XVIII.

Metabolismo de nucletidos
Introduccin. Dentro de las clulas, las bases, purinas y pirimidinas, se
encuentran casi siempre como constituyentes de nucletidos y de sus derivados (una gran
variedad de vitaminas o polinucletidos). En varias reacciones enzimticas estos
compuestos actan como coenzimas, ya sea cmo cosubstratos o cmo grupos prostticos
firmemente unidos a la enzima.
Adems, los nucletidos participan en la clula de todas las rutas centrales de
biosntesis de polmeros. Su funcin es el de transportar los monmeros de cada uno de los
polmeros. Por ejemplo los oligosacridos y los polisacridos (como el glucgeno o el
almidn), son sintetizados a partir de derivados de nucletidos de azcar (UDP-Glucosa,
ADP-Glucosa u otros). Adems en la sntesis de lpidos intervienen derivados del CDP; en
la sntesis de polinucletidos, obviamente intervienen todos los NTPs o los dNTPs; y en la
sntesis de protenas es el tRNA (un oligonucletido) el que transporta el aminocido que
ser incorporado en la protena naciente. Adems, los nucletidos son los transportadores
ms importantes de energa qumica entre rutas anablicas y catablicas, y los derivados
de nucletidos son transportadores de poder reductor (NAD + o FAD) o de grupos acilo
(Coenzima A). Por ltimo algunos nucletidos poseen funciones diferentes dentro de
determinados tipos de clula, por ejemplo derivados del AMP funcionan en la ruta de
fijacin del azufre inorgnico (APS o PAPS), como compuestos de regulacin (AMP cclico)
o en la conversin de algunas vitaminas B a sus formas de coenzima. De hecho, la mayor
parte de los organismos posee la capacidad para sintetizar nucletidos de purina y de
pirimidina, lo que refleja la importancia central de estas molculas para todas las clulas.
Un aspecto metablico que refleja la importancia de estos compuestos dentro de la
clula es el hecho de que es posible observar al menos dos mecanismos diferentes para su
sntesis. Uno de estos mecanismos corresponde a lo que tradicionalmente consideramos
biosntesis. As, tal cual lo vimos en otras rutas metablicas, es posible obtener estructuras
complejas (en este caso nucletidos) a partir de compuestos sencillos. De hecho, utilizando
las reacciones que ya hemos analizado, como por ejemplo en el metabolismo de hidratos
de carbono (fotosntesis incluida) podemos realizar estas sntesis partiendo nicamente de
compuestos inorgnicos.
Por otro lado, para la sntesis de estos compuestos existe una ruta cuya estrategia
es totalmente diferente a las otras rutas biosintticas conocidas. Estas son rutas sencillas
por las cuales las purinas o pirimidinas preformadas, obtenidas de la degradacin de los
cidos nucleicos dentro de las clulas o del ambiente externo (por ejemplo del producto
intestinal durante la digestin de los alimentos), pueden ser incorporadas directamente en
los nucletidos. Estas reacciones son denominadas rutas de recuperacin. Como veremos
ms adelante, el proceso de recuperacin se aplica a las bases incluso hasta en la etapa
previa a la de su degradacin total.
En los organismos pluricelulares, la capacidad para catalizar la formacin de los
nucletidos, mediante las vas de novo garantiza, en cierta medida, la independencia de la
dieta, y la va de recuperacin significa una economa al reciclar los productos de la
degradacin de los cidos nucleicos.
Ms adelante veremos que la ruta metablica para la biosntesis de novo de los
nucletidos de pirimidina, posee una secuencia de reacciones muy sencilla y fcil de
deducir a diferencia de la ruta de biosntesis de las purinas. Adems, las rutas de sntesis
de los dos tipos de bases difiere en sus estrategias qumicas ya que los nucletidos de
pirimidina son sintetizados primero como bases y luego son incorporados a un nucletido
(utilizando una reaccin anloga a una ruta de recuperacin) mientras que los nucletidos
de purina se sintetizan paso a paso modificando en primer lugar a la ribosa, de manera que
se sintetizan directamente como nucletidos. Adems, las estrategias qumicas para la
degradacin de los compuestos de purina y de pirimidina tambin difieren. La degradacin
 de las purinas lleva a la formacin de compuestos potencialmente txicos, mientras que la
degradacin de las pirimidinas forma productos fcilmente metabolizables.

