Labo de Analisis

FICHA DE IDENTIFICACIN DE TRABAJO DE INVESTIGACIN
Ttulo: DETERMINACION DEL NITROGENO TOTAL POR EL METODO

KJELDAHL
Autor: (1) KATHERINA JAUREGUI AGUILAR
Fecha: 26/NOVIEMBRE/2016
Cdigo de estudiante: 201307255
Carrera: INGENIERIA EN GAS Y PETROLEO

Asignatura: LABORATORIO DE ANALISIS
Docente: ING. ROLANDO CERRUTO NUEZ Msc.
Periodo Acadmico: SEMESTRE/06/2016
Subsede: LA PAZ
Ttulo: DETERMINACION DEL NITROGENO TOTAL POR EL METODO KJELDAHL
Autor: KATHERINA JAUREGUI AGUILAR
RESUMEN:
El mtodo kjeldahl o digestin de kjeldahl en qumica analtica, es un proceso de

anlisis qumico para determinar el contenido en nitrgeno de una sustancia qumica en
nitrgeno y se engloba en la categora de medios por digestin hmeda. Se usa comnmente
para estimar el contenido de protena de los alimentos, que fue desarrollado por Johan
Kjeldahl.
El mtodo kjeldahl ms comnmente utilizado para la determinacin de nitrgeno orgnica es
el llamado el mtodo kjeldahl que se basa en una volumetra acido base. El procedimiento es
directo, el material necesario es muy simple (aparato de destilacin kjeldahl) es fcilmente
adaptable al anlisis rutinario de un gran nmero de muestra. El mtodo estndar para la
determinacin del contenido proteico en grano, harinas, carne, y en general materiales
geolgicos.
El mtodo kjeldahl se descompone en caliente medio sulfrico, en presencia de agente
reductor catalizador (mercurio cobre o selenio) tambin puede adicionarse una sal neutra para
aumentar el punto de ebullicin de la disolucin de cido sulfrico de esta forma que aumenta
la temperatura d trabajo, con lo cual se favorece la descomposicin. El tratamiento transforma
el nitrgeno de la muestra en amoniaco. La posterior adicin de una base fuerte libera el NH 3
que es arrastrado hasta un frasco colector por destilacin en corriente de vapor.
El mtodo desarrollado por kjeldahl consta de tres etapas:
Digestin.
Destilacin.
Valoracin.
TABLA DE CONTENIDOS

2
Carrera: INGENIRIA EN GAS Y PETROLEO
INDICE PAG.
Captulo I: Introduccin......5
Capitulo II: Marco Terico..7
2.1. Fuentes de error
..8
2.2. Estrategia8
2.3. Reacciones llevados a cabo en el mtodo de kjeldahl 8
2.3.1. Digestin...............................................8
2.3.2. Neutralizacin y destilacin9
2.3.3. Titulacin....9
2.4. Material..9
2.5. Equipo..10
2.6. Reactivos..10
2.7. Metodo...................................................................................................11
2.7.1. Elaboracin de reactivos.11
2.8. Procedimientos.11
2.8.1. Digestin..11
2.8.2. Destilacin12
2.9. Titulacin.13
2.10. Recuperacin de Amoniaco..13
2.11. Clculos y Resultados..14
Captulo III: Definicin del Problema15
Captulo IV: Objetivos de la Investigacin..........16
4.1. Objetivos general..16
4.2. Objetivos especficos...16

3
Captulo V: Conclusiones.17
Captulo VI: Recomendaciones....18
Bibliografa...19
Anexos.....20-21
LISTA DE GRFICOS E IMGENES
Figura 1.20
Figura 220
Figura 321
Figura 421

