DIAGNOSTICO PRE NATAL

TM SILVIA ZAVALETA CAMPOS

QUE PRETENDE?

CONOCER AL FETO
DX PRENATAL
 El concepto de Diagnstico Prenatal ( DP) ha
cambiado radicalmente en las dos ltimas
dcadas. Mientras hace unos pocos aos era
sinnimo de investigacin citogentica, hoy en
da se acepta que comprende todas aquellas
acciones diagnsticas encaminadas a
descubrir INTRATERO cualquier tipo de
defecto congnito.
 TECNICAS NO INVASIVAS
TECNICAS INVASIVAS
 TECNICAS NO INVASIVAS

1. TAMIZAJE BIOQUIMICO DE CROMOSOMOPATIAS.

2. TAMIZAJE ECOGRAFICO DE CROMOSOMOPATIAS Y DEFECTOS

ESTRUCTURALES.

3. DIAGNOSTICO PRENATAL EN CELULAS FETALES CIRCULANTES

EN SANGRE MATERNA.
 1. TAMIZAJE BIOQUIMICO DE
CROMOSOMOPATIAS
Sustancias de origen fetal, placentario o
feto-placentario.
 MARCADOR T21 MARCADORES %

AFP AFP + HCG 40%

HCG BETA LIBRE AFP + HCG + UE3 60%

UE3 AFP + HCG + UE3 + PAPP A 75 80%

2. TAMIZAJE ECOGRAFICO DE
CROMOSOMOPATIAS
 MARCADORES ECOGRAFICOS

MORFOLOGICOS
TRANSLUCENCIA
NUCAL (1999)
PLIEGUE NASAL
ANGULO
MAXILAR (2005)
 TRASLUCENCIA NUCAL
Liquido que
se encuentra
en la regin
posterior al
cuello del
feto
TRASLUCENCIA NUCAL
 HUESO NASAL

Presente en el 98% de fetos sanos

Ausente en el 60 70% de fetos con Sndrome de Down
HUESO NASAL
ANGULO FRONTO MAXILAR FACIAL

Angulo entre la parte superficial del maxilar superior y el

hueso frontal
 ANGULO FRONTO MAXILAR
FACIAL
VN: 78.1
T21: 88.7
70% de Pacientes con T21 tienen
un ngulo FMF mayor a 85
 3. DIAGNOSTICO PRENATAL EN
CELULAS FETALES CIRCULANTES EN
SANGRE MATERNA.
DIAGNOSTICO PRENATAL EN CELULAS FETALES
CIRCULANTES EN SANGRE MATERNA.

Clulas Fetales (1997)

ADN fetal
ARNm fetal
TECNICAS INVASIVAS
1. BIOPSIA DE VELLOSIDAD CORIAL
2. EMBRIOFETOSCOPIA.
3. AMNIOCENTESIS PRECOZ CON
AMNIOFILTRACION
4. AMNIOCENTESIS CLASICA
5. CORDOCENTESIS (20sem)
6. CARDIOCENTESIS
7. BIOPSIA FETAL
8. CELOCENTESIS.
9. LAVADO TRANSCERVICAL.
10. DIAGNOSTICO PREIMPLANTACION
1. BIOPSIA DE VELLOSIDADES
CORIONICAS
 Las vellosidades coriales derivan del
trofoectodermo, poseen la misma constitucin
gentica que el feto reflejando por tanto la
situacin cromosmica, bioqumica y gentica del
mismo.
Primer BVC 1968
Se realiza entre las 10 y las 12 semanas.
 Vellosidades Coriales
Sincitiotrofoblasto
Citotrofoblasto
Ncleo del mesenquima
 Existen fundamentalmente dos tipos de
tcnicas:
Va transcervical
Va transabdominal.
Complicaciones:
Mosaicismo placentario 1.5%
Aborto (0.8 1.5%)
Hemorragias (1 25%),
Perdida del Liquido Amnitico (0.4%)
Infeccin (0.3%)
 BIOPSIA DE VELLOSIDAD
CORIONICA
Los villi corinicos se aspiran en una pequea
jeringa y se cultiva a corto y largo plazo en el
laboratorio. Los cariotipos se obtienen de ambos
cultivos aun que los basados en largo plazo son mas
exactos. La principal ventaja de esta biopsia de
vellosidades es que los resultados salen mas
tempranamente en el embarazo.
 MUESTRA (V.C)

SELECCIN Y
LAVADO

STOCK (V.C)

CULTIVO DIRECTO CULTIVO LARGO PL.

