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NACIONAL
ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA
Departamento de Formacin Bsica
Disciplinaria
Academia de Bioqumica Mdica I
MANUAL DE LABORATORIO
DE
BIOQUMICA MDICA I
SEMESTRE: AGOSTO-DICIEMBRE
C I U D A D D E M X I C O
J u l i o d e 2 0 1 7
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN
PROFESORES
LABORATORIO:
LABORATORIO:
LABORATORIO:
Vo. Bo.
No. PRCTICA FECHA
PROFESOR (A)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
PROFESORES DE LA ACADEMIA
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DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN
MISIN
= 4 =
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MEDICINA, IPN
La Escuela Superior de Medicina del Instituto Politcnico Nacional es una institucin de educacin mdica,
pblica, laica y gratuita, con un legado histrico identificado con las necesidades de salud de la poblacin
ms desprotegida; cuenta con una planta de destacados profesores, instalaciones fsicas y campos clnicos,
que garantizan una slida formacin mdica. Forma mdicos generales de alta calidad, creativos y eficientes;
con compromiso social, humanitario, de equidad, tico, ecolgico y crtico, tanto en el sector pblico como
en el privado, contribuyendo a mejorar las condiciones de salud y de desarrollo social de la poblacin.
Realiza investigacin cientfica, genera y difunde el conocimiento y fomenta la educacin mdica continua y
el posgrado. Apoya al Sistema Nacional de Salud y participa en el desarrollo cientfico, tecnolgico y social
del pas.
VISIN
La Escuela Superior de Medicina del Instituto Politcnico Nacional, mantendr su carcter de institucin
pblica de educacin mdica con slidas bases en el conocimiento cientfico y tecnolgico, en constante
actualizacin e innovacin, en un marco de calidad, equidad y servicio. Incrementar desarrollo de la
investigacin cientfica, el posgrado y la educacin mdica continua, manteniendo una vinculacin con los
procesos formativos de los profesionales de la salud de alto nivel, para destacar dentro de las Escuelas y
Facultades de Medicina del pas por la formacin de mdicos generales de alta calidad que conforme al
panorama epidemiolgico sean competentes para atender los problemas de salud y la emergencia de nuevas
patologas, bsicamente en el primer nivel de atencin, contribuyendo as a mejorar la salud y el desarrollo
social de la poblacin en constante interaccin con todos los sectores de la sociedad. Continuar participando
en la rectora de la educacin mdica en el pas, en el desarrollo cientfico y reafirmando su compromiso con
la poblacin ms desprotegida, guiada siempre por un desarrollo basado en la calidad humana, la tica y la
excelencia acadmica.
CALENDARIO DE ACTIVIDADES
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EXMENES
Primer Examen Parcial: Lunes, 11 de septiembre de 2017
Temas de teora: 1. Composicin Qumica del Organismo Humano
2. Agua, Soluciones, cidos, Bases, pH y Soluciones Reguladoras
3. Estructura y Funcin de Protenas
Prcticas de Laboratorio: 1. Introduccin 14 al 18 de agosto de 2017
2. Soluciones 21 al 25 de agosto de 2017
3. Electrolitos y pH 28 de agosto al 1 de sept de 2017
4. Soluciones reguladoras 4 al 8 de septiembre de 2017
Segundo Examen Parcial: Lunes, 23 de octubre de 2017
Temas de teora: 4. Termodinmica, Catlisis y Enzimas
5. Estructura, Funcin y Metabolismo de Glcidos
Prcticas de Laboratorio: 5. Protenas 25 al 29 de septiembre de 2017
6. Cintica Qumica 2 al 6 de octubre de 2017
7. Cintica Enzimtica 9 al 13 de octubre de 2017
8. Glcidos 16 al 20 de octubre de 2017
Tercer Examen Parcial: Lunes, 11 de diciembre de 2017
Temas de teora: 6. Bioenergtica y Ciclo del cido Ctrico
7. Estructura Funcin y Metabolismo de Lpidos.
8. Estructura y Funcin de cidos Nucleicos y Gentica Molecular.
Prcticas de Laboratorio: 9. Oxidaciones Biolgicas 6 al 10 de noviembre de 2017
10. Lpidos 13 al 17 de noviembre de 2017
11. cidos Nucleicos 27 de nov al 1 de dic de 2017
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prctica debern revisar cuidadosamente dicho material y Artculo 27. Durante los exmenes, los alumnos no
anotar en el vale cualquier anomala que observe, ya que de no podrn llevar consigo telfonos celulares.
hacerlo se harn responsables de los daos que presente el Artculo 28. Para tener derecho a presentar cada uno de
material y debern reponerlo en un plazo mximo de quince los exmenes departamentales ordinarios, los alumnos
das, con nota de compra. debern tener un mnimo del 80% de asistencia global (en
Artculo 19. Al terminar la prctica, el equipo deber teora y laboratorio) en el periodo examinado, siempre y
dejar la mesa de trabajo limpia y en orden, como la cuando no hayan acumulado ms del 20% de faltas en el
recibi. laboratorio (del total de prcticas del curso).
Artculo 20. Los alumnos no podrn abandonar el Artculo 29. Cuando por causa justificada (ver artculo 13
laboratorio hasta que la prctica termine, o cuando sean del presente Reglamento) un alumno no pueda asistir a
autorizados por el maestro. S un alumno abandona el presentar un examen ordinario, deber proceder segn el
laboratorio sin autorizacin, se har acreedor a la falta de artculo 46 del Reglamento General de Estudios.
ese da. Artculo 30. Cada evaluacin departamental ordinaria se
Artculo 21. El alumno deber entregar un reporte escrito integrar por el 50% de la calificacin del examen de
de la prctica, que formar parte de su evaluacin de teora, ms 30% de la calificacin de laboratorio, ms
laboratorio. 20% de la calificacin de actividades complementarias del
CAPITULO V. DE LA EVALUACIN periodo correspondiente.
Artculo 22. La evaluacin final de la Unidad de Artculo 31. La acreditacin de la Unidad de Aprendizaje
Aprendizaje, se har con base en tres Evaluaciones de Bioqumica Medica I se obtendr promediando las tres
Parciales Ordinarias, y en su caso los Exmenes evaluaciones parciales ordinarias. La calificacin mnima
Extraordinario y a Ttulo de Suficiencia. aprobatoria es de 6 (seis) referirse al Artculo 42 y 43 del
Reglamento General de Estudios.
Artculo 23. Las calificaciones quedarn registradas en el
acta de evaluacin correspondiente con un nmero entero Artculo 32. Cuando un alumno no apruebe o intente
de cero a diez. En calificaciones superiores a 6 con mejorar su calificacin ordinaria, deber presentar el
fracciones de cinco dcimas o ms, la calificacin se Examen Extraordinario, que incluye el total de los
aumentar al entero inmediato superior. En calificaciones contenidos de la Unidad de Aprendizaje. Referirse al
inferiores a 6, las fracciones decimales sern consideradas Artculo 45 del Reglamento General de Estudios.
nulas. Artculo 33. Para tener derecho a presentar el Examen
Artculo 24. La evaluacin parcial ordinaria de la Unidad Extraordinario de la Unidad de Aprendizaje, los alumnos
de Aprendizaje se har tomando en cuenta los resultados debern contar con un mnimo de 80% de asistencia a las
obtenidos en: clases de teora y tambin 80% de asistencia a las
prcticas de laboratorio, del total de clases del curso.
a) El examen parcial departamental de los temas
revisados en el aula. Artculo 34. La calificacin mnima aprobatoria del
Examen Extraordinario ser de 6 (seis). Cuando un
b) La calidad de su trabajo en el laboratorio y de sus
alumno presente este examen para mejorar la calificacin
informes de las prcticas.
ordinaria obtenida, su calificacin final ser la ms alta.
c) Las actividades acadmicas complementarias.
Artculo 35. Los alumnos que al trmino del curso
Artculo 25. Los exmenes departamentales ordinarios, tengan calificacin reprobatoria y como mnimo 50% de
extraordinario y a ttulo de suficiencia, se realizarn en el asistencia a las sesiones de teora y prcticas de
lugar, fecha y hora que se dar a conocer al inicio del laboratorio, tendrn derecho a presentar el Examen a
curso. Ttulo de Suficiencia.
Artculo 26. Todos los grupos debern iniciar los
exmenes departamentales a la hora programada. Los
CAPITULO VI. OTROS
sinodales de examen controlarn la asistencia, llamando
lista de presentes al inicio del examen, con un periodo de Artculo 36. Cualquier caso no contemplado en este
tolerancia de 15 minutos, los alumnos que lleguen Reglamento deber someterse por escrito, a la Academia
despus del periodo de tolerancia no podrn presentar de Bioqumica Mdica I, para su discusin y resolucin
examen, ni permanecer en el saln. inapelable.
