UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

AISLAMIENTO DE LEVADURAS PRODUCTORAS DE ETANOL A PARTIR

DE CHICHA DE JORA

I. INTRODUCCION
Desde la antigedad las levaduras se han reconocido como protagonista en la
produccin de alimentos y bebidas por fermentacin, teniendo una amplia
aplicacin en la biotecnologa tradicional y moderna1.

Las levaduras estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, sus hbitats

puede ser no solo las capas superiores del suelo, sino tambin muchas materias
orgnicas, sobre todo los de origen vegetal que contienen hidratos de carbono,
tambin se pueden aislar del suelo de viedos y huertos, superficies de frutas
dulces como uvas, manzanas, limn, etc., de las hojas y otras partes de la planta,
asimismo, se puede aislar de las frutas y verduras, en los que se producen la
fermentacin del azcar con desprendimiento de CO2 y liberacin de etanol2.

Sacharomyces cerevisae es la levadura industrial importante. Esta levadura se ha

utilizado durante mucho tiempo en la produccin de bebidas alcohlicas, la
fermentacin de azucares derivados de arroz, el trigo, la cebada, el maz y en la
produccin de etanol. Ms reciente se ha utilizado como una fbrica de clulas para la
produccin de productos farmacuticos3.

Los procesos de fermentacin requieren en general una serie de operaciones unitarias

cuyo objetivo es la conversin de un sustrato dado (fuente de carbono) en un producto
final, utilizando un microorganismo como catalizador. Estas operaciones unitarias
pretenden tanto el cubrir los requerimientos nutritivos necesarios para el crecimiento y
la formacin de productos, como el control del medio ambiente para la optimizacin del
proceso. El proceso de produccin y excrecin de etanol, as como los factores que lo
regulen, estn por ser aclarados con el conocimiento de los aspectos fisiolgicos y
genticos en la produccin de etanol por las clulas de levaduras 4.

Las levaduras productoras de etanol pueden sr aisladas y seleccionadas mediante la

tcnica de screening a partir de fuentes naturales como los nctares de lagunas flores;
tambin se las asla a partir de frutas que contienen azucares o de mosto fermentados en
forma espontnea, como la chica de jora2.

Se sabe que en la chicha de jora existen levaduras seleccionadas con elevado

potencial de produccin de etanol. Si se aslan, identifican y caracterizan cinticamente
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tales levaduras, se podran proponer nuevas estrategias en la produccin de etanol en las

empresas productoras del alcohol con mejores rendimientos y a bajo costo para de esta
manera satisfacer la demanda de alcohol etlico (etanol) 5.

II. OBJETIVOS

II.1. Identificar la fuente natural a partir de las cuales es factible aislar con
xito levaduras productoras de etanol.

II.2. Aislar levaduras productoras de etanol a partir de chicha de jora.

III. MATERIALES

III.1. Material biolgico

Chicha de jora en proceso de fermentacin

III.2. Medios de cultivo

Agar sabouraud sacarosado (ASS)

III.3. Material de vidrio

Frascos de penicilina.

Laminas porta y cubreobjetos

Placas petri

III.4. Equipos e instrumentos

Autoclave

Estufa

Microscopio ptico

III.5. Otros

Alcohol yodado

Algodn hidroflico

Encendedor

Mechero

Plumn de tinta indeleble

Ron de quemar
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IV. METODOS
IV.1. Obtencin y procesamiento de muestras liquidas

Colocar 100 mL de chicha de jora en frasco estriles o envases de primer

uso y trasladarlo al laboratorio de prctica. Realizar observaciones
microscpicas en fresco de la muestra para garantizar la presencia de
levaduras.

IV.2. Aislamiento de las levaduras productoras de etanol

El aislamiento de las levaduras se realiz por la tcnica del agotamiento

de muestra por estriado en placa petri servida con Agar Saboudarud
Sacarosado (ASS) e incubar a 30C por 24-48 horas. Las colonias que se
mostraron como tpicas de levaduras y estuvieron libres de
contaminantes, se seleccionaron, anotndoles sus caractersticas como
color, tamao, aspecto, etc.