Reacciones de recuperacin de nucletidos. Durante el

metabolismo celular y durante el proceso digestivo de los animales, los cidos nucleicos
son degradados a mononucletidos, nuclesidos, y eventualmente a bases heterocclicas.
Estas reacciones catablicas son catalizadas por enzimas de la familia de las hidrolasas,
que incluyen ribonucleasas, desoxirribonucleasas, y una diversidad de nucletidasas y
nuclesidasas. Algunas de las purinas que se forman en esta forma son degradadas
posteriormente a cido rico, pero una fraccin considerable normalmente es economizada
por conversin directa a ribonucletidos de purina. A esto es lo que denominamos
recuperacin. Las purinas formadas por reacciones de degradacin intracelulares son
economizadas en un grado mayor que las que se forman durante la digestin debido a que
estas ltimas se pierden en parte en las excreciones sin absorverse.

NH2 NH2 O O O O

N N N N N HN N
N N HN HN HN

N N N N N O N N H2 N N N H2 N N N
N
CH2 OH O CH2OH O CH2 OH O CH2 OH H O CH2 OH O CH2 OH O

reduccin Transaminacin oxidacin Transaminacin reduccin

HO H HO OH HO OH HO OH HO OH HO H

Nucletidos ATP GTP

trifosfato dATP dGTP
Sntesis de novo
Nucletidos ADP GDP
difosfato dADP dGDP
Adenilo-
Nucletidos AMP Succinato IMP XMP GMP
monofosfato dAMP dGMP

Adenosina Inosina Xantosina Guanosina

Nuclesidos dAdenosina d Inosina dGuanosina

Bases Adenina Hipoxantina Xantina Guanina

Productos de
degradacin Urea Acido alantoico Alantona cido rico

En el esquema de arriba se muestra un resumen de las reacciones de

interconversin entre los nucletidos de purinas. Las reacciones involucradas en la sntesis
de novo estn marcadas con flechas azules, las que involucran (sntesis o degradacin) a
los deoxinucletidos, con flechas en naranja y las de las rutas degradativas finales, en rojo.
Las reacciones de recuperacin estn marcadas en violeta. Las principales rutas de
este tipo en la mayora de las clulas son las que convierten las bases libres directamente
en nucletidos monofosfato. Estas reacciones estn marcadas con una flecha violeta ms
gruesa. El sustrato que reacciona con las bases libres para su recuperacin es el 5'-fosfo-
ribosil-1'-pirofosfato (PRPP), que funciona como donador de la unidad de fosforibosa
(ribosa-5-fosfato) para la sntesis de los nucletidos. Adems de su participacin en las
 rutas de recuperacin de bases purnicas o pirimidnicas el PRPP tambin funciona como
donador de ribosa 5-fosfato en una serie de reacciones como en la formacin del primer
nucletido (orotidin-monofosfato u OMP) en la va de sntesis de novo de los nucletidos de
pirimidinas, en la primer reaccin de la sntesis de novo de los nucletidos de purinas y en
las biosntesis de histidina y de triptofano.
El PRPP en s, se sintetiza a partir de la ribosa 5-fosfato y ATP en una reaccin
catalizada por la enzima PRPP sintetasa. Esta enzima es una kinasa atpica en el
metabolismo ya que en lugar de catalizar la transferencia de grupos fosfato, interviene en la
transferencia de un grupo pirofosfato entre el ATP y la ribosa.
NH2 NH2
O O OH OH
N N N
HO P O P O P O HO P O N
OH OH O CH2 O N O CH2 O N
N N

OH OH
HO OH HO OH
HO P O HO P O
ATP AMP O O
O CH2 O OH O CH2 O O P O P OH
PRPP sintetasa OH OH

HO OH HO OH
Ribosa-5-fosfato PRPP

En la ruta de recuperacin de la base adenina, la adenina fosforribosiltransferasa

cataliza la reaccin de adenina con PRPP para formar AMP y PPi. La hidrlisis de PPi,
catalizada por pirofosfatasa inorgnica hace que la reaccin se convierta en
metablicamente irreversible. La hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa cataliza
reacciones similares (la conversin de hipoxantina a IMP y de guanina a GMP, con la
formacin simultnea de PPi; ya veremos ms adelante la estructura de estas bases).
NH2
OH OH
NH2 N
HO P O O O Adenina fosforibosil HO P O N
O CH2 O N N transferasa O CH2 O O O
O P O P OH N N
OH OH + N + HO P O P OH
N
H OH OH
HO OH HO OH