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o Todo el material biolgico, equipos y de desecho (cadveres, original, busque otro frasco reactivo y vierta el sobrante. Nunca
muestras biolgicas, algodn, gasas, guantes, jeringas, etc.) emplee pipetas para efectuar este procedimiento.
debern ser incinerados adecuadamente, para lo cual, deber
ACADEMIA DE BIOQUMICA MDICA I
usted seguir las instrucciones del Profesor para dejarlos
ENERO DE 2017
convenientemente preparados.
SIMBOLOS DE SEGURIDAD
FLAMABLE VENENO
EXPLOSIVO RADIOACTIVO
OXIDANTE
INFLAMABLE
CORROSIVO IRRITANTE
DAO AMBIENTAL
VENENO
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NDICE
No. Pginas
1. INTRODUCCIN... 1
2. SOLUCIONES. 8
3. ELECTRLITOS y pH...... 13
4. SOLUCIONES REGULADORAS......... 16
5. PROTENAS 20
6. CINTICA QUMICA Y CATLISIS. 29
7. CINTICA ENZIMTICA 38
8. GLCIDOS.. 46
9. OXIDACIONES BIOLGICAS 54
10. LPIDOS... 61
11. CIDOS NUCLEICOS... 66
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PRCTICA No. 1
INTRODUCCIN AL LABORATORIO
Se revisarn conceptos y procedimientos de importancia para el trabajo en el laboratorio. El alumno deber
previamente haber ledo y sujetarse al Reglamento de la Academia de Bioqumica I.
Las actividades de laboratorio constituyen una parte importante del aprendizaje de la materia de
Bioqumica Mdica I, complementando las actividades de la materia impartidas en el aula.
Es obligacin del alumno la asistencia puntual, as como participar de forma activa, obtener resultados de
los experimentos y entregar el reporte del mismo.
Es obligacin del alumno registrar los resultados de cada experimento que obtiene durante el desarrollo
de cada prctica y de la seccin de Evidencias de aprendizaje, siendo este ltimo apoyo
complementario de los resultados.
Ser de suma importancia cumplir de forma obligatoria con las medidas de seguridad, comportamiento,
uniforme y accesorios como: guantes, anteojos de proteccin o caretas transparentes, cubre bocas y bata larga.
a. Antes de entrar al laboratorio, todos los alumnos debern portar, debidamente abotonada la bata de
laboratorio y tener listo su material de trabajo.
b. Cuando el profesor lo indique, los alumnos colocarn su mochila en el lugar que les sea asignado.
c. Siguiendo las instrucciones de su profesor, localizar la mesa de trabajo de su equipo, dirigirse a ella e
inmediatamente antes de realizar cualquier actividad, debern colocarse los gogles y guantes de forma
obligatoria. No podrn permanecer durante la sesin del laboratorio si no cumplen con este requisito.
d. En la mesa de trabajo, localizar la toma de corriente, desages, tuberas y sitios donde puede trabajar.
e. Observar y ubicar la mesa de trabajo con respecto a la campana de extraccin, regadera, extintores, zonas
de seguridad y rutas de evacuacin.
f. Identificar el uso de cada una de las tuberas que encuentre en la mesa de trabajo y marcarlas con masking
tape. Esperar a que su profesor confirme que el etiquetado es correcto.
Evidencias de aprendizaje
1. Ilustrar la mesa de trabajo sealando la posicin de las tomas de corriente, desages y vlvulas de flujo.
2. Ilustrar la distribucin del laboratorio e indique las zonas de seguridad, posicin del equipo de seguridad y
la ruta de evacuacin desde la mesa.
a) Localizar en la charola el vale de resguardo del material de laboratorio (documento que enlista el
material para realizar cada prctica) seguidamente revisar cuidadosamente cada una de las piezas,
indicando en el vale cualquier defecto en el material. Bajo ninguna circunstancia se deber desplazar la
charola de la mesa de trabajo a ningn otro sitio.
b) Etiquetar con masking tape cada pieza que lo identifique. Reunir en la charola el material que desconozca y
preguntar a su Profesor. Para esta Prctica y las posteriores, favor avisar al Profesor o Profesores para que
le revisen el ejercicio o experimento, en caso de no avisar y desechar el ejercicio o experimento, no se
podr incluir en el Reporte de Laboratorio.
c) Al terminar de revisar todo el material, completar los datos solicitados en el vale, (fecha, grupo, equipo,
responsable, etc.) y entregarlo al personal tcnico de laboratorio. En las siguientes prcticas, el vale se
entregar al inicio de cada sesin con tolerancia de 10 minutos.
d) Al terminar cada prctica el equipo tiene la obligacin de ordenar el material limpio dentro de la charola,
limpiar la mesa y solicitar al personal tcnico que tendr que revisar y levantar el material de su mesa de
trabajo, quienes les tendrn que devolver el vale que se entreg al inicio de la prctica.
Evidencias de aprendizaje
b) Conectar el tubo de ltex del mechero a la llave de gas, la que debe estar completamente cerrada, con la manija
en posicin transversal respecto de la salida del gas. No olvidar que la tubera de gas es de color amarillo.
c) Verificar que el tornillo de control de flujo de gas est abierto ms o menos a la mitad de su capacidad
total. El flujo de gas se puede disminuir girando el tornillo en el sentido de las manecillas del reloj y
aumentar en sentido contrario.
d) Encender el mechero aproximando la flama de un cerillo o encendedor al borde de la parte superior del
mechero e inmediatamente abrir la llave de gas, lo cual debe hacerse lentamente, avanzndola hasta que
est aproximadamente a 45 grados con el tubo del gas. Tener cuidado de no acercar su rostro, pelo u
objetos inflamables al mechero al momento de encender, ni cuando est encendido. Al usar el mechero no
deber portar guantes clnicos hechos de ltex o polietileno, tener cuidado, ya que son inflamables.
e) Ajustar la cantidad de aire que entra, usando el arillo de control de flujo de aire, hasta que la flama tenga
una zona central de color azul claro rodeada de otra de color azul oscuro o violeta. La parte ms caliente
se encuentra en la punta de la zona interna. Cuando la combustin es incompleta, por falta de oxgeno, la
flama presenta color amarillo.
Evidencias de aprendizaje
1) En el esquema siguiente, indicar el tipo de mechero, as como las partes que se indican.
1
a
c 3
b
a) Agregar a un tubo de ensayo agua de la llave hasta un 20% de su capacidad y sujetarlo con pinzas para
tubo de ensayo.
c) Colocar el tubo sobre la flama del mechero, inclinar aproximadamente a 70 oC. Nunca calentar un tubo de
ensayo en el fondo o en posicin vertical debido a que se puede proyectar su contenido.
d) Mover el tubo cuidadosamente casi sobre la flama de arriba hacia abajo, para que el lquido se caliente de
manera homognea.
e) Durante el calentamiento dirigir la boca del tubo hacia un lugar donde no se encuentre ninguna persona o
material que se pueda daar.
f) No observar de ninguna manera directamente la boca de un tubo de ensayo que se est calentando, aunque
est fuera de la flama del mechero.
h) PROHIBIDO calentar tubos de ensayo con solventes orgnicos directamente a la flama del mechero.
Hacerlo siempre en bao Mara.
Evidencias de aprendizaje
a) Identificar y reunir el siguiente material: soporte universal, anillo de hierro, rejilla de asbesto, mechero de
Fischer o Bunsen y un vaso de precipitados de 600 mL.
b) Ensamblar el anillo en el soporte a la altura adecuada para que la parte ms caliente de la flama del
mechero quede a nivel del anillo. Colocar la rejilla de asbesto sobre el anillo.
c) Agregar agua de la llave al vaso de precipitado nicamente al 50% de su capacidad y colocarlo sobre la
rejilla. Agregar pequeos trozos de papel en el vaso con agua a modo de cuerpos de ebullicin.
Evidencias de aprendizaje
a) Usar siempre la pre-pipeta, nunca pipetear con la boca para manejar con seguridad los reactivos lquidos.
b) Al abrir un frasco de reactivo, colocar el tapn sobre la mesa en posicin invertida, para evitar
contaminacin. Vaciar la cantidad necesaria en un vaso de precipitados y de ah usar el reactivo.
c) Para extraer el lquido utilizar una pipeta o un gotero limpio. Nunca vaciar reactivos directamente del
frasco para evitar escurrimiento.
d) Usar una pipeta de 10 mL, para transferir 5 mL de agua de un vaso de precipitados a un tubo de ensayo en
su mesa y en la campana de extraccin. Repetir hasta que pueda realizarlo con seguridad.
