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TESIS PROFESIONAL
INGENIERO AGROINDUSTRIAL
PRESENTA:
JURAW CALI
Presidente:
M.C. e
/
Secretario: -
Dr. Arturo Hernandez Montes
Vocal :
Suplente :
Suplente :
CONTENIDO
Pgina
Indice de figuras ................................... v
Resumen ............................................. vi
Summary ............................................. vii
1
Tesis donada a la UAM por la
Universidad Autnoma Chapingo
...
ul
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INDICE DE FIGURAS
F i g u r a 10.- R e p r e s e n t a c i n g r f i c a de una c o r r i d a
de l e c h e de ordea ................................... 68
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RESUMEN
El problema de la calidad en nuestro pas suele ser complejo, sobre todo en las
pequeas y medianas empresas, porque ellas enfrentan diversas situaciones que no les
permiten alcanzar una calidad minimma
aceptable en sus productos.
SUMMARY
The problem of quality in our country tends to be complex above all in small
and large companies because they face vaned situations that do not let them reach an
acceptable minimum quality in their products.
in this work, the process of pasteurized milk production was placed and
considered as a link in the agroindustrial milk system and, therefore, the problem of
quality was approached from a focus, of total control of quality. Thus, the manual was
elaborated proposing the control of quality of pasteurized milk, taking into account ithe
process of milk from its production iin the farm to its purchase by customers. Likewise,
it is highlighted the role that the Ilaborato~yof control of quality must play iri a
company at present, taking into account the competitive background in which it will
develop.
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I.- INTRODUCCION
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11. - OBJETIVOS
Objetivo General:
f. Elaborar un documento base que sirva como referencia
terica, pero tambin de utilidad prctica para una planta
pasteurizadora mediana en proceso de establecimiento
(CALCA, C.A. de C . V . ) .
Objetivos particulares:
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/ I[
1
Acopio (abasto) ]I
1
I
Mercado
(competencia)
I
/ Consumo
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' Segn la NOM-120-SSAI-1994 se define a la higiene como a "todas la medidas necesarias p a n prantizw
la sanidad e inocuidad de los productos en todas las fases del proceso de fabricacin hasta su consumo
final". Dentro de rsm medidas se incluye a la limpieza.
De acuerdo a la NOM-091-SSAI-1994, las buenas prcticas de fabricacin se definen como cl "conjunto d~r
normas 9 acnvidades relacionadas entre si destinadas a garantitar que los productos tengan y mantengan las
especificaciones requerida pard su uso".
'9
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I
La productividad :se define entonces como "la forma
eficiente y eficaz de manejar los factores de la
produccin teniendo en cuenta que el hombre es la esencia
de la productividad y el conocimiento tecnolgico l a forma
de mejorarla" (Gmez, 1991).
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d) Desarrollar un si.stema
Deber para la calidad.-
desarrollarse un sistema de aseguramiento de calidad, esto
es, establecer un conjunto de acciones planeadas
(verificar y evaluar) que se ejecuten de manera
sistemtica con el propsito de detectar, eliminar y
evitar la recurrencia de aquellas causas que origi.nari
problemas de calidad, impidiendo la satisfaccin del
consumidor. Este sistema de aseguramiento de la cali.dad
puede incluir diversos programas, entre ellos el HACCP,
CEP', etctera.
Punto c r i t i c o de control 1 ( P C C l ) .- Es l a
operacin donde
se efecta un control completo de un riesgo potencial y
por lo tanto se elimina el riesgo que existe en esta etapa
en particular, por ejemplo los procesos de pasteurizacin
y esterilizacin comercial.
Punto c r t i c o de control 2
( P C C 2 ) . Es la operacin donde
se lleva a cabo un control parcial, por lo que s l o es
posible reducir la magnitud del riesgo, por ejemplo en e:L
lavado de la materia prj-ma.
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V. - METODOLOGIA
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para cada etapa de produccin deba ser tal que los costos
no se incrementaran en qran manera.
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MEDIC)
MtI3IENlZ
PRIMA (lnfraestniciura de
Z001ECNICAS Y (LECHECRUDA). produccin).
ZOOSANlTARIA.5
MANEJO DE LA
ORDEA
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-
6 . 1 . 2 . 2 . - P r a c t i c a s zootcnicas. Son todas aquellas
acciones dentro del rancho, que se ocupan de la cra,
multiplicacin, mejora y explotacin racional del hato. La
correcta aplicacin de s t a s prcticas dar como resultado
un incremento en la productividad por vaca y, algunas de
ellas, contribuirn a mejorar la calidad composicional de
la leche (Loaiza, 1983).
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a) ordea manual
- Los utensilios de ordea (cubetas, botes, agitadores,
filtros, etc.), deben limpiarse y mantenerse limpios y
desinfectarse. Adems deben ser usados exclusivamente para
los fines que fueron diseados.
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b) ordea mecnica
- El equipo de ordea ma.1 lavado e higienizado (incluyendo
el tanque enfriador) es la principal fuente de
contaminacin bacteriana de la leche. Aun en la tubera de
acero inoxidable hay cavidades microscpicas en las clue
las bacterias se pueden multiplicar. Cualquier residuo de
leche dejado en el equipo es una fuente de alimento para
microorganismos y, al rr.ismo tiempo, puede dar origen a
"piedras de leche" y causar corrosin por la accin de la
humedad y del cido lctl-co (FIRA, 1987).
S a l a de ordea.-
Mantener limpia y seca el rea de
ordea, las bacterias no se reproducen dentro de tal
ambiente.
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T
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U
6.2.2.- Funciones del acopiador
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a) Temperatura
b) Anlisis sensorial
c) Densidad
d) Prueba de alcohol al 68%
e) Prueba de neutralizantes
f) Pruebas de limpieza (inspeccin visual).
Nota: Para mayor informacin sobre estos anlisis, consulte de la
pgina 77 a la pgina 89.
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EN RECEPCION
DURANTE EL PROCESO
EN ALMACENAMIENTO
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I 1
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El programa involucra:
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I Leche cruda I
I Estandarizacin I
(calentamiento)
I
1
sostenimiento
ILienado de envases I
I Distribucin I
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DEFECTOS
I{Acidez I NUMERO DE CACOS I PORCENTAJE ($1 I % ACUP.NLADO
en leche1 12 I 46.15 I 46.15 I
pasteurizada. I I
Cuenta total I 7 26.92 I 73.08
alta (cta)
Bajo porcentaje 5 19.23 92.31
de grasa (bpg).
otros 2 7.69 100
r -71
Figura 5.- Diagrama de Pareto
II
20
O0
m
.n 80
m
JJ
C 60
(u
U
$8
O 40
o<
20
11
O
Acidez cta otros
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H= R/k = 0.04
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Figura 6 . - Histograma
Diagrama de 1shikawa.-
Un problema que se presenta a
menudo en una planta pasteurizadora es la contaminacin
microbiolgica de la materia prima. Si se desean conocer
las causas que originan esta contaminacin, se enumeran
las posibles causas y se organizan en tres rubros
principales: personal, equipo e instalaciones.
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EQUIPO
INSTALACIONES
mantmlrniento
ALTA
CONTAMINACION
MICRODIOLOGIW
DE LA MATERIA
PRIMA
r
~
Leche de la maiiana
.9
e 3
z
Y 2
I
O
34A3.08 3.08A3.16 3.16A3.24 3.24A3.32 3.32A3.40
Lmks de clase
Leche de la tarde
I
Figura 0.- Estratificacin, a travs de
histogramas, del porciento de grasa en leche
cruda.
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Acidez
TOTAL:
I TOTAL DE RECHAZOS:
I
c DIA
1
I
I
I
__
%GRASA
3.L
2 3.3
I 3
!I 3.8
I
4 3.5
5 3.4
3.5
I 3.7
8 3.6
3.1
3.1
10 I 3.2
11 3.8
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1
iiempo
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6.3.4.- Control de calidad en proceso
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Temperatura.
Anlisis sensorial.
Densidad.
Acidez.
Prueba de fosfatasa.
Pruebas de reductasa.
Nota: De la pgina 77 hasta la 87 se describen stas pruebas.
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Temperatura.
Anlisis sensorial.
Acidez.
Determinacin de grasa y protena.
Recuento de bacterias termodricas.
Recuento de coliTormes totales v E. coli ( s l o si se
cree que el producto ha sufrido recontaminacin
bacteriana).
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* El anlisis sensorial es exigido en forma irnplicita por la Ley General de Salud, aunque no especifica la
forma de llevarlo a cabo.
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i
De acuerdo al reglamento de la Ley General de Salud
(Secretara de Salud, 1995) el ndice de refraccin a 2OoC
no debe ser menor que 37 ni mayor que 39. En general,
lecturas menores que 37 hacen sospechar la adicin de aguc,
y lecturas mayores que 39 hacen sospechar de la adicin de
solutos (Ramos, 1976).
