Inmovilizacin de Biocatalizadores

Introduccin:
Unin del biocatalizador (molculas o clulas) a un soporte inerte que
limite su libre difusin, manteniendo su actividad cataltica y su
estabilidad. Esto permite su uso en forma repetida y continua.

Ventajas : Desventajas:

Reutilizacin del biocatalizador Incrementos en los costos de

produccin: requerimiento de mayor
Mayor estabilidad potencial frente a equipamiento
cambios de temperatura, pH, reactivos
En algunos casos, prdida de
Facilita la purificacin y separacin de actividad biocataltica durante la
los productos inmovilizacin u operacin del
bi
bioreactor
t
Procesos continuos
TCNICAS Y SOPORTES PARA INMOVILIZACIN
TECNICAS SOPORTES MINERALES
Adsorcin carbn activado, bentonita, slica gel
Materiales porosos en los que queda atrapado el catalizador

Carbn activado Bentonita (arcilla) 800 m/g de superficie

500 -1500 m2/g especfica
SOPORTES VEGETALES: esponja vegetal
vegetal, los microorganismos forman bio-films,
bio films
o en el caso de hongos, las hifas crecen
adheridas al sustrato

Unin inica resinas de intercambio inico (el catalizador

queda inmovilizado por uniones electrostticas)
Unin covalente vidrio poroso con glutaraldehido,
cuentas o tubos de nylon activado
(alquilacin
l il i d de nylon
l con di
dimetil lf t ),
til sulfato ) sefarosa,
sefarosa
diisocianatos

Nylon Activado RNH2 Grupo Amino de protenas

DMS o (+) (+)

-C=NH- -C=NH- -C=NH-
TTFB
OR Trietiloxonio tetrafluoroborato OX HNR

NH2
OHC(CH2)3CHO + ENZIMA-NH2
N
GLUTARAHALDEIDO NH2
CH(CH2)3CH=N-ENZIMA-N=CH(CH2)3CH

N N

-CH=N-ENZIMA-N=CH(CH2)3CH=N-ENZIMA-N

Enzimas inmovilizadas: invertasa, lipasa

* Perdida de actividad por alteracin del sitio activo

TCNICAS Y SOPORTES PARA INMOVILIZACIN
TECNICA SOPORTE

Mi
Microencapsulacin
l i membranas
b de
d silicona,
ili colodin,
l di etc.
t
La enzima queda encerrada en una capsula de forma esfrica formada por
una membrana semipermeable.

Agregacin celular polielectrolitos (quitosano, poliaminas)

Zymomonas movilis Produccin de etanol

Inclusin en geles poliacrilamida, alginato de Ca,

carragenanos celulosa
carragenanos, celulosa, agar
agar-agar
agar (polmeros
( l
de origen natural)
 Inclusin o atrapamiento en geles
Metodologa: Crear una red lo suficientemente cerrada que impida
la salida del biocatalizador atrapado permitiendo la difusin de sustrato y
producto

Tipos:
- Fsico
F i : Solidificar
S lidifi ell soporte en presencia
i del
d l biocatalizador
bi li d
Soportes: alginato de Ca, carragenanos, agar- agar

- Covalente: Polimerizar el soporte en presencia del biocatalizador

Soportes: poliacrilamida, (acrilamida + bisacrilamida)

Mtodo muy
y importante
p para la inmovilizacin
p
de clulas y enzimas

- Fcil de aplicar
p industrialmente
- Rpido y Barato
- Condiciones suaves de inmovilizacin
Continuous Fabrication of Biocatalyst Immobilized Microparticles Using
Photopolymerization and Immiscible Liquids in Microfluidic Systems

CLEA
CLEC

We report a novel technique for manufacturing polymeric microparticles containing

biocatalysts by the behavior of immiscible liquids in microfluidic systems and in situ
photopolymerization. The approach utilizes a UV-polymerizable hydrogel/enzyme
solution and an immiscible oil solution. The oil and hydrogel solutions form emulsions
in pressure-driven
pressure driven flow in microchannels at high values of the dimensionless capillary
number (Ca). The resultant hydrogel droplets are then polymerized in situ via exposure
to 365 nm UV light. This technique allows for the generation of monodisperse particles
whose size can be controlled by the regulation of flow rates. In addition, both
manufacturing
f t i microparticles
i ti l andd immobilizing
i bili i bi
biocatalysts
t l t can b be performed
f d
simultaneously and continuously.
 Aplicaciones de Inmovilizacin

Biocatalizador Microbiano Mtodo Aplicacin

Escherichia coli Inclusin en gel Produccin de Triptofano

Escherichia coli Inclusin en gel Produccin de Ac. Fumrico

Saccharmyces cerevisiae Unin a superficies Hidrolisis de sacarosa

Rhodococcus rhodocrous Inclusin en gel Produccin de acrilamida

Pseudomonas AMI Inclusin en gel Produccin de L-Serina

Humicola sp. Inclusin en gel Conversin de Ryfampicina

 Objetivo:

estudiar la actividad invertasa de

Saccharomyces cerevisiae inmovilizada en
g g
agar-agar.
 Sacarosa

Glucosa Fructosa

Invertasa

F t
Fructosa
Glucosa
 S. cerevisiae (cepa comercial)

Inmovilizacin en agar-agar

Armado de columna

Solucin de
Sacarosa + productos de hidrolisis

Deteccin y dosaje de glucosa liberada

 Inmovilizacin en Agar-agar

Resuspender 1gr. Mezclar con agar fundido a 45C

Levadura prensada en 1ml agua

Resuspender en Gotear en aceite vegetal

buffer acetato de Na fro y con agitacin,
200 mM pH=5 ajustar la velocidad de
Armado de las agitacin
Columnas y erlenmeyer Filtrar en red
Filt ddde
nylon de 2 mm
y lavar con Buffer
Cargado de las columnas e incubacin:
Sacarosa 20% m/v

Azucar 20% m/v en

buffer acetato 200mM

Incubacin

Elusin

Alcuotas de 1 ml

Deteccin de Glc
Glc. libre
Test de glicemia
+ (GOD-POD)
 Tomar 20l de la solucin y agregar 2ml de reactivo

Test de Glicemia
GOD
Glucosa oxidasa
Glucosa + O2 + H2O Acido glucnico + H2O2

POD
peroxidasa
2 H2O2 + 4 AF + Fenol quinona coloreada + 4 H2O

Incubar 10 minutos a 37C

Absorvancia a 505 nm
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