Evidencias de aprendizaje
2) Utilizar las tcnicas que se aprendi para medir los volmenes de los utensilios que le solicite su profesor.
b) Agregar en el tubo 1 la cantidad de 2.5 mL de agua. En el tubo 2 la cantidad de 1.25 mL de agua. En tanto
que en el tubo tres deposite 8 mL de agua y en el tubo 4, deposite 0.6 mL de agua.
c) Utilizar para cada tubo de ensayo una pipeta de capacidad adecuada. Repetir este ejercicio hasta que pueda
realizarlo con seguridad y precisin.
Evidencias de aprendizaje
2. Describir que pipetas utiliz para cada uno de los volmenes indicados.
a) Reunir el material siguiente: Soporte universal, pinza para bureta (Lincoln), bureta, matraz Erlenmeyer.
b) Instalar la pinza para bureta sobre el soporte a una altura conveniente para colocar adecuadamente la bureta.
c) Armar la bureta colocando la llave del lado derecho de la escala, la cual debe quedar correctamente
orientada (escala de 0 arriba y escala de 25 abajo).
d) Colocar la bureta con las pinzas teniendo cuidado que este bien sujeta, con la escala hacia el observador y
a la altura adecuada por arriba del matraz Erlenmeyer.
e) Emplear siempre un vaso de precipitados de 100 mL para llenar la bureta, teniendo cuidado que la llave se
encuentre cerrada. Con la finalidad de evitar escurimientos, colocar un vaso de precipitados debajo de la
bureta.
f) Para purgar la bureta abrir completamente la llave para que el lquido salga rpidamente y pueda
arrastrar las burbujas de aire. Posteriormente, aforar al volumen total y colocar el matraz Erlenmeyer.
g) Abrir la llave lentamente y dejar salir el lquido (agua) de la bureta en cantidades fijas de: 1 mL, 5 mL,
6 mL, 10 mL hasta 25 mL, agitando constantemente el matraz Erlenmeyer. Aprender a leer con precisin
la escala de la bureta. Manejar con soltura y seguridad la llave de la bureta y el matraz.
Evidencias de aprendizaje
a) Preparar un sobre de papel encerado, el cual ser proporcionado por su Profesor de Laboratorio. Escribir
en el sobre el nombre y cantidad de reactivo que se le asign, nmero de equipo y grupo.
b) Encender la balanza y esperar a que se estabilice la lectura. Colocar una charola de papel encerado en el
plato de la balanza. Cuando se estabilice, presione el botn de tarar, para llevarlo a cero.
c) Abrir el recipiente del reactivo y colocar la tapa sobre la mesa, boca arriba, para evitar la contaminacin.
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d) Con una esptula retirar el reactivo del recipiente y pesar la cantidad de NaCl (cloruro de sodio)
depositndolo sobre la charola. Si se rebasa la cantidad deseada, regresar el exceso de reactivo al
respectivo recipiente usando la esptula. Nunca regresar al recipiente original un reactivo que caiga fuera
del sobre o por encima de la mesa.
e) Al terminar de pesar la cantidad deseada, verter el reactivo pesado al sobre y cerrarlo con cinta masking
tape y conservar para utilizar en la siguiente prctica.
f) Cerrar inmediatamente el frasco de reactivo para evitar que se hidrate o contamine. Asegurarse que la
mesa y la balanza queden limpias.
Evidencias de aprendizaje
1) Ilustrar la balanza, sealando la posicin del botn de encendido-apagado y del botn de tara.
b) Aadir a dos tubos Falcon de capacidad de 15 mL la cantidad de 5 mL de agua de la llave como marca la
escala del propio tubo.
c) Colocar en dos frascos gerber cada tubo y mantenerlos a la mano cuando se requiera en la balanza.
d) Ajustar las pesas de medicin en la posicin de cero en una balanza de dos platillos. Asegurarse de que la
aguja o fiel de la balanza est en posicin cero. Si no lo est, girar cuidadosamente las pesas de ajuste en
el sentido que sea necesario hasta lograr el equilibrio.
e) Retirar los tubos de los frascos gerber, colocar cada frasco en cada platillo, cuidando que el ms pesado
quede del lado izquierdo.
f) Deslizar las pesas de medicin de la balanza hasta lograr que el fiel vuelva a la posicin de equilibrio,
posteriormente colocar los tubos nuevamente en cada frasco y observar que se encuentren balanceados.
g) De no estar en equilibrio, use una pipeta y aadir agua de la llave al tubo ms ligero hasta lograr que el
fiel de la balanza regrese al equilibrio. Al equilibrar los tubos ya puede centrifugar.
Evidencias de aprendizaje
1) Ilustrar la balanza de platillos sealando la posicin de las pesas de ajuste y las de medicin.
PRCTICA No. 2
SOLUCIONES
Una solucin es un sistema homogneo, formado por dos o ms sustancias qumicas. Est formada
por un solvente en el cual se dispersa uno ms solutos. Cuando ambos son lquidos miscibles, se
acostumbra nombrar solvente al que se encuentra en mayor cantidad. En las soluciones acuosas siempre se
considera el agua como solvente.
La relacin que existe entre las cantidades de soluto y solvente en una solucin se llama
concentracin.
Existen varias formas de expresar la concentracin de una solucin. Las de uso ms frecuente son:
MOLARIDAD (M). Nmero de moles de soluto en un litro de solucin. Un mol se define como el
peso molecular en gramos de una sustancia, o sea la masa de una sustancia que contiene el mismo
nmero de tomos o molculas que hay en 12 g de 12C. (6.022 x 1023 o Nmero de Avogadro).
MOLALIDAD (m). Nmero de moles de soluto en 1000 g de solvente.
NORMALIDAD (N). Nmero de equivalentes qumicos de soluto en un litro de solucin. Si
dividimos los gramos de un mol entre la valencia del compuesto se obtiene el peso equivalente
qumico.
OSMOLARIDAD (OsM): Nmero de osmoles en un litro de solucin. Un osmol es la cantidad de
soluto en gramos que proporciona el nmero de Avogadro de partculas en solucin.
PORCENTUAL (%). Expresa el porcentaje de soluto en una solucin. Existen diferentes tipos:
Porciento en peso (% p/p). Nmero de gramos de soluto en 100 g de solucin. Esta es la forma
como se expresa la pureza de los reactivos qumicos.
Porciento en volumen (% v/v). Nmero de mililitros de soluto en 100 mL de solucin.
Porciento en peso-volumen (% p/v). Nmero de gramos de soluto en 100 mL de solucin. Si no se
indica expresamente la relacin de porcentaje, esta es la concentracin porcentual que se debe
usar.
FRACCIN MOLAR (xi). Nmero de moles de una sustancia en una solucin entre la suma de
los moles de todos los componentes de la misma.
DILISIS
Ejemplos de membranas dialticas son el celofn y el colodin. La base del tratamiento de pacientes
renales descompensados es la dilisis, la cual es til tambin para eliminar sustancias nitrogenadas,
medicamentos en exceso o exceso de acidez en sangre. Mdicamente se refieren diversos tipos de dilisis
tales como: hemodilisis y la dilisis peritoneal.
Evidencia de aprendizaje:
1) Describa detalladamente los clculos que hizo para conocer la cantidad de agua destilada que es
necesario aadir al NaCl del sobre para que la solucin sea al 5%.
2) Al considerar que la solucin de NaCl es al 5%, calcule las concentraciones siguientes y detalle los
clculos correspondientes. Molaridad, Normalidad, mEq/mL, mg/mL, moles%, Osmolaridad.
EXPERIMENTO 2. DILISIS
a) Humedecer por inmersin en agua destilada durante 10 minutos el tubo de colodin o celofn de
aproximadamente 6 cm de largo por 2.5 cm de dimetro.
b) Preparar dos tubos de ensayo limpios y etiquetarlos. Aadir el tubo uno 2 mL de NaCl al 5% y 5 gotas
de AgNO3 (Nitrato de Plata). Al tubo nmero dos agregar 2 mL de solucin de almidn al 1% y 2
gotas de solucin de lugol. Agitar y observar la reaccin que ocurre en cada tubo. Etiquetar como
testigo de cloruros y testigo de almidn respectivamente.
c) Pasado los 10 minutos de inmersin del colodin, cerrar un extremo de dicho tubo con un hilo de
algodn para obtener un saco. Desechar el agua destilada utilizada, enjuagar el vaso y llenar con agua
destilada nuevamente hasta un tercio de su volumen.
d) Llenar el saco con una mezcla de 1 mL de solucin de NaCl al 5% y 10 mL de solucin de almidn al
1%.
e) Cerrar cuidadosamente el otro extremo del saco, enjuagar con agua destilada y sumergir en el vaso de
precipitados con agua destilada, cuidando de no tocar las paredes.
f) Determinar la presencia de almidn y de cloruros en el lquido que rodea al saco del vaso de
precipitados, a tiempo 0 (inmediatamente despus de sumergir el saco), 15, 30, 45 y 60 minutos.
