Evaluacion de métodos y objetivos de calidad analitica vf INTRODUCCION: Los métodos de andlisis que van a.cmpleare on los laboratorios clinioos han de evaluarse para conocer sus caracteristicas de funcionamient. Laevaluacicn de los de calidad analitica, Eamsabjetiver pueden fijarse en funcidn de diversns criterion. En este capithuo se exponen lan principales téonicas pars Inevaluscién de los méto- dos analitice y la determinacitn de los objetives de calidad analitica, REQUERIMIENTOS PRACTICOS DE UN METODO ANALITICO Los requerimientos prictioos de un métndo analiticn comprenden sus caracte- risticas de realizacién que determinan si puede funcionar adecuadamente en el laboratorio clinioo. Los factores principales que determinan que un métedo pueda reslizarse en son el tamafo del espécimen, la rapidez, la dificultad técnica, el grado de dependencia, la frecuencia de calibracién, el coste por prusha y la peligrosidad de Ios reactivos y su seguridad. Tamano de espécimen La cantidad de eapécimen que necesita un método es un factor clave en los métodos analiticos que se emplean en los laboratories, ya que cn ocasiones no se dispone de una gran cantidad de espécimen. Rapider La evaluscidn dela rapier de un métedodebe analizar dos variables descriptive: relacionadas con el temper ls velocidad ala que pueden procesarse Ins especime nes. y el intervalo que transcurre entre la recepcitin del expécimen y ba disponibi- lided del resultado, Enel primero se analiza el tiempo que tarda en procesars: el espécimen con ese método y, ened segundo, cada cuines tiempo se realize Dificultad técnica Es también importante estudiar La dificultad de los diferentes pasos del méto- do. Algunos métodos son muy féciles, porque requieren pocos pasos de pro- cesado, mientras que otros son complees, porque tienen muschos pasca. Grado de dependencia Asimismo, debe valorarse el grado de dependencia de los instrumentos utili- zadee para realizar el método. (07008 mer pin SL mmc en ecoFrecuencia de calibracién Es fundamental conocer la frecuencia de calibrscién para proporcionar unos resultados fiables. Debe conocerse la estabilidad de Is calibracidn y cada cur to tiempo hay que realizarls, (Coste por prueba El coste de un método induye nosdlo el gasto en los reactivos y los materiales necesarios para preparar los especimenes y hacer el andlisis, sino también los costes de amortizacién y de operscidn, los de trabajo —que dependen de Jos conocimientos bécnices que debe tener [a persona que lo realice— y los ‘costes comrespondientes de los gastos generales del laboratorio. Peligrosidad de los reactivas y seguridad Finalmente, hay queanalizar ls seguridad del método, en términos de ricsgos Eilmicos, como explosiones y reactivos venencsos © cancerigenos, y de posi- riesgos microbiclégicos. También deben ponderarse los ricagos derivados acer iiciee iawn. (CARACTERISTICAS ANALITICAS. Toda medida cuantitativa ex afsctada por factores que la apartan del valor cimen. Los del métod.o se deben a bes limitaciones del método de andlisis. Los, dela medida son fruto de las limitaciones del equipo y de los instrumentos media, con un seage que puede ser positive o negative. Sin embargo, afectan pom a la varisbilidad de-lna resultados. Los errore: aleatorise se deben a lecturas incorrectas de los instrumentos, ciloulos equivocedos, el cambio de expecimenes y el uso de reactivos o de estindares preparados deforma incorrecta. Estos errores aumentan la variabi- lidad de los resultados, y afectan poco a la media. intervalo de linealided, En los apartados siguientes se detallan cada uno de estos parimetros, PRECISION ANALITICA. ‘La precisiémanalitica de un métode da cuenta de la concordancia entre las medi- dasrepetidas con un mismo espécimen. La precisién es un término conceptual que no posee valor numérico. El técmino cuantitative ex la imprecisiéin, que seOLAV Gs a pater Penmaes define come