4
CAPTULO 1: INTRODUCCIN
El problema que representa proporcionar protenas adecuadas a la poblacin del

mundo es un tanto secundario en el problema general de alimentacin mundial. Adems de su
significado nutritivo las protenas juegan un papel importante en las propiedades
organolpticas de los alimentos. Las protenas ejercen una influencia controladora en la
textura de los alimentos provenientes de fuentes animales. El contenido protico del trigo y su
harina es considerado como uno de los mejores indicadores de la calidad de la panificacin.
El anlisis para la determinacin de protenas, a pesar de no estar incluido generalmente como
factor de clasificacin en los estndares de granos se acepta como un factor comercial.
Las protenas existen en los alimentos en combinacin fsica o qumica con
carbohidratos o lpidos. Las glucoprotenas y las lipoprotenas afectan las propiedades
reolgicas de las soluciones alimenticias o poseen aplicaciones tcnicas como emulsificantes
comestibles. El "envejecimiento" de la carne est relacionado con cambios qumicos en las
protenas. Las protenas naturales puras poseen poco sabor. Durante el proceso de
calentamiento (ebullicin, panificacin, asado) las cadenas laterales de aminocidos se
degradan o interactan con otros componentes de los alimentos (ejemplo, la lisina con los
azcares reductores) para conferir sabores tpicos. El calentamiento excesivo puede, por otro
lado, reducir el valor nutritivo.
El analista de alimentos comnmente desea saber el contenido protico total de los
alimentos, aunque dicho contenido est conformado por una mezcla compleja de protenas.
Actualmente todos los mtodos para determinar el contenido protico total de los alimentos
son de naturaleza emprica. El aislamiento y pesado directo de la protena proporcionara un
mtodo absoluto, sin embargo, dicho mtodo es llevado a cabo slo a veces en investigaciones
bioqumicas pero es completamente imprctico para el anlisis de alimentos.
5
En 1883 el investigador dans Johann Kjeldahl desarroll el proceso bsico del

conocido mtodo actual de anlisis de protenas por el mtodo Kjeldahl, ms propiamente,
para analizar nitrgeno orgnico. En esta tcnica se digieren las protenas y otros
componentes orgnicos de los alimentos en una mezcla con cido sulfrico en presencia de
catalizadores. El nitrgeno orgnico total es convertido en sulfato de amonio. La mezcla
digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente en una solucin de cido
brico. Los aniones del borato as formado se titulan con HCl estandarizado, lo cual se
convierte en el nitrgeno de la muestra. El resultado del anlisis representa el contenido de
protena cruda del alimento ya que el nitrgeno tambin proviene de componentes no
proticos. Este mtodo ha sufrido varias modificaciones. As, Kjeldahl us originalmente
permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidacin, sin embargo, los
resultados no fueron satisfactorios, de manera que este reactivo se descart. En 1885 Wilforth
encontr que se poda acelerar la digestin con cido sulfrico aadiendo algunos
catalizadores. Gunning en 1889 sugiri la adicin de sulfato de potasio para elevar el punto de
ebullicin de la mezcla de la digestin para acortar la reaccin. Por lo tanto, el procedimiento
de esta tcnica es ms correctamente conocido como Mtodo Kjeldahl-Wilforth-Gunning.