Evidencias de aprendizaje:
1) Describir detalladamente los clculos que hizo para conocer la cantidad de agua destilada que es necesario
aadir al NaCl del sobre para que la solucin sea al 5%.
2) Calcular las concentraciones siguientes y detalle los clculos correspondientes del NaCl al 5%: Molaridad,
Normalidad, mEq/mL, mg/mL, moles%, Osmolaridad.
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El osmmetro consiste en un recipiente que contiene una solucin de sacarosa 1 M teida con rojo
neutro conectado a un capilar de polietileno por el cual asciende el nivel del lquido (ver esquema de la
tabla). El recipiente es el cuerpo de una jeringa hipodrmica de 5 mL que presenta dos bandas de hule; la del
extremo inferior permite la fijacin de una membrana de celofn humedecido previamente durante 5 minutos
en agua destilada. La banda superior sirve para sellar el orificio de llenado de la cmara. Por la parte
correspondiente al pivote, se le agrega el trocar metlico de un catter el cual se introduce en el extremo de
un capilar de polietileno. El extremo inferior de la jeringa se sumerge en un vaso de precipitados con agua
destilada. El dispositivo lo instala el personal tcnico del laboratorio. Nota: cualquier error en el montaje del
osmmetro se manifestar por salida de solucin coloreada del dispositivo.
a) Cuando el Profesor le indique, en el osmmetro marcar el nivel de la solucin de sacarosa contenido en el
tubo capilar, el cual ser el tiempo cero.
b) Medir cada 15 minutos el nivel ascendido hasta los 90 minutos.
c) Registrar sus resultados en la tabla siguiente:
Tiempo Altura
min. mm Atm
15
30
45
60
75
90
Evidencias de aprendizaje:
1. Graficar el tiempo en el eje de las abscisas (eje x) y la altura en milmetros en el eje de las ordenadas (eje
y).
2. Calcular la presin osmtica en atmosferas y complete la tabla.
3. Cundo deber detenerse el proceso osmtico?
4. Depende slo de la altura la presin osmtica? Explique.
5. Influye el radio del capilar en la presin osmtica? Explique.
6. La sacarosa y el colorante dializan? Explique.
7. Identificar en el esquema de la tabla de resultados todas las partes del osmmetro.
Prepare 50 mL de solucin 0.5 M de CH 3COOH (cido Actico) tomando como base los siguientes
datos: El CH3COOH tiene un peso molecular de 60 g/mol, la pureza del reactivo es de 99.7% y la densidad a
20C es de 1.06 g/mL. Una vez preparada consrvela para utilizarla en el experimento siguiente.
Evidencia de aprendizaje:
1) Describa detalladamente los clculos que hizo para conocer el volumen de CH3COOH
concentrado que utiliz para preparar los 50 mL de dicha solucin. R = _________ mL.
2) Considerando que la solucin es 0.5M calcule las concentraciones siguientes detallando los
clculos:
% (p/v) =
Normalidad =
mmoles/L =
gramos/L =
mEq % =
Osmolaridad =
Aada 2 gotas de fenolftalena y titule utilizando solucin de NaOH (Hidrxido de Sodio) 0.2N.
Recuerde que el punto de titulacin se observar cuando persista por ms de un minuto un ligero
color rosa.
Evidencia de aprendizaje:
1) Calcule el gasto terico de NaOH 0.2N
2) Cuntos mL de NaOH 0.2N gast para neutralizar los 10 mL de la solucin de cido actico?
R = _________ mL
3) De acuerdo con los resultados que obtuvo y considerando que la solucin de NaOH es
exactamente 0.2N. Cul es la verdadera normalidad del cido actico problema?
4) Escriba el concepto de titulacin cido-base.
Llene casi completamente una probeta de 100 mL con agua de la llave y luego espolvoree, con un
aplicador de madera, unos granitos de azul de metileno sobre la superficie del agua y observe que ocurre.
Anote sus observaciones.
A continuacin caliente con sus manos la probeta en la parte media y nuevamente observe que ocurre
al agregar calor. Anote sus observaciones. Una vez homogeneizado el colorante, la difusin se ha
efectuado.
Evidencia de aprendizaje:
1) Ilustre el experimento.
2) Es uniforme el descenso del colorante por la columna de agua?
3) Qu sucede al calentar la parte media de la probeta?
4) Qu es disolucin, conveccin y difusin?
PRCTICA No. 3
ELECTRLITOS y pH
Las sustancias que permiten el paso de la corriente se conocen como electrlitos y a los que no
manifiestan esta propiedad como no electrlitos. A esta capacidad de dar paso a la electricidad se le conoce
como conductancia, propiedad que se debe a la movilidad de los iones.
Los electrlitos de clasifican en fuertes y dbiles de acuerdo al grado de disociacin y facilidad con
que conducen la corriente elctrica.
Los electrlitos fuertes se disocian completamente como las sales minerales, los hidrxidos de
metales alcalinos, y los cidos fuertes. En los lquidos del organismo encontramos ejemplos de
electrolitos fuertes: NaCl, KCl y CaCl2, entre otros.
Son electrlitos dbiles la mayor parte de los compuestos orgnicos como los cidos lctico, pirvico,
urea y otros compuestos nitrogenados.
Disueltos en el agua corporal hay ejemplos de compuestos no electrlitos como glucosa y glicerol.
CONDUCTIVIDAD
Observe la formacin de gas en los electrodos, agregue entre ambos 5 gotas de azul de bromofenol
como indicador.
Observe los cambios de coloracin en la solucin cercana a los electrodos.
Evidencias de aprendizaje:
a) Anote las reacciones que se llevan a cabo en cada uno de los electrodos, incluida la del indicador.
b) Ilustre el proceso de la electrlisis del agua.
Lmpara
Fuente
Observe tambin la intensidad luminosa con relacin a la distancia entre los electrodos, sin ponerlos
en contacto.
Repita el experimento usando CH3COOH (cido Actico) 0.5M.
Evidencias de aprendizaje:
1) Anote sus resultados valorando por medio de cruces la intensidad luminosa y la variacin
observada.
Con base en los clculos previamente hechos prepare 100 mL del par de soluciones que le indique su
profesor, consrvelas para el siguiente experimento.
De HCl al 37% de pureza y densidad de 1.18 g/mL. De pH = 1.4, 1.7 y 2.0
De CH3COOH al 99.7% de pureza, densidad de 1.06 g/mL y pKa = 4.74. De pH = 3.07, 3.22 y 3.37
Prepare 50 mL de una dilucin 1:10 de cada una de las soluciones asignadas.
Evidencia de aprendizaje:
1) Detalle los clculos de todas las soluciones indicadas en el experimento.
2) Calcule la concentracin y el pH de las diluciones preparadas.
3) Explique porqu se le asignaron ese par de soluciones para preparar.
Determine con papel indicador el pH de cada una de las soluciones que prepar en el experimento
anterior.
A continuacin determine el pH potenciomtrico de cada una de ellas.
En un matraz Erlenmeyer tome una alcuota de10 mL de cada una de las soluciones preparadas y
titule con NaOH 0.1N y aada 2 gotas de fenolftalena como indicador.
Evidencia de aprendizaje:
1) Con los datos obtenidos llene la tabla
TITULACIN
N terica pH Gasto de NaOH
Solucin Concentracin
0.1N mL
Terico Colorimtrico Potenciomtrico Terico Experimental N real
HCl
HCl 1:10
CH3COOH
CH3COOH 1:10
PRCTICA No. 4
SOLUCIONES REGULADORAS
A las soluciones reguladoras se les pueden aadir cantidades relativamente grandes de cidos o lcalis
sin alterar de manera significativa su pH. Esta accin amortiguadora se debe a la presencia en la solucin de
un sistema formado por un cido o una base dbil y su sal correspondiente.
Si se toma como ejemplo una solucin que contenga un cido dbil, al que representaremos por HA y
su sal, representada por BA los hidrogeniones existentes en ella procedern nicamente de las molculas
cidas, que se disocian como sigue:
Donde Ka es la constante de disociacin del cido. De esta ecuacin se deduce que la concentracin
de hidrogeniones es:
La relacin entre estas dos constantes es, sin embargo, tan sensiblemente constante en condiciones
ordinarias que podemos afirmar que la concentracin de A- es igual a la concentracin de la SAL.