PRPP Adenina AMP Pirofosfato

OH OH
HO P O O O HO P O
O CH2 O BASE fosforibosil transferasa O O
O P O P OH O CH2 O BASE
OH OH + H + HO P O P OH
OH OH
HO OH HO OH

PRPP NMP Pirofosfato

Las pirimidinas tambin son recuperadas. Sin embargo, este tipo de reacciones no
son tan importantes para la mayora de las clulas como en el caso de las reacciones de
recuperacin de purinas. Esto se debe fundamentalmente a la baja toxicidad de los
productos intermedios en la degradacin de las pirimidinas. Como anteriormente, el
reciclado de estas bases ahorra energa celular.
En el esquema de abajo se muestra un resumen de las reacciones de
interconversin entre los nucletidos de pirimidinas. De forma similar que en el esquema de
las purinas, las reacciones involucradas en la sntesis de novo de estos nucletidos estn
marcadas en azul, las que involucran (sntesis o degradacin) a los deoxinucletidos, en
naranja, las de las rutas degradativas finales, en rojo y las reacciones de recuperacin en
violeta.
O
O O O NH2 NH2
HN
CH3
HN HN HN N N
O N COOH
O N O N O N CH2 OH O O N O N
CH2 OH O CH2OH O CH2 OH O CH2OH O CH2 OH O
Descarboxilacin
Metilacin reduccin HO OH reduccin
HO H HO H HO OH Transaminacin HO OH HO H