Determinacin de g r a s a , protena y l a c t o s a
Grasa.- A la grasa de la leche se le denomina grasa
butrica y es uno de los principales componentes de ste
alimento. Su determinacin ha sido tradicional en l a
industria lechera desde su comienzo y ha tenido como
finali.dad bsica el pagar en forma justa leche con
diferentes contenidos de grasa (Bruhn, 1976).
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T
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~ ~ ~~ ~
El
6.5.1.- consumidor y la calidad de la leche
pasteurizada
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VI1.- CONCLUSIONES
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VII1.- BIBLIOGRAFIA
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U'
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IS0 9000
Gestin y aseguramiento de la calidad,
5 conceptos:
- poltica de calidad
- gestin de la calidad
- sistema de calidad
- control de la calidad
- aseguramiento de la calidad.
Gestin de la calidad y
3 Modelos de
aseguramiento
de l a calidad
ANEXO 2:
,....
I..
!
n
L
r-L:
-i
c x
XI O
z c
O D
I-
o
-i
m
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ANEXO 3:
Tabla
__No.1 .. . ~
CLACIFICACION
~
Grasa
-ii.iiC n~in
CLAC.I?TCACIC;N:
a= Leche entera
h= Leche parcxalnw~tr cescier%?a
c= Leche semidescremada
d= Leche descremada
Nota: 1.0 densidad de l a ledie ser invexoamentc propor-. i a l a l c o n ~ e n i d ode
NCU-F-420-9-1982
O INTRODWCCIoll
Las b a c t e r i a s pueden a l c a l i r i i z a r a l a ; e c h e , por descomposici.n de l a a l t . b i . n a
y i a formacin de amoniaco.
La a c i d e z l a o r i g i n a r . l o i s i g u i e n t e s componentes: c a s e n a d e 0.05% a O . O B % ,
l a c t o a l b m i n a s 0 . 0 1 % . t ~ d o c a r b n i c o d e 0 . 0 1 a 0 . 0 2 % . c i t r a t o s 0.01' y
f o s f a t o s de 0.06 a 0 . 0 9 % .
La 1act.osa no i n k r v i e n e d i r e c t a m e n t e , sino s o l u b i l i z a r i d o e l f o s f a t o d e c a l c i o
y los c : i t . r a t o s a l c a l i n o s . E l c l o r u r o s d i c o y o t r o s coaponentes de l a s c e r i i 2 a s
no t.ienen a c c i 6 n . So?.ament~ese debe A 104 elementos eri s o l u c i n .
2 FUNDAMENTO
E s t e mbtodo s e basa e n la t i t u l . a c i S n a l c a l i m t r i c a ccn h i d r x i d o de sodio
(NaC:H! C : . l N , U t i l i ando s o l u c i n de f e n o l f t a i e i i i a como I n d i c a d o r .
3 REACTlVOS Y N A m s
3 . 1 %activos
3.1.1 Los r e a c t i v o s que a c o n t i n u a c i n -e mencionan, deben ser grado
a n a i l t . i c o ; cuando s e i n d i q c t . agua, ciehe enteri:!erce agua d e s t i l a d a .
- Hidrhxiclo de s o d i o O . !N
- i e n o l f r a l e n a , s c . l i i c i 6 r i n d i c a c r r a a: 1. (1.0 g de f e n o l f t a l e n a en 7 9 cni'
de a l c o h o l e t l i c o y 30 c m ' de agua, neurraiizar a c c i o r rosado c o ~ i si'sa
0.02N).
3.2 Materialrs
- Pipeta gradiiade de I C c m '
- Pipeta v o i u m t r i c a de 2 0 cm?
- Matraz Erlemteyer de 1 2 5 cm
- ureta de 5 C c m 3 qraduada en 0 . 1 cti'
4 PRocE?We"TS
Medir 7 0 cm. de muest.ra en un i i a t r a z Erlenmeye: 'y d i l u i r agregando dos v e c e s
su volimen con agria l i b r e de Coi. Afiaciir n :' r m - ' or s o l u c i C n de f e n c ~ j f t a l e n u y
t i t u l a r con h i d r e x i p a de sodi.0 0.IN h a s t a l a z p r i c i b r , ;ie 'in c ~ l a rrosado que
p e r s i s t a de 1 5 a 3 0 seQ-lndes.
5 EXPRESION DE R g S U L T g O S
La a c i d e z en l a muestra expresada como dcirlc l d c t . l c ? se c a l c u l a c o n :.d
s i g u i e n t e frmula:
Acidez g/l ( 8 c i d o lcticc) = (V X W X 9 O ) / M
En donde:
V = Volumeii de s o l u c i 6 n d e h i d r x i d o de s o d i o O.iN g a s t a d o en l a t i t u l a c i n d e
i a muestra, e n cm' .
N= t r l m a l i d a d de la n o l u c i n rie h i d r x i d o de s q i i o
M- Voliman de l a m u e s t r a , en cm' ,
99- E q u i v a l e n t e d e l c i d o l c t i c o .
Nota: Uri 1
11' d e NaOH O.1N es i g u a l a 5.JC90 g de & c i a o l c t i c o .
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12.2 Material
Tubos de ensayo de 10 nl
Pipetas de T O m l
Alcoholimetro o Aerhmetro graduado
Probeta
12.2.1 Reactivos
Alcohol e t i l i c o a l 9 en peso ccrresuondiendo 2 ?es,:, e s p e c i f i c o de 0 . 8 : 4 1
de 2fl'C/2QC (Mezclar 70.8 m l de Llconoi e:il.im de 9 6 1 con ? 3 . 2 m l de a q u a
recientemente hervida y < e n f r i a d a ) . (CIH5CIi>
1 2 . 3 Procadi.miant0
!4cdir 2 n i de muestri; en el tubo de ensayo y i . A 2 !nl de alcoho:. etilico a l
E F % , mezclar y observar s i hay formaci,ir, de gru
12.4 Interpratacin
La forniacin de grumos ireaccibn po:-it::a;, e*. i a e v i d e n c i a de rjue l a
e s t a b i l i d a d de l a s ~ s p e n s i b nc o l o i d a l :le :.3 l e , i h j - s e eiicueritia a f e c t a d a , po:
l o que no r e s i s t i r e l proceso t-miro de La pasteuii.?.sci'5?.
2 oT"
Este mtodo se basa en usar una soluci0~: oe s ~ i . f a t i > de co' p3:a
d e s p r 2 t e i n i i a r y separar e i suoro, a l cual
(20C) 3eterninarle e l g r a d 3 r e f r a c : ~ - i . t r i .5 . 2r~::iiurrer;t~ -2'Lsta:: ei
r e f r a c t t m e t r u de i ~ m e r s i ncun a - r i desi. i i ( 3 i l i i .
3 P.EAcTivos Y m m s
3.1 %activos
3.1.1 LCS r e a c t i v i s que a c o r ~ t ~ n u i i c i . 6 n3 - 1 , ; e r c ~ > n a ! > , deben ser gr.?d-,
a n a l t i c o : cuando se indique agua, debe entenderse agua % e s t i l a d a .
3 . 2 iitT8RiALES
- Matriz volumtrico
- P i p e t a s v o i w a t r i z a s de 5 y 2 0 cm'
- Wnbuda d e f i l t r a c i n
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6 EIBLIOGPAFXA
NOM-2-13-1977 G u a para l a Redaci:in, L5tructirac1.Cn. y Presentacidn de
Normas O f i c i a l e s Mexicanos.
O f f i c i a l M e t h - l s of A n a l y s i s of t h e A s s o c i a t i o n e2 O f f L c i a l Anallyriczl
Chemist. Thirteenth E d i t i o n , 1980. P a r t . 1 6 . 0 > 8 , Chapter 1 6 .
0 Mtodo de P r u e h de l a Direccibn General de L a b o r a t o r i o s . Cubsecre.tara de
S,3luhridad.
2 FIMAMeNTO
E l uunto de c o c s e l a c i n rle 1.a l e c h e Z 7 ? . d ? i l 1.: a 27:.2-10 K i-O.533':'c; a -
0.560"Ci e s t determinado por l a co:icer.rraci c1c::ur;s y '>tras
i a l e s minerales en i a misma, y e s menor a l pi: it.>?",:ei .?U3 p.:ra
que es d e 273 K ( C ' C i .
3 REACTIVOS Y MAmRIALEs
3.1 Reactivos
3.1.1 Los r e a c t i v o s que a continuacin s e meici-ma::, d;he:i ser g - i ~ d o
a n a l i t i c o ; cuando 'se indique agua, debe enteneeerse 3rji.a i e c i e n d e s t i l a d a :
- Acido s u l f r i c o concentrada
- Eter e t l l i c o
-- hgua
- Sijlucibn A 3e socarosa.- 7 g de sacarosa p:ira F .
? a y w rbp 1 0 0 CIP 3 3 3 I.:
(20-c).
- Soliicicn O de s a 2 a r o s a . - io g de sacaroca lira en agda cbgt iiiO i.i,i a 293 K
120QC).