Sustituyendo una expresin por otra en la ecuacin anterior tenemos:
Ahora bien, si -log [H+] es igual a pH, por analoga podemos decir que log de K a es igual a pKa por
lo que:
Por otra parte por las leyes de los logaritmos, las expresiones log de ([cido]/[Sal]) y + log de ([Sal]/
[cido]) son iguales y la segunda puede reemplazar a la primera, de tal modo que hechas todas las
modificaciones la ecuacin queda finalmente como sigue:
Esta ecuacin se conoce con el nombre de Ecuacin de HendersonHasselbalch y nos indica que el
pH de una solucin que contenga un cido dbil y su sal est determinado por el valor de pK a (constante para
cada cido) y por el logaritmo del cociente que resulta de dividir la concentracin de la sal entre la
concentracin del cido.
Por ejemplo, el valor de la constante de disociacin K a del cido actico es de 1.8 x10-5. El valor de
su pKa es por lo tanto igual a 4.74. Si tenemos una solucin reguladora que posea iguales cantidades de
CH3COOH y CH3COONa en concentracin 0.1N, el pH de esa solucin sera de:
Adems de servir para la preparacin de soluciones de pH conocido, las soluciones reguladoras tienen
dentro del organismo un papel de importancia capital que es el de evitar que aumente o disminuya de manera
importante la concentracin de iones hidrgeno, ya que la vida humana es posible en lmites muy estrechos
de pH, es decir, para la sangre arterial un pH de 7.40 y para sangre venosa y lquidos intersticiales 7.35.
Este ltimo es menor por tener ms CO2 y por lo tanto ms H2CO3 producido metablicamente. Se
sabe que los lmites mximos de pH en los que por algunos minutos puede permanecer el organismo sin
sufrir muchas alteraciones son de 7.0 a 7.8. En los lquidos donde existen y actan al mismo tiempo varios
sistemas amortiguadores, como sucede en la sangre, el cido o la base que entra es amortiguado por todos los
sistemas presentes de manera proporcional a la eficacia de cada uno de ellos.
La regulacin fisicoqumica tiene lugar en todos los medios que contienen reguladores, constituidos
principalmente por cidos o bases dbiles y sus sales. Por ejemplo el de fosfatos H 2PO4-/HPO4= con un pKa2
de 7.2 (o de 6.8 a la temperatura corporal), es el principal amortiguador intracelular.
El principal amortiguador extracelular en la sangre y lquidos intersticiales es el sistema bicarbonato
H2CO3/HCO3- con un pKa de 6.1.
En el interior del eritrocito, adems del bicarbonato, el amortiguador de mayor importancia es el de
hemoglobina reducida / oxihemoglobinato (HHb/HbO2). Otros sistemas son los de protenas y aminocidos.
Todos estos sistemas funcionan de manera inmediata cuando existen excesos de lcali cido ya que
un cambio del pH afecta la estructura y la actividad de las protenas, la distribucin de otros iones entre las
clulas y el lquido extracelular, la actividad de hormonas y frmacos, etc.
Comportamiento cido-base de la glicina. Existen sustancias de mucha importancia en bioqumica
como son los aminocidos y las protenas los cuales tienen grupos cidos y bsicos, por lo que actan como
anfolitos. En sta prctica se determinarn las curvas de titulacin de la glicina con HCl y con NaOH.
La glicina es un aminocido que tiene un carboxilo cuyo pka se denomina pka1 y un grupo amino cuyo
pka se denomina pka2. Una propiedad conocida de los aminocidos es el punto isoelctrico (pI) que es el pH
en que el aminocido tiene carga neta 0 en solucin, y en ste caso se calcula con la siguiente frmula:
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
18
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN
Preparar 50 mL de las soluciones amortiguadoras con los valores de pH que le indicar su profesor (7.0,
7.2, 7.4 y 8.0), emplear KH2PO4 (fosfato dicido de potasio) 0.01 M y Na2HPO4 (fosfato monocido
disdico) 0.01 M (pKa2 = 7.2).
Preparar 50 mL de las soluciones amortiguadoras con los valores de pH que le indicar su profesor (7.2, 7.4
y 8.0), emplear KH2PO4 0.1 M y Na2HPO4 0.1 M (pKa2 = 7.2).
Medir el pH potenciomtrico y colorimtrico de las soluciones anteriores y anotar los resultados en la tabla.
Armar dos dispositivos de titulacin (llenar, purgar y aforar), uno ser para titular con HCl (cido clorhdrico)
las soluciones amortiguadoras preparadas previamente y el otro dispositivo ser para titular con NaOH
(hidrxido de sodio).
Aadir una alcuota de 10 mL de la solucin amortiguadora que prepar en un matraz Erlenmeyer de
250 mL, medir con una pipeta volumtrica de 10 mL. Aadir 5 gotas de azul de timol y titular con HCl
0.1 N hasta observar el cambio de color a rojo. Repetir la titulacin para cada solucin amortiguadora
preparada por duplicado.
Agregar una alcuota de 10 mL de la solucin amortiguadora que prepar en otro matraz Erlenmeyer de
250 mL, medir con una pipeta volumtrica de 10 mL. Aadir 5 gotas de azul de timol y titular con NaOH
0.1 N hasta observar el cambio de color a azul. Repetir la titulacin para cada solucin amortiguadora
preparada por duplicado.
Evidencias de aprendizaje.
1) Describir detalladamente los clculos que realiz para cada uno de los pH solicitados.
2) Con los datos obtenidos y las de todo el grupo llenar la tabla siguiente:
pH pH Gasto de Gasto de
Concentracin
terico Colorimtrico Potenciomtrico HCl 0.1 N NaOH 0.1 N
7.2 0.01
7.2 0.1
7.4 0.01
7.4 0.1
8.0 0.01
8.0 0.1
3) Explicar la coincidencia o no, entre sus resultados y el clculo terico.
4) Explicar los resultados con base en la teora.
Evidencias de aprendizaje:
1) Graficar los valores acumulativos de HCl signo negativo y a los de NaOH signo positivo, en el eje de las
abscisas (X) y el pH en el eje de las ordenadas (Y).
2) Identificar en la grfica los valores de pK1 y pK2.
3) Calcular el punto isoelctrico (pI).
PRCTICA No. 5
PROTENAS
Su nombre deriva del griego proteios que significa primordial o fundamental; contienen en su molcula C,
H, O, N y en ocasiones P y S. El nitrgeno constituye en promedio el 16%. Por hidrlisis dan aminocidos,
los cuales varan en nmero, cantidad y posicin en cada protena. La actividad de una protena depende de
su conformacin espacial, por lo que agentes fsicos y qumicos que alteran los diferentes enlaces son
capaces de anularla. Algunos de los agentes desnaturalizantes ms comunes son cidos o bases, detergentes,
metales pesados, solventes orgnicos, alcaloides, calor, radiaciones ultravioleta, rayos x, ondas ultrasnicas,
sales inorgnicas, sustancias orgnicas como urea, guanidina, agentes reductores, agentes oxidantes, etc. Las
protenas desnaturalizadas pierden su actividad, modifican su solubilidad y precipitan. Tal como existen en la
naturaleza se denominan protenas nativas. Las propiedades fisicoqumicas y biolgicas caractersticas de las
protenas se deben a los aminocidos que las constituyen y las reacciones coloridas que se utilizan para su
anlisis en realidad detectan la presencia de un aminocido especfico. Muchas de las propiedades qumicas
de las protenas son comunes a varias especies por que contienen el mismo tipo de aminocidos, por lo que
para caracterizar una protena es necesario estudiar sus propiedades fisicoqumicas las cuales dependen del
peso molecular, de su carga elctrica neta y de la conformacin que adopte la molcula.
REACCIONES QUMICAS.
REACCIN DE MILLN: Es especfica para el grupo fenlico y por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen este grupo funcional, como el fenol, cido saliclico, timol, tirosina y todas aquellas
protenas que contengan tirosina.
REACCIN DE BIURET: Todas las molculas que contengan dos o ms uniones peptdicas, por lo tanto
todas las protenas y pptidos no menores de 3 unidades, dan positiva a esta reaccin. El nombre se debe
al compuesto biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Cuando una protena o un
polipptido se hacen reaccionar con sulfato CuSO 4 en solucin alcalina se produce un color caracterstico
prpura o violeta. El color se debe a un complejo que resulta al unirse el cobre con los tomos de
nitrgeno de los enlaces peptdicos. Esta reaccin nos sirve para diferenciar las protenas y pptidos de los
aminocidos y su utilidad principal es la de seguir el proceso de hidrlisis, la reaccin ser negativa
cuando la hidrlisis sea completa.
REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS: Las protenas que contengan los aminocidos cistena
y cistina cuando se tratan con lcalis concentrados, desprenden H2S, el cual se puede reconocer por su olor
desagradable y caracterstico, o bien, por la formacin de un precipitado negro de PbS al reaccionar con
(CH3COO)2Pb.
REACCIN XANTOPROTICA: Esta reaccin se debe a la formacin de nitroderivados aromticos por
reaccin del cido ntrico sobre grupos aromticos que poseen algunos aminocidos como la fenilalanina,
la tirosina y el triptfano. Por lo tanto, la dan positiva todas aquellas protenas que tengan aminocidos
aromticos en su molcula.
REACCIN DE LA NINHIDRINA: Es una de las reacciones ms sensibles para identificar aminocidos
en general, ya que detecta una parte de aminocido en 1 500 000 partes de agua. Aminocidos y muchas
aminas primarias dan un color violeta caracterstico. La prolina da coloracin amarilla. Por su sensibilidad
esta reaccin se emplea para valoracin cuantitativa de aminocidos por colorimetra.
PROPIEDADES FISICOQUMICAS.
DESNATURALIZACIN DE PROTENAS: Cuando la estructura altamente ordenada de una protena se
somete a la accin de agentes fisicoqumicos desnaturalizantes, queda reducida al llamado polmero
estadstico o cadena de aminocidos y adems pierde toda actividad biolgica. Algunos de los agentes
desnaturalizantes ms importantes son los metales pesados, los cidos fuertes y el alcohol.
PRECIPITACIN DE PROTENAS POR METALES PESADOS: Las protenas cuando se encuentran en
solucin a pH superiores a su punto isoelctrico son capaces de reaccionar con diferentes metales pesados
formando los correspondientes proteinatos insolubles. Tomaremos como ejemplo dos protenas, la peptona
y la gelatina y observaremos su reaccin, en forma simultnea frente a los metales pesados: Fe, Ag, Hg, y
Pb.
PRECIPITACIN DE PROTENAS POR EFECTO DE CIDOS FUERTES: Los cidos fuertes son
capaces de desnaturalizar a las protenas formando productos de desnaturalizacin insolubles conocidos
como metaprotenas.
PUNTO ISOELCTRICO: Las protenas al igual que los aminocidos son molculas anfteras. Es decir,
pueden reaccionar con cidos o con lcalis. En medio cido las protenas se combinan con los iones hidrgeno
y quedan con carga positiva. En medio alcalino liberan protones y quedan con carga negativa. El pH en el cual
una protena no posee carga elctrica neta se denomina punto isoelctrico, a este pH la protena presenta su
mnima solubilidad y generalmente precipita, teniendo adems una viscosidad mxima.
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la composicin del reactivo de Milln y explicar cul es el mecanismo propuesto para esta
reaccin.
2) Ilustrar sus resultados.
Agitar los tubos y observar la reaccin que se produce en cada caso. La aparicin de una coloracin
violeta o rosa en no ms de 20 minutos debe considerarse como prueba positiva.
Registrar sus resultados en la tabla que se encuentra al final de esta prctica.
Evidencias de aprendizaje
1) Se puede considerar la reaccin de Biuret como caracterstica para todas las protenas? Por qu?
2) Escribir la reaccin.
3) Ilustrar sus resultados.
Preparar una serie de 5 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 5, aadir a cada uno 2 mL de las
soluciones siguientes:
Tubo Soluciones
1 Agua destilada
2 Peptona al 2%
3 Casena al 2%
4 Gelatina al 2%
5 Albmina al 2%
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado.
2) Qu sustancias pueden interferir en esta reaccin?
3) Ilustrar sus resultados.
2 Prolina al 2%
3 Peptona al 2%
4 Casena al 2%
5 Gelatina al 2%
6 Albmina al 2%
Evidencias de aprendizaje
1) Describir el aspecto de la reaccin.
2) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado.
3) Qu sustancias dan positiva la reaccin de la Ninhidrina, adems de las protenas, pptidos y
aminocidos?
4) Ilustrar sus resultados.
AgNO3
HgCl2
Pb(CH3COO) 2
Evidencias de aprendizaje
1) Tiene alguna influencia el pH en el efecto de los metales pesados sobre las protenas?
2) Tienen todos los metales pesados el mismo efecto precipitante sobre las protenas?
3) Ilustrar sus resultados.
Aadir a cada tubo 2 mL de CCl3COOH (cido Triclorocetico) al 5%, estratificando por las paredes
del tubo.
Observar y registrar sus resultados valorando el grado de turbidez de cero a tres cruces en la siguiente
tabla:
Sustancia CCl3COOH
Agua destilada
Peptona al 2%
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
Evidencias de aprendizaje
1) Cmo puede explicar el efecto desnaturalizante del CCl3COOH y en general de cualquier cido?
2) Ilustrar sus resultados.
Sustancia CH3CH2OH
Agua
Peptona al 2%
Casena al 2%
Gelatina al 2%
Albmina al 2%
Evidencias de aprendizaje
1) Observa turbidez en todos los tubos?
2) Ilustrar y describir lo que sucede en cada tubo.
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Agua destilada mL 8.4 7.8 8.8 8.5 8.0 7.0 5.0 1.0 7.4
cido actico 1N mL - - - - - - - - 1.6
cido actico 0.1N mL - - 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 -
cido actico 0.01N mL 0.6 1.2 - - - - - - -
Casena al 5% en acetato de sodio 0.1N mL 1 1 1 1 1 1 1 1 1
Agitar los tubos y observe el grado de turbidez o la precipitacin que se produce en el tiempo cero (en
el momento) y despus de 15 y 30.
Registrar sus observaciones en la tabla valorando con cruces.
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Observacin al tiempo cero
Observacin a los 15
Observacin a los 30
pH terico
Evidencias de aprendizaje
1) Calcule el pH terico de cada tubo, aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbalch y regstrelo en
la tabla.
2) Cul es el punto isoelctrico de la casena? Calcule y discuta sus resultados comparando con el terico.
3) Ilustrar los resultados.
Casena
Albmina
PRCTICA No. 6
CINTICA QUMICA Y CATLISIS
De acuerdo con la Ley de Accin de Masas, la velocidad de una reaccin qumica depende de la
concentracin de las sustancias que intervienen en la reaccin. Esta Ley establece que: La magnitud de
una reaccin es proporcional a la masa activa de las sustancias reaccionantes presentes en ese
momento. El trmino masa activa significa la concentracin molecular o sea, la cantidad presente por
unidad de volumen. Si reaccionan:
La velocidad V1 con que reaccionan A y B para producir C y D depende de la concentracin de cada reactivo
y de la afinidad que tengan para reaccionar entre s, pero como esto se puede considerar constante, podemos
decir que: V1 = k1[A][B].
Como el cociente de dos constantes es siempre igual a una constante podemos decir que:
Que es la expresin matemtica de la Ley de Accin de Masas y keq se conoce como Constante de Equilibrio.
Donde t1/2 es el perodo de vida media, es decir, el tiempo necesario para que se descomponga la mitad de una
cantidad dada de material reaccionante.
Desde hace muchos aos se saba en forma emprica que la velocidad de muchas reacciones aumenta al
aumentar la temperatura. Arrhenius encontr una relacin que expresa matemticamente la forma como la
temperatura afecta la velocidad de una reaccin, la cual est dada por la siguiente ecuacin:
La cual indica que el cambio en el logaritmo natural de la constante de velocidad de una reaccin es inversamente
proporcional al cuadrado de la temperatura absoluta multiplicada por la constante de los gases. E es la energa de
activacin. Actualmente se considera que para que las molculas puedan reaccionar deben ser primero activadas,
es decir, requieren una cantidad de energa E. Integrando entre lmites la ecuacin de Arrhenius:
Esto quiere decir que por cada 10C de aumento la velocidad de la reaccin se duplica. En la mayor parte de
las reacciones se observa este aumento bajo ciertas temperaturas lmites.
Se sabe que muchas reacciones qumicas son afectadas por el pH del medio o el aumento de [H+], sobre todo
aquellas en las que participan cidos. Actualmente se acepta que las molculas deben ser activadas antes de
que puedan reaccionar. Aparentemente el pH cido favorece la ionizacin y el estado inico se puede
considerar como un estado activado.
