BILIRUBIN T&D

Bilirrubina Total y Directa

DMSO. Colorimtrico

Determinacin cuantitativa de bilirrubina CLCULOS

IVD Con Calibrador:
( A ) Muestra ( A )Blanco Muestra x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina
Conservar a 2-8C ( A ) Calibrador ( A )Blanco Calibrador

PRINCIPIO DEL MTODO Con Factor:

La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el cido sulfanlico ((A) Muestra (A) Blanco Muestra) x Factor* = mg/dL bilirrubina en la muestra
diazotado midindose fotomtricamente. De las dos fracciones presentes en
suero, bilirrubin-glucurnido y bilirrubina libre ligada a la albmina, slo la
*Factor: Concentrac in del Calibrador
primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda
la solubilizacin con dimetilsulfxido (DMSO) para que reaccione (bilirrubina ( A ) Calibrador ( A ) Blanco Calibrador
indirecta). En la determinacin de la bilirrubina indirecta se determina tambin
la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del Factor terico: Bilirrubina (T) = 19,1 ; Bilirrubina (D) = 14
color formado es proporcional a la concentracin de bilirrubina presente en la
1,2
muestra ensayada . Factor de conversin: mg/dL x 17,1 = mol/L.

SIGNIFICADO CLNICO CONTROL DE CALIDAD

La bilirrubina se origina por la degradacin de la hemoglobina. Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
Es transportada del bazo al hgado y se excreta en la bilis. SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210).
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
plasma. Causas ms probables de la hiperbilirrubinemia: instrumento, los reactivos y el calibrador.
Bilirrubina Total (T): Aumento de la hemlisis, alteraciones genticas, anemia Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
neonatal, alteraciones eritropoyticas, presencia de drogas. correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
Bilirrubina Directa (D): Colestasis heptica, alteraciones genticas y
1,5,6 1
alteraciones hepticas . VALORES DE REFERENCIA
El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos Bilirrubina Total Hasta 1,10 mg/dL 18,81 mol/L
clnicos y de laboratorio. Bilirrubina Directa Hasta 0,25 mg/dL 4,27 mol/L
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
REACTIVOS propios valores de referencia.
cido sulfanlico 30 mmol/L
R 1 (D)
cido clorhdrico (HCl) 150 mmol/L CARACTERISTCAS DEL MTODO
cido sulfanlico 30 mmol/L Rango de medida: Desde el lmite de deteccin de (T) 0,099 mg/dL (D) 0.04 mg/dL
R 2 (T) cido clorhdrico (HCl) 50 mmol/L hasta el lmite de linealidad de 18 mg/dL.
Dimetilsulfxido (DMSO) 7 mol/L Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa
R3 Sodio nitrito 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
29 mmol/L Precisin:
Opcional Bilirrubina T Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
BILIRRUBIN CAL Ref: 1002250 Media (mg/dL) 1,12 5,36 1,01 5,28
SD 0,02 0,12 0,03 0,12
PRECAUCIONES CV (%) 2,33 2,27 2,70 2,32
R1/R2/RT: Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves.
S26: En caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente Bilirrubina D Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
con agua y acudir a un mdico. Media (mg/dL) 0,64 2,28 0,68 2,53
SD 0,01 0,02 0,02 0,05
PREPARACIN CV (%) 1,91 1,10 2,51 1,95
Todos los reactivos estn listos para su uso.
Sensibilidad analtica: 1 mg/dL = 0,015 A (T).
CONSERVACIN Y ESTABILIDAD 1 mg/dL = 0,073 A (D).
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad Exactitud: Los reactivos SPINREACT no muestran diferencias sistemticas significativas
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a cuando se comparan con otros reactivos comerciales.
2-8C, protegidos de la luz y se evita la contaminacin durante su uso. No usar Los resultados obtenidos con 50 muestras para Bilirrubina D fueron los siguientes:
reactivos fuera de la fecha indicada. Coeficiente de correlacin (r): 0.99
Indicadores de deterioro de los reactivos: Ecuacin de la recta de regresin: y=0.9933x + 0.0039
- Presencia de partculas y turbidez. Los resultados obtenidos con 50 muestras para Bilirrubina T fueron los siguientes:
- Desarrollo de color en el R 2. Coeficiente de correlacin (r): 0.996
Ecuacin de la recta de regresin: y=0.0884x + 0.0208
MATERIAL ADICIONAL Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado.
- Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 555 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. INTERFERENCIAS
1,2
- Equipamiento habitual de laboratorio. La presencia de hemlisis disminuye el valor de bilirrubina .
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren con la determinacin
MUESTRAS 3,4
de bilirrubina .
Suero o plasma libre de hemlisis (separado lo antes posible de los hemates).
Proteger de la luz. NOTAS
Estabilidad de la muestra separada ya de los hemates: 4 das a 2-8C o 2
1. Para la determinacin de bilirrubina en neonatos, pipetear 50 L de muestra.
meses a 20C.
Multiplicar el resultado obtenido por 2.
PROCEDIMIENTO 2. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este
1. Condiciones del ensayo: reactivo en distintos analizadores.
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 555 nm (530-580)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz BIBLIOGRAFA
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25C 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada. Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
3. Pipetear en una cubeta: 2. Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
Blanco B. Total Blanco B. Directa 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
R 1 (D) (mL) -- -- 1,5 1,5 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
R 2 (T) (mL) 1,5 1,5 -- --
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
R3 ( L) -- 50 -- 50
(Nota 1)
Muestra /Calibrador ( L) 100 100 100 100 PRESENTACIN
4. Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25C.
Ref: 1001044 R 1 (D): 1 x 150 mL
5. Leer la absorbancia (A). Cont. R 2 (T): 1 x 150 mL
R 3: 1 x 10 mL

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