6
CAPTULO II: MARCO TERICO
El mtodo kjeldahl o digestin de kjeldahl en qumica analtica, es un proceso de anlisis

qumico para determinar el contenido en nitrgeno de una sustancia qumica en nitrgeno y se
engloba en la categora de medios por digestin hmeda. Se usa comnmente para estimar el
contenido de protena de los alimentos, que fue desarrollado por Johan Kjeldahl.
En 1883 el investigador dans Johann Kjeldahl desarroll el proceso bsico del conocido
mtodo actual de anlisis de protenas por el mtodo Kjeldahl, ms propiamente, para analizar
nitrgeno orgnico. En esta tcnica se digieren las protenas y otros componentes orgnicos
de los alimentos en una mezcla con cido sulfrico en presencia de catalizadores. El nitrgeno
orgnico total es convertido en sulfato de amonio. La mezcla digerida se neutraliza con una
base y se destila posteriormente en una solucin de cido brico. Los aniones del borato as
formado se titulan con HCl estandarizado, lo cual se convierte en el nitrgeno de la muestra.
El resultado del anlisis representa el contenido de protena cruda del alimento ya que el
nitrgeno tambin proviene de componentes no proticos. Este mtodo ha sufrido varias
modificaciones. As, Kjeldahl us originalmente permanganato de potasio para llevar a cabo
el proceso de oxidacin, sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, de manera que
este reactivo se descart. En 1885 Wilforth encontr que se poda acelerar la digestin con
cido sulfrico aadiendo algunos catalizadores. Gunning en 1889 sugiri la adicin de
sulfato de potasio para elevar el punto de ebullicin de la mezcla de la digestin para acortar la
reaccin. Por lo tanto, el procedimiento de esta tcnica es ms correctamente conocido como
Mtodo Kjeldahl-Wilforth-Gunning.

7
2.1. FUENTES DE ERROR
Constituyen fuentes de error en este mtodo son: la inclusin de nitrgeno no protico como
parte de la protena; la prdida de nitrgeno durante la digestin, la digestin incompleta de la
muestra.
Las proporciones excesivas de sulfato de sodio o potasio que se aaden al cido (para elevar el
punto de ebullicin) pueden resultar en una descomposicin por calor y la consecuente prdida
de amonaco. Generalmente se recomiendan temperaturas de digestin de 370-410C.
Tambin puede ocurrir prdida de nitrgeno si se utiliza demasiado selenio o la temperatura de
la digestin no se controla cuidadosamente; las condiciones son an ms crticas que con el
cobre o el mercurio cuando se usan como catalizadores.
2.2. ESTRATEGIA
En la prctica comercial se tienen que analizar un gran nmero de muestras diariamente, as
que se utilizan estrategias que ahorran tiempo de anlisis. En el anlisis de la harina de trigo
se digiere 1 gramo de muestra usando una cantidad conocida de cido sulfrico 0.1253N, y
titulando (mediante una bureta de lectura invertida) con hidrxido de sodio 0.1253N, as se
hace posible reportar el porcentaje de protena directamente de la lectura de la bureta
2.3. REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MTODO DE KJELDAHL
2.3.1. DIGESTIN
catalizadores
(1)n - C -NH2 + mH2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2
protena calor

8
2.3.2. NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
(2) (NH2)SO4 + 2 NaOH 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O
(3) NH3 + H3BO3 (cido brico) NH4 + H2BO3- (in borato)
2.3.3. TITULACIN
El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno) es titulado con HCl

estandarizado:
(4) H2BO3- + H+ H3BO3
2.4. MATERIAL
1 matraz de digestin Kjeldahl con capacidad de 125 ml.
1 matraz de Erlenmeyer de 10 ml.
1 matraz volumtrico de 100 ml.
1 mechero de Bunsen.
2 pinzas (nueces).
1 soporte universal
9
1 pipeta de 5 ml.
1 pipeta de 10 ml.
1 frasco gotero de 25 ml.
1 frasco lmbar con capacidad de 1 litro.
1 piseta grande con agua destilada.
1 microbureta.
3 cuerpos de ebullicin.
1 par de guantes de asbesto.
1 pinzas largas.
1 embudo de cristal chico o mediano.
2.5. EQUIPO
Aparato digestor Kjeldahl (1 para todo el grupo).
1 aparato destilador micro Kjeldahl (1 por equipo).
2.6. REACTIVOS
Verde de bromocresol al 0.1% diluido en alcohol al 95%.
Rojo de metilo al 0.1% diluido en alcohol al 95%.

