Determina el pH

UNIVERSIDAD TELESUP - GUA PRCTICA DE BIOQUMICA
mm
BIOQUIMICA
UNIVERSIDAD
PRIVADA TELESUP
GUA DE PRCTICAS
DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
Coordinador: Luis Palma Garca.

Omar Ampudia Garca
Percy Ureta Sierra.
Cesar Andrs Tejada Valdivia.
Vctor Hugo Llaja Vergaray.
Osmar Adelmo Cuentas Daz
Gisela Oliveira Bardales
Oswaldo Martin Sanabria Salazar
Jos Sotelo
Roger Velsquez Ziga
Luis Aldo Augusto Moreno Grados
UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP

ASIGNATURA DE CARRERA
UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP
FACULTAD DE SALUD Y NUTRICIN
CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
RESOLUCIN N 287(14)-2014-UPTELESUP-CU
GUA DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA
INTRODUCCIN
El desarrollo del curso busca que el estudiante adquiera los procedimientos

experimentales ms ampliamente usados en bioqumica. Incluye anlisis de
macromolculas como carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos;
purificacin y caracterizacin de protenas, ensayos de enzimas y cintica
enzimtica, aislamiento y manipulacin de ADN y otros. El estudiante tambin
se familiarizar con los materiales y equipos ms frecuentemente usados en
las prcticas de bioqumica.
La bioqumica clnica es la especialidad que se ocupa del estudio de las

reacciones qumicas in vitro ocurridos en el organismo as como las patologas
presentados por los excesos o defectos de los analitos presentados en el
organismo o alteraciones de las reacciones bioqumicas.
Mediante la bioqumica clnica se podr conocer el significado clnico de las

determinaciones analticas efectuadas, asociando los parmetros obtenidos
gracias a tcnicas de bioqumica y de biologa molecular, lo cual permitir
conocer las diferentes enfermedades humanas, as como las pruebas estticas

y dinmicas ayudarn a evaluar la funcionalidad de diferentes glndulas,
rganos y tejidos humanos.
Por tanto, comprende el estudio de los procesos metablicos y moleculares en

relacin con los cambios tanto fisiolgicos como patolgicos o los inducidos por
acciones teraputicas. Para este estudio, la bioqumica clnica aplica los
mtodos, tcnicas y procedimientos de la qumica y bioqumica analticas con
el propsito de obtener la informacin til y participar en su interpretacin, para
la prevencin, diagnstico, pronstico y evolucin de la enfermedad, as como
de su respuesta al tratamiento.
La presente gua de prctica de la asignatura ha sido elaborada como base

orientadora para las prcticas clnicas de laboratorio en los alumnos de la
carrera de Medicina en la Facultad de Salud y Nutricin de la Universidad
Privada Telesup.
SEMANA 1:
PRACTICA N1
El pH EN LOS DIFERENTES FLUDOS BIOLGICOS
OBJETIVOS:
Determinar el pH de una solucin utilizando mtodos colorimtricos o

potenciomtricos.
Relacionar algunos de los conceptos y tcnicas aprendidos en clase
sobre reacciones qumicas en soluciones acuosas, aplicando tcnicas
de medicin de pH e identificacin de cidos y bases.
Aprender el funcionamiento del PH-metro en las muestras.
Distinguir por el color al que cambia una sustancia cuando se le agrega
el indicador natural si se trata de un cido, una base, o una sustancia
neutra.
Reconocer la capacidad tampn de aminocidos y protenas
Relacionar los conocimientos adquiridos del funcionamiento de las
soluciones tampn de importancia biolgica.
MARCO TERICO:
El pH es una medida utilizada por la qumica para evaluar la acidez o

alcalinidad de una sustancia por lo general en su estado lquido (tambin se
puede utilizar para gases). Se entiende por acidez la capacidad de una
sustancia para aportar a una disolucin acuosa, iones de hidrgeno,
hidrogeniones (H*). La alcalinidad o base aporta hidroxilo OH, por lo tanto, el
pH mide la concentracin de iones de hidrgeno de una sustancia.
Concepto de cido-base, ionizacin del agua, definicin de pH y pKa, ecuacin

de Henderson-Hassenbalch, capacidad tampn, valores de pKa de
aminocidos.
FUNDAMENTO TERICO:
El pH de una solucin acuosa se define como el logaritmo negativo de la

concentracin molar de hidrogeniones (H3O+). La determinacin de pH es muy
importante, ya que influencia de manera directa en la carga de la molcula y en
su actividad biolgica. El producto inico del agua es la base de la escala del
pH propuesta por Sorensen: kW= [H+] [OH -] = 10-14, pH = -log [H+].
La escala de pH permite expresar la concentracin de iones hidronio (protn

hidratado) comprendida entre 1M y 1X10-14 M, extremos que corresponden a
pH 0 y 14, la neutralidad es igual a pH 7.0. La manera ms conveniente y
exacta de determinar el pH es usando un electrodo de vidrio. Este electrodo
depende del intercambio de iones en las capas hidratadas formadas sobre la
superficie del electrodo de vidrio.
Generalmente se utiliza vidrio compuesto de aproximadamente 22% de Na2O,

6% de CaO y 72% de SiO2. Este vidrio muestra una especificidad hacia los
iones hidrgeno hasta un pH de cerca de 9; a valores mayores de pH, la
membrana se vuelve sensible a iones sodio y otros iones alcalinos. Esto se
evita empleando membranas construidas con vidrio en que el sodio se
remplaza por litio. El electrodo de vidrio debe mantenerse en agua destilada o
en solucin de KCl saturada para evitar el crecimiento de microrganismos. En
el electrodo de vidrio est presente un electrodo de referencia interno de
plata/cloruro de plata (Ag/AgCl) rodeado por un electrolito de HCl 0.1M. Este
electrodo de referencia interno produce un potencial estacionario. El electrodo
de vidrio acta como una batera cuyo voltaje depende la actividad del H+ de la
solucin en que est sumergida.
En el pHmetro, el electrodo de vidrio y el electrodo de referencia de calomel,

estn diseados para que a pH 7 d un potencial cero. Antes de medirse el pH
de una solucin desconocida el pHmetro se estandariza con soluciones
amortiguadoras de pH conocidos. El voltaje depende de la temperatura, por lo
que los potencimetros tienen un control de ajuste para la temperatura de la
solucin. Los electrodos de vidrio son frgiles y caros, por lo tanto, deben
manejarse con cuidado. Si se mide el pH de soluciones de protenas, se puede
formar una capa delgada en el electrodo la cual puede removerse sumergiendo
en HCl 0.1N, y despus limpiando con detergente diluido y enjuagando con
agua. Por otro lado, las soluciones amortiguadoras (buffers o soluciones
tampn), son aquellas capaces de mantener el pH dentro de un rango de
variacin mnima. Estn formadas generalmente por un cido dbil y su base
conjugada cuando se trabaja a pHs por debajo de 7. En el caso de pHs
alcalinos se usa una base dbil con su cido conjugado respectivo. La
eficiencia de una solucin reguladora est regida por dos factores: (a) La
concentracin total del regulador (suma de las concentraciones del cido dbil
y de la sal). Cuanto ms concentrado sea un regulador, ms tolerante ser a la
adicin de cidos o bases fuerte. (b) Por la relacin existente entre la base
conjugada y el cido. Cuando esta relacin es igual a 1, la solucin reguladora
tiene su mxima eficiencia.
Este valor se alcanza cuando el pH del regulador es igual al pKa de cido. La

E=ecuacin de Henderson y Hasselbalch, es muy til para la preparacin de
las soluciones amortiguadoras. (pH = pKa + log [sal]/ [cido]). El pH ms
adecuado para que una solucin amortiguadora funcione eficientemente, es
cuando se encuentra en un rango de pH igual a su pKa 1.
MATERIAL DE LABORATORIO:
20 tubos de ensayo13x100
Pipetas (5-10 mL)
Varillas de agitacin
3 vasos de precipitados (50 o 100 mL)

2 gradillas
10 pipetas 0.5ml
10 goteros
Cinta universal de pH
Muestra de fluido
Mandil largo con distintivo de la Universidad
Guantes
Gorro
EQUIPOS:
pHmtro
REACTIVOS:
Soluciones tampn de pH 3,5,7,9 y 10

Indicador universal
cido brico
Fosfato de sodio monobsico (NaH2PO4)
NaOH 0.1 M
cido ortofosfrico
HCl 0.1 M
cido actico glacial
Fosfato de sodio dibsico (Na2HPO4 .7H2O)
PROCEDIMIENTO:
Determinacin del pH mediante el mtodo potenciomtrico:
1. Preparacin de soluciones en un rango de pH de 3-10: Pesar 0.5 g de

cido brico y disolver en un 100mL de agua destilada, adicionar 560 L
de cido ortofosfrico y 480 L de cido actico glacial, completar hasta
200 mL de agua destilada. El pH de la solucin da alrededor de 1.9
A partir de esta solucin, a 25 mL de la solucin anterior adicionar NaOH

0.2 M, con ayuda de una bureta, para obtener diferentes pHs. Realizar
los clculos tericos del volumen de NaOH para obtener soluciones a pH
3,5, 7,9 y 10. Comparar estos datos con los obtenidos
experimentalmente.
2. Preparacin de una solucin tampn de fosfato 0.1M a pH 7.0
A) Pesar 2.78 g de fosfato de sodio monobsico (NaH2PO4) y disolver en

agua en un baln volumtrico de 100 mL, para obtener una solucin de
0.2M.
B) Pesar 5.365 g de fosfato de sodio dibsico (Na2HPO4 .7H2O) o

7.17g (Na2HPO4 .12H2O) y disolver en agua en un baln volumtrico de
100 mL, para obtener una solucin de 0.2M. Mezclar 9,75 mL de la
solucin A con 15,25 mL de la solucin B y diluir hasta 50 mL para
obtener una solucin tampn de fosfato 0.1M a pH=7.0.
3. La tabla 1 contiene los volmenes de las soluciones A y B necesarios

para obtener soluciones tampn de fosfato a diferentes pHs. Determinar
el pH terico y experimental.
4. Tabla 1. Relacin entre los volmenes de las soluciones A y B para
obtener diferentes pHs. A (mL) B(mL)
Determinacin del pH mediante el mtodo colorimtrico:
Preparacin de las soluciones con papel universal:
Pesar 0.05g de naranja de metilo, 0,15g de rojo de metilo, 0.30g de azul de

bromotimol, 0.35g de fenolftalena y el 66% de alcohol etlico un litro.
Escala estndar:
Preparar una batera de 8 tubos de ensayo y colocar en cada tubo de ensayo

1ml de las soluciones preparadas en un rango de pH de 3-10. Adicionar 5 gotas
de indicador universal y 9 ml de agua destilada.
Experimentacin:
Experimento 1: Determinacin del pH.
Tubo 1: 5 gotas de indicador+10 mL de agua
Tubo 2: 5 gotas de indicador+ 1 mL de solucin tampn pH 7.0 + 9 mL de

agua.
Tubo 3: 5 gotas de indicador+10 mL de agua
Tubo 4: 5 gotas de indicador+ 1 mL de solucin tampn pH 7.0 + 9 mL de

agua.
Determinar el pH de cada solucin as como la concentracin de

hidrogeniones y anotar los resultados en una tabla.
Experimento 2: Capacidad amortiguadora
Tubo 1: Adicionar una gota de NaOH 0.1M + 9 mL de agua destilada
Tubo 2: 9 mL de solucin amortiguadora a pH= 7.0+ una gota de NaOH 0.1M

*Observar, determinar el pH y anotar en la tabla.
Soplar por 15 segundos en el tubo 1
Y por un minuto el tubo 2. Observar el cambio de color, determinar el pH

(pHmetro) y anotar en la tabla.
Tubo 3: 9 mL de agua destilada+ 2 gotas de HCl 0.1M
Tubo 4: 9 mL de solucin amortiguadora a pH= 7.0 + 2 gotas de HCl 0.1M
Observar, determinar el pH y anotar en una tabla.
Continuar adicionando gota a gota HCl 0.1M al tubo 4 hasta obtener el mismo
color del tubo 3. Determinar el nmero de gotas. Qu pueden concluir?
CUESTIONARIO:
1. Qu es el PH y por qu es importante? Explique

2. De acuerdo al nivel de pH que fluido biolgico visto en la prctica
asociada a patologas puede usted describir. Explique
EVALUACIN:
La evaluacin ser permanente. se aplicar evaluacin constante. Al final del

ciclo las notas se harn entrega al responsable del curso.
BIBLIOGRAFIA:
1. Gmez J. Bioqumica preguntas y respuestas. Vol 1. 1 edicin. Lima.

Hetagrfica y servicios; 2014.
2. VILLACENCIO. M. Bioqumica, tomos I y II. Ed. Concytec. Lima-Per. 2000

3. LOZANO, J. GALINDO, D, Bioqumica para ciencias de la salud, Ed

interamericana, McGraw-Hill. 1996
4. Devlin M, Bioqumica Edit. Reverte Espaa 2000
5. MURRIA, R. MAYES P, GRANNER`D RODWELL V: Bioqumica de Harper.

12av edicin. Ed el manual Ed el manual moderno Mxico 2004
6. MONTGOMERY, R, CONWAY, T, SPECTOR, A: Bioqumica casos y textos

6 edicin. Ed. Harcourt Brace 1999 6. ABBAS, A. LIGHT, A. POBOES, J;
inmunolgica celular y molecular 4ta edicin. Ed. McGraw-Hill.2002
SEMANA 2:
PRACTICA N 2
FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS
OBJETIVOS:
Determinar la concentracin e sustrato en la cual la enzima alcanza su

velocidad.
Entender el significado de los parmetros cinticos Vmax y Km.
Determinar el efecto de un inhibidor en la actividad del lactato
deshidrogenasa.
Analizar el efecto de un inhibidor sobre los parmetros cinticos de la
enzima.
MARCO TERICO:
La enzima como unidad fundamental de vida. Cada clula y cada tejido tienen
su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado
bioqumico en la base de la cual estn las enzimas que tienen el poder de
catalizar, facilitar y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. Los
propios genes son reguladores de la produccin de las enzimas; por tanto,
genes y enzimas pueden ser considerados como las unidades fundamentales
de la vida
Cocina elctrica
2 gradillas
10 pipetas 0.5mL y 10 mL
2 vasos de precipitacin de 100 y 400 mL
2 morteros
10 tubos de ensayo
1 hoja de bistur
REACTIVOS:
HNO3 - 80% (concentracin en 80%)

NaOH - 80% (concentracin en 80%)
H2O2
Etanol
Agua destilada
INSUMOS:
250 g. de hgado
Papas
Apio
PROCEDIMIENTO:
1. Cocer, lavar y cocer las muestras: la papa, el apio y e hgado.

2. En 5 tubos distintos se colocar cada insumo requerido.
3. Se colocar luego los reactivos correspondientes para cada tubo
sealado por el docente.
4. Observar y tomar nota para los resultados correspondientes.
CONCLUSIN:
Con la prctica de laboratorio realizada se pudo sacar la siguiente

conclusin:
Los peroxisomas poseen una gran cantidad de enzimas entre ellas la catalasa,
la cual degrada a sustancias toxicas como el H2O2 (principal componente del
agua oxigenada) convirtindolos en H2O y O2.
CUESTIONARIO:
1. En cul de los tubos hubo mayor liberacin de gas?

2. Por qu en las muestras de hgado no se destruyeron las enzimas?
3. Qu efecto podra tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento
de las enzimas?
4. Conoce alguna condicin mdica que se deba al mal funcionamiento de
una enzima?
EVALUACIN:
La evaluacin ser permanente, se aplicar evaluacin constante. Al final del

ciclo las notas se harn entrega al responsable del curso.
BIBLIOGRAFIA:
1. Gmez J. Bioqumica preguntas y respuestas. Vol 1. 1 edicin. Lima. Heta

grfica y servicios; 2014.
2. VILLACENCIO. M. Bioqumica, tomos I y II. Ed. Concytec. Lima-Per. 2000
3. LOZANO, J. GALINDO, D, Bioqumica para ciencias de la salud, Ed

4. Devlin M, Bioqumica Edit. Reverte Espaa 2000
5. MURRIA, R. MAYES P, GRANNER`D RODWELL V: Bioqumica de Harper.

12av edicin. Ed el manual Ed el manual moderno Mxico 2004
6. MONTGOMERY, R, CONWAY, T, SPECTOR, A: Bioqumica casos y textos

6 edicin. Ed. Harcourt Brace 1999 6. ABBAS, A. LIGHT, A. POBOES, J;
inmunolgica celular y molecular 4ta edicin. Ed. McGraw-Hill.2002
SEMANA 3:
PRACTICA N 3
RECONOCIMIENTO DEL DNA
INTRODUCCIN:
La extraccin de ADN requiere hacer varias series de etapas bsicas. En

primer lugar, tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica
para poder acceder al ncleo de la clula. Despus debe romperse igual la
membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo, hay que proteger el ADN
de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se
precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en
alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua.
Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa. La sal
evita la unin de las protenas al ADN.
OBJETIVO:
En esta prctica realizaremos la extraccin del ADN de clulas animales

poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de
enrollamiento, que permite el empaquetamiento en el ncleo celular de
largusimas cadenas de esta molcula.
Pipeta
Alcohol 96 grados
Mortero o batidor
Varilla de vidrio
Solucin de NaCl - 2M
Embudo
Probeta
Vaso de precipitado
INSUMOS:
Tejido animal (rganos linfoides o Hgado de pollo)

Trozo de tela para filtrar
Arena
Detergente tipo lavavajilla
PROCEDIMIENTO:
1. Triturar en frio la muestra de rganos linfoides o Hgado de pollo en el

mortero junto con la arena o mediante la batidora para homogenizar el
tejido.
2. Aadir unos 50 ml de agua destilada o, en su defecto, agua mineral y
remover suavemente, pero mezclando a fondo.
3. Filtrar varias veces el resultado a travs de un pedazo de tela.
4. Aadir al filtrado resultante un volumen igual de solucin de NaCl 2M.
5. Aadir 1 ml de detergente y remover suavemente sin hacer espuma.
6. Con los pasos anteriores hemos conseguido tener el ADN libre en la
disolucin acuosa.
7. Ahora se aaden unos 50 ml de alcohol muy frio.
8. El ADN ira apareciendo poco a poco en la interface agua-alcohol en
forma de grumos blancos.
9. Se puede ahora tomar una muestra de ADN recogido.
PIPETA
TUBO DE ENSAYO
INTERFASE
HOMOGENIZADO
MUESTRA
VEGETAL
El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que,

entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se
realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden
que se unan al ADN.
Para realizar una extraccin pura ocurrir que el detergente contiene lauril
sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y protenas. ste
acta de la misma manera en el protocolo de extraccin de ADN, separando
las grasas (lpidos) y las protenas que constituyen las membranas que rodean
la clula y el ncleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es
liberado de la clula.
BIBLIOGRAFIA:
Nelson, D.L., Cox, M. M. Lehninger Principios de Bioqumica. Ediciones

Omega. Captulo 3 (2006).
Lewin, B. Genes VI. Oxford: Oxford University Press, 1997. Pg: 1260.
SEMANA 4:
PRACTICA N 4
ESPECTROFOTOMETRA: CUANTIFICACIN
INTRODUCCIN:
La espectrofotometra es una parte de la qumica que se encarga de la

cuantificacin de la luz en base a los principios de absorbancia y transmitancia.
Es utilizado para cuantificar las concentraciones de los analitos y estn en
funcin a la concentracin de la muestra y al color final de la reaccin.
Todas las sustancias absorben luz en alguna regin del espectro

electromagntico (VIS, UV, IR, etc.).
La absorcin de luz depende de la estructura qumica del compuesto

absorbente, y en especial de ciertos grupos funcionales, de modo que es
posible identificar un compuesto por medio de las caractersticas de su
espectro de absorcin.
A NAD+
NADH
260 300 340 nm
Figura 1. Espectros de absorcin del NAD+ y del NADH.