3.2 MTERIWS
-' Matraz K i t a s i t o
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4 EQUIW
- Criscopo de Mor::iet.- Consta de un tubo de Dewar de 28 cm d e a l t o con
.zapacidad de un l i t r a y dentro de un estuche c i l l n 3 r i c o m e t l i c o de mayor
dimetrc,. Tiene un tapC~!i de 3 cm de g r o s o r horadaao que permite e l paso a dos
termmetros, una s a l i d a y una entrada de a i r e , un a g i t a d o r iwe rodea a iun
termmeirr colocados den.tro de u n tubo de ensayo y o t r o a g i t a d o r en e l medio
refrigerant e.
- Bomba de v a c o .
5 PDCEDIMIWTO
5 . 1 Colocar en e1 tuba de c o n g e l a c i n una pequea cart.i.dad de a l c o h o l e t i l i c o .
5 . 2 V e r t e r en e l frasco d e Dewar 4C cw' de &ter a m c n c x 3e 263 K I-lOOC).
5 . 3 Conertair La boinba de a s p i r a c i n d f l u ; o moderado c o n f x m e se juzga por l a
agItat:in d e l a o i d o su:f'>rico en e l matraz de K i t a s a l c .
5 ~ 4C , ~ l o ~ a 33-35 r mi de agua a. 2 6 3 <: i - 1 O o C 1 en e l tubo de ensayo, a
:iontir~iiaciOn c c l x a r e l termmetro y r i z a i t a d o r der.tro.
5 . 5 Move- el a g i t a d o r de a r r i b a a b a j o u% cada segundo o dcs.
5 . 6 Mantener e!. paso de a i r e y cuando e l medio r e f r i g e r a n t e alcanza 2 7 0 . 5 K ( -
? S o r ) , empieza a congelar e l aqua subiendo r6pidamente e l mercuric.
5 . 7 Go!pear levemente e l termrnetri hasta que e l nive', d e l mercurio permanezca
e s t a b l e , e f e c t u a r l a 1ec:tura.
5 . 8 E1 t ~ b ide ensayo s e enjuagar con l a soluci:-. e n e s t u d i o ant?s de
l l e n a r l o nuevamente c.on 30-35 cm' a menos d e 263 K i - 1 0 ~ ~ ) .
5 . 9 R e p e t i r l a lecturi'. C O R o t r a a l c u o t a .
5.10 R e p e t i r todo e l procedimiento con l a s o l u c i i i A de sacarosa, i o soiuci6r?
B de sacarosa y l e c h e .
5.12 :A r e p e t i r l a s deterninaciones det,e co1:iproharse que e: volumen d e l e t e r
sea de 40'2 cm3 . Generalmente s e r e q u i e r e anadir de 10-14 cm' e:, cada
determinaciSn.
5 EXPRESION DE RESULTADOS
0.1 S a c a r e ? promedio de l e c t u r a s de c a d a 1iqu:do.
6 . 1 Se c,!,tler.e e;. f a c t o r de c o r r e c c i b n dividiend-l C . 1 9 9 por i.i drfs.rt'r:cia
a l g e b r a i c a e n t r e l a s l e c t u r a s obcenidas en l a s so:,.>ciones estn2ar A y B :le
sa..;arosa. (i.199 cs e l i n t e r v a l o d e i punto de cangeldcion d e l a s s o l u c i o n e s
estndar <!e sacarusa A :J b obtenido por cl trrmi>n,etri c f i c : i a l c e r - i f i c a u c , .
6 . 3 Restar el promedic de l a l e c t u r a de l e c h e d e l promedio de l a i e r t u r a =,el
agua, que e q u i v a l e a :a depresin d e i p i i t : , Sc congilaci6n de ! a ! e c h e .
6 . 4 il verdadero plinto de congelacin, s e obt-iene multiplicando dei. f a c t o r d e
c';rreccLhn por l o d i f e r e n c i a a l g e b r a i c a e n t r e l a d e p r e s i d r de; punto dc.
congelacin de la l e c h e y e l punto de conqel3cl6n ~ ! sai3arosa e a l 7 . rnds C.;:?.
2 RMDAMENM
E s t e mirodo s e bos.:. en l a d i g e s t i n p a r c i a l de io3 componentes de .:a l e c h e .
except.:, i a - r a s a , en c i d o s u l f i i r i c o . Emplea a l c o i i o l i s o a m l i c o p a r a ayudai: a
rornpei i.c *m::!sibn de le l e c t , e y e v i t a r que s e queme l a capa de 7 r a s a . l i
a i c c h c l isoanilizo r e a c c i o n a con el^ A c i d 3 s u ; f U r i c . c formand,., un s t e ; que e s
conp1etame:ite .;ol.ublc en d i c h o c i d o .
3 REXCTIVOS Y NATERIALES
3.1 R e i c t i v o s
3.1.1 Los: react-ivos q::e a c o n t i n u a c i b n s e mencionan, 'deben ser grado
analit:.:-: cuando s c i n d i q u e agua, debe e n t e n d e r s e agua d e s t i l a d a .
3 . 2 Xalatarialeo
- P i p e t , v o l m t r i c a de l i
- Emburir co!i ii,3vi+ de ,-aso p a r 3 l i b e r a r 1.0
- Embu<:i con l l r v e de p a l c p a r a l i b e r a r IC
- Btrt:.:t.m.e(iro de Gerber con una s o l a abertic gradii,3ioo de modo que sade. marca
corresponda a:. 0.1% ,de qrasa e n l a l e c h e
- Tdpores p a r a h a t i r m e t r o
- AjiiutaAor p a r a tapones a u t o m t i c o s ,d.? t x i t i r m e t r o
4 MARATOS P EQUIPO
- c e n r r i f u g a p a r a t:utir3mecr,? Verber
- EqulFo cnmCr; d e l a b o r a r o r l u
5 PROCEDIMIENTO
Medir 1 C cm' de d c i , j a s u i f r i c a en e1 b u L i r i m e t r c evitu:ido bailar l a s ared des
internas del c.iel;o; a n a d i r l e n t nr.te rrs::?lando p las 1:areriPs y si
m e z c i i r , ?.i cm' d e leche di. mod:. e s e ::::-.e un e s i ~ de :.c:che s c b r e e
Acido, i:media:oment? aqregar 1 de alcs?,cl iso-a ' c o . S e r r a r co:: 1'
tapdn y a g i t a r s n s 5 r g i z m e r l e , c o a l o que s e pri".Lic.e un ca?eritamierit.>
aprczimadazente d- 353 K (S0"C) y l a d i . j : l i c i n eri ,%cidc de l a s ircte!n?.s de
l a i e c h e : co:ocar .l b u t i r m e t r o e n J n ban? de agua c a l i e n t e y mantenrrl,:, a
3 3 3 K f E 5 " C ) - 342 K ( i O ' C ) por d i e z minutos.
6 ItxPRESION DE RESULTADUS
L e e r e l e s p e s o r d e l a capa de g r a s a acumulada o n l a part-e s u p e r i o i : colno el
t.apn queda h a c i a a b a J o , t s f e debe m o v i l i z a r s e s i i d a d o s a n e n t e !iast.a c o l o c a r
los lmites de l a capa d e g r a s a d e n t r o de l a e s c a l 2 , l a c u a l e x p r e s a
d i r e c t a q e n t e l a c a n t i d a d en por c i e n t o cir l a g r a s a c u n t e n i d a en l a l e c h e .
Tesis donada a la UAM por la
Universidad Autnoma Chapingo
7 BXgLIOGRAKIA
m NM,I-Z-13-1977 Gula p a r s i l a Redacci6r:, E s t r u z t u r a c i n y P r e s e n t a c i n de
Normas Of i c i a l e % Mexicanas.
D i g e s t o r - d e s t i l a d o r de K j e i d a n i
Reactiv:;.
R c i d o s i . i f l r i c o (H:SO,)
S u l t a t o de c o b r e iCuSO<.SH;Oi
Grarialla de Z i n c ( m a l l a 2 0 )
S r l f a < : o de s o d i o anhidro (Tia;S04)
h.riuo b 6 r i c o a! 4 % en aqua (HiBOi) .~
S o l i ? c i b i ; c:oncrntrada de h i a r b x i d o Ir s d i o ? : l m/v (NaH)
A,ido c l o r h d r i c o 0.1N HClj
.indicirdc.r de Wesslou
11.4 Procedimiento
Medir c r n una pi!pet.a 1.0lii~ietr:ca 5 r n l de mues:rd ei: un matraz dc X j e ? d a ! i l ,
a s r e j a r 2 g de .;ulfa:o de c o b r e , 10 g de su1ie:o de s o d i o a n h i d r o , 2 5 n i de
&:ir?<> w l f r i c o :I u t n s 'cuerpos d e e h u l l i c i 6 n : c o l c c a r a b a j a temperatui.
hiista q u e taco e: i?!a:ezial e s t d carbonizado i' a m e r t a r gradualmente !a
temperatura h a s t a e e ; conter:ido d e l matxaz e i f compietariente c l a r ? , d
por 32 :ninutos n Dejar e n f r i a r y agreg 4 3 n l de agua d e s t i i a i i a .
