CITRATO DE SIMMONS

El citrato de sodio es una sal del cido ctrico, un compuesto orgnico simple que
constituye uno de los metabolitos del ciclo de los cidos tricarboxilicos.
Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como nica fuente de
carbono, utilizan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno. El
metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de
Krebs y requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa (citrato-
oxalacetato-liasa o citrato desmolasa) en presencia de magnesio o manganeso
y de transportadores como citrato permeasas.

La citritasa acta sobre el citrato produciendo cido oxalacetico y acetato;

productos que son convertidos enzimticamente a piruvato y dixido de carbono.
Durante esta reaccin el medio comienza a alcalinizarse por el CO 2 que se
genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar Carbonato un
producto alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce el cambio de
color del indicador de pH del medio de verde a azul Prusia oscuro (indicador:
azul de bromo timol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El medio incluye
citrato como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de
nitrgeno.

Tcnica

Inocular el tubo con agar citrato de Simmons realizando siembra por estra
tomando una colonia del microorganismo en estudio. Incubar a 37 grados C por
24 horas.

Interpretacin

El desarrollo de un color azul intenso en 24-48 horas indica una prueba positiva
y revela que el microorganismo en estudio ha sido capaz de utilizar el citrato en
el medio con la formacin de productos alcalinos. La prueba tambin es positiva
en ausencia de color azul si existe crecimiento del microorganismo a lo largo de
la estra de inoculacin.

Utilizacin del citrato

Fundamento
Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como nica fuen
y sales amnicas inorgnicas como nica fuente de nitrgeno, provocando la alcalinizacin del medio.
El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de sodio, fosfato de amonio y azul de bromotim
indicador de pH.

Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn multiplicarse en este medio y liberarn iones amonio lo
con el metabolismo del citrato, generar una fuerte basificacin del medio que ser aparente por un cambio de co
de verde a azul

Realizacin prctica

Inocular realizando una siembra por agotamiento en la superficie del agar inclinado.

Vdeo de YouTube

Incubar a 37C durante 24 horas.

Tras el periodo de inbacin se procede a la lectura de los resultados. Si el medio vira a color azul ser citrato posi
contrario ser citrato negativo.