OBJETIVO:
Cuantificar protenas ocupando tcnicas espectroscpicas como el mtodo de

Lowry y el mtodo de Biuret.
MARCO TERICO:
La espectrofotometra es una tcnica analtica que nos ayuda a determinar la

concentracin de un compuesto en una solucin, esta se basa en la cantidad
de radiaciones electromagnticas que absorben las molculas y a su vez la
cantidad de luz absorbida depende de la forma lineal de la concentracin. Para
tomar estas medidas se utiliza un espectrofotmetro en el cual se puede
seleccionar la luz de onda que pasa por una solucin y la cantidad de luz
absorbida por la misma, Las longitudes de onda de las radiaciones que una
molcula puede absorber recaen en la estructura atmica y condiciones del
medio (p%, temperatura, fuerza inica, constante di-elctrica!. Las molculas
son capaces de absorber energa luminosa y almacenarla en forma de energa
interna, esto permite realizar ciclos vitales como la fotosntesis. La absorcin
de luz de cada molcula provoca un salto desde un estado fundamental o basal
a uno e& citado en este punto la molcula libera la energa absorbida hasta el
estado energtico fundamental. Cuando un rayo de luz de longitud de onda
determinada de intensidad incide perpendicularmente en una solucin que
absorbe luz (cromo foro, el compuesto absorber una parte de la radiacin
insidente y dejara pasar el resto.
lo= longitud de onda,
la = radiacin absorbida y
t= lo que la molcula dejara pasar
lo = la + t
La transmitancia de un sustancia en una solucin es la relacin de la luz que

llega al detector una vez atravesada la muestra y la cantidad que insidio en
ella./#- transmitancia nos da la medida de la intensidad incidente y
transmitida. La absorbancia nos muestra la cantidad de luz absorbida por la
muestra.
A= Log 1/T
A= - Log T
Ley de Lambert-Beer
Lambert y Beer demostraron que la absorbancia (A), tambin llamada densidad

ptica (D.O.) de una sustancia es directamente proporcional a la concentracin
(c) de la sustancia absorbente, la longitud del paso de luz (l) (espesor de la
solucin) y una constante denominada coeficiente de extincin o coeficiente de
absorcin (a), que es caracterstico para cada sustancia a una longitud de onda
() determinada.
A = a l c Ecuacin 1.1
Para medir la absorbancia de una sustancia se utiliza el espectrofotmetro,

instrumento destinado a medir la absorcin por especies inorgnicas y
orgnicas de luz monocromtica en la regin ultravioleta / visible del espectro.
Los espectrofotmetros dan la lectura directa de la absorbancia (A) o bien, el

porcentaje de transmitancia (%T). La relacin entre ambos es:
A = 2 - log % T Ecuacin 1.2
Anlisis espectrofotomtrico:
Todo mtodo espectrofotomtrico se basa en la comparacin de la absorbancia

de una sustancia de concentracin desconocida con la de una solucin de la
misma sustancia cuya concentracin se conoce y a la cual se denomina
solucin patrn o estndar.
La absorbancia de una solucin es la resultante de la absorbancia del soluto

cuya concentracin se desea conocer y la de otros componentes del sistema
(solventes, reactivos) que absorben tambin a esa longitud de onda. Estos
compuestos se denominan interferencias. Se debe descartar la absorbancia de
las interferencias, para ello es necesario hacer siempre una muestra que
contenga todos los componentes del sistema menos aquel que se desea medir.
Esta muestra se llama blanco y la absorbancia de ste debe restarse a las
muestras problema y a los patrones, o bien, con el blanco se calibra el
instrumento a absorbancia igual a 0, o sea 100% de transmisin.
Curva de Calibrado:
Se obtiene la curva de calibrado midiendo la absorbancia de una serie de

soluciones de concentraciones conocidas de una misma sustancia tratadas con
un mismo mtodo y medidas a igual longitud de onda en el mismo instrumento.
Para medir la concentracin de una sustancia se elige por lo general, la regin
de mxima absorcin del espectro, denominada longitud de onda analtica.
El resultado se expresa en una grfica de la absorbancia (A) en funcin de la

concentracin (c). Si el sistema sigue la ley de Lambert-Beer se obtiene una
lnea recta que pasa cerca del origen; de cuya pendiente se puede obtener el
coeficiente de extincin (a) (Ecuacin 1.3).
Es posible determinar grficamente la concentracin de una muestra

desconocida (cx) midiendo la absorbancia de la muestra (Ax) e interpolando en
la curva de calibrado.
Normalmente la concentracin se estima, a partir de la ecuacin de la curva de

calibrado.
A = al c + Ao Ecuacin 1.3
Donde, A es la variable dependiente (y), la pendiente es igual a (a l), c es la

variable controlada (x) y Ao es el intercepto.
Las unidades del coeficiente de extincin dependen de las unidades de

concentracin y de longitud del paso de luz. Generalmente la unidad de
longitud es el centmetro y la longitud del paso de luz es 1,0 cm. Si las
unidades de concentracin son moles L-1 o milimoles L-1, se hace referencia al
coeficiente de extincin molar ( o milimolar, respectivamente (Ecuacin 1.4).
Si la concentracin est expresada en g/100 mL (% peso / volumen) se obtiene
el coeficiente de extincin especfico (E1%).
A = l c + Ao Ecuacin 1.4
Cuando la concentracin de la sustancia y la longitud del paso de la luz se

hacen iguales a la unidad, la absorbancia corresponde al coeficiente de
extincin. Si se midiera la absorbancia de una solucin 1,0 M de una sustancia
colocada en una celda de 1,0 cm se obtendra el coeficiente de extincin molar
(). Si la concentracin fuera 1,0 g/100 mL se obtendra el coeficiente de
extincin especfico (E1%). Estos coeficientes son una propiedad especfica de
las partculas absorbentes y su valor es referido a un determinado solvente y a
una determinada longitud de onda.
Cuando se conoce por bibliografa el coeficiente de extincin de un compuesto

(E1%), o ste es estimado experimentalmente, midiendo la absorbancia (AX)
de una muestra del compuesto de concentracin desconocida (c X) se puede
calcular su concentracin (ecuacin 1.5).
A X Ao
c Ecuacin 1.5
x
l
En esta forma se obtiene la concentracin (cf) de la muestra problema en la

cubeta, para obtener la concentracin original (ci) se debe considerar las
diluciones correspondientes al ensayo usado para cuantificar (Ecuacin 1,6).
vi * ci vf * cf Ecuacin 1.6
Frmula del Estndar:
La concentracin desconocida puede determinarse sobre la base de un slo

estndar, de acuerdo a la siguiente ecuacin:

A c vi AMP CS vi Ecuacin 1.7
S mp
vf mp vf s
As y Amp son las absorbancias del estndar y muestra problema,

respectivamente.
vi corresponde al volumen de la solucin estndar o de la muestra problema

ocupado en el ensayo para cuantificar.
vf corresponde al volumen final del ensayo ocupado para cuantificar.
cs y cmp corresponden a las concentraciones de las soluciones estndar y

muestra problema respectivamente. Ambas concentraciones se refieren a las
originales sin la dilucin propia del ensayo ocupado para cuantificar.
Unidades:
Absorbancia (A): Adimensional (sin unidades)
Longitud (l): cm
Concentracin (c):
Molar: milimolar, g/100 mL
Coeficiente de extincin (a)
Molar ()

M-1 cm-1
L moles-1 cm-1
mL milimoles-1 cm-1
Milimolar ()

mM -1 cm-1

L mmoles-1 cm-1

mL moles-1 cm-1
Especfico (E1%)
dL g-1 cm -1
(g/100mL) 1 cm-1
Cuantificacin de protenas de solucin:
En general, no hay un mtodo completamente satisfactorio para medir la

concentracin de protenas en una muestra. La eleccin del mtodo depende
de la naturaleza de la protena, de los otros componentes de la muestra
problema, de la rapidez y sensibilidad deseada. En este trabajo prctico se
vern dos de los mtodos que se usan corrientemente para medir
concentraciones de protenas, Biuret y Lowry.
Mtodo Biuret
Los compuestos que tienen dos o ms uniones peptdicas (pptidos y

protenas) dan color prpura caracterstico cuando se tratan con una solucin
alcalina de sulfato de cobre diluida. El color se debe aparentemente al complejo
de coordinacin del Cu con cuatro tomos de nitrgeno, que participan en el
enlace peptdico. Este mtodo es reproducible, pero requiere una alta
concentracin de protenas para la formacin de color. La sensibilidad del
mtodo es de 0,25 200 mg de protenas por mL de solucin.
Mtodo de Lowry
Los aminocidos pueden dar reacciones caractersticas con ciertos reactivos

de acuerdo a la naturaleza de sus cadenas laterales. Muchas reacciones de
este tipo se caracterizan por la formacin de productos coloreados. La tirosina,
por ejemplo, debido a su grupo hidroxifenilo, reacciona con una solucin de
cido fosfomolbdico tungstico en un medio cprico alcalino, produciendo una
coloracin azul, la cual absorbe a 650 nm.
Este mtodo llamado originalmente Foln Ciocalteau debido a sus estudios

iniciales ha sido desarrollado y transformado, por Lowry y colaboradores, en un
procedimiento muy sensible que ha sido ampliamente usado para la
determinacin cuantitativa de protenas en una muestra.
En el mtodo de Lowry la muestra se trata con el reactivo de Folin Ciocalteau

modificado. Si hay protenas presentes se produce una coloracin azul debido
principalmente a la presencia de residuos de tirosina y triptofano en las
protenas.
Se mide la absorbancia a 650 nm y se compara con las medidas obtenidas de

soluciones de protenas de concentracin conocida (patrn), tratadas de forma
idntica.
Sin embargo, debido a las diferencias en el contenido aminoacdico de una

protena a otra, cantidades iguales de protenas distintas, producen coloracin
diferente con el reactivo de Lowry, motivo por el cual no es posible obtener la

concentracin real de una muestra de protena por este mtodo, an as,
cuando se requiere una estimacin relativa de la concentracin de protenas,
este mtodo es ampliamente satisfactorio, debido a su alta sensibilidad.
Sensibilidad 1 200 g de protenas por ensayo.
16 tubos de ensayo
2 gradillas
2 pipetas graduadas de 5 mL
2 pipetas graduadas de 1 mL
1 pisceta.
1 vaso precipitado de 250 mL
1 vaso precipitado de 100 mL
EQUIPOS:
Espectrofotmetro (visible)
Celdas para espectrofotmetro
1 bao termostatizado
1 termmetro.
REACTIVOS:
Reactivo de Biuret:
Solucin estndar de ovoalbmina al 5% en NaCl 9%.
Reactivo de cobre alcalino (RCA).
Reactivo Folin (RF)

MUESTRAS EN ESTUDIO:
Muestra de orina Ovoalbmina
Albmina de suero de bovino (BSA).
PROCEDIMIENTO:
Mtodo de Biuret:
De acuerdo a la tabla 1.1:
Prepare una batera de tubos enumerados.
Agregue el volumen indicado de la solucin de ovoalbmina estndar o

muestra problema con una pipeta graduada de 1 mL.
Agregue el volumen indicado de agua con una pipeta graduada de 1 mL.
Agregue 4,0 mL del reactivo de Biuret con una pipeta graduada de 5 mL.
TABLA 1.1
Ovoalbmina R.
Biuret Absorbancia Concentracin
Tubo (mL) H2O
5% MP (mL) (mL) %
1B 0,0 --- 1,0 4,0
2S 1,0 --- 0,0 4,0
3S 0,8 --- 0,2 4,0
4S 0,6 --- 0,4 4,0
5S 0,4 --- 0,6 4,0

6S 0,2 --- 0,8 4,0
7 MP --- 1,0 MP1 0,0 4,0
8 MP --- 1,0 MP2 0,0 4,0
9 MP --- 1,0 MP3 0,0 4,0
Agite y espere 20 minutos a temperatura ambiente para la formacin del

complejo coloreado.
Mida la absorbancia de los tubos en un espectrofotmetro a 540 nm, previa

calibracin del equipo con el blanco.
De acuerdo a los datos:
Calcule la concentracin de la ovoalbmina en los tubos (2S 6S)
Complete la tabla con los valores de absorbancia y concentracin.
Obtenga la ecuacin de la recta y el coeficiente de regresin por regresin

lineal.
Construya una grfica absorbancia versus concentracin, trace la recta

obtenida por regresin.
Calcule las concentraciones de las muestras problemas en las cubetas

mediante la ecuacin 1.5.
Calcule las concentraciones de las muestras problemas en las soluciones

originales considerando las diluciones realizadas en el ensayo
(Ecuacin1.6). Recuerde que cx (Ecuacin 1.5) corresponde a cf (Ecuacin
1.6).
Mtodo de Lowry:
De acuerdo a la tabla 1.2:
Prepare una batera de tubos enumerados.
Agregue los volmenes indicados de la solucin de seroalbmina de bovino

(BSA) estndar o muestra problema con una pipeta graduada de 1 mL.
Agregue los volmenes indicados de agua con una pipeta graduada de 1

mL.
Agregue 1,0 mL del reactivo alcalino (RCA) con una pipeta de 1 mL. Espere
10 minutos exactos
Despus de los 10 minutos, agregue 4,0 mL del reactivo de Folin con una
pipeta de 5 mL y mezcle.
Caliente los tubos por 5 minutos exactos a 55 C en el bao termostatizado.
Enfre y lea en el espectrofotmetro a 650 nm, previa calibracin con el

blanco.
TABLA 1.2
BSA R.F. A Conc.
Tubo (mL) H2O R.C.A.
0,4 MP (mL) (mL) (mL) %

mg/mL
1B ---- --- 1,0 1,0 4,0
2S 0,1 --- 0,9 1,0 4,0
3S 0.2 --- 0,8 1,0 4,0

4S 0,3 --- 0,7 1,0 4,0
5S 0,4 --- 0,6 1,0 4,0
6S 0,5 --- 0,5 1,0 4,0
7MP --- 0,5 MP1 0,5 1,0 4,0
8MP --- 0,5 MP2 0,5 1,0 4,0
9MP --- 0,5 MP3 0,5 1,0 4,0
De acuerdo a los datos:
Calcule la concentracin de BSA en los tubos (2S 6S).
Complete la tabla con los valores de absorbancia y concentracin.
Obtenga la ecuacin de la recta por regresin lineal y el coeficiente de

regresin.
Construya una grfica absorbancia versus concentracin, trace la recta

obtenida por regresin.
Calcule las concentraciones de las muestras problemas en la cubeta

mediante la ecuacin 1.5.
Calcule las concentraciones de las muestras problemas en las soluciones

originales considerando las diluciones realizadas en el ensayo (Ecuacin
1.6).
BIBLIOGRAFA:
Bohinski Robert, 1991, Bioqumica, 5 Edicin, Addison-Wesley,