(48 Hrs.) (10-15 Das)

COSECHA ESTUFA
(24 Hrs.) 37C - 5%CO2

LAMINAS CAMBIOS DE MEDIO

(24 Hrs.)

COSECHA

LAMINAS

BANDEO

CARIOTIPO

RESULTADO
 TOMA DE MUESTRA:

Debe ser remitida al laboratorio en frasco

estril que contenga medio de transporte o
suero fisiolgico estril.
VELLOSIDADES CORIALES
 SIEMBRA

1. Una vez obtenida la muestra

del tejido de aborto, se
seleccionan las v.

2. Hacer lavados en placas

petri Prex con medio Ham F-10
hasta eliminar los restos de
sangre.
3. Se corta finamente el tejido con hoja de bistur
No 10 estril para obtener pequeos explantes.
4. Agregar 4mL de medio de cultivo Bio AMF- 1 con 1mL
de FBS. Distribuir la suspensin en la superficie de
crecimiento de la placa.
5. Se transfieren las placas de cultivo a la incubadora (37 C,
5% CO2 y 97% de humedad).
6. Observar si hay crecimiento o posible contaminacin
despus de tres o cuatro das.
5.Si se observa el
crecimiento fuera de los
fragmentos del tejido
cambiar el medio de
cultivo( 5-14 das).
6.Si se observan clulas en
divisin (refringentes )y
buena cantidad de
fibroblastos se procede hacer
un cambio total de medio de
cultivo , 24 horas antes de la
cosecha.
CLULAS VISTAS AL MICROSCOPIO
INVERTIDO 7 12 DAS
CULTIVO DE VELLOSIDADES CORIONICAS
 COSECHA

1.Agregar Colchicina a
la placa y colocarla en
la incubadora por 2
horas

2.Transcurrido el tiempo
se levantan las
clulas con tripsina
Versene.
3. Se sigue el mismo
protocolo de cosecha de
linfocitos( hipotonizacin,
fijacin, lavados)
4.Se hacen las lminas y se
observan al microscopio
 BANDEO CROMOSOMICO

5.Se procede al bandeo ,

anlisis de la metafases y
armado de cariotipos
2. AMNIOCENTESIS
AMNIOCENTESIS
 El estudio de liquido amnitico, poseen
clulas derivadas del feto reflejando por
tanto la situacin cromosmica, bioqumica y
gentica del mismo.
Se realiza a las 14 - 16 semanas.
Amniofiltracin:
11 14 semanas
Tiempo de cultivo menor
Mayor costo
Las principales fuentes primarias del liquido amnitico son la
orina fetal y el liquido pulmonar, con una contribucin
pequea de la secreciones buco nasales.
 Existen fundamentalmente dos tipos de
tcnicas:
Va transcervical
Va transabdominal.