La desviacién estandar o el coehciente de variacién de los renulta- dos de un conjunto de medidas repetidas. La imprecisién informa del error aleatoria. Las principales causas que contribuyen a la imprecisidn de los resultados de un meétods son emplear diferentes resctives, personal, estindares de calibra- cién y series analiticas Durante la ewaluacién de un métedo deben mantener s@ constantes tantos factores como se pueda, por ejemplo, usar el mismo loce de reactives, los mismos esténdares y el misme personal de laboratorio, aun- que debe estudiarse también el efecto de la variacidn de estos factores, En los estudios de precisidn hay que obtener la imprecisisn intraserial y La interserial: © La imprecisidn intraserial se obtiene analizando especimenes, generalmente de tres concentraciones diferentes (bsja, normal y alts) del intervals analitics, de forma repetida (de 102 20 voces) en la misma serie de andlisis. A partir de los datos, se obtienen los coeficientes de variacién para cada concentracidn. La imprecisidn intraseriall proporciona un valor optimista, ya que se producen menos oportunidades de variscién dentro de una serie que entre series. consecutives de trabajo. A partir de los resultados, oe calcula el cocficiente de wariacidn para ada concentracién. La imprecisidin interserial e= el valor mas real de la precsidn de un método y el que observa el médico solicitante cuando usa esa determinacin, ya que Pars analizar el efeco de la concentracién sobre la imprecisidin se representan Jos eneficientes de wariacién frente a la concentracién de le sustancia. Si la impr isidn es constante en el intervalo analitico, los coeficientes de variacion propar- donarin une lines recta, mientras que si la improcisidn e proporcional a la con senmacicin de Is sustancia, el coeficiente aumentard al crecer [a concentracicr, EXACTITUD ANALITICA La cuctitad anaitica es una medida de la concordancia entre el valor obtenido: para una determinacién y su valor real, La exactitud ex un termina conceptual que no poser un correlate numérico. Como término cusntitativese usa la inex Jifud, que sedefine como ls diferencia numérica ertreel valor medio de una serie de determinadones y su valor verdadero. La diferencia, positiva o negative, puede expresarse en las mismas unidades en que se mida La magritud, o como. Jun porcentaje del valor verdadero. La inexactitud pucde evaluarse utilizando: materiales de control o por medio de la comparacién de métodos. ‘Una forma de evaluar La inexactibad analitica de un método es utilizar mate- fiales de control con valores asignados. obtenidos. mediante métodos definiti-vos. ode referencia Estos materiales suslen ser carcs y dificiles de conseguir, por le que pueden emplearse controles comerciales valorados. Es importante constatar que #u matriz sex lo més semajante posible a la de los expecimenes. wor wapl on diferentes series analliticas (cine por lo menos). Con los resultados obteri- dosse calcula dl valor medio y se compara con el valor asignado. Se obtiene asi el error relative respecto al valor teGrica, com sign positive o negative. COMPARACION DE METODOS Otro modo de evaluar la inexectitud analitica ex mediante la comparaciéin de métndos, para lo cual se analizan especimenes clinicos por el método que se evalia y por otm método de referencia ode inexacinud conocida Eesti debe realizarse, al menos, en 40) especimenes diseribuidos uniformemente por el intervalo analitico, con determinaciones por duplicado. Asi, se comprucke la presencia de valores aberrantes y se comparan las imprecisiones de ambos métndos. Los especimenes de los pacientes se dividen en dos alicuotas, que st analizan por duplicado con cada método. Los resultados se representan de forma gréfica, colocande en el gje de abscisas los valores abtenides con el método de referencia o comparativo y en el eje de ordenadas los valores que se obtengan con el