Iberoamericana.
D Skoog, D. West y F. Holler, 1995, Qumica Analtica, 6 Edicin.
D.Bozimowsk, J.D. Artiss and B. Zak, 1983, Spectrophotometric comparison

of several reactions used for cerebrospinal fluid protein determinations.
Microchemical Journal 23, 285-293.
SEMANA 5:
PRACTICA N 5
DETERMINACION DE LA GLICOSURIA
INTRODUCCION:
Es una prueba de laboratorio de tipo cualitativa o semicuantitativa que permite

determinar la presencia de glucosa en orina. Una de las caractersticas de esta
prueba es de que va a resultar positiva cuando las concentraciones de glucosa
en sangre va a ser mayores de 160 mg/dl u 180 mg/dl para que glucosa que se
encuentra en la sangre aparezca en la orina (Umbral de Glucosa).
Considerando de que la glucosa 120 determina que el paciente es diabtico
y como tal va a producir trastorno en el organismo ya que la diabetes es
considerado una enfermedad degenerativa de muchos rganos nobles.
OBJETIVOS:
1. Que el estudiante reconozca la importancia el detectar la presencia de

glucosa en orina.
2. Que reconozca las diferentes patologas que pueden presentarse por

encontrar la presencia de glucosa en orina.
3. Que sea capaz de detectar la presencia del analito a partir de una

muestra en orina.
MARCO TERICO:
La glucosa se determina habitualmente en un anlisis de sangre (glucemia) o a

partir de una muestra de orina (glucosuria).
La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se
obtiene fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena
principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en el
mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia).
La determinacin de glucosa en orina (glucosuria), suele formar parte del

anlisis de orina rutinario. En condiciones normales, no debera haber
glucosa en la orina, pero cuando la cantidad en sangre supera un determinado
lmite, empieza a ser eliminada a travs del rin con la orina.
Cuanta ms cantidad de glucosa haya en la sangre, ms se eliminar por la
orina.
La determinacin en orina es menos exacta y menos til que la determinacin
en sangre.
El examen completo de orina (ECO) es una prueba de gran importancia para el

clnico y para el paciente mismo. El uroanlisis es algo ms que la simple
impregnacin de la tira y la observacin del sedimento, es la aplicacin de
todos nuestros conocimientos y el empleo de todos nuestros recursos dentro
del laboratorio para proporcionar al mdico y al paciente resultados de y
con calidad.
El anlisis de orina realizado en el laboratorio clnico, puede proporcionar

una informacin amplia, variada y til del rin de un individuo y de las
enfermedades sistmicas que pueden afectar este rgano excretor. Por medio
de este anlisis, es posible elucidar tanto desrdenes estructurales
(anatmicos) como desrdenes funcionales (fisiolgicos) del rin y del tracto
urinario inferior, sus causas, y su pronstico. La realizacin cuidadosa del
examen de orina, por parte del laboratorio, ayuda al diagnstico diferencial de
numerosas enfermedades del sistema urinario. Usualmente, los datos de
laboratorio obtenidos por medio de este anlisis, se logran sin dolor, dao o
tensin para el paciente.
En la actualidad, se practican tres tipos de exmenes de orina: anlisis de orina

por tira hmeda, empleado generalmente por los mdicos en sus consultorios y
por los pacientes en sus casas; tamizaje de anlisis hmedo de la orina,
comnmente llamado anlisis bsico o rutinario de orina; y citodiagnstico de la
orina, que es una evaluacin citolgica especializada del sedimento urinario
(ECO) que correlaciona con los anlisis realizados por medio de la tira reactiva.
El anlisis de orina realizado con la tira hmeda es un ensayo de primera etapa
para la deteccin y monitoreo de pacientes con anormalidades qumicas. El

anlisis de orina hmedo o rutinario, proporciona, a costos razonables, un
tamizaje adecuado para la deteccin de anormalidades qumicas y
morfolgicas presentes en la orina.
La Glucosa es una sustancia reductora, la cual reduce al sulfato cprico
(color azul), de la solucin de Benedict, a xido cprico (color rojo) que es
insoluble.
Tubos de ensayo de 13 x 100

Pinzas de metal
Pipetas de 5 ml
Mechero
Encendedor
Pipeta automtica de 1 ml
Punteras de color azul para 1 ml
EQUIPOS:
Bao Mara
REACTIVOS:
Reactivo Benedict
Agua destilada
Tiras reactivas para determinacin de glucosa en orina
Muestra de orina
PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO-1:
1. Pipetear en un tubo 2 cc de Reactivo de Benedict y 500 ul de orina
2. Aplicar a bao mara y esperar que cambie de color el contenido del

tubo o exponer al mechero usando pinzas metlicas y observar el
cambio de color.
3. Determinar el resultado a partir del color final producto de la reaccin
quimica.
PROCEDIMIENTO 2:
1. Insertar la tira en el recipiente con orina
2. Comparar los colores patrones de la caja de la tirilla con el color que se
torn. Observar la Glucosa y la Densidad.
VALORES DE REFERENCIA:
La densidad normal de la orina es de 1.010 a 1.030; en orina de diabticos es
hasta 1.050 de concentracin.
Resultados de la reaccin de Benedict de acuerdo color de la sustancia
Resultado de Color Cantidad

Benedict
Negativo Azul claro o verdoso No Presenta
Trazas + Verde precipitado Menor a 100 mg%
Glucosuria ++ Verde claro De 100 a 500 mg%
Positivo Amarillo precipitado intenso 500 a 1000 mg%
Positivo +++ Anaranjado
1400 a 2000 mg%
Positivo ++++ Rojizo Mayor a 2000 mg%
Fundamento de la Reaccin de Benedict:

La glucosa presente en la orina reduce al sulfato de cobre presente en el
reactivo de Benedict el ion cprico a ion cuproso produciendo los diferentes
cambios de coloracin la cual est en funcin a la concentracin del azcar en

la orina.
FUNDAMENTO EN LAS TIRAS REACTIVAS:

Las tiras de orina basan la deteccin de glucosa en la reaccin enzimtica de
la glucosa oxidasa. Esta enzima cataliza la oxidacin de la glucosa por el
oxgeno ambiental para formar D-glucono--lactona y perxido de hidrgeno.
En una segunda reaccin acoplada, mediada por una
enzima peroxidasa cataliza la reaccin entre el perxido y un cromgeno (una
sustancia que adquiere color luego de una reaccin qumica), para formar un
compuesto coloreado que indica la concentracin de glucosa.
1)Catalizada por Glucosa Oxidasa
Glucosa + O2 D-glucono--lactona + H2O2
2)Catalizada por peroxidasa
H2O2 + Cromgeno Cromgeno oxidado (coloreado) + H2O
BIBLIOGRAFA:
Davida Caadas Bustos (s.f). Glucosuria Renal. Recuperado
de: http://www.mapfre.com/salud/es/cinformativo/glucosaria-renal.shtml
Graff, Laurine (1987). 2. Anlisis de orina - Atlas Color (1 edicin). Ed.

Mdica Panamericana. p. 59. ISBN 950-06-0841-3. Consultado el 14 de marzo
de 2012
ENSAYOS PARA EL RECONOCIMIENTO DE ALDEHDOS Y CETONAS

Strasinger, Susan K.; Di Lorenzo Schaub, Marjorie (2008). 4. Anlisis de
orina y de los lquidos corporales (5 edicin). Editorial panamericana. pp. 46-
47. ISBN 978-950-06-1938-7. Consultado el 14 de marzo de 2012.
SEMANA 6:
PRCTICA 6
DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SUERO
INTRODUCCION:
Con esta prctica se busca determinar la concentracin de glucosa en una

muestra de suero, utilizando un reactivo para determinacin de glucosa
mediante el mtodo enzimtico.
La glucosa es el glcido principal del organismo que necesita la clula para

producir ATP que es la sustancia energtica que necesita todo ser vivo para
realizar sus funciones por lo que todos los otros azucares son convertidos en
glucosa despus de su digestin y absorcin.
Los niveles de glucosa en sangre se mantienen en la sangre entre unos lmites

muy estrechos y constantes gracias a la accin de dos hormonas: insulina y
glucagn. En general, dichos valores nunca deben sobrepasar los 110 mg/dl,
por grande que sea la ingestin de hidratos de carbono, ni descender por
debajo de 70 mg/dl en condiciones fisiolgicas.
Interpretacin de los datos de laboratorio
-Hiperglucemia: Son elevaciones de la glucosa en sangre que cursan con

valores de glucosa mayores a 120 mg/dl.
- Diabetes mellitus: sndrome caracterizado por un aumento en los niveles

fisiolgicos de la glucosa y que cursa de manera caracterstica con polifagia,
poliuria y polidipsia. Durante las clases tericas se explicar detalladamente
las pruebas de laboratorio que llevan a su diagnstico.
- Disminucin de la tolerancia a la glucosa: glucemia basal inferior a 140

mg/dl y, a las dos horas de sobrecarga oral de glucosa, valores
intermedios entre los fisiolgicos y los tpicos de la diabetes.
-Hipoglucemia: hablamos de hipoglucemia cuando los niveles de glucosa en

sangre se sitan entre 40 y 45 mg/dl. La hipoglucemia puede presentarse en
ayunas, o bien ser reactiva a la ingestin de alimentos o a la toma de
medicamentos.
OBJETIVOS:
Mediante esta prctica se busca de que el alumno sea capaz de:
1. Reconocer la importancia que tiene la glucosa en el organismo y las

diferentes patologas que se presenta por una alteracin en el
metabolismo del analito.
2. Que capaz de identificar mediante prueba de laboratorio la presencia
del analito (Glucosa).
3. Identificar la presencia del analito y su aplicacin en la clnica.
Reconocer que pruebas auxiliares ayudan al diagnstico del
paciente.
MARCO TEORICO:
La glicemia es la cantidad de glucosa contenida en la sangre; generalmente se

expresa en mligramos por ml de sangre. La glucosa es indispensable para el
buen funcionamiento del organismo porque constituye el principal sustrato de
energa (ATP) del organismo y es fcilmente disponible. Una parte de la
glucosa en la sangre se transforma en glucgeno, que constituye una forma de
almacenamiento de la glucosa cuando hay un exceso de glucosa. El glucgeno
se almacena principalmente en el hgado y se moviliza en cualquier momento
para compensar una glucosa demasiado baja (hipoglucemia).
Todos estos mecanismos complejos estn regulados por

varias hormonas entre las que destaca particularmente la insulina; sta es la
principal hormona y su funcin es la disminucin de la glucosa en sangre por
diferentes mecanismos cuando sta est demasiado alta. La glicemia se mide
en una prueba de sangre realizada en ayunas y sus valores normales estn
entre 70 y 110 mg/dl. Se habla de hipoglucemia por debajo de estos valores y

de hiperglicemia cuando est por encima. Si el valor est comprendido entre
110 y 125 mg/dl se sospecha un problema de intolerancia a la glucosa.
Si es superior a 126 mg/dl despus de un control adicional se habla

de diabetes, que es una patologa debida a un problema a nivel de la insulina.
La glucosa es un monosacrido con frmula molecular C6H12O6. Todos los

azcares consumidos por el organismo son transformados en glucosa pero
cuando existen patologas en el organismo con relacin al metabolismo de la
glucosa se presentan diferentes enfermedades. Una de las enfermedades
conocidas por el mal metabolismo de la glucosa es la llamada Diabetes Mellitus
que puede ser de tipo 1 o de tipo 2.
Existen factores que dan lugar a la diabetes, estos puede ser: genticos,
sedentarismo, estrs, sobrepeso, frmacos por uso excesivo de corticoides.
Dao pancretico, Etc.
Las hormonas estn relacionadas con el metabolismo de la glucosa, tenemos a

la insulina y el glucagn (ambos secretados por el pncreas), la adrenalina (de
origen suprarrenal), los glucocorticoides y las hormonas esteroides (secretadas
por las gnadas y las glndulas suprarrenales).
La hiperglucemia es el indicador ms habitual de la diabetes, que se produce

como resultado de una deficiencia de insulina, en el caso de la diabetes de
tipo I o una resistencia a la insulina, en el caso de la diabetes de tipo II.
La glucosa en ayunas alterada es una forma de prediabetes, muy similar y

probablemente concomitante a la intolerancia a la glucosa, en la que el
individuo tiene valores elevados de glucosa en sangre sin llegar a los valores
de una diabetes mellitus tipo 2. Es un estado de prediabetes en la que el
individuo presenta un empeoramiento de la resistencia a la insulina, as como
trastornos en la secrecin de insulina que resulta en una produccin
aumentada de glucosa por las clulas del hgado. Todos estos defectos
conjuntamente conllevan a valores elevados de glucosa en el plasma
sanguneo durante el ayuno. La glucosa en ayunas alterada se define como los
niveles de glucosa en sangre >110 mg/dl pero <126 mg/dl evaluados en

ayunas considerados como prediabetes.
Clnicamente, tanto la intolerancia a la glucosa como los niveles alterados de

glucosa en ayunas representan un punto equivalente en la historia natural de la
diabetes mellitus tipo 2. Esencialmente los pacientes se encuentran
sin sntomas pero en un estado potencialmente patolgico caracterizado por
una leve elevacin de la glucemia. De manera que la glucosa en ayunas
alteradaas como la intolerancia a la glucosaes un marcador predictivo del
riesgo de un individuo de ser diagnosticado en el futuro con diabetes mellitus
tipo 2.
FUNDAMENTO:
La glucosa por accin de la glucosa oxidasa se transforma en cido Glucnico

y perxido de hidrogeno. El perxido de hidrogeno en presencia de la 4-
aminofenazona y la Peroxidasa se transforma en una quinonimina coloreada
cuyo color es directamente proporcional a la concentracin del analito.
El esquema de reaccin es el siguiente:
GOD
Glucosa + O2 + H2O. cido Glucnico + H2O2
POD
2 H2 O2 + 4-AF + fenol...Quinonaimina coloreada + 4 H2 O

Pipeta automtica de 10 200 ul
Pipeta automtica de 1000 ul
Lpiz marcador
Punteras de color amarillo
Punteras de color azul
Cronometro
Tubos vacutainer con gel separador
Agujas de doble bisel 1x para vacutainer
Ligadura
Algodn
Alcohol de 70
Gradilla
EQUIPOS:
Bao Mara
Centrifuga
Espectrofotmetro
REACTIVOS:
Reactivo de glucosa enzimtica

Pisceta ms agua destilada
Muestra de sangre
PROCEDIMIENTO:
PROCEDIMIENTO
En tres tubos marcados B (Blanco) S (Standard) y D
(Desconocido) colocar:
B S D
Standard - 20 ul -
Muestra - - 20 ul
Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
Incubar 10 minutos en bao de agua a 37 oC. Luego leer en espectrofotmetro

a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el aparato
a cero con el blanco.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL
El color de reaccin final es estable 1 hora, por lo que la absorbancia debe ser
leda dentro de este lapso.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
f = 100 mg/dl
Glucosa mg/dl = D x f donde: S
Linelidad de la prueba..?
CUESTIONARIO:
1. Cul es la finalidad del blanco? Cmo se ajusta el espectrofotmetro con

el blanco? Ha realizado un blanco de reactivos o de suero? por qu?
2. Calcule la concentracin de glucosa en el suero indicando los clculos

realizados.
3. Si la concentracin de glucosa hubiera sido superior a 800 mg/dL. Cmo

actuaria?
4. Para la determinacin ha utilizado un mtodo enzimtico. Se trata de un

mtodo cintico? Fundamente su respuesta.
SEMANA 7:
PRACTICA N 7
GLUCOSA POSTPRANDIAL
INTRODUCCION:
La Glucosa Posprandial es una prueba que sirve para ver el metabolismo de la

glucosa por parte del paciente. Normalmente cuando uno consume alimentos
se eleva los valores de glucosa en la sangre debido a que ha tenido una
ingesta de carbohidratos que se han transformado en glucosa. La glucosa
normalmente se mantiene entre los valores de 70 a 110 mg/dl en un individuo
que mantiene un ayuno de 8 horas, pero cuando consume sus alimentos se
elevan los valores de glucosa en sangre pero a cabo de las 2 horas despus
del consumo de los alimentos tienden a volver a los valores normales la
glucosa en sangre.
Con esta prueba se determina si el paciente tiende a ser un paciente diabtico,

porque si los valores de glucosa no regresan a los valores normales despus
de las 2 horas es considerado un paciente diabtico.
OBJETIVOS:
1. Que el alumno identifique la importancia de la prueba y su

aplicacin en la evaluacin de un paciente.
2. Que adquiera la capacidad para determinar mediante esta prueba
el diagnstico del paciente.
3. Saber en qu casos se puede realizar la prueba y en qu casos
se debe evitar realizarlo.
MARCO TEORICO:
GLICEMIA POSPRANDIAL Es el nivel de glucosa en sangre que se obtiene

despus de una a dos horas de haber consumido algn alimento, mediante la
cual se puede determinar si es necesario algn ajuste en el tratamiento o en la
comida. La hiperglucemia posprandial es el aumento en los niveles de glucemia
que tienen lugar despus de las comidas como consecuencia de la falta de
respuesta en la secrecin de insulina tras la ingesta de alimentos. La elevacin
de la glucosa en sangre o picos de hiperglucemia despus de las comidas se

debe al aporte masivo de glucosa a la sangre como consecuencia de la
digestin y absorcin de los alimentos. En personas sanas el pncreas
responde segregando insulina, pero quienes padecen diabetes tipo 2 han
perdido la capacidad de respuesta del pncreas a esta situacin, de tal forma
que el aporte de glucosa no es metabolizado dando como resultado su
incremento en la sangre. Adems se ha demostrado que los valores de
glicemia que producen lesiones son los que se obtienen despus de las
comidas y a su vez es el que muchos pacientes no controlan. En las
determinaciones de glucosa posprandial los niveles se miden en una hora
determinada despus de alguna de las comidas, por lo general dos horas
despus. As individuos sanos presentan niveles de glucosa posprandial
menores de 200 mg/dl. Las personas que presentan niveles de glucosa
superiores a los 200 mg/dl tienen diabetes. Quienes presentan niveles de
glucosa posprandial entre los 140 y los 200 mg/dl es posible que tengan
tolerancia alterada de la glucosa (Prediabetes).
Glucosa en sangre de una muestra basal >110 mg/dl pero <125 mg/dl
evaluados en ayunas considerados como prediabetes.
Si es superior a 126 mg/dl despus de un control adicional se habla

de diabetes,
NIVELES POSPRANDIAL A LAS DOS HORAS DE LA GLUCOSA EN EL

PLASMA
El incremento mximo del nivel plasmtico de glucosa despus de una comida

se produce entre 60 y 90 minutos, y a las dos horas, los niveles son similares a
los valores obtenidos en ayunas. Sin embargo, en individuos de edad
avanzada, el nivel a las dos horas puede resultar ligeramente superior al de la
glucosa en ayunas. Ms se ha determinado que el valor ms sensible de la
glucosa posprandial es el que se obtiene 2 horas despus de las comidas. Se
sugiere realizar una glucosa posprandial cuando 2 horas despus de la ingesta
los niveles plasmticos sean superiores a 140 mg/dl. Con la edad se presenta
un incremento gradual tanto de los niveles de glucosa en ayuno (1 a 2 mg/dl
por cada dcada despus de los 50) como de los valores postprandiales(a
las 2 horas aumenta de 5 a 10 mg/dl por cada dcada despus de los 50).
Glucemia como indicador de control
Grado de control Optimo Bueno Regular Malo
Glucemia en ayunas <110 <140 <160 >160
Glucemia posprandial <140 <160 <180 >180
FUNDAMENTO:
La prueba de Glucosa Posprandial sirve para evaluar si el paciente es diabtico

o predispone a una diabetes. Debe darse las condiciones para que al paciente
se le pueda realizar la prueba como es un paciente con la sintomatologa de
diabetes y que su muestra basal tenga resultados dentro de los valores
normales 70 110 mg/dl o que la muestra de sangre tomada al azar tenga
valores de glicemia menores a 126 mg/dl

Pipeta automtica de 10 200 ul
Pipeta automtica de 1000 ul
Lpiz marcador
Punteras de color amarillo
Punteras de color azul
Cronometro
Gradilla
Tubos de vacutainer con gel separador
Agujas vacutainer
Adaptador para aguja vacutainer
Ligadura
EQUIPOS:
Bao Mara
Centrifuga
Espectrofotmetro
REACTIVOS:
Reactivo de glucosa enzimatica

Muestra de sangre
PROCEDIMIENTO:
1. Tomar una muestra basal, con el ayuno adecuado para la prueba, luego
fraccionar la muestra y determinar la concentracin de glucosa basal
usando la tcnica para determinacin de la glucosa por el mtodo
enzimtico.
2. Evaluar el resultado e indicar si el paciente contina con la prueba que

es determinacin de Glucosa Postprandial.
3. Si procede la prueba deber consumir el paciente aproximadamente 300

g de alimentos rico en carbohidratos y azucares, esperar 2 horas
despus de haber consumido los alimentos.
4. Cuantificar la glucosa de la segunda muestra e indicar cul es la

situacin del paciente.
CUESTIONARIO:
1. Cul es la importancia de la prueba?