10
cido brico al 2%.
cido clorhdrico 0.01N (solucin valorada).
Hidrxido de sodio al 30%.
cido sulfrico concentrado.
Mezcla catalizadora para la digestin: 2.5 g de dixido de selenio + 100 g de sulfato de

potasio + 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (proporcionada por la coordinacin
de laboratorios).
2.7. MTODO
2.7.1. ELABORACION DE REACTIVOS
1.- Mezcla Indicadora.- Prepare por separado los indicadores verde de bromocresol al
0.1% y el rojo de metilo al 0.1% diluidos en alcohol al 95%. Mezcle 10 ml. de verde de
bromocresol con 2 ml. de la solucin de rojo de metilo en un frasco gotero.
2.- cido Brico al 2%.- Disuelva 10 g de cido brico (en cristales) en 500 ml. de agua
destilada hirviendo. Despus de que se enfre transfiera la solucin a un frasco tapado. Se
conserva indefinidamente.
3.- cido Clorhdrico 0.01N.- Prepare un litro y valrela con una solucin de NaOH de
la misma normalidad.

11
4.- Hidrxido de Sodio al 30%.- Disuelva 150g de perlas de hidrxido de sodio en 350
ml. de agua destilada. Almacene la solucin en un frasco mbar con tapn de vidrio.
5.- H2SO4 concentrado.
6.- Catalizadores para la Digestin.- Mezcle 2.5g de dixido de selenio (SeO2), 100g de
sulfato de potasio (K2SO4) y 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4 . 5H2O).
2.8. PROCEDIMIENTO
2.8.1. DIGESTIN
1.- Pese exactamente 0.15g de harina de trigo en un matraz de micro-Kjeldahl cuidando que la
muestra no se adhiera a las pardes o al cuello del matraz.
2.- Aada 2.5 ml. de H 2SO4, dos perlas de ebullicin y aproximadamente 1.0 g de mezcla
catalizadora.
3.- Someta a digestin la muestra en el aparato de microKjeldahl bajo una campana de
extraccin, con el matraz ligeramente inclinado usando baja temperatura al inicio y
aumentando el calor a medida que procede la digestin, rotando los matraces de vez en cuando
para asegurarse de que se digiera toda la muestra. La digestin terminar cuando el color de la
muestra sea azl-verde claro. El proceso tomar aproximadamente 90 minutos.
4.- Enfre el matraz durante unos 4 minutos para que no se endurezca al solidificarse la
muestra.
5.- Aada 7 ml. de H2O cuidadosamente, poco a poco, a la muestra digerida. Mezcle y
permtale enfriarse.
2.8.2. DESTILACIN
Encienda la unidad destiladora.

12
Si es posible ajuste la velocidad de destilacin a aproximadamente 5 ml. por minuto

Abra la llave del agua para tener H2O circulando por el refrigerante todo el tiempo.
Aada la muestra a la cmara de ebullicin por medio de un embudo (para recuperar
las perlas de ebullicin) y enjuague el matraz con aproximadamente 5ml. de H 2O
destilada.
Coloque 1 frasco Erlenmeyer con 10 ml de cido brico y 2 gotas de indicador bajo la
salida de destilacin.
Aada aproximadamente 10 ml. de la solucin de NaOH a la cmara de ebullicin
lentamente. La mezcla digerida se tornar oscura (azl-gris o caf oscuro). Si no
cambia de color aada ms NaOH.
Deje un poco de NaOH en la copita superior del destilador.
Colecte aproximadamente 20 ml. del destilado (4-5 minutos).
El destilado estar listo para ser titulado cuando se torna verde en el matraz receptor.
Retire el matraz de Erlenmeyer y limpie la unidad destiladora enjuagando la cmara de
ebullicin varias veces con agua destilada. Cada vez que se aada agua destilada hasta
llenar la copita superior de la unidad destiladora para el enjuague deje que sta hierva
primero.
Luego abra la llave de la parte que permite salir las muestras hacia fuera de la unidad
destiladora. Una vez vaca la parte en donde se procesa la muestra asegrese de que
est bien vaca. Si queda todava un poco de agua en el fondo permita que hierva para
que se vaya toda hacia esa segunda parte de la unidad destiladora.
El matraz estar listo para recibir la segunda cantidad de agua destilada para lavar la
unidad destiladora. Esta operacin se repite al menos unas 4 veces.