Nucletidos UTP CTP

trifosfato dTTP dUTP dCTP

Nucletidos UDP CDP

difosfato dTDP dUDP dCDP

Nucletidos
UMP OMP CMP
monofosfato dTMP dUMP dCMP

Nuclesidos dTimidina Uridina Citidina

dUridina dCitidina

Bases Timina Uracilo Orotato Citosina

Sntesis de novo

Productos de
degradacin -amino-isobutirato -alanina

Como puede verse en ambos esquemas, la biosntesis de deoxinucletidos

comienza en el precursor difosforilado (NDP). Un detalle interesante que diferencia las rutas
de sntesis de purinas y pirimidinas, es que en las primeras la sntesis de novo llega a un
nucletido (IMP) y despus se divide en dos ramas una para sintetizar ATP y otra para el
GTP. Por el contrario en las pirimidinas, despus de llegar al primer nucletido de esta va
(OMP), se obtiene el UTP y a partir de este se sintetiza el CTP. Esta va por lo mismo,
puede verse como una ruta lineal que termina en CTP. Como veremos ms adelante en
este terico esta organizacin de ambas rutas tiene implicancia en el modo de regulacin
de las mismas.
Un detalle a resaltar en el caso de las pirimidinas, tiene que ver con la sntesis del
dTTP. Los derivados de la timina se obtienen por metilacin de uno de los derivados del
uracilo. Este derivado es el dUMP. Aparentemente, la metilacin se realiza sobre el
derivado monofosforilado como consecuencia de que la clula evita el aumento de
concentracin del derivado trifosforilado correspondiente (dUTP). Muchas enzimas que
actuan sobre una gran variedad de nucletidos pueden convertir los derivados
monofosforilados en difosforilados y a estos en los trifosforilados. De esta manera el dUMP
y el dUDP pueden convertirse en dUTP. La presencia de este ltimo en altas
concentraciones podra impulsar su incorporacin errnea en el DNA (en lugar del dTTP).
Para evitar esta acumulacin, casi todas las clulas poseen una pirofosforilasa especfica
de dUTP que lo convierte rpidamente en dUMP evitando su acumulacin. Como puede
verse en el esquema, esta tipo de pirofosforilasa no existe para los otros nucletidos.
Gracias a la accin de esta enzima, el dUMP es el derivado reducido del UNP de mayor
concentracin y por lo mismo es el ms adecuado para funcionar como sustrato en la
metilacin.
 Biosntesis de pirimidina s. La va de novo para la sntesis de pirimidina es
una reaccin lineal cuyo producto final es el CTP. Sin embargo otros nucletidos son
sintetizados en esta va antes que el CTP, entre ellos el UMP. Esta va es ms sencilla que
la va para las purinas y requiere de un consumo menor de ATP. Existen slo dos
precursores metablicos del anillo de la pirimidina, el carbamoil-fosfato y el aspartato. El
primero es sintetizado a partir del bicarbonato y del grupo amida de la glutamina, mientras
que el segundo se produce a partir del oxalacetato como vimos anteriormente.
Para la biosntesis de los nucletidos de pirimidina se requiere PRPP, pero el azcar
fosfato slo es donado despus de que el anillo completo de la base ha sido sintetizado. Un
compuesto con un anillo de pirimidina completo (orotato o 6-carboxiuracilo), reacciona con
PRPP para formar un ribonucletido (OMP) en la cuarta etapa de una va de cinco etapas.
Las cinco reacciones de la va para la sntesis de novo de la pirimidina se ilustran en
la figura.
El aspartato y el carbamoil-fosfato son sintetizados por rutas ya conocidas que vimos
en las etapas de biosntesis de aminocidos (familias del aspartato y glutamato,
respectivamente). As, como vimos en la biosntesis de arginina, la formacin de carbamoil
fosfato se realiza a partir de CO2, del nitrgeno amdico de la glutamina y ATP. Esta
reaccin, catalizada por la carbamoil fosfato sintetasa, requiere de dos molculas de ATP,
una para dirigir la formacin del enlace C-N y la otra para donar el grupo fosforilo al
producto.

HO O Aspartato-transcarbamilasa HO O Dihidroorotasa O
HO
C O C H
NH2 O C O C
C N C H N H2C NH
H2 N C H OH C C
CH2
+ C H2 N
H
CH2
H H C C
O O P OH HN CH2 O C N O
C OH C H2O C H
O
O OH
O P OH
HO O
O
Dihidro Orotato OH
Aspartato Carbamil-fosfato OH Carbamil-aspartato

Dihidroorotato
Q
Deshidrogenasa
QH2

O O
C C O
HC NH HC NH C
OMP descarboxilasa HO Orotato-fosforibosil transferasa
HC C C C HC NH
OH OH C
N O O N O
C C
HO P O CH2 O HO P O CH2 O O C N O
H
O O OH
CO2 Orotato
OH
O O
HO OH HO OH
HO P O O O
HO P O P OH
UMP OMP O CH2 O
OH OH O P O P OH
OH OH

HO OH

PRPP

En los procariotes, la misma carbamoil-fosfato sintetasa es utilizada en ambas vas

