido por el micelio, que es un agregado de filamentos filiformes o hifas.
Estas hifas son de dos tipos funcionales: hifas vegetativas, que penetran en el
sustrato para absorber las sustancias nutritivas, e hifas frtiles (areas), que
producen las clulas reproductoras. El crecimiento de los mohos puede ser
apical, cuando es solo la clula terminal de la hifa la que se alarga y divide, o
intercalar, cuando se divide cualquiera de las clulas de la hifa. Las
ramificaciones de la hifa proceden de la formacin por gemacin de un
filamento lateral. (Pelczar y Raid, 1966)
Fisiologa y nutricin de los mohos

Los mohos estn adaptados fisiolgicamente a vivir en condiciones ms

severas que la mayor parte de los microorganismos. Pueden crecer, por
ejemplo, cobre substratos que contienen concentraciones de azcares que las
bacterias no toleran, porque los mohos no son tan sensibles como las bacterias
a las presiones osmticas elevadas. Soportan y crecen en concentraciones de
cido relativamente altas. Pueden resistir desviaciones del pH de 2,0 a 9,0,
aunque pH ptimo para la mayora de las especies se encuentran alrededor de
5,6. (Pelczar y Raid, 1966)

Aunque necesitan humedad para su crecimiento y pueden obtener agua tanto

de la atmsfera como del medio, los mohos sobreviven en ambientes
deshidratados que seran inhibitorios para la mayor parte de las bacterias.
Cuando el medio se deseca, los hongos forman esporas resistentes o pasan al
estado de latencia. (Pelczar y Raid, 1966)

Casi todos los mohos son aerobios estrictos, y su crecimiento se estimula con
una provisin abundante de oxgeno. Crecen sobre una amplia escala de
temperaturas, aunque la ptima para la mayora se encuentra entre los 22 a 30
C. La glucosa es una fuente de carbono aprovechable, prcticamente por
todos los mohos. Muchas especies utilizan tambin otros azcares,
especialmente sacarosa y maltosa, as como compuestos orgnicos de carbono
ms complejos, como el almidn y la celulosa. (Pelczar y Raid, 1966)

Como origen de nitrgeno, algunas especies pueden aprovechar el nitrgeno

inorgnico, en forma de sales amnicas o nitratos. En los medios de cultivo, el
nitrgeno orgnico se proporciona muy a menudo como peptona. Los mohos
son capaces de degradar y utilizar gran cantidad de substratos. Son tambin
muy activos en la transformacin de los elementos nutritivos en material
celular. Cuando crecen en un medio que contiene cantidades escasas de
nutrientes, pueden metabolizar y sintetizar como sustancias celulares la mayor
parte del substrato. (Pelczar y Raid, 1966)

Hongos en el medio ambiente:

El aire no es un medio en el que pueden desarrollarse los microorganismos

pero es el portador de aerosoles biolgicos como polvo, gotitas de agua y
otros, que pueden estar cargados de los diversos grupos de Microorganismos.

De las capas de aire se han encontrado esporas de hongos que proceden

principalmente del suelo, de la vegetacin y del mar. El aire es tambin el
medio de diseminacin de hongos saprfitos.

Gneros ms comunes encontrados en el aire segn Guzmn (1977).

Penicillium
 Aspergillus
Rhizopus
Mucor
Cladosporium
Rhodotorula
Candida
Hormodendrum

Hongos comunes en polvo domestico:

Cladosporium sp
Penicillum sp
Sistrotema brinkmannii
Botrytis cinrea
Aspergillus sp
Paecillomyces variotii
Stachybotrys atra
Phoma sp
Aureobasidium pullulans
Alternaria alternata
Epicoccum purpurascens
Geotrichum candidum
Ulocladium sp
Trichoderma viride
Trichoderma harzianum
Mucor sp

Cuestionario 1

Por qu razn algunas colonias aisladas del medio ambiente no

desarrollan esporas en el medio de cultivo realizado?

El medio de agar Sabouraud tiene un bajo pH de aproximadamente 5.6. Este

pH permite inhibir el crecimiento bacteriano que puede contaminar a la
muestra, priorizando al de hongos. Sin embargo no todos los hongos tienen la
capacidad de soportar la acidez del medio, estos hongos no resistentes no se
desarrollaran por completo o simplemente no se desarrollarn en absoluto.

Adems, porque la formacin de esporas est ntimamente relacionada con las

necesidades especficas de los distintos hongos para dispersarse a nuevos
ambientes apropiados. Por lo tanto si tienen los nutrientes necesarios no
necesitan formar estructuras de resistencia.

Otras razones por las cuales las esporas de los hongos no desarrollan puede
deberse a que no se cumplan con todas las condiciones para su desarrollo
como la temperatura, humedad, pH, tensin de oxgeno, etc.
BIBLIOGRAFA

STAINER. 1996. Microbiologa. Segunda Edicin. Editorial Revert.

Espaa.
GUZMM. 1977. Micologa Mdica. Instituto Nacional De Salud. Colombia.
WILLIAM. 1976. Isolation and Biological Activity of the Pigments of the
Mold Epicoccum nigrum, Journal of Agriculture anf Food Chemistry, Vol
24
TUTTOBELLO. 1969. Growth and pigmentation of Epicoccum nigrum in
submerged culture, Applied Microbiology Vol 17.
PELCZAR y RAID. 1966. Microbiologa. Segunda edicin Ediciones del
Castillo, S.A. Espaa

EJERCICIO N 2: CULTIVO EN CMARA HMEDA

Materiales

Placas petri con colonias de hongos aislados del medio ambiente

 Dispositivo para cultivo en Cmara Hmeda

Mechero de alcohol

Agua destilada estril

Procedimiento

1 Utilizando una aguja de Klle o estilete, pique una colonia y extraiga una
fraccin mnima de esporas o micelio.

2 En forma asptica deposite esa fraccin sobre la porcin de agar dispuesta
en el portaobjeto de la cmara hmeda.

3 Con ayuda de una pinza estril, cubra cuidadosamente la preparacin con la
lmina cubre objetos.

4 Humedezca el papel filtro de la placa con agua destilada estril.

5 Incube la placa a temperatura ambiente (20 25C).

6 Examine diariamente al microscopio la lmina sembrada hasta verificar el
completo desarrollo del hongo. Retire cada vez la lmina de cultivo de la
cmara hmeda y una vez realizada la observacin vulvala a su lugar
cuidando de mantener la humedad constante, si es necesario aada ms
agua al sistema.

7 Observe la germinacin de las esporas, el crecimiento y la ramificacin del

micelio, la aparicin de hifas diferenciadas y el desarrollo de las estructuras
de reproduccin.

8 Con ayuda de un Manual de Identificacin de Hongos determine el gnero

correspondiente.