La velocidad de una reaccin qumica frecuentemente es afectada por la presencia de sustancias extraas
que permanecen inalteradas al terminar la reaccin. Cualquier sustancia que sea capaz de acelerar una
reaccin qumica y que no sea consumida por ellas, se denomina catalizador y el proceso se conoce con el
nombre de catlisis. La funcin de un catalizador es disminuir la energa de activacin, por lo que las
molculas son activadas con menor cantidad de energa producindose reacciones ms rpidas. En un
principio se supuso que los catalizadores actuaban por presencia. Es decir, que no intervenan en los
procesos que catalizaban. Sin embargo, actualmente se acepta que el catalizador se combina con el sustrato
formando un complejo intermediario inestable y altamente reactivo. Supongamos la reaccin: A + B AB.
Esta reaccin en condiciones normales se efecta muy lentamente pero si se aade un catalizador C
apropiado, tenemos: A + B + C (AC) + B AB + C. Estas reacciones son rpidas y el catalizador
puede ser usado una y otra vez. Estas sustancias pueden ser de naturaleza inorgnica o bien sustancias
orgnicas complejas producidas por las clulas y son denominadas enzimas. La sacarosa es un disacrido no
reductor, pero al hidrolizarse, cada molcula libera una molcula de glucosa y una de fructosa, ambas
reductoras. Basndose en esto es posible visualizar y cuantificar la hidrlisis de la sacarosa midiendo la
concentracin de azcares reductores con algn reactivo apropiado. Una caracterstica importante entre los
catalizadores inorgnicos y las enzimas es que ambos solo son capaces de acelerar un proceso que ya est en
marcha. Para esta prctica emplearemos como enzima la sacarasa, tambin conocida como invertasa o
fructofuranosidasa; la cual, es una de las enzimas mejor conocidas y estudiadas. Acta hidrolizando los
azcares que contienen fructosa. As hidroliza la estaquiosa (tetrasacrido), la rafinosa (trisacrido), y alcanza
su mxima velocidad con la sacarosa (disacrido). Se puede medir la hidrlisis observando el cambio en la
rotacin ptica o valorando el poder reductor de los productos obtenidos.
Evidencias de aprendizaje
1) Determinar el orden de reaccin grficamente. Para calcular la Ke a cada tiempo se debe utilizar la
ecuacin:
Tubo 1 2 3 4 5
Solucin
HI mL 5 5 5 5 5
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
37
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN
1) Trazar una grfica con el 1/tiempo en segundos en las ordenadas y la concentracin de H+ en las abscisas.
Incubar ambos tubos en bao Mara a ebullicin por 10 minutos al cabo de los cuales se retiran del
bao, dejndose enfriar.
Observar si existe un precipitado rojo de Cu2O (xido Cuproso) en ambos tubos.
Registrar sus resultados.
Evidencias de aprendizaje
1) Se puede considerar al H2SO4 como un catalizador? Por qu?
Evidencias de aprendizaje
1) Comparar este experimento con el anterior y explique qu sucede.
PRCTICA No. 7
CINTICA ENZIMTICA
FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
La vida depende de una serie de reacciones qumicas cuyo curso y velocidad estn determinados por la
presencia de diversos catalizadores orgnicos denominados enzimas: (del griego en = en, zymo = fermento).
La mayor parte de las reacciones biolgicas seran cinticamente insignificantes si no fuera por las enzimas.
Las enzimas desde el punto de vista qumico son compuestos que pertenecen al grupo de las protenas
(aunque algunas solo funcionan asociadas a un grupo no proteico, grupo prosttico o coenzima). Debido a su
carcter protenico, las enzimas son muy sensibles a cualquier cambio fsico, qumico, o fisicoqumico. As,
cualquier cambio en la temperatura, en el pH, en la fuerza inica, la adicin de sales, la presencia de agentes
oxidantes o reductores, la presencia de metales pesados, etc., producen modificaciones profundas en su
actividad. En general, cualquier factor que sea capaz de desnaturalizar a las protenas ser capaz de alterar su
actividad.
NATURALEZA QUMICA DE LAS ENZIMAS
Estructuralmente todas las enzimas son protenas simples o complejas. La parte protenica de las enzimas se
denomina apoenzima, la parte no protenica puede ser coenzima, si se separa fcilmente de la protena. Las
coenzimas pueden ser comunes a varias enzimas y no actan como catalizadores ya que se transforman en la
reaccin que catalizan y requieren de otra enzima para regenerar su actividad. La mayor parte de las
coenzimas estn relacionadas con las vitaminas. Si la parte no protenica se encuentra firmemente unida a la
protena por enlace covalente y no es posible separarla por dilisis, se denomina grupo prosttico. Hay
varios factores que afectan la velocidad de una reaccin catalizada por enzimas. Algunos de ellos son:
temperatura, pH, concentracin de sustrato, concentracin de enzima e inhibidores.
Temperatura. La velocidad de las reacciones qumicas aumenta al incrementar la temperatura, originando
aumento en la energa cintica y en las velocidades medias de las molculas con el resultado de una mayor
probabilidad de colisiones efectivas. Sin embargo, las enzimas se inactivan y desnaturalizan a temperaturas
elevadas. La mayor parte de las enzimas tienen una temperatura ptima, en la cual catalizan con una
velocidad mxima.
pH. La actividad de la mayora de las enzimas depende del pH debido a la participacin de iones [H +] o iones
[OH-] en las reacciones, adems que se afecta la de los grupos funcionales. La mayora de las enzimas tienen
un pH ptimo en el cual su actividad es mxima.
S + E [ES] P + E
La velocidad de formacin (Vf) del complejo [ES] depende de V1 mientras que la velocidad de degradacin
(Vd) depende de V2 + V3. Por lo tanto en el equilibrio tenemos:
Vf = Vd es decir: V1 = V2 + V3
Sustituyendo sus valores nos queda: K1[E ES] [S] = K2[ES] + K3[ES]. Dividiendo ambos miembros entre
K1 y [ES] nos queda:
Simplificando:
Constante de Michaelis-Menten
La constante de Michaelis-Menten se utiliza como una medida de la afinidad entre la enzima y el sustrato,
aunque no es propiamente la constante de afinidad. La constante de Michaelis-Menten (Km) se define como la
concentracin de sustrato cuando la reaccin adquiere la mitad de su velocidad mxima. Cuando esto sucede:
[E ES] = [ES]. Y por lo tanto, sustituyendo: Km = [S]. Si en una reaccin enzimtica se mantiene constante
la concentracin de la enzima y todos los dems factores que pueden modificar la actividad, se observa
experimentalmente que al aumentar la concentracin del sustrato, aumenta progresivamente la velocidad de
la reaccin hasta llegar a un mximo (velocidad mxima) despus del cual ya no se afecta la velocidad
aunque se trabaje a concentraciones ms altas de sustrato. En algunas enzimas se observa incluso una
disminucin en la actividad si se aumenta demasiado la concentracin de sustrato.
Durante mucho tiempo se pens que los catalizadores eran sustancias que actuaban por presencia debido a las
concentraciones tan pequeas y a que podan recuperarse inalterados al final de la reaccin. Sin embargo, se
sabe que la velocidad de reaccin de acuerdo a la Ley de Accin de Masas depende de su concentracin de
tal manera que la velocidad es directamente proporcional a la concentracin de enzima, lo que se expresa
como: V = K[E]. As que la grfica que se obtiene al expresar la velocidad de reaccin en funcin de la
concentracin de enzima es una recta con pendiente positiva.
Tubo
s 1 2 3 4 5 6 7
Reactivos
Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer
mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
de fosfatos 0.02M, pH=7
Buffer de fosfatos 0.02M, pH = 7 mL --- 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
Agua destilada mL 5.5 3 3 3 3 3 3
Preincubar 5 minutos a 25C 5C 25C 40C 50C 60C 90C
Posterior a este tiempo, agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubo
s 1 2 3 4 5 6 7
Reactivos
Enzima (solucin de amilasa) mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Agitar todos los tubos y colocar nuevamente cada tubo en su respectivo bao como se indic en la
primera tabla, incubar durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico (este reactivo desarrolla un
color rojo caoba en presencia de azcares reductores).
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfrar en bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.
4 40 C
5 50 C
6 60 C
7 90 C
Evidencias de aprendizaje
1) Trazar una grfica con los datos obtenidos, donde la absorbancia sern las ordenadas y la T las abscisas.
Tubos
Reactivos
1 2 3 4 5 6
Sustrato (sol. de almidn 8 mg/mL) --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
mL
Buffer de fosfatos al pH indicado 7 5 6 7 8 9
m 5 4 4 4 4 4
L
Preincubar a 40C por 5 minutos
Tubos
Reactivos
1 2 3 4 5 6
Enzima (sol. de amilasa) --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
mL
Agitar los tubos e incubar nuevamente en el bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico.