biosintticas, de la pirimidina y de la arginina. Esta enzima es inhibida alostricamente por
los ribonucletidos de pirimidina, por ejemplo el UMP, el producto de esta ruta biosinttica.
Adems, es activada por la L-ornitina, un precursor de la citrulina.
 En cambio, en las clulas eucariticas, hay dos carbamoil fosfato sintetasas. Una
sintetasa en las mitocondrias recibe el nombre de carbamoil fosfato sintetasa 1, ya que fue
la que se descubri primero, y la cual cataliza una reaccin en la que se emplea amoniaco
con origen de la amida del carbamoil fosfato. En el hgado de mamferos, el carbamoil
fosfato generado en las mitocondrias es utilizado para la sntesis de la urea. La sintetasa
citoslica, la carbamoil fosfato sintetasa 2, es la que cataliza la sntesis del precursor de las
pirimidinas. Como antes se hizo notar, en esta reaccin, la amida del carbamoil fosfato
proviene de la glutamina. La carbamoil fosfato sintetasa 2 es regulada alostricamente. Es
activada por PRPP e IMP e inhibida por varios nucletidos de pirimidina. La divisin de las
reacciones en compartimientos, entre las mitocondrias y el citosol permiten un control por
separado de cada enzima y de la va en la que actan.
En la primer etapa de la biosntesis de UMP, el grupo carbamoil activado del
carbamoil fosfato es transferido a aspartato para formar carbamoil aspartato. Es lgico
suponer que el grupo fosfato del carbamil-fosfato es un buen grupo saliente para que la
reaccin se realice, por lo que el carbono con el que est unido debera ser el tomo
atacado por un nuclefilo. De los tomos del aspartato, el mejor dador (o atacante)
nucleoflico es el tomo de nitrgeno del aminocido. Por ello, en esta reaccin,
catalizada por aspartato transcarbomilasa (ATCasa), el nitrgeno nucleoflico ataca al grupo
carbonilo del carbamoil fosfato desplazando un fosfato inorgnico.
La ATCasa procaritica (especficamente la ATCasa de E. coli) fue la primera
enzima alostrica en ser por caracterizada completamente. En E. coli, en donde la
carbamoil fosfato sintetasa genera un intercambio que entra en las vas que conducen a las
pirimidinas o a la arginina, es esta ATCasa la que cataliza la primera etapa comprometida
de la biosntesis de la pirimidina. Esta enzima es inhibida por los nucletidos de pirimidina y
es activada, in vitro, por el ATP. Aunque la ATCasa en E. coli es inhibida slo parcialmente
por CTP (50% a 70%), la inhibicin puede ser casi total cuando ambos estn presentes,
CTP y UTP. El UTP slo no inhibe la enzima. Los controles alostricos, la inhibicin por los
nucletidos de pirimidina y activacin por el nucletido de purina ATP, proporcionan un
medio para que se equilibren las proporciones de nucletidos de pirimidina y purina en E.
coli, mediante la carbamoil fosfato sintetasa y la ATCasa. La proporcin de la concentracin
de cada uno de los efectores alostricos determina el nivel de actividad de la ATCasa.
La ATCasa eucaritica no es inhibida por retroalimentacin. Esta regulacin
mediante inhibicin por retroalimentacin no es necesaria debido a que el sustrato de
ATCasa en los eucariotes no es un metabolito en una ramificacin la va que conduce a la
arginina y la urea en la mitocondria est separada de la va biosinttica de pirimidina, en la
cual, en este caso son seis las etapas que tienen lugar en el citosol comenzando por la
sntesis del carbamoil-fosfato. En consecuencia, la va de las pirimidinas en eucariotes se
puede controlar por regulacin de la enzima ATCasa precedente, la carbamoil fosfato
sintetasa 2.
La dihidroorotasa cataliza la segunda etapa de la biosntesis de UMP, el cerrado
reversible del anillo de la pirimidina. El producto dihidroorotato, ya contiene todos los