13
2.9. TITULACIN
Titule la muestra con 0.1N de HCl. Un color violeta indica el punto final de la titulacin.
Comprese este color con el del blanco. Cada equivalente del HCl usado corresponde a un
equivalente de NH3 o a un equivalente de N en la muestra original. El peso del N en mg est
dado por mili equivalentes del cido X 14 (el peso equivalente del N).
2.10. RECUPERACIN DEL AMONACO
Una posible fuente de variacin en este mtodo es la prdida del gas amonaco o una falla en
atrapar el amonaco en el cido brico. Esto puede ocurrir en diferentes pasos del proceso.
Una tcnica para buscar la recuperacin del amonaco consiste en destilar cantidades
conocidas de amonaco lquido y titularlo con HCl.
Se obtendr otra vez el color prpura en el cido brico.
Mientras se digieren las muestras, se puede destilar una solucin de sulfato de amonio.
Aada 5, 10 15 ml (mediante una pipeta) de solucin de sulfato de amonio a la cmara de
ebullicin de la unidad destiladora. Enjuguela despus con agua destilada y, si es posible,
desionizada. Coloque inmediatamente la punta de la unidad destiladora en 10 ml de cido
brico + indicador. Colecte aproximadamente 20 ml. de destilado.
Titule la muestra con el HCl estandarizado, registre los ml. de HCl empleados y calcule el
peso del nitrgeno en el (NH4)2SO4.
2.11. CALCULOS Y RESULTADOS
CLCULOS
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
% N = NHCl x Volumen de cido corregido x 14 g N x 100

g de muestra mol

14
Dnde:
NHCl = Normalidad del HCl en moles/1000ml.
Volumen del cido corregido = (ml. del cido estandarizado para la muestra) - (ml. de
cido estandarizado para el blanco).
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Se utiliza un factor para convertir el porcentaje de N a porciento de protena cruda. El
porcentaje de N en protena para el harina de trigo es de 18% y su factor de conversin
es de 5.70.
CAPTULO III: DEFINICIN DEL PROBLEMA
Para este proyecto de investigacin primeramente se establece la siguiente pregunta de

investigacin:
Qu son los mtodos de Kjeldahl y el fundamento del anlisis de la determinacin de

nitrgeno total de las protenas por el mtodo de Kjeldahl?

15
CAPTULO IV: OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIN
3.1. OBJETIVO GENERAL
Comprender, analizar los fundamentos del mtodo kjeldahl, para la determinacin del
contenido en nitrgeno de la protena de un alimento.
3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

16
Conocer el fundamento del anlisis de protenas por el mtodo de Kjeldahl.
calcular el porcentaje de protena de un alimento a partir del contenido de

nitrgeno del mtodo kjeldahl.
Familiarizarse con los equipos y el procedimiento del anlisis de protenas

por el mtodo de Kjeldahl y la recuperacin de amonaco.
CAPTULO V: CONCLUSIONES
El mtodo kjeldahl o digestin de kjeldahl en qumica analtica, es un proceso de anlisis

qumico para determinar el contenido en nitrgeno de una sustancia qumica en nitrgeno y se
engloba en la categora de medios por digestin hmeda. Se usa comnmente para estimar el
contenido de protena de los alimentos, que fue desarrollado por Johan Kjeldahl.
En 1883 el investigador dans Johann Kjeldahl desarroll el proceso bsico del conocido
mtodo actual de anlisis de protenas por el mtodo Kjeldahl, ms propiamente, para analizar
nitrgeno orgnico. En esta tcnica se digieren las protenas y otros componentes orgnicos
de los alimentos en una mezcla con cido sulfrico en presencia de catalizadores.