2. En qu casos podemos rechazar la prueba?
3. Cmo podemos conocer si los resultados obtenidos durante el
procesamiento son las correctas? por qu?
4. Fundamente la realizacin de la prueba y porque no puede ser reemplazado
por un test de tolerancia
5. .Que otras pruebas sirven para evaluar diabetes en el paciente.
SEMANA 8:
PRACTICA N 8
DETERMINACIN DE COLESTEROL TOTAL
INTRODUCCIN:
El colesterol es una molcula compleja que generalmente se la ha asociado a

los peores riesgos cardiovasculares, por formacin de ateromas o placas
aterognicas en los vasos sanguneos. Si bien esto es verdad hay que tener en
cuenta tambin la importancia biolgica que tiene en el metabolismo y por lo
tanto en nuestra salud. El colesterol es la materia prima para la formacin de
hormonas esteroideas, como testosterona estrgenos y otras. Por otro lado le
disminuye la fluidez a la membrana celular, para darle cierta solidez, sin la cual
muchas de las funciones celulares se veran seriamente afectadas llevndola a
su destruccin. A partir del colesterol se forman las sales biliares,
indispensables para la digestin, tambin de vitamina D, fundamental para el
metabolismo del calcio esencial para los huesos. Con estos ejemplos vemos
que es fundamental el colesterol en nuestro metabolismo.
OBJETIVOS:
4. Que el alumno vea la importancia y el papel que tiene el colesterol

como parte estructural y funcional en el organismo.
5. Reconocer que forma parte del perfil lipdico en la cual puede ser
aplicado la Ley de friedewald para su determinacin.
6. Que reconozca las diferentes patologas que pueden presentarse por

un exceso en los valores del colesterol
7. Que sea capaz de cuantificar el analito a partir de una muestra

biolgica.
MARCO TERICO:
El colesterol El colesterol es una estructura molecular de

ciclopentanoperhidrofenantreno (esterano) con cabeza polar (grupo hidroxilo) y
cola apolar. Presente en las clulas de los animales vertebrados, es
componente esencial de las membranas plasmticas y precursor de
lipoprotenas, sales biliares, vitamina D y hormonas (sexuales y
corticoesteroides). Por su carcter hidrofbico, en sangre es transportado por
las lipoprotenas y, a nivel celular se puede encontrar formando parte de las
membranas o en el citoplasma en forma de gotitas grasas, previa
esterificacin con un cido graso pues el exceso de colesterol libre es txico
para la clula. El acmulo de colesterol esterificado intracelular, especialmente
en macrfagos, tambin es perjudicial para el hombre, favoreciendo el
desarrollo de lesiones aterosclerticas. Dado que consumimos, absorbemos,
sintetizamos y no podemos metabolizar completamente el colesterol, y que su
acmulo es deletreo, no es de extraar que su homeostasis est sujeta a
complejos y finos mecanismos de regulacin.
El colesterol es una sustancia cerosa, de tipo grasosa, que existe naturalmente

en todas las partes del cuerpo. El cuerpo necesita determinada cantidad de
colesterol para funcionar adecuadamente. Pero el exceso de colesterol en la
sangre puede adherirse a las paredes arteriales. Esto se denomina placa
ateromatosas. Las placas pueden estrechar las arterias o incluso obstruirlas.
Los niveles de colesterol elevados en la sangre pueden aumentar el riesgo de
enfermedades cardacas. Los niveles de colesterol tienden a aumentar con la
edad. El aumento de colesterol no suele tener signos ni sntomas, pero puede
detectarse con un anlisis de sangre.
Los sntomas El colesterol alto est relacionado con enfermedades graves,

como las cardiopatas, la angina de pecho y los accidentes cerebrovasculares.
La causa de la cardiopata coronaria es el estrechamiento de las arterias
(ateroesclerosis) que suministran el aporte de sangre al corazn. Los depsitos
grasos, como el colesterol o los productos residuales se acumulan en el interior
de las arterias. Esta acumulacin se llama placa e impide el flujo de sangre por
las arterias. Si tiene sntomas de ateroesclerosis, tambin puede tener un nivel
alto de colesterol. Los sntomas incluyen la angina de pecho (dolor en el pecho
causado por una reduccin del aporte sanguneo al corazn), dolor de pierna
(debido al estrechamiento de las arterias que aportan sangre a las
extremidades) y cogulos sanguneos en las arterias que transportan sangre al
corazn (trombosis coronaria). Los cogulos sanguneos pueden llevar a una
deficiencia cardiaca. Las manchas espesas de color amarillo (xantomas)
alrededor de los ojos o en alguna otra zona de la piel se forman por los
depsitos de colesterol. A menudo, se pueden apreciar en personas con
colesterol alto hereditario (por familiares con antecedentes de colesterol alto).
EL COLESTEROL circula permanentemente en el cuerpo humano entre el

hgado, donde se secreta y se almacena, y los dems tejidos del organismo;
sin embargo, como no se disuelve en soluciones acuosas (como el suero), para
ser transportado necesita integrarse a otras sustancias solubles, las
lipoprotenas.
El contenido aproximado de colesterol en cada familia de lipoprotenas es (en

% por unidad de peso): 1% en los quilomicrones, 18% en las VLDL, 50% en las
LDL y 23% en las HDL. Dado que cada familia posee distinta actividad
biolgica, el significado clnico de un aumento de colesterol depende de la o las
lipoprotenas que se encuentran en exceso.
Por otra parte, los mecanismos reguladores de los niveles plasmticos de

lipoprotenas son muy complejos y pueden ser afectados por mltiples factores
(genticos, ambientales, fisiolgicos o patolgicos), siendo posible encontrar
valores de colesterol total cercanos al rango normal acompaados de
alteraciones en las fracciones lipoproteicas.
Las HDL y las LDL han sido las ms estudiadas por su importante actividad
biolgica:
- las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en plasma, son las
encargadas del transporte del colesterol exgeno (y en mucho menos
proporcin, endgeno) hacia el interior de las clulas.
- las HDL, sintetizadas en el hgado, remueven el colesterol no utilizado por las
clulas (dentro de ciertos lmites de concentracin), transportndolo hacia el
hgado para su degradacin.
Diversos estudios epidemiolgicos han confirmado que el exceso de colesterol

de LDL con respecto a un valor crtico (1,9 g/l) debe ser considerado como
factor de riesgo para el desarrollo de enfermedad cardaca coronaria,
considerando que el efecto protector de las HDL slo parece tener relevancia
dentro de cierto rango de concentraciones de colesterol circulante. Tales
hallazgos permiten deducir que los valores aislados de colesterol de HDL o de
LDL no pueden tomarse como ndices predictivos de riesgo, sino que es
necesario conformar un perfil lipdico con los valores de colesterol total,
colesterol de HDL y colesterol de LDL.
MATERIALES:
Tubo de tapa amarilla
Reactivos
Cubetas
Micropipetas
Centrfuga
Espectrofotmetro
Gradilla
Agujas vacutainer
Algodn
Alcohol
EQUIPOS:
Bao Mara
Centrifuga
Espectrofotmetro
Muestra de sangre
REACTIVOS:
Reactivo de Colesterol enzimtico.

FUNDAMENTO:
Para la determinacin de colesterol total se utilizan reactivos comerciales

que incluyen las enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin de
todas las formas de colesterol presentes en el suero (Kit comercial). Las
reacciones que tienen lugar son:
CHE
Esteres de colesterol + H2O Colesterol + Ac. Grasos
CHOD
Colesterol + O2 + H2O Colestenona + H2O2
POD
H2O2 + Fenol + 4-AP Quinona + H2O
1. Una colesterol estearasa (CHE) hidroliza los steres de colesterol a
colesterol mas cidos grasos libre.
2. A continuacin una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a
colestenona y perxido de hidrgeno.
3. El perxido de hidrgeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto
con 4- amino fenazona (4-AP) da lugar a la formacin de una quinona roja.
4. La quinona formada es proporcional a la concentracin de colesterol en la
muestra.
PROCEDIMIENTO:
1. Extraer una muestra de sangre del paciente con el tubo amarillo,

Centrifugarlo por 10 minutos.
2. En tres tubos o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S

(Standard) y D (Desconocido) colocar:
3. Mezclar y esperar 10 a 15 minutos en temperatura ambiente.

4. Medir la absorbancia de los tres tubos en 500 nm de longitud de onda.
5. Anotar y calcular los resultados.
RESULTADO
Tubo 1: 0.000 (blanco)

Tubo 2: 0.013 (Estndar)
Tubo 3: 0.010 (muestra)
C. Mx = C. Estndar x Abs. Mx
------------------------------
Abs. St.
F = 200 / 0.013
F = 15384
15384 * 0.010
= 153, 84
Resultado es del Colesterol Total es 153, 84%
CONCLUSIONES:
Se realiza la determinacin de colesterol en suero sanguneo de una muestra normal y otra

patolgica y se observa la proporcin del color con la concentracin de la muestra, y se
concluy que en el caso patolgico las consecuencias que podran ocurrir si se mantienen
los niveles elevados de colesterol.
BIBLIOGRAFIA:
http://www.cunoc.edu.gt/medicina/practicano8bioqui.pdf
www.galiciaclinica.info/PDF/13/247.pdf
www.odon.uba.ar/uacad/bioquimica/docs/clase17catabolismodeacgraso
s2012.pdf capitulo ii marco terico - UNMSM
Gomez J. Bioqumica preguntas y respuestas. Vol 1. 1 edicin. Lima.
Heta grfica y servicios; 2014.
VILLACENCIO. M. Bioqumica, tomos I y II. Ed. Concytec. Lima-Per.
2000
LOZANO, J.GALINDO, D, Bioqumica para ciencias de la salud, Ed
Devlin M, Bioqumica Edit. Reverte Espaa 2000
SEMANA 9:
PRACTICA N9
DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS
INTRODUCCIN:
Los Triglicridos son grasas, que el organismo necesita para la formacin de

estructuras esenciales para las clulas y que por tanto viajan por el torrente
circulatorio. Se consideran un excelente reservorio de energa para nuestro
organismo. Al igual que con el colesterol, el hgado es la principal fbrica de
triglicridos de nuestro cuerpo.
No es frecuente la elevacin aislada de triglicridos sin alteraciones de los
otros lpidos como el colesterol, pero existen enfermedades familiares y
alteraciones dietticas que pueden condicionar un aumento de sus cifras
normales que ocasionarn una hipertrigliceridemia, con la consiguiente
aparicin de patologas asociadas a su aumento en sangre.
El aumento en sangre de los niveles de triglicridos puede acarrear la
presentacin de pancreatitis, aumento del riesgo cardiovascular por
ateromatosis y alteraciones cutneas y oculares.
La determinacin de los niveles plasmticos de triglicridos es importante para

conocer la aparicin de riesgo aterognico o lo que es lo mismo, para prevenir
la aparicin de enfermedad cardiovascular entre otras.
Es un parmetro que nos ayuda en combinacin con la determinacin de los

otros lpidos como el colesterol a hacernos una idea de la progresin de la
arteriosclerosis en nuestras arterias.
Adems, su conocimiento nos habla de posibles alteraciones del metabolismo

lipdico de posible origen familiar y por tanto transmisibles, con las
consecuencias clnicas que esto conlleva.
Tambin nos previene la aparicin de enfermedades, si se tiene alto, como la

pancreatitis aguda o los xantomas o acmulos de grasa en determinados
lugares de la piel.
Enfermedades como la diabetes mellitus puede condicionar un aumento de los

triglicridos al igual que la ingesta de determinados frmacos como los
anticonceptivos orales, consumo exagerado de alcohol, etc.
Es pues, un importante predictor de enfermedad por lo que su conocimiento es

necesario a la hora de practicar lo que conocemos como Medicina Preventiva.
MARCO TERICO:
Un triglicrido es un tipo de glicerol que pertenece a la familia de los lpidos.

Este glicrido se forma por la esterificacin de los tres grupos OH de los
gliceroles por diferentes o igual tipo de cidos grasos, concedindole el nombre
de triglicrido. Es comn llamar a los triglicridos grasas, si son slidos a
temperatura ambiente, y aceites, si son lquidos a temperatura ambiente. La
mayora de los triglicridos derivados de los mamferos son grasas, como la
grasa de la carne de res o la manteca de cerdo. Aunque estas grasas son
slidas a temperatura ambiente, la temperatura tibia del cuerpo en los seres
vivos la mantiene un poco fluida, permitiendo que se pueda mover. Los
triglicridos en los mamferos son transportados en todo el organismo teniendo
como funcin suministrar energa o para ser almacenados por periodos largos
como grasa, siendo una fuente de energa a largo plazo ms eficiente que los
carbohidratos.
Como se mencion inicialmente, los triglicridos se forman por la esterificacin

de los OH del glicerol; los tres cidos grasos estn unidos de tal manera que se
obtiene la siguiente estructura:
ESTRUCTURA CONDENSADA DE UN TRIGLICRIDO
Donde R, R', y R" son cidos grasos. Los tres cidos grasos pueden ser
diferentes, todos iguales (R=R"=R), o slo dos iguales (R=R" o R"=R o R=R)
y el otro distinto. La longitud de las cadenas de los triglicridos oscila entre 16 y
22 tomos de carbono.
TRANSPORTE DE LOS TRIGLICRIDOS
Las grasas se hidrolizan en el intestino delgado para poder formar cidos

grasos y glicerina para atravesar la pared intestinal, aislados o en forma de
jabones al combinarse con los jugos pancreticos e intestinales. Luego son
reconstruidos de nuevo al otro lado de la pared intestinal; pero, dado que los
lpidos son insolubles en agua, deben combinarse con protenas, sintetizadas
por el intestino, para ser transportadas y distribuidas a travs de la sangre a
todo el organismo. El transporte de triglcridos est estrechamente integrado
con el transporte de otros lpidos, como el colesterol, y est directamente
relacionado con enfermedades como la arteriosclerosis.
El cuerpo humano utiliza tres tipos de vehculos transportadores de lpidos:
Lipoprotenas, como los quilomicrones, que los transportan al hgado tras su

absorcin por el intestino, desde donde se distribuyen al resto de las clulas del
cuerpo, sobre todo las adiposas y musculares, en forma de lipoprotenas VLDL,
IDL, LDL y HDL. Las clulas del tejido adiposo son las principales clulas de
reserva de grasas.
Albmina srica. Transporta cidos grasos libres.