tomos que van a formar parte finalmente del UMP. En la figura se muestran dos molculas
de dihidroorotato rotadas alrededor de un punto central para resaltar la posicin que ocupan
cada uno de los tomos de la molcula obtenida por condensacin, en el producto final de
la ruta (la flecha roja indica la rotacin). Este compuesto necesita ser deshidrogenado,
descarboxilado y transferido a un azcar fosfato para convertirse en UMP. En la siguiente
etapa el dihidroorotato es oxidado despus mediante la accin de dihidroorotato
deshidrogenasa para formar orotato. En los eucariotes, la dihidroorotato deshidrogenasa
est asociada con la membrana interior de la mitoncondria. Es una flavoprotena que
contiene hierro, la cual cataliza la transferencia de electrones a la ubiquinona y despus al
O2 por la cadena de transporte de electrones.
 Una vez formado, el orotato desplaza el grupo pirofosfato de PRPP, produciendo
orotidina 5-monofosfato (OMP, u orotidilato), en una reaccin que es catalizada por orotato
fosforribosiltransferasa. Esta reaccin es del mismo tipo que las reacciones de recuperacin
de nucletidos que analizamos antes, en las que el pirofosfato producido es hidrolizado,
haciendo irreversible la etapa. El OMP es as el primer nucletido sintetizado por la va de
las pirimidinas. Finalmente, el OMP es descarboxilado para formar UMP.
Aunque las cinco etapas enzimticas que conducen a UMP son las mismas en los
procariotes y los eucariotes, la organizacin estructural de las enzimas (libres versus
asociadas) vara entre los organismos. Por ejemplo, en E. coli, cada una de las reacciones
es catalizada por una enzima separada. En los mamferos, una protena multifuncional del
citosol, conocida como dihidroorotato sintasa, contiene sitios catalticos separados
(carbamoilfosfato sintetasa 2, ATCasa, y dihidroorotasa) para las tres primeras etapas de la
va. El dihidroorotato producido en el citosol pasa a travs de la membrana externa de la
mitocondria antes de ser oxidado a orotato por la dihidroorotato deshidrogenasa. El sitio de
fijacin al sustrato de esta enzima est localizado en la superficie externa de la membrana
interna de la mitocondria. Entonces el orotato se mueve al citosol, en donde se efecta su
conversin a UMP. Una enzima bifuncional, conocida como UMP sintasa, cataliza ambas
reacciones, como PRPP para formar OMP y la descarboxilacin rpida de OMP a UMP.
Los intermediarios formados en las sub-etapas (carbamoil fosfato, carbamoil
aspartato y OMP) normalmente no son liberados a la solucin, sino que permanecen fijos a
la enzima y son canalizados de un centro cataltico al siguiente. En algunos organismos
tambin se encuentran en la va de la biosntesis de los nucletidos de purina diversas
protenas multifuncionales que catalizan varias etapas cada una. Este secuestro de los
intermediarios lbiles dentro de enzimas con multifuncionales evita la degradacin
improductiva de los intermediarios, conservando en consecuencia la energa.
El CTP se sintetiza en tres etapas a partir del UMP. Primero, la uridilato kinasa (UMP
kinasa) cataliza la transferencia del grupo -fosforilo de ATP a UMP para generar UDP, y
entonces, la nuclesido difosfato kinasa cataliza la transferencia del grupo -fosforilo de una
segunda molcula de ATP a UDP para formar UTP. En estas dos reacciones, dos
molculas de ATP son convertidas a dos molculas de ADP. Entonces la CTP sintetasa
cataliza la transferencia dependiente de ATP del nitrgeno amdico de la glutamina al C-4
de UTP, formando CTP.
Kinasas CTP sintasa
O O NH2
C C C
HC NH HC NH HC N
OH OH OH OH OH OH
HC C HC C HC C
OH N O HO P O P O P O N O HO P O P O P O N O
HO P O CH2 O O O O CH2 O O O O CH2 O
O