,i:.solvcr comple arre?te e l r e s i d u , d e l r.3 ; 5ejar e n f r i a r , agregzi 5 - 1
yranall,?.s de zi.nz, r s t r a t i f i c a i i d o , y s i n a q i t a r , a g r e y z r 5 in1 de solucihn di.
h i d r 6 x d o de s o d i o . Cciriectar e l mmtraz a l d e s t i l . a d o r y r e c i b i r e l d e s t i l a d o en
un :x&:raz Er1eri:;leyer de 530 ml, q c e coirtsnga 50 m l d e a c i d o b 6 r i c o y uno5
g o t a s d e l i n d i - a d o r de Wesslow ( l a part.e t e r m i n a l d e l t u b o d e l d e s t i l a d o r debe
e s t a r 89rntro del. A c i d u ) . D e s t i l a r h a s t a aproximadamente 300 m l . R e t i r a r el.
m a t r i z y ? i t u l a r con .Azido r l o r h i d r i c o 0 . 1 N.
11.5 C A l C u l O S
g i l de ? r o t e i n a s (V X N X C.014 >: 1F03)/M X 6 . 3 8
En donoe:
V- al de c i d o c l o r h i d r i c o 0.3 N r e q u e r i d o s en l a t.itl.ilari6n
N- Hormalidad de! c i d n c l o r h d r i c o
Ha ;
.
r
i de muestra
Tesis donada a la UAM por la
Universidad Autnoma Chapingo
G.38= f a c t o r j u r a c o n v e r t i r n i t r 6 g e n o a p r o t e n a s de l a l e c h e
2 . APAXATOS i EQUIPO
Balanza a n a l t i c a can s e n s i b i l i d a d de 0.CC01 Y
Sistema de f i l t r a c i n a l vaco
Vasos de p r e c i p i t a d o de 100 y 600 m l
Matraz a f - r a d o de 500 ml
Papel f i i t r o p l i s a d o
V i d r i o de Relo]
F i p e t a s volllllitricas de 70 y 5 0 m i
Matraz Lrlenmeyer oe 3 C O m l con tapn de h a l e bihoradado
Errbudo de A l l i h n (Ver 8.1.3.)
B u r e t a de 5 3 m l tal 9.1 m l )
Termnetrc
C o n t a d , x de minu:\?s
$!c:zteri.~il csmi! d e 1 . i h o r a t o r i c
3. W I A L E I I I RwLc**vos
Los r e s c t i v s que a c o n t i n u a c i 6 n s e mer.cionnn, deben s e r grado z n a l t i c : 2
menos 'que s e indique o t r a c o s a . Cuando se hable de agua, se de3e entender q':e
s e t r a i a de agua d e s t i l a d a .
S o l u c i S n de hidrr5xido de s o d i o 0.r5 N
Acido c l o r h d r i c o 1 N
A c i d c nlt.ricn 1::
..
i'rea c r i s t a l i z a d a
Yoduro d.i p o t a s i o a l 3 0 %
SolucirSii t i t i i l e d a c e T i c i : i l f a t o de s o d i o N/:O
SzlucL!,n de almidn a l i i , e s t a b i l i z a d a '2 r%iiienten.ente p ; ~ ~ a : - a < - .
O. -DE LAMVESTRA
Se t o m una n s e s t r n r e p r e s e a t a t i v a d e l l o t e de i;::.~eba, : : ~
a i_.~.i'
- ' --y-+- cc.n ? a nc,rm',
s f i c i a ? i!e Muestre0 NOM-2-iL en vigor.
5 . PROCEDIMIENTO
5 . 1 . In pesan exociamente. en e i v a s o d e p r e c i p i t a d o l2.i ; 5 (Pi dc is :eche y
s e pasan cuantit.ativami-;ite, lavando con ag-, a c e .O0 m
:
s e aaden cerca d e 232 zi de agus y s e niezcia
c l i i d a i c s a d e l matraz, e v i t a n d o l a formacihn de e
1 5 ml de sL21iicin oe F e h l i n g Y y se a g i t a ; derpu
0 . 2 5 i! y s e a g i t a . S e a j u s t a a l a temperatura <!
con agua a 20'C. Se mezcla y s e f i l t r a .
En e l v a s o de p r e c i p i t a a o d e 609 r a l s e c o l o c a n ;
25 ml de F e h l i n y I
25 m l 3c Fehl:,ng
50 m i de agua
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Universidad Autnoma Chapingo
5 . 5 . S e c a l i e n t a la s o i u c i n d e n i t r a t o de c o b r e ( v 3 l i u n e n t e t a : !:O-?; inl)
h a s t a e b u l l i c i h n , se aaden con cuidado c e r c a de 1 . 5 y de 'urca y s e c i ; r . t i n i a
!.a e b c : . i i c i h n dtirante un mindto, se d e j a CnfrLar? se a<!i:>.~:ian i i i mi de p d ' i r a
de pot.asio a l 30% y s e t i t u l a inmediatamente ei yodr terseo C G P t . i o s u l f a t 3
d e s o d i o N i l o , aliadiendo a l f i n a l de l a t i t u l a c i h n 1 mi se Le. sduci':? nc
a l m i d l n c3mo i n d i c a d o r .
5 . W 7 J U J S Y RESOLTADOS
6 . 1 . S e i o n v i e r t e n les m l d e La sclucibl: ie t i c s u l f a t o di; s c d i o U / 1 7 e;;n:eadcs
en ? a t . i t ; ; l a s i r i n a m g de Oxi,do de c o b r e , e v l t l p l i c a n d o ~ z er ? f a c t o ; ee l a
s o l u c i h n de tiosG1:at.o.
6 . 2 . En l a t a b l a s e busca l a c a n t i d a d de h i d r a t s de l a c t i ~ s aiolrespondlentt? I
l o s mg d e 6:;ido de c o b r e .
k d,r l a c r o s a (M X 1 0 X l @ O I / P
Ln d o r i e :
M- Peso en granos 5e l a l a c t o s a
F= Pes<>en gramos de l a muestra
1C= 0a:i:e de l u a l c u o t a
7 . ~ P R O D U C C I O NDE LA FPJJEBA
La determinaci.n de la l a c t o s a se r e a l i z a por dup:.icadc, pait;ei::jo de l a
s , ? l u r i n a f o r a d a a 5 O i m l ( v e r S.l), y los r e s u l i a d o s n c deben d i f e r i r en ms
de i i . 3 4 .
e. APENDICE
R . 1 . Observaciones.
9.1.1. E s t a d e t e r m i n a c i n debe ser pre1.in.ir.a:~ i i.:a d f : I $ : s en~
~ L s ~ prs2~ctc..
1 , i c t z o s 'que hayan s i d a a d i c i o n a d o s con e l l a (materia -.ma;.
8.1.3. El embudo de A l l i l i n debe ser de pir-ca p > c ~ ; s d,<.e I:: 3 Jeaa I . f l , ia-:J
m d e :ll2metrc aproxi.ma3anente.
8.2. Biblioqrafa
O i f l c i l i ? Nethods o f Firiaivsis k q r i c u l . t c r a 1 i'hemisrs
Eiaventk E d i t i o n Fr::tcedu;e 6 0 5 0 p. 2 5 0
(Ma::uel S u i s s e des Dt?nres A l i m e n t a i r e s , -i emr e d i t ~ i . G n , 1935. 4 5 1 a 4 5 8 ) .
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Universidad Autnoma Chapingo
A.I.