metodo nuewo. En la figura 7-1 se presenta un ejemplo de comparacién de métedos. La inspeccién visual informa del intervale analitico cubierto, de si los puntos se distribuyen deforma homogénea a lo largo del mismo, dela posible existencia de valores aberrantes, etc. TRATAMIENTO ESTADISTICO Se ealiza por medio de un andlisis de regresidn lineal y se valora la ecuscidn dela recta (yar +b), el cncficiente de correlacién (r) yell valor estadistico & Ecuacion de la recta de regresion En esta ecuacién, los términos de la ccuacién, pendiente fa} y ordenada en el origen (h), musstran los errores sistem dticos. La pendiente de ls recta da cuenta del error proporcional, que es positive cuando b> 1 y negative cuando b < 1; y Ia ordenada en el origen sefiala el error constante, que es positive cuando a> 0 y negative cuando a < 0. En una situacién perfecta, los resultados de! seabtenga una recta y-x,eedecirdependiente 1 y que pase por el origen. Por tanto, si Ios intervalos de confianza de ba pendiente y de ba ordenada en el oci- geno induyen Ine valores tedrices respectives de 1 para la pendiente y 0 para la orderada enel origen, hay un error sistemdticn constante y/o proporcional, ‘Coeficiente de correlacion ‘Bl coefictente de correlacién (Fr) indica el grado de asociacidn lineal entre el método nueva y el de referencia o comparative, Cuanto mas cerca de 1 se ancuentre r, mayor sera el grado de asociacién. Sin embargo, ete grado puedeCSAS Me da painiemALR Fenrir ea cae Chntatira C bn Matods " 7 t @© 3 «© & @ Citatine C leg) Mistode A FIGURAT-I Ejomplo de comparacion da dos mitados. ser alto y estar todos los puntos fuera de la cocta de regresién, La desviacién esténdar de loo resicuales =, que sefala las diferencias entre el valor observa do con el método nuevo y el obtenide mediante la recta de regrasion, informa del grado de dispersidn de los puntos alrededor della recta de regresin. Valora de un mode conjunto les resultados que propordonan el método nuevo: yelde referencia o comparativo. El valor de# lleva asociads la probabilidad de que las medias de Ins resultados con el métndo nuevo y el comparative sean En la figura 7-2 se muestran las diferencias entre precisiin y exactitud. Un métedo puede ser preciso y exacto, como en A; impreciso, pero exacto, como en Bo preciso, pero inexacto, como en C. SENSIBILIDAD ANALITICA Y¥ LIMITE DE DETECCION. La sensibilidad anuliticn es una medida de la capacidad de un métode para detectar variaciones pequefias de la sustancia que sc analiza. Sule expre- sarse por la pendiente de [a curva de calibracién, aunque tambidn depend de la variacién aleatoria de la funcidn de calibracién, que os la relacide entre Ia sefial y Ia concentracién de la sustancia. Cuanto menor sea la variacién aleatoria de la respuesta del aparato y mas inclinada la pendiente mayor serg la capacidad de determinar pequefias diferencias de ls concentraciin dela sustancia.inprecen, enacts pers emesis pers incest FFIGURA 7-2 Diforencias entre la prackion y Ib exactiud de tres metodo, Bl limite de detecciém se define como el resultado mas pequefic que puede dela forma siguiente Seselecciona el blanco adecuasdo. Idealmente, debe diferir de los capecimencs en no contener el componente que se mide. Otra selucidn ee cvitar el uso de un componente cscncial en la rescsién fenzimas, reactive de inicio, incubacién, et-). Se efectian 20 determinsciones del blanco. © Scestablece la media y la desviacién estindar de los resultados aparentes del blanco. © Se obtieneel valor equivalents a tres veces la decviaciGn estindar. Hay que sefalar que la imprecisiGn aestas concentracones tan bajas pucde divergir dels obtenida con el método, por lo que la desviacién estindar que se ‘uss es[a total, que redine la de los blancs y la de los especimenes. Para conocer sila de Jos blancos es semejante a la deestos, se puede realizar una compara cidn, mediante la F de