IV.3. Estudio morfolgico y verificacin de pureza

Cada colonia de levaduras seleccionada en el paso anterior, se analizaron

al microscopio a las cuales se les hizo una observacin en fresco.
Aquellas colonias que se mostraran como levaduras tipo
Saccharomyces y estuvieran libres de contaminantes, se trasladaran a
frascos de penicilina con ASS inclinado incubndolo a 30C durante 2
horas. Luego de observar el desarrollo microbiano, se les rotul con su
cdigo y se conserv en refrigeracin a 8C.

V. RESULTADOS

FIG.1 Obtencin de 3 cultivos puros de levaduras productoras de etanol

a partir de chicha de jora.
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CODIGO FUENTE DE MEDIO DE CARACTERISTICAS CARACTERISTICAS

DEL AISLAMIENTO AISLAMIENTO MACROSCOPICAS MICROSCOPICAS
CULTIVO

Chicha de jora
MIT-L1A1 Agar sabouraud Colonias redondas, de Clulas redondas u
sacarosado aspecto cremoso y ovaladas estado con
convexo yemas

MIT-L1A2 Chicha de jora Agar sabouraud Colonias redondas, de Clulas redondas u

sacarosado aspecto cremoso y ovaladas estado con
convexo yemas

MIT-L1A3 Chicha de jora Agar sabouraud Colonias redondas, de Clulas redondas u

sacarosado aspecto cremoso y ovaladas estado con
convexo yemas

MIT-L1A4 Chicha de jora Agar sabouraud Colonias redondas, de Clulas redondas u

sacarosado aspecto cremoso y ovaladas estado con
convexo yemas

MIT-L1A5 Chicha de jora Agar sabouraud Colonias redondas, de Clulas redondas u

sacarosado aspecto cremoso y ovaladas estado con
convexo yemas

MIT-L1A6 Chicha de jora Agar sabouraud Colonias redondas, de Clulas redondas u

sacarosado aspecto cremoso y ovaladas estado con
convexo yemas

TABLA 1. Caractersticas macro y microscpicas de la levadura aisladas de Chicha de

Jora y cultivadas en Agar-Sabouraud-Sacarosado

VI. COMENTARIO
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Las exigencias de las industrias manufactureras hacen que cada vez se estn
necesitando levaduras con mayores posibilidades de produccin de metabolitos
tiles, as en nuestro caso, las levaduras productoras de etanol, es un tema que
atrae a pequeos y medianos empresarios para producir alcohol

La seleccin primaria de las levaduras productoras de etanol a partir de chicha

de jora, involucra una deteccin y aislamiento en medios de cultivo especficos.
En esta etapa se asla un elevado nmero de diferentes levaduras que pueden ser
o no se productoras de etanol, por lo que es necesario utilizar estrategias y
medios adecuados que eviten aislamiento innecesario.

Como sabemos los medios de aislamiento y evaluacin de la capacidad

fermentativa juegan un rol importantsimo en la obtencin de levaduras
productoras de etanol. El aislamiento y seleccin son actividades que se ejecutan
en forma complementarias, no se puede hablar de aislamiento sin pensar en
poner las pruebas de seleccin, as un criterio de seleccin (Screening) es que las
colonias estn puras sin contaminacin, que desarrollen en forma tpica en los
medios de aislamiento, y que sobre todo produzcan el metabolito de inters, el
alcohol6.

La Chicha de Jora, es una bebida fermentada, que, por sus caractersticas de

elaboracin, permite seleccionar levaduras productoras de etanol, as en esta
experiencia, se aislaron levaduras aisladas, inicialmente como cultivos puros de
levaduras.