3
A
93.8
201. 91.3 94.2 89.4 130.4
202. 91.1 94.6 09.9 131.1 170.7
203. 92.2 95.2 90.3 131.8 171.6
to+. 92.1 95.1 90.8 132.4 172.1
205. 93.2 96.2 91.3 133.1 113.3
206. 93.6 96.6 91.7 133.8 174.1
207. 94.1 97.1 92.1 134.5 175.0
208. 94.5 97.6 92.6 135.2 175.8
209. 95.0 9e.i 93.1 135.8 176.7
210. 95.5 90.6 93.6 136.5 177.5
211. 95.9 99.1 94.0 137.2 178.3
212. 96.4 99.6 94.5 131.9 179.2
213. 96.S 100.1 95.0 138.6 180.o
214. 97.4 100.6 95.5 139.3 1.80.9
215. 97.8 101.1 96.0 140.0 181.7
216. 98.3 101.6 96.5 140.6 182.6
217. 98.7 102.1 97.0 141.3 183.4
21@. 99.2 102.6 91.5 142.O 184.3
219. 99.7 103.1 91.9 142.6 185.1
220. 100.1 103.6 98.4 143.3 186.0
221. LOO. 6 104.1 98.9 144.0 186.9
222. 101.. 1 104.6 99.4 i v .7 187.1
223. 101.5 105.1 99.8 145.4 188.6
224. 102.o 105.6 100.3 146.1 189.4
225. 102.5 106.1 100.8 146.8 190.3
226. 103.L 106.6 101.3 147.5 191.1
227. 103.5 107.1 101.7 148.1 19z.a
228. 103.9 107.6 102.2 148.8 192.E
229. 104.4 108.1 102.7 149.4 193.1
230. 104.8 108.6 103.2 150.1 194.5
231. 105.1 109.1 103.6 150.8 195.3
232. 305.0 109.6 iOd.1 151.4 196.2
233. 106.3 110.1 104.6 152.1 197.0
234. 106.8 110.6 10s.1 152.8 197.9
235. 107.1 111.1 105.5 153.4 198.7
236. 107.7 111.6 106.0 154.1 194.6
237. 108.2 112.1 106.5 154.8 200.4
230 108.6 112.6 107.O 155.4 201.3
239. 109.1 113.1 107.5 156.1 202.1
240 109.5 113.6 108.0 156.8 203.0
241. 110.0 114.2 108.5 157.4 203.9
262. 110.5 114.1 109.0 158.1 204.7
243. 111.o 115.2 109.4 158.7 ZC5.6
244. 111.5 il5.7 109.9 159.4 206.1
245. 111.5 116.2 110.I 160.I 297.3
246. 112.4 116.7 110.9 160.1 2c,a. 1
247. 112.8 117.2 111.3 161.4 209.9
248. 113.3 117.7 111.8 162.O 201.8
249. 113. e 118.2 112.3 162 7 210.7
300. 138.1 144.0 136.R 191.4 254.2
30!.. 138 s 144.5 137.3 198.1 255.1
302. 139.5 145.0 137. e 198.8 255.9
303. 139.5 145.5 138.3 199.5 256.e
304. 140.O 146.1 138.8 200.2 257.6
305. 140.5 146.6 139.3 200.9 218.5
30s. 141.G 147.1 139.1 201.6 259.1
307. 141.5 141.6 140.2 202.3 260.2
308. 142.O 148.1 140.7 203.0 261.1
309. 142.5 lie . 6 141.2 203.7 261.9
310. 143.O 148.1 141.6 204.4 262.8
311. 143.4 149.6 142.1 205.2 263.1
312 143.9 150.1 142.6 205.9 264.5
313. 144.4 150.6 143.1 206.6 265.4
314. 144.9 151.2
151.1
!
Tesis donada a la UAM por la
Universidad Autnoma Chapingo
1 O e J E T l M Y CAHPO DE APLIWION
E s t ? Norma O f i c i a l Mexicaiia e s t a h l e c i ei procedimiento para determinar los
s d l i d o s rota?Lesen l e c h e fliiida.
2 E v " m
A un v , l u n e n definido de leche se l e evapora e l agua por c a l e n t a m i e n t o ,
FOK de a g i a y despus en una e s t u f a a temperatura 3e 3 7 1 K - 373
3 U&TP.IALES
- P i p e t s v o l m t r i c a s d e 2 cn'
- Cp'.:?as de nquc.1 d e 5 c m de dimetro
- Casa
- E s t u f a p a r a mantener l a t e n u e r a t u r a de 3 7 1 K - 3 7 3 K (9S"C-lOO"C1
- Desez-dor
4 APARATO
- Balanza a n a l . i i c a con +- 0 . 0 0 0 1 CI de s e n s i b i : i 3 a d
5 E'RYDIMXNTU
Medir 5 ~n de l e c h e y colocarlo:: 'En una cpc7:la de n q u e l a masa c o n s t a r t e
con una cama de g a s a . C o l o c a r l a cdps!ila s o b r e un baio de dqua a e b u l l i c i 5 n
i i a s t a sequedad. T r a n s f e r i r l a c a p s u l a a l a e s t u f a y secar d u r a n t e 3 h o r a s d
3 7 1 '< - 3 7 7 K (9SC-ICOoC)
6 %XPRESION DE RESULTADOS
Sbl.idos t o r a l e s ( g / i O C r m )= IE.P:)/M X 10.)
En donde:
Pi= Masa de l a c p s u l a con r e s i d u o s e w
F:= Maza de l a c i p s u l a c:on l a :ama de g a s a
M= Vol:;r.en de l a muestra en cm
7 BIBLIGGRAFIA
NOM-2-13-1917 Gula j a r a 16 i7fxlaccit.r. arrseniaci6n clip
Normas O f i c i a l e s Hexicanas.
O f f i c i a l Methods of A n a l y s i s o f +he As c5ial hnalgr ;<:a?
Chemist. Thirteenth Edition, 19PU. P a r r . !
Mtodo de Prueba de l.a D i r ~ ~ c r i Genemi
n de S i b o r a t a r l o s . S u b s e c r e t a r a de
Salubridad.
La prueba e s de g r a n u t i l i d a d p a r a d c i i d i . r s i la l e c h e ha s i d o o no
p a s t e u r i z a d a , si l a l e c h e p a s t e u r i z a d a :re h a mezclade con l e c h e c r u d a , c
i n c i u s o s i l a p a s t e u r i z a c i n Lia sido d e f i c i e n t e .
Tesis donada a la UAM por la
Universidad Autnoma Chapingo
1 B J X T S i 0 Y CAwPo DE APLICACICW
Esta Noma O f i c i a l Hexican;. e s t a b l e c e el procedimientc para determinar la
L'osfstssa r e s i d u a i e? l e i h e f l u i d a .
2 -
-
TO
Este mtodo s e basa en la h i d r i i s i z del f e n i i f c ; s f l t o , que en presencia de l a
f o s f a t a s a de l a l e c h e l i b e r a f e n o l ; s t e s e determina colorimtricarnenLe
hacinaoio r e a c c i c n a r con 2.6-dibromo-quinon c?rimida (B.Q.C.) ohteniondose
C6H.C" t KFOA
3 . 1 Raictivor
3.1.1 Los r e a c t i v o s que a continuacin se mencionan, deben ser grado
anal2t ico; cuando 'e indique agua, debe entenderse a.qua d e s t i l a d a :
3 . 1 . 1 . 5 Substrat<; regulador
3 . 1 . 1 . 5 . 1 Para v a l c r a r l a pasteuri:acion
- D i s o l v e r 0 . 1 0 y Se i e n i l f o s f a t o d i s S d i c 2 i r i s t a i i z a d n i i b r e ,$e Fer,cl, en
I C 0 c d d e i reguiacior de hidrbxidc l e nari--i- t.o i v i c e ? . l . i . I i . Ifer:il
f-sfato cristalizado debe cc.nseriarsp si -e en iil coi~.ge:ador de;
r e f r i g e r a d o r o en Gn desecador.
C a i e n t a r La s o l t i r i n de f e n i l - f o s f a t o d i s b d i c o (0.10 g o b i e n 2 ,m' de l a
s o l u c i n p u r i f i c a d a ) , mas bcrato-hidrxido de b a r i o 1 0 0 cm') a 358 K ( 8 5 O C t
por I minctos: t.apar inmediatamente y guardar en e: r e f r i g e r a d o r . I s o l u c i n
e s e s t a b l e par un ado, .si s e encuentrz> b i e n tapada s i n e x p o s i c i n a l a
atmsf-ra. T i . s e r e p u i e r e , d e s a r r o l l a r e l c<:lor y r e e x t . r a e r l o antes de us5.
3 . 1 . 1 . 5 . 2 Pasa d e t e r n i n a c i m r s en l e c h e cruda
La p r e p a r a c i t n d e l reactivo, s e e f e c t a ccjmo s e ha d e s c x i t o en l a v a l o r a c i 6 n
de la p a s t e u r i z a c i n , excepto qlie se d i s u e l v e 3 3 . 3 0 g de f e n i l f o s f a t ' i
disbdicc, o b i e n s e u t i l i z a n 2 an3 de l a s o l u c i n p u r i f i c a d a .
3.1.1.9 .hlcohoi b u t i l i c o
Emplear alcohol b u t i l i c o m r m a l , d e punto de e t i l i i c l n 3 0 9 K - 39i K ! l l t C -
1 1 B 0 C ] . Para a j u s t a r e l pH, n e z c l a i en un 1 ro d e a i c o h - i , c o n 5 0 cz' >e 1 3
s c l u c i n reguladora para d e s a r r o l l o de c o l o vase 3 .l.l.Z) Conservar ?in un.
f r a s c o con tapn d e v i d r i o esmexilado.
3.1.1.10 Patrones de f e n o i
3.1.1.10.1 Soluci6n madi-?
Pesar esactamente 1 . 0 g de ! E
' 1 ;aro: t r a n s f e r i r .. ur, ma:ra:
En l i t r o y d i i . J i r hasta l a marca on agua, m e z c l a r p e r E e i t a n r n l c <c:aea cm
c o n t i e n e 1 mg de f e n o l ).Zsta salucin mantenida r n e l r e f r i g e r a d o r e s e?'.abi.e
O u r a n t e ---ariosmese.
3.2 Materiales
- Tubos de ensayo de 15 X 125 mm
- Tubos de ensayo con graduacin en cm' ( r k de 5 a J;i
- Pipetas de Nohr graduadas en 0.1, i.3, 5 . C y 10 cm
- Embudos de filtracin, tallo r o r t . 0
- Papel filtro Whatman No. 4 2 de 9 cm o bier: i 1 No. 2 3 su equivalente.