Snedecor, de las variancias de los blanoos y las de cinco especimencs de muy baja concentracién, de modo que se determinan si sono. ee ae INTERVALO DE LINEALIDAD E INTERVALO AMALITICO: Bl internals de linealidad determina el analitico, que se define como el interval dc concentracién, o de la magnitud que se mida, en el que hay una relacién Jineal entre cl valor real y el obtenido con el método, de forma que exte puede aplicarse sin modificacon. Hl intervalo de linealidad del método debe ser sufi- cientemente amplis para incluir la mayoria de los valores que se obtienen en Jos especimencs de rutina. En los métodos que emplean calibraciones a uno o dos puntos, se asume la linealidad del métedo, al menos entre el origen y el20 AIVOA Ge 4a paint Pearman te baja concentracidn de la sustancia, Los andlisis se realizan por duplicado y se representan las medias de los duplicados en el eje x, frente 3 los valores tedci- cos (o frente al volumen de wepécimen utilizada) en el eje y. Entonces se com- pruchan visualmente los valores de concentracin para los que st mantiene la relacién lineal y si las dos series de diluciones tienen la misma pendiente. ya que, en caso contrario, habrs un efecto de matriz cusado por el diluyente. ESPECIFICIDAD ANALITICA E INTERFERENCIAS Le expecificidad anattion de un métode representa au sapacidad para medietini- Geterminar oma sustancia. Lainterferencia puede dar hagar a valores mas bajos o mds altos de la sustancia que se analice. La magnitud del efecto sobre La medida depende de la concentracién o dela cantidad dela sustancia que inter- fiere, aunque no necesariamente de forma proporcional Al menos, deben investigarse siempre loo efectos de la ictericia, la lipemia y la hemélisis. Los estudios se realizan de la forma siguiente. Se seleccionan especimenes ictéri- cos, lipdmicos y hemolizados, y se determina la sustancia que interesa por el miétodo que se evaldia y por otro de referencia, libre de la interferencia que se estudie. Luege se compara la diferencia obtenida entre ambos valores con el error permitide. Normalmente, se analizan las interferencias de una en una. Sin embargo, menudo hay presentes de forma simultsines mis de una sustancia interferente. La evaluacin cuantitativa de las interferencias complajas ex complicada y requiere undisefio factorial en el que se analicen todas las combinaciones posi- bles de las diversas concentraciones de cada sustancia intererente. ‘Cuando no se disponga de un métods comparative que con seguridad esté libre de interferencias, se afadiriin cantidades diferentes dela sustancia inter ferente a una combinacién de sueros y se analizarin los especimenes por duplicado, comparando el valor obtenidoy ell experada, y s2expresars el efec- tosobre La sustancia en las mismas unidades que esta y por unidad de la sus tancia interferente (p. ej.,.3 mg/dl de glucosa por cada mg/dl de bilisrubina). OBJETIVOS DE CALIDAD ANALITICA Se denominan objetives de calidad analitica a los requerimientos de funcio-~ iamiente necesafios para proporcionar un cuidado Gptimo a los pacientes. Para inmar decisioner, los médicns utilizan todos los dato de que disponen, y muy raras veces actiian de acuerdo con los resultados de una sola prueba de laboratorio, En caso de duda, suelen solicitar que se repita la prueba y, si el resultado coincide con el anterior, puede considerarse exacto. La falta de concordancia puede deberse a la variacién biolégica que, con frecuencia, nose tient en cuenta aunque puede, correcta o equivocadamente, tenerse tam- bién por un error del laboratorio o ser resultado de un cambio clinico signi- ficative. Se ha sefilado que los objetives de calidad analitica dependen del uso mmédico de los resultados y, por tanmn, son variables, en funcidn del problema clinico del momento y dela determinacién de que se trate. Para el diagnéaticn res que lax del Laboratorio general. Deben, pues, establecerse