Cuerpos cetnicos. Pequeas molculas hidrosolubles (acetoacetato y -

hidroxibutirato) producidas en el hgado por oxidacin de los cidos grasos.
Dado que son solubles en agua (y por tanto en la sangre), pueden viajar en ella
sin problemas.
FUNCIN BIOLGICA DE LOS TRIGLICRIDOS

Constituyen la principal reserva energtica del organismo animal (como
grasas) y en los vegetales (aceites). El exceso de lpidos se almacena en
grandes depsitos en los animales, en tejidos adiposos.
Son buenos aislantes trmicos que se almacenan en los tejidos adiposos
subcutneos de los animales de climas fros como, por ejemplo, las ballenas,
el oso polar, etc.
Son productores de calor metablico, durante su degradacin. Un gramo de
grasa produce 9,4 kilocaloras. En las reacciones metablicas de oxidacin,
los prtidos y glcidos producen 4,1 Kcal.
Dan proteccin mecnica, como los constituyentes de los tejidos adiposos que
estn situados en la planta del pie, en la palma de la mano y rodeando el rin
(acolchndolo y evitando su desprendimiento).
FUNDAMENTO:
El esquema de reaccin es el siguiente:

lipoprotein lipasa
triglicridos. glicerol + cidos grasos
glicerol kinasa
glicerol + ATP ..glicerol-1-P + ADP
GPO
glicerol-1-fosfato + O2 H2O2 + dihidroxiacetonafosfato
POD
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol .quinonimina roja
MATERIALES:
Reactivos
Cubetas
Micropipetas
Centrfuga
Espectrofotmetro
Reloj
Gradilla
Agujas vacutainer
Algodn
Alcohol
EQUIPOS:
Bao Mara
Centrifuga
Espectrofotmetro
Muestra de sangre
REACTIVOS:
Reactivo de Triglicridos
PROCEDIMIENTO:
Homogeneizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros
lechosos.
En tres cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco),
S (Standard) y D (Desconocido) colocar:
B S D
Muestra - - 10 ul
Standard - 10 ul -
Reactivo A 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar, incubar 5 minutos a 37oC o 20 minutos a temperatura ambiente (18-

25oC). Enfriar y leer en espectrofotmetro a 505 nm llevando el aparato a cero
con agua destilada.
CONCLUSIONES:
Se concluye que la determinacin de triglicridos nos va a indicar el nivel de

triglicridos en el organismo
Se concluye que la determinacin de triglicridos nos va a indicar la concentracin del analito

siendo los valores elevados cuando se percibe en la muestra de suero un aspecto lechoso y
cuando se realiza la lectura de la reaccin qumica va a tener un color final que es rojo
grocella cuyo color va a estar en relacin directa con la concentracin de la muestra.
BIBLIOGRAFIA:
http://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos
https://es.slideshare.net/.../determinacion-de-lipoprotenas-de-alta-densidad-
hdl-en-suer
www.odon.uba.ar/uacad/bioquimica/docs/clase17catabolismodeacgrasos20
12.pdf
www.scientificpsychic.com/fitness/aceites-grasas1.html
Gomez J. Bioqumica preguntas y respuestas. Vol 1. 1 edicin. Lima. Heta
grfica y servicios; 2014.
VILLACENCIO. M. Bioqumica, tomos I y II. Ed. Concytec. Lima-Per. 2000
SEMANA 10:
PRACTICA 10
DETERMINACIN DEL PERFIL LIPIDICO - HDL
INTRODUCCIN:
Las Lipoprotenas de Alta Densidad (HDL) son un tipo de lipoprotenas que

transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo al hgado.
Las HDL son las lipoprotenas ms pequeas y ms densas y estn

compuestas por una alta proporcin de apolipoproteinas. El hgado sintetiza
estas lipoprotenas como esferas vacas y tras recoger el colesterol
incrementan su vacas y tras recoger el colesterol incrementan su tamao al
circular a travez del torrente sanguneo.
Los hombres suelen tener un nivel notablemente inferior de HDL que las
mujeres.
Vulgarmente se conoce a las HDL como colesterol "bueno", dando una falsa
idea de que sus valores altos pueden prevenir por s solo ciertas enfermedades
(ver seccin "Colesterol bueno vs. colesterol malo" ms abajo).
Aunque algunos estudios epidemiolgicos, citados por ciertas publicaciones y

artculos cientficos, mostraran que altas concentraciones de HDL (superiores
a 60 mg/dL) tienen una carcter protector contra las enfermedades
cardiovasculares (como la cardiopata isqumica e infarto de miocardio); y,
contrariamente, que bajas concentraciones de HDL (por debajo de 35mg/dL)
supondran un aumento del riesgo de estas enfermedades, pero ninguno de
estos estudios obtuvo conclusiones cientficamente consistentes como para
aseverar dichas afirmaciones. El nivel de HDL dice muy poco acerca de su
salud si es tomado aisladamente, de acuerdo a los mismos grandes estudios
hechos hasta la fecha.
Rango recomendado
La American Heart Association proporciona una serie de guas para subir los
niveles de HDL y bajar el riesgo de cardiopata isqumica
Nivel mg/dl Nivel mmol/L Interpretacin
Colesterol HDL bajo, riesgo aumentado de

<40 <1.03
enfermedad cardaca,, <50 en mujeres
40-59 1.03-1.52 Nivel medio de HDL
Nivel alto HDL, condicin ptima considerada de

>60 >1.55
proteccin contra enfermedades cardacas
OBJETIVOS:
1. Que el alumno vea la importancia y el papel que tiene el HDL como factor
protector en el organismo.
2. Reconocer que forma parte del perfil lipdico en la cual puede ser aplicado la
Ley de friedewald para su determinacin.
3. Que reconozca las diferentes patologas que pueden presentarse por un

disminucin en los valores del HDL-Colesterol
4. Que sea capaz de cuantificar el analito a partir de una muestra srica.

MARCO TERICO:
Las lipoprotenas plasmticas son partculas esfricas que contienen

cantidades variables de colesterol, triglicridos, fosfolpidos y protenas. Los
fosfolpidos, el colesterol libre y las protenas constituyen la superficie externa
de la partcula lipoproteica, mientras que su core contiene en mayor proporcin
colesterol esterificado y triglicridos. Estas partculas solubilizan y transportan
el colesterol en el torrente sanguneo. La proporcin relativa de protena y lpido
determina la densidad de estas lipoprotenas y provee las bases sobre las
cuales establecer una clasificacin. Estas clases son: quilomicrones,
lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL - Very Low Density Lipoproteins),
lipoprotenas de baja densidad (LDL - Low Density Lipoproteins) y lipoprotenas
de alta densidad (HDL - High Density Lipoproteins). Numerosos estudios
clnicos han demostrado que las diferentes clases de lipoprotenas tienen
distintos y variados efectos en el riesgo de enfermedad coronaria. La funcin
principal de las HDL en el metabolismo lipdico es la captacin y transporte de
colesterol desde los tejidos perifricos al hgado en un proceso conocido como
transporte reverso de colesterol (mecanismo cardioprotectivo). El HDL-
colesterol bajo, est asociado con un alto riesgo de enfermedad cardaca. Por
este motivo la determinacin de HDL-colesterol es una herramienta til en la
identificacin de individuos de alto riesgo.
Estructura de las HDL Las HDL son complejos macromoleculares,

seudomicelares, constituidos por lpidos anfipticos (fosfolpidos y colesterol
libre), lpidos no polares (triglicridos y steres de colesterol) y por protenas
llamadas apolipoprotenas (apo) (Fig. 1). Los lpidos anfipticos se organizan
en una monocapa en la superficie del complejo, presentando sus grupos
polares hacia el medio acuoso. La estabilidad de esta monocapa est
garantizada por las apolipoprotenas. Los lpidos no polares son insolubles en
un medio acuoso.
Las diferentes subclases de HDL no poseen las mismas propiedades

antiaterognicas, lo que sugiere que las intervenciones tanto higinicas como
farmacolgicas se debern enfocar en el futuro hacia incrementos de la

funcionalidad de las HDL. Estas HDL se sitan en el interior de las
lipoprotenas, evitando as las interacciones con grupos polares que seran
fisicoqumicamente desfavorables. De esta manera el transporte de los lpidos
en plasma est garantizado. Las HDL son las lipoprotenas con mayor
proporcin proteica (55-60% de su masa seca), siendo la apo A-I su
apolipoprotena ms abundante. La apo A-I, aparte de su funcin estructural, es
indispensable para el flujo de colesterol de las clulas perifricas, la primera
etapa del transporte reverso de colesterol (TRC) que se detalla adelante. La
apo A-I desempea tambin la funcin de coenzima de la lecitina: colesterol
acil transferasa (LCAT), enzima clave en el TRC. Se han descrito varias
subclases de HDL en funcin de ciertas caractersticas fisicoqumicas y
funcionales. Una clasificacin con base en la densidad de flotacin (), las
distingue en HDL2 (1.063<< Las HDL migran en su mayora dentro de la
fraccin del plasma, por lo que algunos autores las identifican como -
lipoprotenas. Tambin por su movilidad electrofortica en combinacin con su
tamao, se han descrito otras subfracciones de HDL entre las que destacan las
partculas pre-1. Estas partculas estn compuestas esencialmente de
fosfolpidos y apo A-I, tienen una masa molecular aparente alrededor de 60 kD.
Desempean un papel muy importante en la captacin de colesterol de las
clulas perifricas como se menciona ms adelante. Otros mtodos de
separacin como la electroforesis en gradiente de poliacrilamida o filtracin en
gel, se han utilizado para dividir a las HDL en subgrupos que permitan una
mejor comprensin de sus funciones.
MATERIALES:
Reactivos
Cubetas
Micropipetas
Centrfuga
Espectrofotmetro
Reloj
Gradilla
Agujas vacutainer
Algodn
Alcohol
EQUIPOS:
Bao Mara
Centrifuga
Espectrofotmetro
Muestra de sangre
REACTIVOS:
Reactivo de HDL-Colesterol

FUNDAMENTO:
El presente, es un mtodo homogneo que emplea dos reactivos. En la primera
etapa de la reaccin, se solubiliza y consume el colesterol libre o unido a
protenas distintas de la HDL en una reaccin que involucra a colesterol
oxidasa (CHO), peroxidasa (POD) y N-etil-N-(2-hidroxi-3-sul-fopropil)- 3-
toluidina disdica (TOOS) dando lugar a un producto no coloreado. En una
segunda etapa, un detergente solubiliza especficamente las HDL. El HDL-
colesterol es liberado para reaccionar con colesterol esterasa (CHE), colesterol
oxidasa y TOOS, dando un producto coloreado:
PROCEDIMIENTO:
En un tubo de Kahn medir 0,5 ml (500 ul) de muestra, y agregar 50 ul de
Reactivo Precipitante. Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20
segundos y dejar 30- 40 minutos en refrigerador (2-10 C) o 15 minutos en
bao de agua a la misma temperatura. No colocar en congelador. Centrifugar
15 minutos a 3000 r.p.m. Usar el sobrenadante lmpido como muestra.
En 3 tubos marcados B, S y D colocar:
B S D
Sobrenadante - - 100 ul
Standard - 20 ul -
Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C si se usa el Reactivo de Trabajo de

Colestat enzimtico AA/lquida o 15 minutos
a 37oC cuando se usa el de Colestat enzimtico.
Retirar del bao y enfriar. Leer a 505 nm en espectrofotmetro o en colormetro

con filtro verde (490-530 nm), llevando a cero con el Blanco.
CALCULO DE LOS RESULTADOS:
HDL Colesterol (g/l) = D x f f =0,457

S
0,457= 2 (g/l) x VFE x VRE x VS donde:

VM VRS VE
VFE = volumen final de extracto = 0,55 ml

VM = volumen de muestra procesada = 0,5 ml
VRE = volumen de reaccin con extracto = 2,1 ml
VRS = volumen de reaccin con Standard = 2,02 ml
VS = volumen de Standard en la reaccin = 0,020 ml
VE = volumen de extracto en la reaccin = 0,1 ml
Si se emplean volmenes de Reactivo diferentes de 2 ml
el factor 0,457 vara y debe ser calculado nuevamente,
reemplazando en la frmula VRE y VRS.
CONCLUSIONES:
Se realiza la determinacin de HDL-colesterol en suero sanguneo de una muestra normal

y otra patolgica y se observa la proporcin del color con la concentracin de la muestra, y se
los niveles disminuidos de HDL-colesterol.
VALORES DE REFERENCIA:
0,40 - 0,60 g/l Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia. No obstante, valores mayores de 0,40 g/l se consideran
recomendables y los que se encuentren por encima de 0,60 g/l se han
considerado como protectivos. Por el contrario, valores de HDL colesterol por
debajo de 0,40 g/l se consideran como ndice significativo de riesgo de
enfermedad cardaca coronaria.
BIBLIOGRAFIA:
1. http://www.cunoc.edu.gt/medicina/practicano8bioqui.pdf
2. www.wiener-lab.com.ar/.../hdl_colesterol_monofase_aa_plus_sp.pdf
3. https://es.slideshare.net/.../determinacion-de-lipoprotenas-de-alta-
densidad-hdl-en-suer
4. www.odon.uba.ar/uacad/bioquimica/docs/clase17catabolismodeacgrasos20
12.pdf
SEMANA: 11
PRACTICA N11
DETERMINACIN DE LDL COLESTEROL
INTRODUCCIN:
Las Lipoprotenas de baja densidad (LDL) son lipoprotenas que

transportan colesterol, son generadas por el hgado gracias a la enzima HTGL,
que hidroliza lostriglicridos de las molculas de VLDL convirtindolas en LDL.
Las LDL son unas molculas muy simples, con un ncleo formado por
colesterol y por una corteza formada por la apoprotena B100. Esta corteza
permite su reconocimiento por el receptor de LDL en los tejidos perifricos. La
funcin de las molculas LDL es la de transportar colesterol desde el hgado
hacia otros tejidos, como los encargados de la sntesis de esteroides, linfocitos,
el rin y los propios hepatocitos. El resto de molculas LDL que no son
absorbidas por los tejidos perifricos, se oxidan y son captadas a travs de los
receptores del Sistema mononuclear fagoctico(macrfagos).
El colesterol est esencialmente en las partculas LDL, cuando estas se

encuentran aumentadas, es decir, cuando hay un exceso de colesterol, estas
molculas se depositan en la capa ntima arterial en donde son retenidas, y en
especial en ciertos sitios de turbulencia hemodinmica (como las bifurcaciones
de las arterias). All, las molculas que han sido retenidas, se oxidan. Las LDL
oxidadas son molculas que favorecen los procesos inflamatorios y atraen a
los macrfagos que captan las LDL oxidadas y se transforman en clulas
espumosas, esto constituye la base de la placa ateroesclertica.
La ateroesclerosis es un grave factor de riesgo cardiovascular, por eso

vulgarmente se conoce a las LDL como colesterol "malo" aunque este trmino
no debe ser usado, porque en situaciones normales, cumplen un papel
fisiolgico vital que es llevar colesterol a los tejidos.
MARCO TERICO:
Lipoprotenas de baja densidad (Para ms informacin, ver referencias 4,5.)

Las lipoprotenas de baja densidad, o LDL (d < 1,063 g/ml, > 1,019 g/ml), se
caracterizan por su contenido en apo B-100 y tienen como componente lipdico
mayoritario los steres de colesterol. La funcin de las LDL es el transporte y
entrega de colesterol a las clulas, incluyendo tejidos perifricos e hgado. Las
LDL son reconocidas por los receptores de LDL situados en la membrana
plasmtica que reconocen apo B-100 y apo E. El receptor de LDL es
sintetizado por mltiples estirpes celulares y viaja hacia la membrana
plasmtica
quedando fijado por una protena, denominada clatrina, en unas zonas

especficas que se denominan hoyos revestidos. Aproximadamente cada 5 min,
hayan unido o no LDL, estos hoyos revestidos experimentan endocitosis y son
transportados hacia el citoplasma en forma de endosomas. En el caso de que
contengan LDL unidas al receptor, el contenido proteico y lipdico de las
mismas es hidrolizado hasta formar aminocidos y colesterol no esterificado. El
colesterol no esterificado es txico para
las clulas por encima de una cierta concentracin y, por tanto, debe ser o bien
utilizado (para sntesis de membranas o de hormonas esteroideas, por
ejemplo), o bien convertido por enzimas del tipo acil:colesterol aciltransferasa
(ACAT) en steres de colesterol, forma en que pueden ser guardados como
reservorio celular de colesterol. El receptor de LDL, una vez completado su
ciclo celular, puede ser degradad. Los niveles de colesterol no esterificado
intracelular regulan de forma coordinada los 2 sistemas de sntesis de
colesterol, asegurando as su coordinacin y evitando un exceso de colesterol
intracelular. La expresin y la funcionalidad adecuadas de los receptores de
LDL son un determinante importante de la concentracin de LDL srico. Como
prueba, la hipercolesterolemia familiar, que es una enfermedad autosmica

dominante causada por mutaciones en el gen del receptor de LDL o, menos
frecuentemente, del dominio de ligando de apo B-100 concentraciones sricas
elevadas de LDL. En este contexto es importante conocer que, presenta el tipo
de medicamentos hipocolesterolemiantes ms usados en clnica, las estatinas,
funcionan inhibiendo la HMGCoA reductasa, ya que de esta forma se consigue
un aumento de la sntesis de receptor de LDL celular, lo que disminuye la
concentracin srica de LDL y, por tanto, de colesterol.
Estructura del LDL

En general, las molculas de LDL contienen ms colesterol que protena,
hacindolos de baja densidad. Sin embargo, el tamao, la forma y la
composicin pueden variar entre las molculas de LDL. Mientras que algunas
molculas son grandes y otras son pequeas comparadas entre s, las
molculas de LDL son ms grandes que las molculas de HDL. Cada molcula
de LDL contiene una molcula de apolipoprotena B-100, que influye en la
funcin de LDL.
Funcin del LDL

Las diferencias de estructura entre el LDL y el HDL causa que funcionen en
formas muy distintas. El LDL se une al colesterol en el hgado para llevarlo a
las clulas del cuerpo. La falta de densidad permite que el exceso de LDL
permanezca en los vasos sanguneos. Cuando las paredes de los vasos
sanguneos se daan, debido a los efectos de las reacciones de oxgeno o
condiciones tales como la hipertensin arterial, el LDL se une y se acumula a lo
largo de las paredes de los vasos sanguneos. Entre ms acumulacin de
colesterol en sangre, ms se adherir a las paredes de los vasos sanguneos.
Esta acumulacin conduce a la formacin de placa en un proceso conocido
como aterosclerosis. Los altos niveles de LDL aumentan el riesgo de
enfermedad cardaca.
MATERIALES:
Muestra de sangre
Reactivos
Cubetas
Micropipetas
Centrfuga
Espectrofotmetro
Reloj
EQUIPOS:
Bao Mara
Centrifuga
Espectrofotmetro
Muestra de sangre
REACTIVOS:
Reactivo de LDL-Colesterol
FUNDAMENTO:
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL o -lipoprotenas) se separan del
suero precipitndolas selectivamente mediante el agregado de polmeros de
alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las
dems lipoprote nas (HDL y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se
determina empleando el sistema enzimtico Colesterol oxidasa/ Peroxidasa
con colorimetra segn Trinder (Fenol/4-AF). Por diferencia entre el colesterol
total y el determinado en el sobrenadante, se obtiene el colesterol unido a las

LDL.
PROCEDIMIENTO:
En un tubo de Kahn, colocar:
Muestra 200 ul
Reactivo A 100 ul
Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos
y dejar 15 minutos en un bao de agua a 20-25oC.
Centrifugar 15 minutos a 3000 r.p.m. Separar inmediatamente
el sobrenadante.
Usar el sobrenadante como Muestra para el ensayo colorimtrico.