17
El nitrgeno orgnico total es convertido en sulfato de amonio. La mezcla digerida se

neutraliza con una base y se destila posteriormente en una solucin de cido brico. Los
aniones del borato as formado se titulan con HCl estandarizado, lo cual se convierte en el
nitrgeno de la muestra. El resultado del anlisis representa el contenido de protena cruda del
alimento ya que el nitrgeno tambin proviene de componentes no proticos.
Este mtodo ha sufrido varias modificaciones. As, Kjeldahl us originalmente permanganato
de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidacin, sin embargo, los resultados no fueron
satisfactorios, de manera que este reactivo se descart. En 1885 Wilforth encontr que se
poda acelerar la digestin con cido sulfrico aadiendo algunos catalizadores. Gunning en
1889 sugiri la adicin de sulfato de potasio para elevar el punto de ebullicin de la mezcla de
la digestin para acortar la reaccin. Por lo tanto, el procedimiento de esta tcnica es ms
correctamente conocido como Mtodo Kjeldahl-Wilforth-Gunning.
CAPTULO VI: RECOMENDACIONES
Tras haber realizado este trabajo de investigacin como tambin la determinacin del mtodo
de Kjeldahl se recomienda seguir los pasos como indican en los procedimientos tambin tener
en cuenta llavecita de la segunda parte de la unidad destiladora (que conduce la muestra
procesada hacia el vasito permanece cerrada (en posicin horizontal) durante el procesamiento
de la muestra. Slo se abre cuando se enjuaga el destilador.

18
BIBLIOGRAFA
A.O.A.C. 1980. Association of Official Agricultural Chemists. Official Methods of

Analysis. Washington, D.C.
Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and
Bartlett Publishers. U.S.A. pp 209-212.
Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products. Ed.

McGraw-Hill Publishing Co. Ltd. New Delhi.

19
Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2. Ed. AVI
U.S.A. pp 753-758.
ANEXOS:

20

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2.3. REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MTODO DE KJELDAHL

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2.3.2. NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN

(2) (NH2)SO4 + 2 NaOH 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

(3) NH3 + H3BO3 (cido brico) NH4 + H2BO3- (in borato)

El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno) es titulado con HCl

(4) H2BO3- + H+ H3BO3

1 matraz de digestin Kjeldahl con capacidad de 125 ml.

1 matraz de Erlenmeyer de 10 ml.

1 matraz volumtrico de 100 ml.

1 frasco gotero de 25 ml.

1 frasco lmbar con capacidad de 1 litro.

1 piseta grande con agua destilada.

1 par de guantes de asbesto.

1 embudo de cristal chico o mediano.

Aparato digestor Kjeldahl (1 para todo el grupo).

1 aparato destilador micro Kjeldahl (1 por equipo).

Verde de bromocresol al 0.1% diluido en alcohol al 95%.

Rojo de metilo al 0.1% diluido en alcohol al 95%.

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cido brico al 2%.

cido clorhdrico 0.01N (solucin valorada).

Hidrxido de sodio al 30%.

cido sulfrico concentrado.

Mezcla catalizadora para la digestin: 2.5 g de dixido de selenio + 100 g de sulfato de

2.7.1. ELABORACION DE REACTIVOS

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Encienda la unidad destiladora.

Si es posible ajuste la velocidad de destilacin a aproximadamente 5 ml. por minuto

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2.10. RECUPERACIN DEL AMONACO

2.11. CALCULOS Y RESULTADOS

Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra

% N = NHCl x Volumen de cido corregido x 14 g N x 100

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CAPTULO III: DEFINICIN DEL PROBLEMA

Para este proyecto de investigacin primeramente se establece la siguiente pregunta de

Qu son los mtodos de Kjeldahl y el fundamento del anlisis de la determinacin de

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3.1. OBJETIVO GENERAL

3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

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Conocer el fundamento del anlisis de protenas por el mtodo de Kjeldahl.

calcular el porcentaje de protena de un alimento a partir del contenido de

Familiarizarse con los equipos y el procedimiento del anlisis de protenas

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