para cada Labora- torin clinics objetives de calidad analitics en ko referente a la imprecisidn y ba inexactitud de los resultados que proparciona. OBJETIVOS ANALITICOS PARA LA IMPRECISION Las variaciones de los resultados de un padente se deben 2 la imprecisidn empleades en los laboratories Los principales criterios utilizan los valores de referencia, la opinién de los médicoa y la variabilidad biolégi Hl criterio que se recomienda en la actualidad para establecer los objetivos pars calcular un CV analitice éptimo (CV,), de acuerdo con ls férmula: CV, = 172 [CV peeatmeaiteen + (CV ertrenvteien Bi sSlaulo de los componentes de variacién bickigics purde sealizarse de ba en condiciones que aseguren su estabilidad. Cuando se completa la recogida deestes, se analizan todos juntos. Los anailisis deben realizarse en las denomi- nadas condiciones de variancia éptimas, que significa que se hace minima la wariacién analitica usando un solo lote de reactives y consumables, un solo instruments y un Gnico La variancia total estd compuesta por la variancia analitica, la variancia bio- ldgica intraindividual y la biolégica interindividual. Para derivar la variancia analitics, se llevan a cabo andlisis de todos los especimenes de las personas en duplicados aleatorins, Dicha variancia viene dada por esta férmula-CLAP fa a pRnMtrACN foro ra ue ee ecMT 2 muimero de pares donde s ola imprecisidn. Dela variancia total, calculada a partir de leo dates obtenides on todas las personas, puede extracrse [a varisncia biolégica interindividual por sustrac~ cidn de la suma de las varianciss analitica e intraindividual. (Cuando se usan las pruebas de laboratorio para diagnosticar o seguir wna enfermedad, son importantes tanto la variacidn analitica como La bioldgica intraindividual. Asi, para la imprecisién entre lotes dentro del laboratosia: Fata = VE ences Debe tenerse en cuenta que esta fraccida es empirica y los objetives no son definitivos, ya que pueden modificarse como consecuencia de otras teorias 0 jientos ms adecuados. El objetive analitice para la imprecisidn de las pruebas utilizadas en una situacién de una sola prueba y para low andlisie de expecimencs seriadoe es: CV erie V2 C Vines (Cuando les resultados de las pruchas de laboratorio seempleen para dete tar una enfermedad en personas sanas (deteccisn sis Pamarsen 14 OPentrctetiet + Pinca) que puede transfermarseen la firmula ya presentada: CV perme © 12 [1CM preeresorvnan? + (CV ppeetresenenne 1? En cualquier caso, en términos matemdtions puede escribirse: (CV peameen 1/2 C¥ipcaogies ‘Si se consigue este objetivo, el error analitico aleatorio afiadirs alrededor ded 12% a La variabilidad total, ya que: Vien = CV" CV, Donde a = analiticn; b = bioligico. ‘Sin embargo, cV,=V/2cK,CML, = 1/4 C4, +CV4, =5/4cV%, CVn = 1118 CV, Existen muchos dates sobre la variacién biolégics intraindividual para un gran nimero de cemponenies de [a sangre, Ls varaciéniniraindividual parece ser siempre La misma, independientemente del mimero de personas: estudiadas, del tiempo que abarque el estudio, de la metodologia o de la instrumentacidn utilizada y del pais en que se realice Adin mas, [a variacién intraindividual en poblaciones ancianas sanas no es diferente de la obtenida en los jévenes. Ademds, en estados estables de enfermedad, como la ineufi- ciencia renal crdnica, la hipertensidn esencial, la diabetes mellitus y la dis- funcién hepética cronica, y durante el embarazo, los puntos de ajuste homeostdtico pueden cambiar, pero no lo hacen las varisciones alrededor suyo. En la tabla 7-1 se presentan [oe objetives de calidad analitica para la preci- sién, obtenidosa partir de la varisbilidad bioldgica de diversoa componentes: de la sangre. y expresados en forma de porentaje del coeficiente: de varia- cién. OBJETIVOS ANALITICOS PARA LA INEXACTITUD Nose han definide con aceptacidin general los criterios sabre