En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D(Desconocido), colocar:
B S D
Sobrenadante - - 100 ul
Standard - 20 ul Reactivo -
de Trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
Mezclar e incubar 5 minutos a 37oC si se usa el Reactivo de Trabajo de

Colestat enzimtico AA/lquida o 15 minutos a 37oC si se usa el de Colestat
enzimtico.
Retirar del bao y enfriar. Leer en espectrofotmetro a 505 nm o en
fotocolormetro con filtro verde (490-530nm), llevando el aparato a cero de
absorbancia con el Blanco.
CALCULO DE LOS RESULTADOS

HDL Colesterol (g/l) = D x f f =0,624
S
0,457= 2 (g/l) x VFE x VRE x VS donde:

VM VRS VE
VFE = volumen final de extracto = 0,55 ml

VM = volumen de muestra procesada = 0,5 ml
VRE = volumen de reaccin con extracto = 2,1 ml
VRS = volumen de reaccin con Standard = 2,02 ml
VS = volumen de Standard en la reaccin = 0,020 ml
VE = volumen de extracto en la reaccin = 0,1 ml
Si se emplean volmenes de Reactivo diferentes de 2 ml
el factor 0,457 vara y debe ser calculado nuevamente,
Reemplazando en la frmula VRE y VRS.
CONCLUSIONES:
Se realiza la determinacin de LDL-colesterol en suero sanguneo de una muestra normal y

otra patolgica y se observa la proporcin del color con la concentracin de la muestra, y se
los niveles elevados de LDL-colesterol.
VALORES DE REFERENCIA :
0,40 - 0,60 g/l Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia. No obstante, valores mayores de 0,40 g/l se consideran
recomendables y los que se encuentren por encima de 0,60 g/l se han
considerado como protectivos. Por el contrario, valores de HDL colesterol por
debajo de 0,40 g/l se consideran como ndice significativo de riesgo de
enfermedad cardaca coronaria.
BIBLIOGRAFIA:
www.wiener-
lab.com.ar/.../hdl_colesterol_monofase_aa_plus_sp.pdf
https://es.slideshare.net/.../determinacion-de-lipoprotenas-
de-alta-densidad-hdl-en-suer
SEMANA 12
PRACTICA N12
DETERMINACIN DE PROTEINAS TOTALES
INTRODUCCIN:
Las protenas son los pilares fundamentales de la vida. Cada clula del cuerpo
humano las contiene. La estructura bsica de la protena es una cadena de
aminocidos.
Las protenas son el componente estructural fundamental de nuestro cuerpo,

entre ellas podemos citar por ejemplo a las globulinas, albumina, enzimas,
hormonas, anticuerpos, hemoglobina, mioglobina, factores de coagulacin,
entre otros.
Es necesario consumir protenas en la dieta para ayudarle al cuerpo a reparar

clulas y producir clulas nuevas. La protena tambin es importante para el
crecimiento y el desarrollo de nios, adolescentes y mujeres embarazadas.
OBJETIVOS:
1. Que el alumno interiorice la importancia de las protenas en la

estructura y funcionamiento del cuerpo humano
2. Conozca los diferentes tipos de protenas y reconozca las ms

importantes para el cuerpo humano
3. Conozca las principales patologas relacionadas con el aumento

o disminucin de los niveles de protenas en el cuerpo humano.
4. Realice la determinacin de Protenas Totales y de Albumina

MARCO TERICO:
Las protenas son largas cadenas de aminocidos unidas por enlaces

peptdicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de
residuos de aminocido adyacentes. Las Protenas son biopolmeros
(macromolculas orgnicas), de elevado peso molecular, constituidas
bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N);
aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor
proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (Y), etc.
Los aminocidos son compuestos slidos; incoloros; cristalizables; de elevado

punto de fusin (habitualmente por encima de los 200 C); solubles en agua;
con actividad ptica y con un comportamiento anftero. Son las unidades
bsicas que forman las protenas. Su denominacin responde a la composicin
qumica general que presentan, en la que un grupo amino (-NH2) y otro
carboxilo o cido (-COOH) Para la especie humana son esenciales ocho
aminocidos: treonina, metionina, lisina, valina, triptfano, leucina, isoleucina y
fenilalanina (adems puede aadirse la histidina como esencial durante el
crecimiento, pero no para el adulto)
Las protenas corporales se dividen en:
A. HOLOPROTEINAS
1. Escleroprotenas Ejemplos: Colgenos, queratina, etc.
2. Esferoprotenas Ejemplos: Albuminas, Globulinas, Glutelinas,
Prolaminas e Histonas.
B. CONJUGADAS (HETEROPROTEINAS):
1. Glucoprotenas Ejemplos: Ribonucleasa, mucoproteinas, anticuerpos,
etc.
2. Lipoprotenas Ejemplos: LDL, HDL y VLDL.
3. Cromoprotenas Ejemplos:Hemoglobina, Mioglobina, Hemocianina.
Las protenas en nuestro cuerpo cumplen las siguientes funciones:

1. Catlisis: Enzimas proteicas que se encargan de realizar reacciones
qumicas.
2. Reguladora: Las hormonas son un tipo de protenas las cuales ayudan
a que exista un equilibrio entre las funciones que realiza el cuerpo.
3. Estructural: Funcin de dar resistencia y elasticidad que permite formar
tejidos as como la de dar soporte a otras estructuras.
4. Defensiva: Encargadas de defender al organismo como la
glicoprotenas que se encargan de producir inmunoglobulinas.
5. Transporte: La funcin de estas protenas es llevar sustancias a travs
del organismo a donde sean requeridas.
6. Receptora: Llevan a cabo la funcin de recibir seales para que la
clula pueda realizar su funcin.
7. Contrctil: Responsables de la contraccin muscular
Las protenas poseen una CAPACIDAD AMORTIGUADORA Las protenas

tienen un comportamiento anftero y sto las hace capaces de neutralizar las
variaciones de pH del medio, ya que pueden comportarse como un cido o una
base y por tanto liberar o retirar protones (H+) del medio donde se encuentran.
SOLUBILIDAD Las protenas son solubles en agua cuando adoptan una
conformacin globular. La solubilidad es debida a los radicales (-R) libres de los
aminocidos que, al ionizarse, establecen enlaces dbiles (puentes de
hidrgeno) con las molculas de agua.
Protenas Totales:
Las protenas totales son el resultado de sumar los distintos componentes

proteicos presentes en el organismo tales como: Alfa1, alfa2, beta gamma
globulina y albmina.
Cuando se hace referencia a las protenas totales en suero, se trata una

medicin aproximada de todas las protenas presentes en la parte lquida de la
sangre. La prueba que determina las protenas totales en sangre, examina
especficamente la cantidad total de dos tipos de protenas: globulinas y

albmina
La determinacin de los niveles de protenas totales es til en la

deteccin de:
Hiperproteinemia causada por deshidratacin, hemoconcentracin o
aumento en la concentracin de protenas especificas.
Hipoproteinemia por hemodilucin producida por un defecto en la
realizacin de la sntesis proteica, catabolismo proteico excesivo o
perdidas excesivas (hemorragias).
La deshidratacin, las enfermedades hepticas crnicas y el mieloma
mltiple son estados que pueden producir niveles altos de protenas totales.
El descenso de los niveles de protenas totales es propio del fallo heptico

terminal y de la enfermedad renal.
Con frecuencia se calcula una proporcin de albumina/globulina a fin de

obtener informacin adicional. El diagnstico clnico debe realizarse
teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio.
Las protenas fraccionadas: al contrario que las protenas totales, miden la

cantidad especfica de cada protena. Ambas pruebas, protenas totales y
fraccionadas, son tiles a la hora de determinar estados anormales y
enfermedades que pueden afectar a nuestro organismo.
La albmina es una protena que se encuentra en gran proporcin en el

plasma sanguneo, siendo la principal protena de la sangre, y una de las ms
abundantes en el ser humano. Es sintetizada en el hgado.
La albmina es fundamental para el mantenimiento de la presin osmtica,
necesaria para la distribucin correcta de los lquidos corporales entre el
compartimento intravascular y el extravascular, localizado entre los tejidos.
Funciones de la Albmina:
Mantenimiento de la presin onctica

Transporte de hormonas tiroideas
Transporte de hormonas liposolubles
Transporte de cidos grasos libres
Transporte de bilirrubina no conjugada
Transporte de muchos frmacos y drogas
Unin competitiva con iones de calcio
Control del pH
Funciona como un transportador de la sangre y lo contiene el plasma
Regulador de lquidos extracelulares (efecto Donnan)
Tipos de Albmina:
Seroalbmina: Es la protena del suero sanguneo.
Ovoalbmina: Es la albmina de la clara del huevo.
Lactoalbmina: Es la albmina de la leche.
Las globulinas son un grupo de protenas solubles en agua que se encuentran

en todos los animales y vegetales.
Entre las globulinas ms importantes destacan las seroglobulinas (de la
sangre), las lactoglobulinas (de la leche), las ovoglobulinas (del huevo), la
legmina, el fibringeno, los anticuerpos (gamma-globulinas) y numerosas
protenas de las semillas.
Las globulinas son un importante componente de la sangre, especficamente
del plasma. stas se pueden dividir en varios grupos: Globulinas alfa 1,
Globulinas alfa 2,, Globulinas beta, *Globulinas gamma
Algunas de las siguientes globulinas se clasifican como "reactivo de fase

aguda". Esto quiere decir que son protenas que van a aumentar o disminuir su
concentracin en el plasma, a partir de los procesos inflamatorios o infecciosos.

Y que van a servir para determinar ciertas patologas.
Globulinas alfa 1:
La alfa 1 o antitripsina: Es la encargada de controlar la accin de las

enzimas lisosomales.
La TBG (tiroglogulina) : Se encarga de fijar la hormona tiroidea.
Transporta T3 y T4.
La alfa 1 glucoprotena cida: Tambin conocida como orosomucoide,
es un reactivo de fase aguda sintetizado en el hgado como respuesta a
la inflamacin y dao del tejido.
La RBP: Es la hormona fijadora de retinol, la cual transporta vitamina
"A". Normalmente se asocia a la prealbmina.
Globulinas alfa 2:
El grupo de las globulinas alfa 2 est compuesto por las siguientes:
La macroglobulina (alfa 2): La funcin primordial de sta es neutralizar

las enzimas proteolticas.
La haptoglobina: Es la encargada de fijar la Hb plasmtica de los
eritrocitos, y la transporta al hgado para que no se excrete por la orina.
La ceruloplasmina: Transporta y fija el 90 por ciento del cobre srico.
La eritropoyetina: Sintetizada en el rin ante una hipoxemia, es la
resposable de la formacin de eritrocitos y plaquetas.
Globulinas beta:
La hemopexina: Es la que fija y transporta el grupo hemo de la

hemoglobina (Hb) hacia el hgado.
La transferrina: Transporta hierro del intestino a depsitos de ferritina

en diferentes tejidos, y de all a donde sean necesarios.
El complejo C3 del complemento: Son protenas sricas que actan
en inmunidad inespecfica, provocando la lisis de distintas bacterias.
Globulinas gamma:
Corresponden a las inmunoglobulinas sricas o anticuerpos (IgA, E, G,
M).
Determinacin de protenas totales y albumina.

Para la determinacin de protenas totales se utiliza el mtodo de Biuret;
cuyo nombre se debe al biuret, una molcula formada a partir de dos
molculas de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da
positiva a esta reaccin. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin
acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de
un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos
del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos, presentando un
mximo de absorcin a 540 nm.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de

protenas totales presentes en la muestra.
Por su lado, para la determinacin de albmina se utilizan varios
compuestos cromgenos, entre los cuales los ms empleados est el verde
de bromocresol BCG- (3,3, 5,5-tetrabromo cresolsulfon ftalena). La
albmina reacciona con el BCG produciendo un compuesto coloreado de
color verde, cuya mxima absorbancia es a 625 nm. La intensidad del color
formado es proporcional a la cantidad de albmina presente en la muestra.
MATERIALES:
Suero para las determinaciones qumicas
Reactivos:
o Biuret para la determinacin de protenas totales
o Verde de bromocresol (BCG) para la determinacin de albmina
Soluciones estndar de:
o Protenas totales
o Albmina
Tubos de ensayo con gel para obtencin de suero (tapn amarillo)
Cubetas
Micropipetas
Puntas para micropipetas
Fotmetro
Reloj
PROCEDIMIENTOS:
a) Protenas totales
a. Marcar tres tubos de ensayo como B (Blanco), S (Standard) y M
(Muestra escribir el nmero de muestra)
b. Proseguir de acuerdo al siguiente esquema:
B St M
Agua 14.3 l
Solucin 14.3 l
Suero 14.3 l
estndar
Reactivo de 1000 1000 1000
Biuret l l l
c. Incubar por 30 minutos a temperatura ambiente (TA) o 15 minutos a
37C.
d. Leer las absorbancias del estndar (AS) y la muestra (AM), poniendo
el aparato en cero con el blanco de reactivo (B), a una longitud de
onda de 540 nm.
e. Determinar la concentracin de protenas totales utilizando la ecuacin
de Beer-Lambert
NOTA: LA LINEALIDAD DE LA PRUEBA ES DE 1.0 a 12.0 g/dl Y LOS

VALORES DE REFERENCIA DE 6.1 a 7.9 g/dl
b) Albmina
a. Marcar tres tubos de ensayo como B (Blanco), S (Standard) y M
(Muestra escribir el nmero de muestra)
b. Proseguir de acuerdo al siguiente esquema:
B St M
Solucin 5 l
Suero 5 l
estndar
Reactivo de BCG 1000 1000 l 1000 l
l
c. Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente (TA) o 5 minutos a
37C.
d. Leer las absorbancias del estndar (AS) y la muestra (AM), poniendo
el aparato en cero con el blanco de reactivos (B), a una longitud de
625 nm
e. Determinar la concentracin de protenas totales utilizando la ecuacin
de Beer-Lambert
NOTA: LA LINEALIDAD DE LA PRUEBA ES DE 0.5 a 6.0 g/dl Y LOS

VALORES DE REFERENCIA DE 3.5 a 4.8 g/dl
c) Relacin albmina/globulina (Relacin A/G)

Con las metodologas arriba descritas se estn determinando las
protenas totales y albmina, respectivamente. Puesto que la albmina
es el nico tipo de protena srica no globulina, la diferencia entre las
protenas totales y la albmina corresponde a la cantidad de globulina
presente en la muestra.
Al dividir el valor de globulina entre el valor de albmina se obtiene la

relacin existente entre ambos tipos de protenas, denominada relacin

A/G, la que es utilizada clnicamente para estimar el tipo y grado de
desorden observado en relacin al metabolismo de las protenas.
CONCLUSIONES:
Se realiz la determinacin de protenas totales en suero sanguneo, y se concluy que las

protenas son esenciales para la vida ya que pueden aparecer en forma de enzimas,
hormonas, factores de coagulacin. Su estudio o determinacin en el laboratorio, pues
puede reflejar el estado nutricional del paciente.
Se realiz la determinacin de albumina en suero sanguneo, cabe

destacar que las protenas en suero se divide en globulinas y
albuminas, la albumina es una de las ms importantes producidas en el
hgado, y se concluy que si hay una alteracin en los valores indican
enfermedad en dicho rgano, una disminucin de los niveles de albumina
indica que puede ser signo de una enfermedad heptica renal crnica.
BIBLIOGRAFIA:
https://es.scribd.com/doc/44104775/Determinacion-de-Proteinas-y-de-
Albumina-3
https://es.slideshare.net/johnnyalexanderaguilarmontalvan/proteinas-
totales-y-albumina-42818080
SEMANA 13:
PRACTICA N13
DETERMINACION DE CREATINA
INTRODUCCIN:
En la presente practica realizaremos la determinacin de urea y creatinina, que

son utilizadas rutinariamente para valorar el funcionamiento de los riones, es
decir, para valorar como marcha la excrecin de los residuos txicos
producidos en el organismo como consecuencia del metabolismo celular de
todas las clulas del organismo.
La creatinina es una molcula de deshecho que se genera a partir del

metabolismo muscular. Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es
una prueba diagnstica esencial, ya que se ha observado que su concentracin
en sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la funcin renal.
OBJETIVOS:
Practicar el adecuado manejo de la tcnica de laboratorio para la correcta

determinacin de creatinina en una muestra biolgica.
Determinar los valores referenciales de laboratorio de la creatinina y

compararlos con el valor obtenido de nuestra muestra problema que
analizaremos.
Sealar las principales patologas que se presentan, cuando se tienen valores

superiores o inferiores a los valores de normalidad de creatinina en una
muestra biolgica
MARCO TEORICO:
La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir

de la creatina por prdida de una molcula de agua. A su vez, la creatina se
produce por hidrlisis del fosfato de creatina, por accin de la creatin-fosfo-
kinasa (CPK), apareciendo como metabolitos de dicha reaccin el fosfato
energtico y la creatina. El radical fosfato puede aportar energa directamente
por dicha reaccin o a travs de su acoplamiento a una molcula de ADP para
formar ATP y posterior hidrlisis por accin de ATPasa.
La eliminacin de creatinina en el cuerpo humano tiene lugar casi

exclusivamente a travs de la filtracin glomerular, siendo un importante ndice
del funcionalismo renal. A diferencia de la urea, la eliminacin de creatinina por
la orina no viene afectada por la diuresis, al mismo tiempo que para una misma
persona es muy constante su eliminacin diaria con casi independencia de la
dieta alimenticia, siendo la masa muscular el factor condicionante ms directo
de su excrecin total por da. En resumen, podemos decir que la eliminacin de
creatinina en un intervalo de 24 horas es un valor constante, dependiente
principalmente de la masa muscular del individuo, y que por otro lado el
clculo del aclaramiento de la creatinina ser un parmetro directo del
funcionalismo renal.
La creatinina es una molcula de desecho que se genera a partir del

metabolismo muscular. La creatinina proviene de la creatina, una molcula muy
importante para la produccin de energa muscular. Aproximadamente el 2%
de la creatina del cuerpo se convierte en creatinina cada da. La creatinina se
transporta desde los msculos por medio de la sangre hacia el rin. Los
riones filtran la mayora de la creatinina y la eliminan en la orina.
Aunque es una sustancia de desecho, la creatinina es una prueba diagnstica