HO OH 2 ADP HO OH Glutamina HO OH
2 ATP + ATP Glutamato
UMP UTP + ADP + Pi CTP

La CTP sintetasa es inhibida alostnicamente por su producto, CTP, y en E. coli, es

activada alostricamente por GTP. La activacin comprende tanto un incremento en la
Vmx y como una disminucin en el Km de la enzima para la glutamina.
El timidilato (dTMP) tambin es un derivado de UMP, pero antes de que se pueda
formar el timidilato, el UMP debe experimentar una reduccin para formar dUMP. En
seguida examinaremos la formacin de los desoxirribonucletidos y despus la formacin
de dTMP a partir de dUMP.
 Sntesis de deo xi ribonucletidos. Los 2-desoxirribonucletidos, cuya
principal (y probablemente nica) funcin es servir, en la forma de trifosfatos, como
sustratos para la DNA polimerasa, se sintetizan por medio de una reduccin enzimtica de
los ribonucletidos correspondientes. En la mayor parte de los organismos esta reduccin
se efecta a nivel de los nuclesido difosfatos (NDPs). Los cuatro ribonuclesidos difosfatos
(ADP, GDP, CDP, y UDP) son sustratos de una sola ribonuclesido difosfato reductasa, la
que se encuantra regulada estrictamente. No obstante, en algunos microorganismos,
incluyendo especies de Lactobacillus, Clostridium, y Rhizobium, la reduccin enzimtica,
realizada por una reductasa que depende de una cobalamina, utiliza a los ribonucletidos
trifosfatos como sustratos. Ambos tipos de enzimas se conocen como ribonucletido
reductasa, aunque los nombres ms precisos son ribonucletido difosfato reductasa y
ribonucletido trifosfato reductasa, respectivamente.
El NADPH proporciona la energa de reduccin para la sntesis de los
desoxirribonuclesido difosfatos. Un enlace disulfuro en el sitio activo de la ribonucletido
reductasa es reducido a dos grupos tiol, los cuales a su vez, reducen el C-2 de la ribosa del
nucletido, mediante un mecanismo complejo que incluye la frormacin de radicales libres.
Los electrones son transferidos del NADPH a la ribonucletido reductasa, a travs de la
flavoprotena-tiorredoxina-reductasa y por la coenzima tiorredoxina. En ausencia de
tiorredoxina (por ejemplo en mutantes de E. Coli que carecen de tiorredoxina), otra protena
pequea que contiene grupos SH libres, denominada glutarredoxina, puede sustituir a la
tiorredoxina en la formacin del desoxirribonucletido. La glutarredoxina transfiere
electrones desde el sustrato glutatin reducido hacia la ribonucletido reductasa. Una vez
formados, los desoxirribonucletidos dADP, dGDP y dCDP son fosforilados al nivel de
trifosfato por la accin de nuclesido difosfato kinasa. En cambio el dUDP, es
desfosforilado, como vamos a ver en la seccin siguiente, antes de convertirse en dTMP.
Bajo ciertas circunstancias, la reduccin de los ribonucletidos puede ser la etapa
limitante de la velocidad en la sntesis de DNA. Las ribonucletido reductasas son reguladas
estrictamente por interacciones alostricas. Hay dos sitios alostricos diferentes por medio
de los cuales se regulan tanto la especificidad de la unin al sustrato (KM), como la
velocidad cataltica de la enzima (VMAX). Los moduladores alostricos son ATP, dATP,
dTTP, y dGTP y ejercen sus efectos fijndose a las ribonucletido reductasa en cualquiera
de los dos sitios reguladores. Un sitio alostrico, que se denomina sitio de actividad,
controla la actividad de la enzima. Un segundo sitio alostrico, llamado el sitio de
especificidad, determina la especificidad del sustrato del sitio cataltico. La fijacin del ATP,
al sitio de actividad, activa la reductasa; la unin de dATP inhibe toda la actividad
enzimtica. Cuando ATP esta fijo en el sitio de actividad y ATP o dATP se han fijado en el
sitio de especificidad, la reductasa se convierte en pirimidina especfica, catalizando la
reduccin de CDP y UDP; la fijacin de dTTP al sitio de especificidad activa la reduccin de
GDP, y la fijacin de dGTP activa la reduccin de ADP. Este sistema de regulaciones
cruzadas asegura una concentracin equilibrada de todos los desoxirribonucletidos para la
sntesis del DNA.

Sntesis de timidilato. Una reaccin nica de metilacin produce dTMP a

partir de dUMP. El timidilato (dTMP) que se requiere para la sntesis del DNA se forma a
partir de UMP en cuatro etapas. UMP se fosfonila a UDP, el cual se reduce a dUDP, y el
dUDP es desfosfonilado a dUMP, el cual entonces puede sen metilado:
La conversin de dUDP a dUMP se puede efectuar por dos rutas. El dUDP puede
reaccionar con ADP en presencia de una nuclesido monofosfato kinasa para formar dUMP
y ATP. Alternativamente, el dUDP tambin se puede fosforilar a dUTP a expensas de ATP
pon medio de la accin de nuclesido difosfato kinasas, ms bien no especficas. Entonces
dUTP es rpidamente hidrolizado a dUMP + PPi, por la accin de desoxiuridina trifosfato
difosfohidrolasa (dUTPasa). Esta hidrlisis rpida de dUTP evita que accidentalmente sea
incorporado en el DNA en lugar de dTTP. El dCMP tambin puede servir como una fuente
de dUMP va hidrlisis de su grupo amino, catalizada por la dCMP desaminasa.
La conversin de dUMP es catalizada por la timidalato sintasa. En esta reaccin el
donador del grupo de un carbono es el 5,10-metilentetrahidrofolato. En este caso, el grupo
metilo (CH3) en el producto, dTMP, est ms reducido que el grupo metileno (CH2) en
el 5,10-metilenotetrahidrofolato, cuyo estado de oxidacin es equivalente al del grupo
formilo del formaldehido. De esta forma, el metilentetrahidrofolato no solamente dona una
unidad de un carbono, sino que tambin sirve como el agente reductor para la reaccin,
proporcionando un ion hidruro y siendo oxidado a 7,8-dihidrofolato en el proceso.
Solamente el tetrahidrofolato puede aceptar otra unidad de un carbono para reacciones
posteriores en el metabolismo de un carbono. Por consiguiente, el doble enlace 5,6 del
dihidrofolato debe ser reducido por NADPH en la reaccin catalizada por dihidrofolato
reductasa para completar el proceso. Finalmente, como ya vimos, la unidad de un carbono
es incorporada en el tetrahidrofolato mediante la reaccin catalizada por la serina
hidroximetiltransferasa que cataliza la transferencia de un grupo hidroximetilo (-CH2OH) de
la serina para regenerar el 5,10-metilentetrahidrofolato.
O O
C F C
P O HC NH P O C NH
CH2 HC C CH2 HC C
O N O N O
O
O
H3 C C
HO H HO H P O C NH