las necesidades: un solo término denominado sersor totals, quees la suma de la desviacin y Ja imprecisidn del método. Este planteamiento tienc la ventaja de proporcic- nar a los médioos un dnico término para el error analitico total, mas facil de: entender. Fijar los objetivos para la calidad analitica es muy itil para los programas de control de la calidad y para ajustar Is adecuscidn de las técnicas de control Jas aplicaciones a las que se dirigen. Dichos objetivos deben expresarse en forma de errores analitions permisibles: desvisciénestindar permitida para los sible limite de error del 95%) como objetive de calidad para los errores alea~ toring y sistemdticos juntos, ‘Cuando se hayan expecificada los objetivos para la calidad analitica podrs ealcularse el tamafc de los errores que deben detectarse para conseguir ‘una calidad determinada, Los errores aleatorios (EA,) y low sistematicos (E5,) médicamente importantes 0 criticas vienen dados por las eauaciomes:2 Ide a pat ARI Ferme natin ae ct ES, = (ET, —desviscin)/'s,..) -1,65 EA, =[ET, —dewiacén|/ 1,96 5, donde ET, = calidad requerida en forma de error total permisible; desvia- cién =inexactitud del método; sy, =imprecisién del métado. Bf error sistemftice critico (ES,) es la desviacién sistemstica de bs distribu- cidn que permite que un 5% de Ins resultados tengan errores médicamente importantes, Esta definicién asume que un proceso analitica deberd detenerse sun 5% de los resultados son defectuosos. Se ha propuestn utilizar dos factores para obtener el error total analitico permisible que detecte cambivs significatives de los resultados de las pruebas de obtenerse a partir de la diferencia estadistica de la variacién biclégica y el TRANSFERIBILIDAD DE LOS METODOS: agnitud on suora: BE CVierantas (FE) 0.5 CF cannes (5) Abning aminotrstores 124 48 amin a 52 ‘Aspartate,7 (Cuando los resultados obtenidos en un laboratorio por doa procedimientos — loa resultados para un mismo espécimen que analizan dos laboratorios— son equivalents s¢ dice que son transferibles 0 conmutables. La equivalencia parables entre si para un pacientes que acuda aun laboratorio varias veces a lo largo del tiempo, y también para el que acude a diferentes laboratorios. tir los valores de referencia; y se utilizan valores discriminantes fijoa para tomar decisiones médicas. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Todos los métodos de determinacion que se aplican en los laboratories clinics: Iitica de ls eleccién del métado. Ademds, heyquesencierd tipo de espécimen para el que puede emplearse el método. En la descripcidn de este debe expli- arse la obtencién y la manipulacian del espécimen, los reactivos y el equipo, Ja preparacién y realizacién del métedo, el cilculo delos resultados yel control de la calidad: Obtencidin del espécimen. Hay que indicat si ex necesario algiin tipo de pre paracidn espacial del paciente y la clase de contenedor precisa. Manipulacién del espécimen. Debe especificarse si son necesarias condicio- nes anserdbicas, la temperatura y el tiempo que puede transcurrir desde La recogida hasta el anslisis, asi coma el procedimients y las condiciones de alma- cenamients del espécimen Reactives y disoluciones. Lalita de eacivonaciske a ents y clei pen de ceda resctive y proporciona instrucciones sobre su almacenamiento, Rranipulacidn y ublizacién, Es preciso describ la preparacién de las disolu, Gone: de almacenamisnte y de trabsjo y su caducidad. Equipo. Se describizdn los aparates y el equipo auxiliar necearios con refe- rencia a loe manuales de los fabricantes. Preparacién v desarrollo del método. Se describird también cada paso del métnda. Ciiloulo de los resultados. Finalmente, x indicard el modo de obtener las férmulas adecusdas para calcular los resultadca de los eapecimencs. Control de fa calidad. Seindicars la forma y los controles adecusdos pars evaluar la calidad del método.