esencial, ya que se ha observado que su concentracin en sangre indica con
bastante fiabilidad el estado de la funcin renal. Si los riones no funcionan
bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto sta se acumula en la sangre.
Por esto la creatinina puede avisar de una posible disfuncin o insuficiencia
renal, incluso antes de que se presenten sntomas. Por eso la creatinina suele
figurar en los anlisis de sangre que serealizancomnmente. Los valores
normales de creatinina en la sangre son aproximadamente 0,6 a 1,2 miligramos
(mg) por decilitro (dL) en los varones adultos y 0,5 a 1,1 miligramos por decilitro
en las mujeres adultas. Los adultos con mucha masa muscular pueden tener
ms creatinina en la sangre que la poblacin normal. Las personas ancianas,
por otro lado, pueden tener menos creatinina en la sangre de lo normal.
Algunos frmacos pueden producir una elevacin anormal de las
concentraciones de creatinina en sangre. Una concentracin muy elevada de
creatinina en la sangre puede indicar la necesidad de someterse a dilisis para
eliminar las sustancias de desecho de la sangre. VALORES NORMALES EN
LA SANGRE Los valores normales en los hombres adultos son entre 0,7 y 1,3
mg por decilitro. En las mujeres adultas entre 0,5 y 1,2 mg por decilitro En los
nios pequeos se aceptan valores de 0,2 y 1 mg/dl. Los valores ms altos de
4 mg/dl se deben a un fallo renal importante. USO EN DIAGNSTICO Medir la
creatinina del suero es una prueba simple y es el indicador ms comn de la
funcin renal. Una subida en los niveles de creatinina de la sangre solamente
es observada cuando hay un marcado dao en los nefrones(RC). Por lo tanto
esta prueba no es conveniente para detectar estados tempranos de
enfermedades del rion Una mejor valoracin de la funcin del rin es dada
por la prueba de aclaramiento de creatinina.
La separacin de creatinina puede ser calculada con precisin usando la

concentracin de la creatinina del suero y alguna o todas las variables
siguientes: sexo, edad, peso, y raza segn lo sugerido por la National Diabetes
Association con una recoleccin de orina de menos de 24 horas. Algunos
laboratorios calcularn el ClCr si est escrito en la forma de solicitud de la
patologa; y, la edad, el sexo, y el peso necesarios son incluidas en la
informacin del paciente. 5.6 INSUFICIENCIA RENAL La insuficiencia renal (o
fallo renal) es la condicin en la cual los riones dejan de funcionar
correctamente. Fisiolgicamente, la insuficiencia renal se describe como una
disminucin en la filtracion de la sangre tasa de filtracin glomerular (TFG). La
insuficiencia renal se puede dividir ampliamente en dos categoras,

insuficiencia renal aguda e insuficiencia renal crnica.
Causas de la insuficiencia renal La diabetes es la causa ms frecuente de

insuficiencia renal, y constituye ms del 40 por ciento de los casos nuevos.
Incluso cuando los medicamentos y la dieta pueden controlar la diabetes, la
enfermedad puede conducir a nefropata e insuficiencia renal.
Una causa tpica de insuficiencia renal en los nios es el Sndrome urmico

hemoltico (SUH), una enfermedad causada por la bacteria Escherichia coli
O157:H7 que puede ocasionar la muerte o dejar daos renales, neurolgicos o
hipertensin arterial.
Aunque cualquier persona y a cualquier edad puede desarrollar insuficiencia

renal crnica, existen ciertos factores de riesgo identificados que favorecen la
aparicin de alteraciones renales: * Diabetes * Hipertensin * Enfermedades
del corazn * Antecedentes familiares de enfermedad renal * Edad * Raza Las
personas con insuficiencia renal tienen que someterse a dilisis pero no en
todas las ocasiones, la cual reemplaza algunas de las funciones de filtracin de
los riones, o a un transplante para recibir el rin de un donante sano. Debido
a que hay pocos sntomas en los inicios de la enfermedad, el diagnstico
depende de las pruebas de laboratorio. Para ello es necesario reconocer
ciertas anormalidades o marcadores renales como la presencia de protenas
en la orina y disminucin de la funcin renal por ms de tres meses.
Determinacin de Creatinina:
La reaccin qumica aplicable para fotometra es la descrita por Jaffe, basada

en el color anaranjado que se produce al reaccionar la creatinina con el
picrato alcalino. Hay varias substancias en el suero y orina que actan como
cromgenos inespecficos, lo que es un problema principalmente para el
clculo del aclaramiento. Por este motivo tiene una gran importancia la
adecuacin de todas
las variables de la reaccin, muy especialmente el pH, con el fin de obtener la

mxima sensibilidad para la creatinina y la mnima interferencia de
cromgenos. Adaptando la reaccin a una medida cintica, se logra una gran
especificidad debido a que la creatinina reacciona con el picrato alcalino con
ms rapidez que los cromgenos (metilguanidina, picramato,), por lo que la
medida del incremento de color en un breve perodo de tiempo inicial de la
reaccin valorarn principalmente creatinina, con poca influencia de los
cromgenos inespecficos, por esto es recomendable, de ser posible, la
determinacin cintica.
MATERIALES:
Pipeta automtica, de ul
Pipeta de 1ml
Muestra (sangre)
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Cubetas de 1cc
Tubo tapa lila
REACTIVOS:
Reactivo A (Tapa Blanca): solucin de cido pcrico
Reactivo B (Tapa Azul): solucin de hidrxido
Standard: solucin de creatinina 2 mg/dl.

PROCEDIMIENTO:
1. Preparar el reactivo de trabajo, con la mezcla de los reactivos de los frascos

de tapa blanca y azul
2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.
4. En tres cubetas de 1cc marcadas B (Blanco), S (Estndar) y D

(Desconocido), colocar:
B S D
R. Trabajo 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Estndar - 100 ul -
Muestra - - 100 ul
5. Leer la densidad ptica en espectrofotmetro a 492 nm.
6. Leer la absorbancia despus de 30 s de haber puesto la cubeta, esperar a

los 90 s y tomar anotar una nueva medida.
7. Calcular el resultado.
NORMALIDAD
Valores normales de Creatinina:
0,7 1,4 mg/dl Varones
0,6 1,1 mg/dl Mujeres

Los adultos con mucha masa muscular pueden tener ms creatinina en la

sangre que la poblacin normal. Las personas ancianas, por otro lado, pueden
tener menos creatinina en la sangre de lo normal.
CONCLUSIONES:
Se realiz la determinacin de Creatina, y se concluy que la creatinina es la
molcula producto de deshecho del metabolismo proteico.
La determinacin de creatina se utiliza en la prctica clnica como un parmetro

idneo para valorar el funcionamiento renal.
SEMANA 14:
PRACTICA N14
DETERMINACIN DE UREA.
INTRODUCCIN:
La urea representa la fraccin de nitrgeno no proteico ms importante en la

mayora de los lquidos biolgicos del organismo, se eliminacin en el hombre
es el principal producto final del metabolismo proteico. Se produce en el hgado
y es excretada por la orina a travs de los riones.
OBJETIVOS:
Practicar el adecuado manejo de la tcnica para la determinacin de urea en

una muestra biolgica
Determinar los valores de referencia de la urea y compararlos con el valor

obtenido en nuestra muestra problema que se analizara..
Sealar cules son las principales patologas que se presentan si tenemos

valores altos o bajos de urea en una muestra biolgica.
MARCO TEORICO:
La Urea Es un compuesto qumico cristalino e incoloro, de formula CO(NH2)2,

soluble en agua y en alcohol. Se encuentra abundantemente en la orina y en la
materia fecal. Es el principal producto terminal del metabolismo de protenas en
el hombre y en los dems mamferos. La urea se presenta de forma esfrica o
granular. Es una sustancia que tiene la capacidad de absorber agua de la
atmosfera y presenta un ligero olor a amoniaco. La orina humana contiene
unos 20g por litro, y un adulto elimina de 25 a 39g diariamente
La concentracin sangunea de amoniaco es superior en los infantes que en los

adultos, debido a que el desarrollo de la circulacin heptica se termina
despus del nacimiento. La hiperamonemia es una entidad que se presenta
con frecuencia debido a defectos congnitos en el ciclo de la urea. El error
innato del metabolismo ms comn es la deficiencia en ornitina
transcarbamilasa. La hiperalimentacin es una causa mucho ms frecuente de
hiperamonemia en infantes. Con frecuencia, se diagnostica el sndrome de
Reye por un amoniaco sanguneo elevado en ausencia de otra causa
demostrable.
Los pacientes adultos muestran elevadas concentraciones de amonaco

sanguneo en las etapas terminales de: la cirrosis heptica, la falla heptica y la
necrosis del hgado aguda y subaguda. Se presagia el comienzo de la
encefalopata heptica por una elevacin en el amonaco sanguneo. Se ha
demostrado que la medicin en lquido cefalorraqudeo (LCR) de la glutamina,
correlaciona bien con el desarrollo de la encefalopata heptica. Tambin se
puede utilizar la medicin de la glutamina en el LCR, para diferenciar la
encefalopata heptica de la sptica. Sin embargo, no es comn la medicin de
la glutamina en el LCR. La excrecin de amonaco urinario se eleva con la
acidosis y se disminuye en la alcalosis, puesto que la formacin de sales de
amonio es un mecanismo importante para excretar el exceso de iones
hidrgeno. Daos en los tbulos renales distales, tal como ocurre en la falla
renal, la glomerulonefritis, el hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison,
conllevan a una excrecin de amonaco disminuida sin presentar cambios en
los niveles sanguneos de amonaco.
Puesto que la urea se sintetiza en el hgado, en la enfermedad heptica sin

dao en la funcin renal, se presenta nitrgeno ureico srico bajo, aunque la
relacin urea a creatinina se puede conservar normal. La elevacin en el
nitrgeno ureico srico no implica necesariamente dao renal, puesto que la
deshidratacin puede llevar a concentraciones de nitrgeno ureico tan altas
como 600 mg/L. En los infantes que reciben una frmula alta en protenas
pueden tener niveles de nitrgeno ureico de 250 a 300 mg/L. Naturalmente,
enfermedades como la glomerulonefritis aguda, la nefritis crnica, el rin

poliqustico y la necrosis renal elevan el nitrgeno ureico.
La urea, que constituye el 80% del nitrgeno en la orina, procede de la

descomposicin de las clulas del cuerpo pero, sobre todo, de las protenas de
los alimentos.
USOS Debido a su alto contenido en nitrgeno, la urea preparada

comercialmente se utiliza en la fabricacin de fertilizante agrcola; esencial en
el metabolismo de la planta ya que se relaciona directamente con la cantidad
de tallos y hojas, las cuales absorben la luz para la fotosntesis. Adems el
nitrgeno est presente en las vitaminas y protenas, y se relaciona con el
contenido proteico de los cereales. En dermatologa la urea se utiliza como
humectante natural por sus excelentes propiedades hidratantes.
Ciclo de la urea El llamado ciclo de la urea, es el proceso que consiste en la

formacin de urea a partir de amonaco. El ciclo de la urea (Ciclo de Krebs-
Henseleit) corresponde a la via metablica usada para eliminar los desechos
nitrogenados del organismo. Los diversos compuestos pueden entrar por casi
cualquier parte del ciclo, y el producto final de desecho es la urea. La mayora
del ciclo de la urea es citosolico, pero la ornitina transcarboxilasa es
intramitocondrial. Los principales ingresos del ciclo son los aminocidos, los
cuales degradan su parte amnica en el ciclo y su parte carboxilica en el Ciclo
de Krebs. En el ciclo principal, el nitrgeno entra por medio del amonio (NH4) y
mediante la Carbomil-P sintetasa forma Carboamil-P NH3 + CO2 + 2 ATP ----->
H2N--CO--O-- PO4- El gasto de dos molculas de ATP desplaza el equilibrio
de la reaccin a la derecha y fuerza la sntesis del carbamilfosfato. La ornitina
se convierte en citrulina directamente por el paso del carbamilo del
carbamilfosfato a la ornitina en la reaccin de transcarbamilacin. La citrulina
es, por lo tanto, una carbamilornitina, cuya sntesis se realiza en la mitocondria
de la cual sale al citosol para continuar el ciclo.
La formacin de arginina es un proceso ms complejo que requiere la

presencia de aspartato, ATP y Mg+2. El primer paso es la formacin de argino-
succinato por la condensacin (en presencia de ATP y Mg+2) de citrulina y

aspartato. El argininosuccinato se fragmenta en arginina (lista para ser atacada
por arginasa) y fumarato, que entra al ciclo de krebs y permite la regeneracin
de aspartato. Finalmente, la arginasa hidroliza a la arginina en urea y ornitina,
la cual queda disponible para penetrar a la mitocondria e iniciar el ciclo
aceptando otro carbamilfosfato. Dada la toxicidad y la necesidad de manejar
concentraciones cambiantes de NH4+, el ciclo de la urea muestra una gran
capacidad de ajuste pudiendo, de acuerdo con la dieta, formarse y eliminarse,
cada 24 horas en condiciones normales, de 5 a 50 gramos de urea. Los
mecanismos de ajuste pueden ser lentos, requiriendo de 3 a 4 das para
instalarse, por depender de la cantidad de enzimas presentes, o rpidos, bajo
control hormonal, instalados en minutos, en este caso en relacin con el mayor
acopio de sustratos, sobre todo de acetil-glutamato, el modulador alostrico
positivo de la carbamilfosfato sintetasa que forma carbamilfosfato, alimentador
del ciclo.
Toxicidad del amoniaco El amoniaco generado por las bacterias entricas se

absorbe en la sangre de la vena porta, por tanto sta contiene niveles ms
altos de amoniaco que la sangre sistmica. Ya que un hgado sano metaboliza
rpidamente el amoniaco de la sangre portal, la sangre perifrica se encuentra
virtualmente libre de amoniaco; esto resulta esencial, puesto que an
cantidades mnimas de amoniaco son txicas para el sistema nervioso central.
En caso de que la sangre portal no pase por el hgado, el amoniaco en sangre
sistmica puede elevarse a niveles txicos. Esto puede ser consecuencia de
una disminucin pronunciada en la funcin heptica, o al desarrollo de
comunicaciones colaterales entre venas porta y sistmicas, como sucede en la
cirrosis. Los sntomas de la intoxicacin por amoniaco incluyen temblor,
lenguaje poco entendible, visin borrosa y, en casos graves, coma y muerte.
Estos sntomas se asemejan a los del coma heptico, que se presenta cuando
los niveles de amoniaco en sangre y en cerebro se elevan en forma
significativa.
DETERMINACIN UREA EN LA SANGRE :
Mide la cantidad (concentracin) de urea o nitrgeno ureico presente en la

sangre. El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al da algo
ms en personas que comen dieta rica en protenas, menos en personas con
dieta pobre en protenas. Toda esta urea debe eliminarse por orina; de lo
contrario se acumular en lquidos corporales. Su concentracin normal
promedio en el plasma es de 0.26 mg/dl, pero se han observado en estados
anormales raros valores de hasta 8 mg/dl; y pacientes con insuficiencia renal
muchas veces tienen valores tan altos como 2 mg/dl. Los dos factores
principales que establecen el ritmo de excrecin de urea son: 1) la
concentracin de urea en el plasma, y 2) la intensidad de filtracin glomerular
DETERMINACION DE UREA:
La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea dando amonio y CO 2. El amonio

formado se valora mediante una reaccin enzimtica (GLDH), pasando
NADH a NAD+.
La disminucin de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la
concentracin de urea.
Ureasa
Urea + H2O +2H+ 2 NH3 + CO2
GL
DH
2NH3 + -cetoglutarato + 2NADH H2O + NAD+ + 2L-glutamato

MATERIALES
Pipeta automtica, de ul
Pipeta de 1ml
Muestra (sangre)
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Cubetas
Reactivo de trabajo
Standar
Tubo tapa lila
PROCEDIMIENTO:
1. Preparar el diluyente para enzimas en un litro de agua destilada.
2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.
3. En 3 tubos marcados B (Blanco), S (Estndar), D (Desconocido), colocar:
B S D
R. Trabajo 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Estndar - 5 ul -
Muestra - - 5 ul
Incubar 10 minutos a temperatura ambiente
4. Leer la densidad ptica en espectrofotmetro a 580 nm.