En diversos trabajos utilizando cepas de Saccharomyces sp, se encontr que

produjeron entre 5.30 y 6.14 mg de PUC/mL de medio de fermentacin a base
de jugo de caa, equivalente en glucosa, en un biorreactor airlift de 0.4 L de
volumen con 190 mL de volumen de trabajo incubado a 30C/10 h 7. Puede
suponerse entonces, que algunas levaduras son mejores fermentadoras que otras,
ms an teniendo en cuenta que dentro de un mismo gnero de levaduras existen
diferentes especies, variedades o razas.

En un proceso de fermentacin alcohlica tiene especial importancia la

velocidad de fermentacin7, este trmino se refiere a la cantidad de alcohol o de
CO2 producido por unida de tiempo. Las velocidades de fermentacin den
condiciones ambientales similares depende principalmente de la cepa y de la
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concentracin celular, por tanto, es posible deducir que aumentando la

concentracin celular aumentar la velocidad de fermentacin8.

VII. CONCLUSIONES

Se aislaron y seleccionaron 6 cultivos puros de levaduras productoras de

etanol a partir de Chica de Jora.

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

1. Orbera RT. Mtodos moleculares de identificacin de levaduras de

inters biotecnolgico. Revlberroam Micol 2001; 21:15-19

2. . Frazier C, Westhoff D. Microbiologa de los Alimentos. 2da ed. Espaa:

Edit. Acribia. 1985.

3. Pizarro F, Jewett M, Nielsen J, Agosin E. Growth Temperature Exerts

Differential Physiological and Transcriptional Responses in Laboratory
and Wine Strains of Saccharomyces cerevisiae. Applied and
environmental microbiology2008; 63586368

4. Prentis S. Biotecnologa. Espaa: Salvat Editores, SA. 1987

5. Heber RC, Hel MC y Carmen LC. Aislamiento de levaduras productoras

de etanol a partir de chicha de jora del Mercado Mayorista de Trujillo
(Per). REBIOL 2012; 32(2):48-55

6. Negre E, Francot P. Manual de Prctica de Vinificacin de los Vinos. 3

ed. Espaa: Editor Monteso. 1980.

7. Murrugara AJ. Efecto de la concentracin del jugo de caa de azcar en

la produccin de protena unicelular e invertasa por Saccharomyces sp.
Tesis de Maestro en Ciencias, Escuela de Posgrado. Universidad
Nacional de Trujillo. Trujillo, Per. 2010.

8. Koneman E, Aleen S, Janda W, Scheneckenberger P, et al. Diagnstico

microbiolgico, texto y Atlas color. 5ta ed. Argentina: Edit. Mdica
Panamericana. 1999.

IX. ANEXOS
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ANEXO 01. Diagrama de flujo

CHICHA DE JORA

Homogenizar

Sembrar

Estria

ASBS

Incubar 37C- 24 Horas

Refrigerar

Observar, analizar y registrar las caractersticas

macroscpicas de las colonias
Etiqueta
r

MIT-L1A
MIT-L1A11

Saccharomyces

Cultivo
puro Incubar
Sembrar (Cdigo MIT-L1A1)
ANEXO 02. Ficha de Registro 37C- 24
Horas
ASBS Inclinado
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1. Fecha: 30 de mayo del 2017

2. Muestra: Chicha de Jora
3. Procedencia de la muestra: Mercado Nazareth- La Esperanza
4. Pre enriquecimiento: No se realizo
5. Medio de cultivo utilizado para el aislamiento: Agar sabouraud sacarosado
6. Condiciones de incubacin:
6.1. Temperatura: 37C 6.2. Tiempo:24 horas
7. Caractersticas macro morfolgicas:
7.1. Color: cremoso
7.2. Tamao: medianos
7.3. Aspecto: Blanquecino
7.4. Bordes: regulares
8. Caractersticas micro morfolgicas:
8.1. Forma: redondas
8.2. Gemacin: presente
9. Medio de conservacin: Agar sabouraud sacarosado
10. Temperatura de conservacin: 30C

ANEXO 03.
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FIG.2 Observacin microscpica en freso de levaduras productoras

de Etanol.

FIG.3 Observacin macroscpicas de colonias de levaduras obtenidas de la

placa contenida con ASS