4 APARATOS Y EQWIW
- Balanza analtica con + / - @.COO1 q d e sen3Frilidad
- Espectrofotmetro o fotocclor1me:rc. aprs;,i63c para lecturas en la ? r g i , n
visible.
- Potencimetro
- BaRo termosttico con aqua contrclada a 6 - 318 K 1370C-45QC)
- Placa caliente, con control termosttico
5 PROCEDWENTO
5.1 Medir con una pipeta 1 cmi de nuestra I?? dos o t r e s tubos (se necesita un
tubo como testigo y se recomie parar dcs o ms tubos paz-a
determinacicnes por dup1icz-c); er. e e :a leche de cabra, emplear 3.0
cm' de la muestra; calentar el +.ut13 eii iin bafio "e agua a ebulliciOn
cubierto, alrededor de un m i n i * . s :;a tu:a inirerna d e l tiitc debe estiir
entre 358 K - 363 K i 8 5 ' C - ~ 3 @ " C ; , , dejar .??friar ,?. temperature arcbiente. A
partir de esta etapa manejar de igual maz'rii el testiga y las riuest.ras.
6 EXPRESION DE RESuLTACS
6.1 L-terminar l a i n t e n s i d a d de1 :olor azul con c ' . 3 l q u i e r a de 1c,s s i q u i e n t r i
mtcdos :
6 . 1 . 1 H4todo a s p e c t r o f o t c n t r i c o
L e e r l a s i n t e c s i d a d e s de c o l o r d e l tuco t e s t i g o y de ! a s !nuestras (usando e l
f i l t r o .ccn mxima t r a n s m i t a n c i a a 610 n a n 6 m e t r c s i , r e s t a r l a l e c t u r a d e l
t e s t i g o de ? a l e c t u r a d e l tubo de l a muestra y c o n v e r t i r e l resu:tado a
unidades de f e n o l u t i l i z a n d o l a curva p a t r 0 n ( v a s e 3,l.l.lO.Z).
6 . 1 . 2 Hetodo v i s u a l con e s c a l a de p a t r c n e s
Comparar l o s c o l o r e s ue l a s muestras que dan m i s de 5 .enidades cimn 1 0 s tui
de color que c o n t i e x n Fat.ro:ies de f e n o l (veuse 3 . 1 . l . i O . ? ) . Para 3 i - t e : i c r
r e s u l t a d i s c u a n t i t a t i v o s en a q a e l l o s ILS:,' en q::e ?,aya v a r i a c i o n e s e n t r e C .:# y
5 =nidades de c o l o r , h a c e r l a e x t r a c c i 5 . u t i l i c o ir'rri;ga?dn 5 ,:m'
de a l c i t ? : e i n v i r t i e n a s lentamente V E T -
.r..fuoar ,>i".ise : sefi.i:-
en e l netodo a n t e r i o r , si f u e r a n e c z s a 11.ar !a c i a r i d a d de i i i
capa a l c o h l i c a y comparar cl c o l o r ccn h ) s patr-cries t r a c a d c s en i p ? i i l tcrma
(vase 3.1.1.10.2;.
'I BIBLIOGRAFIA
NOH-%-13-19'77 G u a para 16 Redaccin, Estructuraci6n y P r e s e n t a c i i n de
. Nornas G f i c i a l e s Mexlcanas.
o f f i c i a l b!ethods of A n a l y s r t of t h e A s s o c i a t i o n o f O f f i c i a l Ana1y:ical
Chemist. T h i r t e e n t h E d i t i o n , 1980. P a r t . 16.116, Chapter 16; P a r t 5 0 . 0 0 7
(f), Chapter 5 0 .
M t c d o d e Prueba de l a Direccihn enerz.1 d e L a b o r a t o r i o s . 5ubsecretar:a d e
Saliikridad.
Ramos. C . M. Manual de Mtodos de A n l i s i s de Leche y L a c t i c i n i o s .
Publicado por e l autor. Mxico, D.F., 1 9 7 6 .
2 mAMIENT0
Este mt-So se basa en l a o t s e r v a c i 6 n d i r e c t a d e los n a l s s de inhibir;;?:.
puelen z p - i e c e r a'rededcr l e l o s d i s c c s de papel f i l t r c . , hurnedeciCns c;::
wJeStra d e aiirnento, p e s c ! x s o b r e u ~ ag i a r a previameiltc inocu:ida c::~
suspensfn d r es:?>ra:. de 3. 5 m t j l i s i ? C S 6633.
3.1 Hedi; de s c l t i v c
3.1.1 Medi.? No. 1 para a n t i b i t t i c o s
- Extractc. ae carne 1 .:> 4
- E x t r a . x c de levadura Z.!) g
- D i g e r i d o p a n c r e a t i c o de caseina 4.0 g
Peptona 6.0 g
-
'-
Dextrosa 1.c y
- Agar 15.0 g
- Agua i f l u cni'
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Universidad Autnoma Chapingo
3.2 Reactivos
3 . 2 . 1 Los r e a c t i v o s que a cont.inuacin se mencionan deben ser grado a n a l t i c o :
cuando se indique agiia, debe entenderse aqua d e s t i l a d a :
3 . 2 . 1 . 1 Solucin s a l i n a e s t r i l a l 0 . 8 5 1
- Cloruro de a o d i o 0.85 g
- Agua d e s t i l a d a 100 cm'
3 . 3 Mat.eriales
- Cajas de P e t r i de 1 0 0 X 1 5 nun
- Discos c!e papel f i l t r o de 6 mm d e dimetro con n d i c e de absorcin eievdda
- P i n z a s de d i s e c c i 6 n d e punta a f i l a d a
- Tubos de ensave de 1 3 X 1 0 0 mn
- Botellas de ~ u x
- P e r l a r de v i d r i o (previamente e s t e r i l i z a d a s )
- Asa de p l a t i n o c nicromel
4 EWW
- Horno para e s t e r i l i z a r a 452 ti (1BO"Ci
- BaT,c marya con termostato y termmetro
- Incubadoro cori ter:nostat:> que e v i t e variac:icnes mayores ae A / - 1.1 ti !O.i
- A r i t o c i a ~ ~ceo r termmetro o man0net:o. proSaOa csn t e r m h e t r c , do mbx?.mas
5 PRCCEDIPIIENTO
5.1 Fundir e l medic, e n f r i a r y Conservar ,i unos 52: ti 1 en Da?) mar!.a
5 . 7 U t i l i z a n d o l a s p i n z a s d e d i s e c c i b n sumergir un disco d e p a p e l f i l t r o e n l a
s o l u c i 6 n c a l e n t a d a y O t t o en l a s o l u c i n no c a l e n t a d a . Escurrir e n l a pared
i n t e r i o r d e l tubo y colocar s o b r e la s;:.pirfic5.e ?e l a p l a c a de medio
i n o c u l a d a . S e puede-ensayar h a s t a s e i s mue:itr;js ( > 2 d i s c o s por c a j a ) .
5.8 I n c u b a r l a s c a j a s a 3 0 3 K ( 3 0 C )
7 BIBLICGRAFIA
NOM-E-13-197'7 Gua p a r a l a Redacci5n, E c t r u s t u r a c i n y P r e s e n t a c i n de
Normas o f i c i a l e s Mexi* c a n a s .
O f f i c i a l Wethods of i i n a l y s i s of ,.lie Associ8-tion Q f o f f i c i a l A n a l y t i c a l
Chemist. T h i r t e e n r h E d i t i o n , 19EO. F a c t . 4.012, 4.323, Chapter 4 ond Part,
1 5 . 1 3 1 , Ch.apter 1 5 .
Mtodo de Prueba de l a DirecciOn Gener;:i de L s b s r a t o r i o s . s u b s e c r c t a r t a de
Salubridad.
32.1.1 Aniisia
- Recuent.0 t o t a l
- Recuento de b a c t e r i a s c o l i f o r m e i
E l p I l i s o r b a t o E O se usa p a r a n e u t r a l i z a r a l g i i r o s d e s i r . f e c t a n t e s fen6lii:os
s u s t i t u i . d o s y l a l e c i t i n a de soya p a r a n e u t r a l i z a r compuestos d e amri:is
c u a t e r n a r i o , pero l a e f i c a c i a de los nrut:alizadores gars m u e s t r e o de a g a r di-
c o n t a c t o no han s i d o demostrados d e f i n i t i v a m e n t e .
32.1.4 P r o c d imiento
S a c a r l a c u b i e r t a de l a p l a c a y p r e s i o x a r cuidadosmerte l a s u p e r f i c i e de:
a g a r contra l a s u p e r f - i c i e a examinar. A p l i c a r iura presiCn uni.forme en e l
r e v e r s o de l a p l a c a p a r a un c o n t a c t o hi>mon&neo. A coi:tinuacihri colocar l a
c u b i e r t a e incubar.