5. Calcular el resultado.
Normalidad
20 a 50 mg%
CONCLUSIONES:
Se realiz la determinacin de Urea, y se concluy que la urea es la excrecin

o eliminacin de los desechos nitrogenados luego del metabolismo celular de
las protenas.
La determinacin de urea se utiliza en la prctica clnica para valorar el

funcionamiento renal, y esta muy ligada a la produccin y metabolismo del
amoniaco a nivel del hgado.
BIBLIOGRAFIA:
1. http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/08/determinacion-de-urea-informe-
de.html
2. http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/08/determinacion-de-creatinina-
informe-de.html
3. https://es.slideshare.net/guillermoreynaldomejiagutierrez/labo-de-urea
4. https://es.slideshare.net/karenstefysuarez/proyecto-de-urea-en-la-sangre
5. .http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA
_10817.pdf
SEMANA 15:
PRACTICA N15
ESTADO NUTRICIONAL
INTRODUCCION:
Debido a los cambios ambientales y socioculturales de las ltimas dcadas y

su papel en el cuadro actual de produccin de la obesidad, se hace relevante
conocer los determinantes del estado nutricional, el universo simblico y los
aspectos subjetivos que hacen parte del estilo de vida y el comportamiento
alimentario. La deteccin y el conocimiento de la magnitud de distorsiones en la
percepcin de la imagen corporal constituyen importantes dados para la
evaluacin clnica de sujetos con riesgo para el desarrollo de la obesidad
La actividad fsica regular y los hbitos alimentarios saludables parecen tener

efectos positivos en varias funciones fisiolgicas y vienen siendo apuntados
como elementos fundamentales en la mejora de la salud y calidad de vida de
los individuos. Se sabe, tambin, que la prctica de ejercicios, aliada a una
alimentacin apropiada, puede reducir las prdidas fisiolgicas inducidas por
enfermedades, mejorando las funciones msculo-esquelticas y
cardiovasculares
MARCO TEORICO:
El ndice de Masa Corporal es un ndice del peso de una persona en relacin

con su altura. A pesar de que no hace distincin entre los componentes grasos
y no grasos de la masa corporal total, ste es el mtodo ms prctico para
evaluar el grado de riesgo asociado con la obesidad. El valor obtenido no es
constante, sino que vara con la edad y el sexo .Tambin depende de otros
factores, como las proporciones de tejidos muscular y adiposo. En el caso de
los adultos se ha utilizado como uno de los recursos para evaluar su estado
nutricional, de acuerdo con los valores propuestos por la Organizacin Mundial

de la Salud.
Las personas con un valor de I.M.C igual o ms de 25 pueden tener mayor

riesgo de ciertas condiciones vinculadas con la obesidad.
Clasificacin de la OMS del estado nutricional de acuerdo con el I.M.C
El clculo del I.M.C te permite saber si tienes un peso adecuado a tu edad y tu

sexo, se puede detectar posibles situaciones de malnutricin, y en particular la
obesidad. Se puede crear adems un enfoque personalizado para un estilo de

vida ms saludable.
La prctica regular de la actividad fsica aerbica es la terapia de menor costo

para la promocin de la salud y prevencin de enfermedades 1. Actualmente, la
campaa de combate al sedentarismo recomienda la prctica de treinta
minutos de actividades fsicas la mayora de los das de la semana, trabajando
los grandes grupos musculares, pudiendo hacerse de modo continuo o
fraccionado2. Mantener alguna actividad fsica es mejor que la inactividad. Sin
embargo, cuando se recomienda la prctica fraccionada o leve, se tiene por
objetivo romper la inercia, para comenzar a adquirir hbitos de vida activa y,
solamente tras algn tiempo de prctica regular, en ritmo submximo
(moderado), es que gradualmente se va adquiriendo los reales beneficios de la
prctica de actividad fsica como elemento de proteccin a las enfermedades
no transmisibles
Actualmente, la inactividad fsica constituye un determinante cada vez ms

importante de salud, un problema resultante del estilo de vida ms sedentario,
para lo que contribuyen: la vida en las ciudades (poco favorable a la prctica de
actividad fsica), las nuevas tecnologas, el ocio pasivo (exceso de Televisin,
entre otras causas) y el mayor acceso al transporte individual. El avance de la
Tecnologa y el transporte propio tienen disminuido la necesidad del ejercicio

fsico en las actividades de la vida diaria. Adems de indispensable a una
buena salud, se sabe que la actividad fsica tiene una relacin inversa con las
enfermedades degenerativas y es un importante elemento primario de
prevencin. La prctica de la actividad fsica tiene un impacto positivo sobre el
desarrollo social y emocional de los nios y adolescentes 22. Un estilo de vida
fsicamente activo se asocia generalmente a costumbres ms saludables y a
una menor incidencia de tabaquismo y otros hbitos txicos (consumo de
alcohol y otras drogas)
MATERIALES:
Balanza
Tallimetro
Cinta mtrica
Lipocalibrador
Calculadora
PROCEDIMIENTO:
Valoracin del Estado Nutricional Exploracin Fsica y Medidas

Antropomtricas
La exploracin fisca y la toma de medidas antropolgicas van encaminadas a

establecer la proporcin de los diferentes componentes del organismo (grasa,
msculo, agua), los cambios producidos en el tiempo.
a) Peso y Talla
Son las medidas ms fciles de realizar, y bsicos para la realizacin de

frmulas ms completas para la valoracin del estado nutricional de un
individuo.
El peso se debe realizar con el individuo sin ropa, en una bscula estndar
ajustada para la medicin cada 100 mg; la talla debe realizarse con el individuo
erguido, ajustando al milmetro, estando el sujeto sin zapatos.
b) ndice de Masa Corporal (IMC)
El ndice de masa corporal (IMC) es la medida de eleccin y ms

frecuentemente empleada, se obtiene al dividir el peso entre la altura, siendo
el peso calculado en kilogramos y la altura en metros.
Peso
2
ndice de Masa Corporal (IMC) = (en Kg/m )
2
Altura
Es el ndice que mejor se correlaciona con la proporcin de grasa del individuo adulto. Se
han establecido tablas de valores normales para mujeres y varones segn su edad.
IMC (kg/m2)
Grupos de edad (aos)
Mujeres Hombres
19-24 19-24 19-24
25-34 20-25 20-25
35-44 21-26 20-25
45-54 22-27 20-25
55-64 23-28 20-25
> 64 24-29 20-25
c) Porcentaje del Peso Ideal
El peso actual de un individuo debe ser comparado con valores estndares como el peso
ideal. En Espaa existen unas tablas de peso ideal para una determinada talla, en
individuos entre 16 y 70 aos. El porcentaje de peso ideal se calcula dividiendo el peso
actual entre el peso ideal y multiplicndolo por 100 (expresado en %).
Peso
actual
Porcentaje del peso x100 (expresado en

ideal = Pes ideal %)
En la evaluacin de pacientes desnutridos, el porcentaje de peso ideal tiene inters para

determinar el grado de desnutricin (calificndose de severa cuando el porcentaje de
peso ideal es menor de 70%, y leve si es mayor de 90%).
d) Cambio de Peso Reciente
Un cambio en poco tiempo de forma importante revela trastornos nutricionales

importantes, que cuando supone una prdida de peso puede relacionarse con una mayor
deficiencia de protenas y mayor ndice de riesgo.
Se calcula mediante la frmula: Peso habitual menos peso actual, dividido entre el peso
actual y multiplicado por 100 (en %).
Peso habitual - Peso
Porcentaje de cambio de actual x100 (expresado en

peso = %)
Peso habitual
Se sugiere que una prdida del 10% del peso habitual durante un periodo de 6 meses
indica un grado de desnutricin importante.
e) ndice Nutricional (IN)
Relaciona el peso y la talla del individuo con el peso y talla medios para su edad y sexo.
Se calcula con la frmula:
ndice nutricional Peso actual (Kg) / Talla actual x100 (expresado en

= (m) %)
Peso medio (Kg) / Talla media

(m)
Se considera normal un IN entre 90 y 110%; cuando es menor de 90% se habla de

malnutricin, si est entre 110 y 120% se define sobrepeso, y obesidad si es mayor de
120%.
f) ndice Ponderal (IP)
Es uno de los ndices de adiposidad ms conocidos, siendo conocido mediante mltiples

expresiones entre las que destaca el de ndice de forma corporal (IFC) o ndice de
Rohrer. Se calcula mediante la siguiente frmula matemtica: dividiendo peso entre
altura3, siendo el peso determinado en kilogramos y la altura en metros:
Peso
(en
ndice de Forma Corporal (IFC) =
Kg/m3)
Altura3
El resultado obtenido del clculo del IFC se correspondera de forma completa con el
porcentaje de masa grasa corporal, no vendra afectado por la altura como ocurre en el
caso del IMC, por lo que sera ms adecuado para el estudio individual, sobre todo en
adolescentes y nios. Sin embargo, el clculo del IFC, hasta el momento, no ha cobrado
la vigencia e importancia del IMC, y en la prctica clnica diaria no es demasiado
utilizada.
g) Medicin de Pliegues Cutneos
La medicin de diversos pliegues cutneos se ha utilizado con el fin de determinar el

grado de adiposidad de los sujetos. Su utilidad deriva de que la grasa subcutnea es
aproximadamente un 50% de la grasa total del organismo, y su medida mediante los

pliegues cutneos reflejara bastante bien el grado de adiposidad total de un individuo.
Se puede realizar una sola medicin o una combinacin de varias zonas, con lo que se
reduce el error y se corrigen las posibles diferencias en la distribucin de grasa dentro de
un mismo individuo.
Para realizar la medicin se utiliza el lipocalibrador o caliper, y su resultado se obtiene en

milmetros. Los puntos utilizados habitualmente son el pliegue tricipital (en el punto
medio entre el olcranon y el acromion), el pliegue bicipital (en la cara anterior del brazo
a la misma altura que la medicin del pliegue tricipital) del brazo no dominante, el pliegue
subescapular (un centmetro bajo el ngulo inferior de la escpula, con los brazos del
paciente relajados) y el pliegue suprailiaco (dos centmetros por encima de la cresta
iliaca izquierda, en la lnea media). En cada zona se realizan tres mediciones y se hace
la media aritmtica, siendo sta el resultado final para cada pliegue.
Existen varias ecuaciones que, utilizando las mediciones de los pliegues subcutneos del
individuo, son capaces de obtener una prediccin precisa del porcentaje de grasa
corporal total. Tambin se puede utilizar el valor de uno o varios de los pliegues para ser
comparados con tablas de referencia segn la edad y el sexo del individuo; se
considerara obesidad cuando la medicin es superior al percentil 90, y por debajo del
percentil 5 como desnutrido.
PLIEGUE TRICIPITAL POR PERCENTILES EN VARONES
Percentiles (mm)
Edad (aos)
5 10 25 50 75 90 95
11-12 6 6 8 10 14 18 21
12-13 6 6 8 11 16 20 24
13-14 6 6 8 11 14 22 28
14-15 5 5 7 10 14 22 26
15-16 4 5 7 9 14 21 24
16-17 4 5 6 8 11 18 24
17-18 4 5 6 8 12 16 22
18-19 5 5 6 8 12 16 19
19-25 4 5 6 9 13 20 24
25-35 4 5 7 10 15 20 22
35-45 5 6 8 12 16 20 24
45-55 5 6 8 12 16 20 23
55-65 6 6 8 12 15 20 25
65-75 5 6 8 11 14 19 22
75-80 4 6 8 11 15 19 22
PLIEGUE TRICIPITAL POR PERCENTILES EN MUJERES
Percentiles (mm)
Edad (aos)
5 10 25 50 75 90 95
11-12 7 8 10 13 18 24 28
12-13 8 9 11 14 18 23 27
13-14 8 8 12 15 21 26 30
14-15 9 10 13 16 21 26 28
15-16 8 10 12 17 21 25 32
16-17 10 12 15 18 22 26 31
17-18 10 12 13 19 24 30 37
18-19 10 12 15 18 22 26 30
19-25 10 11 14 18 24 30 34
25-35 10 12 16 21 27 34 37
35-45 12 14 18 23 29 35 38
45-55 12 16 20 25 30 36 40
55-65 12 16 20 25 31 36 38
65-75 12 14 18 24 29 34 36
h) Permetro del Brazo
Consiste en la medicin del permetro del brazo a la misma altura que en la medicin de
los pliegues tricipital y bicipital. El permetro mide el compartimiento graso y muscular del
brazo, de manera que es posible calcular el permetro muscular (PMB) restando al
permetro total (PTB) el valor del pliegue tricipital:
Permetro muscular del brazo = permetro total del brazo - pliegue tricipital.
Sin embargo no es del todo exacto, ya que no tiene en cuenta el grosor del hmero.
j) Parmetros Indicativos de la Distribucin de la Grasa Corporal
En los ltimos aos se ha reconocido la importancia que tiene la estimacin de la

distribucin de la grasa total en los diferentes compartimentos corporales (tejido
subcutneo, grasa visceral o intra-abdominal) como mtodo ms fiable para establecer
los riesgos relacionados con la presencia de obesidad. As, es la grasa visceral (o intra-
abdominal) la que metablicamente resulta ms peligrosa para la salud.
A partir de la dcada de los 80, se han sugerido diversos indicadores de obesidad

visceral como el ndice cintura / cadera (ICC), la circunferencia de la cintura (CC), el
ndice cintura / muslo (ICM), el ndice cintura / talla (ICT) y el dimetro abdominal sagital
(DS).
ndice cintura / cadera (ICC)
Es el parmetro antropomtrico ms atractivo para la evaluacin de obesidad abdominal.

Su resultado tiene una muy buena correlacin con la cantidad de grasa visceral, es de
muy fcil obtencin y reproducible en el tiempo. Su clculo es muy sencillo: se divide el
permetro de la cintura (cm) entre el permetro de la cadera (cm)
Permetro cintura
(cm)
ndice Cintura / Cadera (ICC)
=
Permetro cadera
(cm)
Para su obtencin se necesita una cinta mtrica ajustada milimtricamente, el paciente

debe estar de pi y con los brazos relajados a ambos lados del cuerpos. El permetro de
la cintura es la circunferencia mnima entre el reborde costal y la cresta iliaca; el
permetro de la cadera es la circunferencia mxima entre la cintura y los muslos.
Se ha establecido como factor de riesgo para el desarrollo de enfermedades asociadas a

la obesidad cuando el Icn/Cd resulta mayor de 0.9 en mujeres y mayor de 1.0 en
varones.
Circunferencia de la cintura (CC)
Cada vez hay ms evidencias que demuestran que la determinacin aislada del
permetro de la cintura (en cm) tiene un valor similar al ICC. sta medicin es ms
sencilla y se correlaciona muy bien con los ndices antes mencionados y la grasa
corporal total. Los valores de referencia varan segn la raza y poblacin.
En la raza europea se considera factor de riesgo cuando es mayor de 82 cm en mujeres

y ms de 95 cm. en varones (siendo el riesgo muy elevado en mujeres y varones cuando
es mayor de 90 cm y 102 cm respectivamente).
CONCLUSIONES:
Luego de realizar la prctica se llegar a la conclusin, que es muy importante la
actividad fsica, la alimentacin saludable (buenos hbitos alimenticios), para prevenir el
sobrepeso que se asocia significativamente con: diabetes, hipertensin arterial,
hipercolesterinemia, hipretrigliciremia, infartos de miocardio, evento cerebro vasculares,
insifiencia renal, entre otros.
La realizacin de la prctica permitir concluir de la importancia de las medidas

antropomtricas y los diferentes ndices de masa corporal, con la finalidad de combatir,
controlar y prevenir el sobrepeso, epidemia de salud mundial con mayor incidencia en
pases latinoamericanos como el Per.
BIBLIOGRAFIA:
1. https://es.slideshare.net/andribetha3/indice-de-masa
2. https://www.infonutricion.com/estado-nutricional-exploracion-fisica-medidas-
antropometricas.html
3. http://umh1544.edu.umh.es/wp-content/uploads/sites/63/2013/02/Medidas-
antropom%C3%A9tricas.pdf
4. http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0212-
16112008000300010

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UNIVERSIDAD TELESUP - GUA PRCTICA DE BIOQUMICA

Coordinador: Luis Palma Garca.

UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP

UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP

FACULTAD DE SALUD Y NUTRICIN

CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

GUA DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

El desarrollo del curso busca que el estudiante adquiera los procedimientos

La bioqumica clnica es la especialidad que se ocupa del estudio de las

Mediante la bioqumica clnica se podr conocer el significado clnico de las

conocer las diferentes enfermedades humanas, as como las pruebas estticas

Por tanto, comprende el estudio de los procesos metablicos y moleculares en

La presente gua de prctica de la asignatura ha sido elaborada como base

El pH EN LOS DIFERENTES FLUDOS BIOLGICOS

Determinar el pH de una solucin utilizando mtodos colorimtricos o

El pH es una medida utilizada por la qumica para evaluar la acidez o

Concepto de cido-base, ionizacin del agua, definicin de pH y pKa, ecuacin

El pH de una solucin acuosa se define como el logaritmo negativo de la

La escala de pH permite expresar la concentracin de iones hidronio (protn

Generalmente se utiliza vidrio compuesto de aproximadamente 22% de Na2O,

En el pHmetro, el electrodo de vidrio y el electrodo de referencia de calomel,

Este valor se alcanza cuando el pH del regulador es igual al pKa de cido. La

3 vasos de precipitados (50 o 100 mL)

Soluciones tampn de pH 3,5,7,9 y 10

Determinacin del pH mediante el mtodo potenciomtrico:

1. Preparacin de soluciones en un rango de pH de 3-10: Pesar 0.5 g de

A partir de esta solucin, a 25 mL de la solucin anterior adicionar NaOH

2. Preparacin de una solucin tampn de fosfato 0.1M a pH 7.0

A) Pesar 2.78 g de fosfato de sodio monobsico (NaH2PO4) y disolver en

B) Pesar 5.365 g de fosfato de sodio dibsico (Na2HPO4 .7H2O) o

3. La tabla 1 contiene los volmenes de las soluciones A y B necesarios

Determinacin del pH mediante el mtodo colorimtrico:

Preparacin de las soluciones con papel universal:

Pesar 0.05g de naranja de metilo, 0,15g de rojo de metilo, 0.30g de azul de

Preparar una batera de 8 tubos de ensayo y colocar en cada tubo de ensayo

Experimento 1: Determinacin del pH.

Tubo 1: 5 gotas de indicador+10 mL de agua

Tubo 2: 5 gotas de indicador+ 1 mL de solucin tampn pH 7.0 + 9 mL de

Tubo 3: 5 gotas de indicador+10 mL de agua

Tubo 4: 5 gotas de indicador+ 1 mL de solucin tampn pH 7.0 + 9 mL de

Determinar el pH de cada solucin as como la concentracin de

Experimento 2: Capacidad amortiguadora

Tubo 1: Adicionar una gota de NaOH 0.1M + 9 mL de agua destilada

Tubo 2: 9 mL de solucin amortiguadora a pH= 7.0+ una gota de NaOH 0.1M

*Observar, determinar el pH y anotar en la tabla.

Soplar por 15 segundos en el tubo 1

Y por un minuto el tubo 2. Observar el cambio de color, determinar el pH

Tubo 3: 9 mL de agua destilada+ 2 gotas de HCl 0.1M

Tubo 4: 9 mL de solucin amortiguadora a pH= 7.0 + 2 gotas de HCl 0.1M

Observar, determinar el pH y anotar en una tabla.

1. Qu es el PH y por qu es importante? Explique

La evaluacin ser permanente. se aplicar evaluacin constante. Al final del

1. Gmez J. Bioqumica preguntas y respuestas. Vol 1. 1 edicin. Lima.

2. VILLACENCIO. M. Bioqumica, tomos I y II. Ed. Concytec. Lima-Per. 2000

3. LOZANO, J. GALINDO, D, Bioqumica para ciencias de la salud, Ed

4. Devlin M, Bioqumica Edit. Reverte Espaa 2000

5. MURRIA, R. MAYES P, GRANNER`D RODWELL V: Bioqumica de Harper.

6. MONTGOMERY, R, CONWAY, T, SPECTOR, A: Bioqumica casos y textos

FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

Determinar la concentracin e sustrato en la cual la enzima alcanza su

HNO3 - 80% (concentracin en 80%)

1. Cocer, lavar y cocer las muestras: la papa, el apio y e hgado.