dUMP 5-fluoro-dUMP CH2 HC C

O N O

H
H 2N N N
CH2
HO H
HN C H
5
N CH2 X dTMP
10
O C N R
H Timidilato
H Sintetasa
N5,N10-metilen-Tetrahidrofolato

Glicina
H
H 2N N N
CH2
6
Serina-hidroximetil HN 5 C
N CH2
Transferasa
10
O N R
H
7,8-dihidrofolato
Serina
H
H 2N N N
CH2
HN C H5
Dihidrofolato
N CH2
H 10 Reductasa
O N R NADPH + H +
H
Tetrahidrofolato
X

H
H 2N N N
O OH CH2
O C NADP+
O
N 5
R= C NH CH CH2 CH2 C N CH2
10
OH NH2 N R
H3C

Metotrexato
 La conversin de dUMP en dTMP es la nica reaccin conocida en la cual la
transferencia de una unidad de un carbono del tetrahidrofolato da como resultado la
oxidacin en N-5 y C-6 de la coenzima para producir dihidrofolato. Debido a que dTMP sirve
como un precursor indispensable del DNA, cualquier agente que haga disminuir los niveles
de dTMP afecta drsticamente la divisin celular. Debido a que las clulas en divisin
rpida son particularmente dependientes de las actividades de la timidalato sintasa y de la
dihidrofolato reductasa, estas enzimas han sido los marcadores principales para los
frmacos anticncer. La inhibicin de cualquiera de estas enzimas, o de ambas, bloquea la
sntesis de dTMP y por consiguiente la sntesis de DNA.
El 5-fluorouracilo y el metotrexato han probado ser efectivos para combatir algunos
tipos de cncer. Los dos actan en la ruta que se utiliza para sintetizar el dTMP. El 5-
fluorouracilo es convertido a su desoxirribonucletido, 5-fluorodesoxiuridilato, mediante una
va de recuperacin de nucletidos. El 5-fluorodesoxiuridilato se fija firmemente a la
timidalato sintasa, inhibiendo a la enzima. El metotrexato, el frmaco anticncer utilizado
ms comnmente, es un anlogo del folato con un grupo amino en lugar del tomo de
oxgeno en C-4 y un sustituyente metilo en N-10. El metotrexato es un inhibidor potente y
relativamente especfico de la hidrofolato reductasa. El anlogo del folato se fija a la
reductasa de modo extremadamente firme solamente por interacciones no covalentes. La
disminucin resultante en los niveles de tetrahidrofolato disminuye marcadamente la
formacin de dTMP, debido a que la sntesis de dTMP es dependiente de concentraciones
adecuadas de metilentetrahidrofolato. La mayor parte de las clulas normales experimentan
la divisin celular con mayor lentitud que las clulas cancerosas, y en consecuencia son
menos sensibles al metotrexato. No obstante, debido a que el metotrexato es txico para
todas las clulas, debe ser usado con precaucin. Con frecuencia, el 5-
formiltetrahidrofolato, el cual puede ser convertido en metilentetrahidrofolato, se da a los
pacientes durante un periodo breve despus de que se les ha administrado una dosis de
metotrexato que de otra forma podra ser letal. Este mtodo de rescate de dosis altas
refuerza el uso teraputico del frmaco.