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32.1.4.1. Incubiaibn
Incubar i a s p l a c a s en p o s i c i d n i n v e r t i d a a 3 i y C por 24 a 4 8 h o r a s
Cuando se o b s e r v a una f u e r t e contaminacin en e l i , e ~ o d ode i n ; i b a c i 6 n de 2 4
h o r a s , debe v i g i l a r s e a modo de p r e v e n i r un creci.miento e x c e s i v o .
32.1.4.2 L.ctura
Las c o l o n i a s deben contarse usando u n contador de ioloni~ii.? y debe r e g i s t r a r s e
e l 'nmero de c o l o n i a s p o r p l a c a RODAC' o *nUnero de C o l o n i a s en 28 cm'.
32.2.2 ArJliiis
- Recuento t c t a l
3 2 . 2 . 3 Tcma do l a muestra
a. At,rir e l envase ( s s b r e o tubo) qae contieti?. ? a :5rula estrii, a s i r l a d e u n
e x t r o n o y s a c a r l a d e l envase ~ c : i i d m l o de r o ccm:a:ni:;ari o .
b . A b r i r e l frasco que cont.icne l a .:olu<:iijn buPFer L o s f a t c y humedecer l a
c a b e z a de 12 C r u i a . A1 e x t r a e r l a e l i n i n a r ~1 e x do s a l i i c i h n prcsiondnuola
c o n t r a l a p a r t e i n t e r i o r :o:, movimiento g i i a t < > r l :
c . S x t e n e r l a t S r u l a hmeda y tratar de FCoer :I e ? i a or: ngulo de i C D en
c o n t a c t o ccn l a s i i p c r E i C i e ii e:ia.n'.nar.
d . R o t a r suavrmente l a cabeza de :a t e : \ i i a 3 2 3 ~'in0 ~ s u p e r f i c i e <!e S C
c m . ( d e l i a i t a d a por e l c c a d r a d o de alzr,l?re! c n s r r . t i , 3 o v e r t j c a i y l u e g o e n
s e n t i d o h c r i z o n t a l finaliza:l,3L:, la cperaclOn er; -1.34 r i a l .
e . V o i i e r l a t h r u i a a l f r a s r o C L I ? i n z:.-.;uc::n S u f ' ~ e r , e i . ~ , , ~ q i c ?yl a e l m
e x c e s o presionando en l a s -,orede? i n t e r n a n +cl reci;>:enre.
32.2.4 Procuiimiento
3 2 . 2 . 4 . 1 siembra
Agi.t,aX fiierte:nrnte el. frazc.: q'2e c 3 n t i e n e :a r
3 2 . 2 . 4 . 2 incubacibn
Una ves s o i i d l f i c a d o e : medio, i n c u b a r 1.3s 1 ii:as +n - o r i : i n invertida d x a
t e s p e r a t u r a d e 3iC d u r a n t e 4 8 h o r a s .
3 2 . 2 . 4 . 3 iactura
Contar l a s c o l o r , i a s y r e g i s t - r a r el r e c u e i i t c <-':,m> r:$mero de c o l o n i a s por tin.
d e s u p e r f i c i e examinada.
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Universidad Autnoma Chapingo
2 REFEPaNCIM
Para la correcta aulicaciS:i de esta norma. se deben consultar las siauientei
Normas Oficiales Mesicanas en vigcr:
NOH-F-285 Muestren y t.ranSpOrte de muestras de alinentos para su anlis5.s
microbiolgico.
N3M-F-286 Prepsraci6n y diluciiin de rmisstras +e aiimentos para anlisis
microbiol6qicos.
3 M\TERIAL Y EQUIPO
a) Horno para esterilizar
b) Artoclave ccn t.?.m6ntctr3. < manhetrc ;robad'> c i n terinbmetro d e mnim.as
c) Bao mar:a con termoc'?atoy term6metzo
d) Licuadora de una o dcs velrcidade; ior,tro:adas >ar an refistat0 con vasos
esterilizables
e) Vasos esterilizabies para licuadora
f)Balanza granataria con sensibilidad de '1.1 q
g ) Incubadora cor: termostatc que evite variaciones ni'/ozes de +)'- 0 . S 9
h) Ut-ensilios estL.riles para la preFiraCi6n de, 13.5 muestras: ~ c u , ~ i ~ i ~ . i c s ,
pinzas, tijeras, c:zzhaias, esptuias.
i) P i p c t a s hzcteria:6gicai e s t i ' r i l e s rie :O j . 1 r7.l oraduadas e:) O . ; y 0 . c ~:o1
respectivamente
j) Frascos de di?u::ion, de vldrio para contepe- 39 ,5 $0 nl, C t.ihos d e i'5 X
150 mm con tapb;! de rc a para contener 9 nl de sol.iri6n reguladora diiuyer.
en ambos casos if- del volvmen c e i ' i a l a l c i.es;:ues de la esterli! :?:
cerrados hermticamente.
KHiPOI 34 qrarrs
Agua dest.ilada 5CL' mi
Disolver el fosfaro en aqua jestilada y a.;ustar e ; 2V. d 7 . 2 coc hidr6sido de
sodio i K. Levar a un litro con agua destilada. Esteriiiiar durante 20
minuto,? a 121.*. Ccilservar en refriqcrcxihr.. ?.;mar 1.25 i?. de s ~ l u r i 6 n
conceniradd y llevar a un litro con ac;.i destilada, esta es la s o l u c l t i i de
trabajo. Distrikui: er. purciones de 951, 3 0 ; 9 -1, segun s e requiera.
Esterilizar a 1 2 1 " d1:rante I O minutos.
El pH finai debe ser 7.2.
1
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Universidad Autnoma Chapingo
5 PRCCEUIMIZNTO
5.1 Disiribuir las cajas esteriles en la m s a ue trabajo de manera que su
inoculacin, la adicir. de los medios de i.u?tivo y su rotacihri se pueda
realizar i;6moda y libremente. Marcar lac ca>a- en s u s tapas con 13s datos
pertinentes previamente a su inoc.ulazihn.
5.1 Incubar las cajas en posicin iiivcrtiio (11 'loa hacia abajo) durante el
tienpo y a l a tenpei-aturaque re requi.era sego9 +i c i p o de aiimi-r.t- 4e que se
trate.
6 INTERPETACICPl DE RFSJLTAtMX
6.1 Cor.
el auxilio de l a ienre de a m e y ic l a cuadrcula del contador,
cor.tar todas l a s coionias de las ?lacas das. Si el. nuPeru se estjnia
meyor de 300, y no se d'sponc de plai.s pieparadas con las diluciones
subsecuentes. contar e: la mitad o en un cuartc representativo de ella,
mi:ti;licando por 2 o ; x ~ i3 e1 riimero obreniio. E? rondo de una caja Petri d?
100 mm de dimetro contiene 65 cuadros de ?a 'wialr:cula del con.tadcr.
6 . 5 S i todas l a s p l a c a s :
l! NO msestrac c o l o n i a s
2 ) Muestran e x c e s i v a d i f u s i d n d e las mismas
3 ) Estn contaminadas o n o son s a t i s f a c t o r i a por c u a l q u i e r r,ct,vo, anoTar
rospetivamei,tte:
1) s i n c o l o n i a s
2 ) co?-iiias d i f i s a s
3 ) i c c o n c l u v e n t e por a c c i d e n t e d e labcrat.sr:io
7 BLBLIOGRAFIA
Ticn.;cas para e l muestre0 y a n l i s i s m:i,irobioldqic; de alimentas. Direcciii
Genera1 d e Invest.iqaci6n en salud P b l i c a , S.S.A. 19?5
1 OBJETIVO
Esta 1<1,3rma O f i c i a l esLablece 10s procedimientos para &tener la ciic'ilta de
organismos c o l i f o r m e s , en a;imentcs.
Tesis donada a la UAM por la
Universidad Autnoma Chapingo
2 CAMPO DE APLICACI<M
El criterio para seleccionar y aplicar uno u otro procedimiento depende
primariamente de la densidad de grmenes q i ~ e s e espera encontrar, siendo en
algunos casos nece:ario considerar adems la composicin y naturaleza del
alimento que se va a examinar.
3 RgFERIoHCIAS
Para l a correcta aplicaci6n de esta norma, se deben consultar las siguientes
Normas Oficiales Mexicanas en vigor.
NOM-F-285 Muestre0 y transporte de muestras b e alimentos para su an1isj.s
microbiolbgico.
NOM-F-286 Preparacin y dilucl6n de muestras de alimentos para anlisis
microbiolbgicos.
NOM-F-187 Determinacih del ii,nero ms probahie de grmenes.
4 DEPINICIONBS
Organimaos coliforms
Para los efectos de esia TiorfFd en e s t e q!-:ipc de m.icroorganismos se incliyen
bacilos Gram negativos, aerohios, no esporulajis, que incuban a 22'-35'C. Una
variedad de bacterias, muy aikundantes y sienpra presentes en la materia fecai
del hombre y animales superiores satisface l a definicidn anterior: t.ambi6n
pertenecen a este grupo ciertas bacterias pro;>i?s del. suelo y vegetales.