Complicaciones:
Aborto (0.5 - 1%)
Hemorragias (1 25%)
Perdida del Liquido Amnitico (0.4%)
Infeccin (0.3%)
CULTIVO DE LIQUIDO AMNIOTICO
Al recepcionar la muestra de lquido amnitico verificando el
volumen (usualmente 1 ml por semana de gestacin)
Centrifugar la muestra en tubos estriles a 1000RPM x 10
minutos. Separa el sobrenadante para estudios bioqumicos.
Al sedimento que ha quedado se le agrega 0.5ml de suero
bovino fetal esteril y se mezcla con el pellet.
Esta mezcla es transferida a 2 o 3 frascos Falcon
dependiendo de la cantidad de clulas de la muestra
PROCEDIMIENTO
1.Repartir la muestra
equitativamente en 2
tubos de centrfuga
estriles.
2. Centrifugar los 2 tubos a 800 rpm x 10 min.
3. Dejar en cada
tubo 0.5 mL de
muestra y agregarle
4 mL de medio de
cultivo amniomax.
4. Con una pipeta Pasteur homogenizar cada tubo
y colocar el contenido(medio de cultivo +
muestra) en su respectiva placa petri estril.
5. Cada placa se rotula con el nmero
correspondiente del lquido amnitico y la
fecha de siembra.
6.Observar al
microscopio invertido la
morfologa y cantidad
de clulas que se
encuentran en cada
placa sembrada e
Incubar a 37 C y 5 % de
CO2.
 7. A los 5 6 das revisar las placas para ver el
crecimiento celular. Se deben observar clulas
adheridas y fibroblastos en el fondo de la misma.
 8. Si observamos fibroblastos y clulas en
divisin(10-15 das), el cultivo est listo para la
cosecha .
9.Finalmente, se preparan estas muestras
para el anlisis citogentico
CULTIVO DE LIQUIDO AMNIOTICO
3. DIAGNOSTICO PRE
IMPLANTACION
 El diagnstico pre implantacin ( DPI ) es una
forma muy precoz de Diagnostico Prenatal
(DPN), que posibilita el estudio gentico de
gametos y/o embriones.

La principal desventaja del DPI es la

necesidad de someterse a una fecundacin in
vitro, procedimiento que presenta tasas de
xito hasta del 35%.
DIAGNOSTICO PRE IMPLANTACION

1. Estimulacin ovrica
2. Biopsia de Corpsculo polar
3. Biopsia de Blastmera
4. Estudios genticos
5. Implantacin del gameto
 ESTIMULACION OVARICA

Reactivar la maduracin del ovocito para

recolectar la mayor cantidad de ovocitos
maduros
 BIOPSIA DEL CUERPO POLAR

Biopsia de los
cuerpos polares
Biopsia del PB1
antes de ICSI
Biopsia del PB1
Despus de ICSI
Biopsia del PB2
BIOPSIA DEL 2do CUERPO POLAR
 MICROMANIPULACIN
ICSI
Biopsia de cuerpos polares y blastmeras
Transferencia nuclear
BIOPSIA DE BLASTOMERA
REMOCIN DE UNA BLASTMERA DE
UN EMBRIN DE 8 CLULAS
BIOPSIA DE BLASTOCISTO
BIOPSIA DE BLASTOCISTO
CARIOTIPO DE UNA SOLA BLASTMERA
OBTENIDA POR CONVERSIN
 DIAGNSTICO GENTICO
PREIMPLANTACIONAL

Permite localizar hasta 9 cromosomas ( X, Y, 13, 15, 16, 17, 18, 21, 22 ).
Se aplica en el ncleo de una blastmera permitiendo observar y hacer el recuento
de las copias que hay de cada cromosoma en el ncleo. Es una muestra
representativa del embrin.
DIAGNSTICO GENTICO
PREIMPLANTACIONAL
 DIAGNSTICO GENTICO
PREIMPLANTACIONAL

5 colores, evaluando los cromosomas

13, 18, 21, X e Y 5 colores, evaluando los cromosomas
13, 16, 21, y 22
 Embrin normal para Embriones normales
cromosomas 13, 16, 18, 21,
para cromosomas 15,
22
17, X e Y
 MTODOS DE DETECCIN
Digestin con enzimas de restriccin
Anlisis de heteroduplex
Anlisis del polimorfismo conformacional de
cadenas simples
Electroforesis en geles denaturantes
Secuenciamiento
Anlisis de ligamento
Embrin anormal Embrin anormal
Trisoma 21 Trisoma 16
FISH EN ESPERMATOZOIDES
 COMPONENTES DE UN SISTEMA DE
PCR

Buffer de PCR
dNTPS
Cloruro de Magnesio
Primers
DNA polimerasa
DNA molde
PCR
MULTIPLEX NESTED PCR Y SUS
APLICACIONES
TCNICAS DE REPRODUCCIN ASISTIDA
GRACIAS