5 MSDIOS DO C V L T N O I REACTIVOS
5 . 1 Recuento de colonias en medio slido
a) Agar Rojo Violeta Bilis
Extracto de levadura 3.0 g
Peptona 7.0 g
Sales biliares 1.5 g
Lactosa 10.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Rojo neutro 0.03 g
Cri.sta1 violeta 0.002 g
Agar i:,.n g
Agua destilada 1000 ml
Suspender lcs componentes ances mencionados e , i;n litri. ,:ie agua iestilad,a,
dejar reposar por un minuto. Mezclar perfectame:.te y ajustar 01 pH a 7 . 4 .
Calentar con agitacin ccnstante y hervir *irante 2 m i n u P ~ s . E;r:fasar en
recipientes estriles.
El pH final del medio debe ser 7 . 4 t- 0.1.
Triptosa
Lactosa
K.HPOa 2.5 g
KH'POI 2.75 y
NaCl 5 9
Laurii sulfato de sodio 0.1 g
Agua destilada 1000 ml
Disolver los componentes antes mencionadas en un litro de agua aestiladn.
Hervir y distribuirlo en t.ubos de 16 X 150 con campana de fermentacin en
volmenes de 10 ml. Esterilizar a 121'C durante 15 minutos. Cl pH final d e l
medio debe ser 6.8+/- 0.1.
b) Caldo Lactosa Bilis Verue Brillante lLBVB1
Peptona 10 q
Lactosa 10 g
Ox-gall :o g
Verde brillante 0.0133 g
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7 PRCEiUiENTO
7.1 Para el recuento de colonias en medic s5lld
7 . 1 . 1 Consultar las indicaciones sealadas en 1s Norma < ) i i c i a l Mexisana NCM-C-
253 (vease 3)
7.1.2 Preparar la nuestra y sus diluciones de oc'lerc:, 3 la Norma Oficia?
Mexicana NON-F-286 (vase 3)
7.1.3 Transferir 1 ml o un volumen decima.1 de la muestra 5 de s i i i diluii-nes a
cajas de Petri
7.1.4 Agregar de 12 a 15 ml del medi.3 A g a r RO: -.rio;era F>i:i- fundirlo y
mantenida de 4 4 ' a 46'C.
7 . 1 . 5 Si fuera necesario inocular las cajas cr,n un vol>men mayor de ;.O m?
(pueden usarse hasta 3.3 mi de muestra ?ara 15-20 m l de medio) o
alternativamente, incluir ms de una caja inocuiada cada una con 1 ml, u fin
de poner en evidencia colonias de coliformes cuando su nnero fuera muy
reducido en la muestra: 3 placas conteniendo cada una 3 . 3 ml de l a dilucin
1:lO permitirn examinar 1 g 6 1 mi da l a muestra.
7.1.6 Mezclar correctamente el medio cor l a muestra. ue;ar oo1ia;ficaz Scbre
una superficie plana y horizontal y agregar 4 m i de? mismo medio de ci.iltiv3
extendindolo para cubrir completamente 1,s superficie.
7.1.7 Dejar solidificar e incubar las cajas en posicin invertida durante 2 4
+ / - 2 horas, de 32OC a 3 5 T .
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31.3.1 T Z 8 t 8 U d a t O dr 18 IWS-8
Las muestras de la solucin de enjuague deberan sembrarse lo ms pronto
posible no excedindose en ningn caso ms de 6 hcras a partir de la recogida
de la muestra.
3 1 . 3 . 2 Tr8triniento da 18 muestra p8r8 e l recuento de bacteri8a termodricaa
a) Tomar 5 al de la solucin de enjuaque p;'~ medio de una pipeta, cuidando ae
hacerlo en forma asptica y traspasarlos a ;in tEbo con 5 m i de leche
descremada estril.
b) Tapar el tubo e invertirlo tres veces en forma lenta.
c) Pasteurizar la muestra a 63OC + / - 0.5 por 35 minutos.
d) Luego de pasteurizar enfriar a 10'C.
e) Tnvertir el tubo tres veces y sembrar 10.' y 10.' en Agar leche yeastrel.
f) incubar a 30C + / - l0C por un tiempo aprximado de 7 ? + i - 2 hora-.
3 1 . P Inform8
El recuento se registrar como colonias por ml de soiucitn de enjuague X 5 0 0
ml .
31.5 P r o p u a c i n de l a muestra
cloruro sdico 9.0 g
Cloruro potsico 0.48 g
Cloruro cicico anhidro 0.24
Bicarbonato sdico 0.20 y
Agua destilada 1000 ml
Se atade una parte de esta so1,~cina ires gartes dc agua destilad?, !:e
distribuye en matraces de 5 U O ml y se esteriliza en autxlave a i21'C par '15
minutos.
31.6 W i o da cultivo
31.6.1 Agar leche yeastrel
Yeastrel (Extracto de levadura) 3 -
Peotona 5 4
Agar
Leche completa fresca
Agua destilada
Se disuelve la peptona y el yeastre: nl' una slla i pres;an con agua d?st;La'ia
y la reaccin se ajusta a trmperdtura ambiente a p H con r o j a feno; ci:no
indicador o con el potencibmetro. Se a.5ade e; agar y la ;eche al caldo y se
esteriliza en autoclave durante 25 mincLos. Para asegurar la mezcla total y
que el tratamiento trmico de este volumer. sea equivalente a la esterilizaci3n
final del medio repartido en tubos, se recomienda esterilizar en el autodave
cantidades no superiores a 1.5 o 2 litros, en Erlenmeyer de 3 litros de
capacidad. El medio caliente se filtra entcnces a travs de pulpa de papel en
un embudo de Buchner.
El irasco y el embudo se calentardn cuidarlosaraente antes de comenzar La
filtracin y tanto el embudo como el egar se. conser.Jarn calientes durante ?a
filtracin.
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O INTRODDCCION
El abastecimiento de agua para uso y consumo humano cn calidad adecuada es
fundamental para prevenir y evitar ia transmlzion de enfermedades
qastrincestinales y otras, para lo cual se requiere establecer limit-es
permisibles en cuanto a sus caracter:st.icas bioigicas, fsicas,
organolpticas, qumicas y elementos radiact-ivos.
Con el fin de asegurar y preservar la calidad del aqua ?n ins sistemas, hasta
:a entrega al consumidor se debe someter a t.ratamiento.5 de potabilizacin.
2 REFERENCIAS
NOM-008-SCF1-1993 'Sistema General de Unidades de Medida"
3 DEPINICIQIES
3.1 Ablandamia t o . -Proceso de remocin de ics innes calcio y maqnesio,
principales causar.tes de la dureza del aqca.
Tabla 1
CARACTERISTICA I LIMITE PERMISIBLE
Orqanismos coliformes totales 2 "?/io3 ml
Organismos coliformes fecales NO detectable NMP/lOO ml
Cero iJFC/lOO ml
Turbiedad
I biolgico y q;mico)
1 5 unidades de turbiedad nefelomtricas
TJ 3 -
CARACTERISTICA LIMITE PERMISIBLE -
Aluminio 0.20
Arsnico 0.05
Bario 0.70
Cadmio O . 005
Cianuros (como CN-) 0.07
Cloro residual libre 11.5-1.00 (despus de un tiempo de
contacto innirno de 30 min)
Cloruros (C1-1 250.0
Cobre 2.0
Cromo total 0.35
Dureza total (como Caco31 500.0
Feno1.e~o compuestos fen5iicos 0 . 031
Fierro C.30
Fluoruros (como F-) 2.50
Fosfatos (coma PO4=) 0.10
Manganeso c.:0
Mercurio 0.001
Nitrator (como SI 12.0
Nitritos (como N ) 0.05
Nitrgeno anoniacal (como N) c.50
Oxgeno consumido en medio Scido 3.0
pH (potencial de hidrgeno1 er
unidades de pH 6.5-8.5
Plaguicidas en microgramos/l Aldrin 1
dieldrin (separados o combinados1 0.03
Clordano (total de ismeros) C.30
DDT (total de ismeros) 1.0
Lindano ?.O
Clorobenceno 0.;11
Epdxido de heptacloro
Tabla 4
adiactividad alfa global I 0.1
Radiactividad bata global 1.0
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6 BIBLIOGRAFU
6.1 NDU-2-1: *Gua para la Redacci6n. Estrxturarin y Presentacibc de l a s
Normas 3ficiales Mexicanas".
6.2 Reglanento de la Ley General de Salud en Maicria de Control Sanitario de
Actividades y Establecimientos, Productos y servicios. 3iario Oficial $e la
federacin. Enero de 1 9 R 8 .
6.3 Desinfeccin del agua. !Oscar Cdceres i.,c.p?~. Lima Per. Ministerio de
Salud. 3rqaniiaci6n Panamericana de la Salud. Organizacibn Mundial de la
Salud. 1993.
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Universidad Autnoma Chapingo