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfrar en un bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.
1 7 Blanco
2 5
3 6
4 7
5 8
6 9
Evidencias de aprendizaje
1) Trazar la grfica correspondiente donde las absorbancias sern las ordenadas y el pH las abscisas.
2) Basndose en sus resultados diga Cul es el pH ptimo de la amilasa?
3) Cul es el azcar que se libera en la hidrlisis de este polisacrido?
Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en el bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico.
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfriar en un bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 8 como blanco
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.
Reactivos Tubos 1 2 3 4 5 6
Sustrato almidn 8 mg/mL en Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL --- 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Buffer de fosfatos 0.02M, pH=7 mL 1 1 1 1 1 1
Agua destilada mL 5.5 4.9 4.8 4.6 4.2 3.4
Preincubar a 40C durante 5 minutos
Agregar la enzima conservada en hielo, como se indica en la tabla siguiente:
Tubos 1 2 3 4 5 6
Reactivos
Solucin de enzima (amilasa) mL --- 0.1 0.2 0.4 0.8 1.6
Agitar todos los tubos e incubar nuevamente en bao Mara a 40oC, durante 15 minutos.
Agregar a todos los tubos, 1 mL del reactivo de cido 3,5 dinitrosaliclico.
Agitar bien y colocar en bao Mara a ebullicin durante 10 minutos.
Retirar y enfrar en un bao de hielo.
Leer en el espectrofotmetro a una longitud de onda de 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.
Evidencias de aprendizaje
1) Trazar una grfica con base en sus resultados con los valores de absorbancia en las ordenadas y la
concentracin de enzima expresada en mg/mL en las abscisas e interpretar la grfica obtenida.
PRCTICA No. 8
GLCIDOS
Los glcidos o carbohidratos se definen como derivados aldehdicos o cetnicos reales o en potencia de
alcoholes polivalentes que poseen en su molcula uno o ms carbonos asimtricos. Estos compuestos se
encuentran presentes en todos los seres vivos, en cantidades variables, desempeando importantes funciones
estructurales y energticas. Debe recordarse que todas las propiedades qumicas de los glcidos dependen
de sus grupos funcionales, o sea, grupos alcohol y grupo carbonilo (aldehdico o cetnico). Los glcidos se
clasifican, segn el nmero de compuestos hidrocarbonados simples que los constituyen, en 3 grupos;
monosacridos, oligosacridos y polisacridos. Los monosacridos no se pueden desdoblar por hidrlisis en
compuestos ms sencillos. A su vez se subdividen, segn el nmero de carbonos que contengan, en: triosas,
tetrosas, pentosas, hexosas, etc. Los oligosacridos, por hidrlisis, dan pocas molculas de monosacridos.
En la naturaleza existen varios disacridos (sacarosa, lactosa, maltosa etc.) y unos cuantos trisacridos,
tetrasacridos y pentasacridos libres. Se pueden obtener por sntesis qumica en el laboratorio o por
degradacin hidroltica de polisacridos. Los oligosacridos poseen propiedades fsicas similares a las de los
monosacridos. Los polisacridos, por hidrlisis dan muchas molculas de monosacridos. Desde el punto
de vista fisiolgico se dividen en dos grupos; polisacridos estructurales y polisacridos de reserva. Entre
los primeros tenemos en vegetales: la celulosa, los cidos pecticos y las hemi celulosas. En animales los ms
importantes son los llamados mucopolisacridos, tales como el cido hialurnico y el condroitin sulfato,
abundantes en varios tejidos y lquidos como el cuerpo vtreo del ojo, el cordn umbilical, el lquido sinovial,
tendones, cartlagos, etc. Entre los polisacridos nutrientes o de reserva los ms importantes son, en
vegetales, los almidones e inulina y en animales, el glucgeno.
Los glcidos reciben este nombre debido a que la mayor parte de ellos se caracterizan por tener sabor dulce.
Sin embargo, esta propiedad la presentan solamente los mono y oligosacridos, ya que los polisacridos son
generalmente inspidos. Otras propiedades que nos permiten diferenciar glcidos de bajo peso molecular
(monosacridos y oligosacridos) de los de elevado peso molecular (polisacridos), son su solubilidad en
agua y su capacidad para cristalizar.
Las propiedades qumicas de los glcidos dependen de sus grupos funcionales. Todos los glcidos poseen en
su molcula grupos alcohol y grupos carbonilo, ya sean aldehdicos o cetnicos. Sin embargo, en algunos
glcidos estos grupos pueden estar bloqueados y por lo tanto, su reactividad qumica estar ausente. Una
caracterstica qumica de los aldehdos y cetonas es su carcter reductor, todos los monosacridos u
oligosacridos que tengan libre el grupo aldehdico o cetnico sern reductores, mientras que los
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polisacridos y oligosacridos que tengan bloqueados estos grupos sern no reductores. Todos los glcidos
formados por varios azcares (oligo o polisacridos) se pueden hidrolizar por accin enzimtica o de cidos
dando como producto final los monosacridos y liberando los grupos reductores bloqueados. Existen varias
reacciones qumicas que se utilizan para la identificacin de los glcidos, algunas son generales y otras son
especficas para determinar tipo o incluso especficas para cada azcar. Entre las ms utilizadas tenemos: la
formacin de osazonas, esta reaccin es una de las de mayor utilidad para la identificacin de azcares por
ser especfica para cada azcar. La dan positiva tanto los monosacridos como los disacridos reductores
sirviendo para identificarlos el tiempo que tardan en formar la osazona correspondiente, la forma cristalina de
ellas, la solubilidad en caliente o en fro y los puntos de fusin.
Existen mtodos para la determinacin de las propiedades de los glcidos. Molish-Udranski es una reaccin
general para todos los glcidos, debido a que el cido sulfrico concentrado que contiene el reactivo hidroliza y
deshidrata a los azcares obtenindose furfural o hidroximetil furfural como producto final y estas sustancias
son capaces de reaccionar con el alfa naftol formando un compuesto colorido (violeta): Esta prueba es una de
las ms sensibles, la dan positiva soluciones de glucosa al 0.001%. Sin embargo, la reaccin no es especfica,
ya que la dan positiva los aldehdos, las cetonas, y algunos cidos orgnicos tales como el frmico, oxlico,
ctrico, etc. La reaccin de Fehling, se emplea para el anlisis cualitativo y cuantitativo de azcares se basan
en su propiedad reductora, aunque esta propiedad no sea especfica de ellos. Se sabe que los azcares
reductores son capaces de reducir diversos iones metlicos como el cobre, bismuto, mercurio, plata, etc.,
cuando se encuentran estos en solucin alcalina. Este tipo de reacciones son muy empleadas porque los
reactivos son estables, existe poca interferencia con otras sustancias, las reacciones son sensibles y puede usarse
la misma reaccin para un anlisis cualitativo o cuantitativo. El mecanismo de reaccin se lleva a cabo debido
a que algunos compuestos orgnicos que contienen uno o ms grupos alcohlicos en su molcula, en este
caso el tartrato de sodio, reaccionan en solucin alcalina con los hidrxidos metlicos, formando un complejo
soluble, el cual se disocia muy poco, pero los iones que deja en libertad son suficientes para que produzcan
las reacciones de coloracin. La formacin de este complejo es esencial para que se produzca un precipitado
con la mayor parte de los metales pesados. El reactivo de Barfoed es una solucin de acetato cprico en cido
actico y una vez ms, se determina la capacidad de los azcares para reducir el in cprico a cuproso (Cu2O).
Esta reaccin sirve para diferenciar un monosacrido de un disacrido, ya que los primeros a los tres minutos
reducen el reactivo y los disacridos necesitan ms tiempo para que se lleve a cabo la reaccin de reduccin,
ms o menos unos 15 minutos. La reaccin de Bial, sirve para diferenciar pentosas de hexosas, el reactivo
consiste en una solucin de orcinol en cido clorhdrico (HCl) concentrado con una pequesima cantidad de
cloruro frrico (FeCl3). El fundamento de esta reaccin, igual que la reaccin de Molisch, Seliwanoff y otras, se
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basa en la produccin de furfural o hidroximetil furfural cuando se calienta con cidos concentrados y la
reaccin de estos con otras sustancias dando productos coloridos, en este caso las pentosas dan color azul y
las hexosas dan color amarillo o caf. La reaccin de Seliwanoff sirve para diferenciar aldosas de cetosas.
Las cetosas reaccionan rpidamente mientras que las aldosas lo hacen lentamente. El reactivo es una
solucin de resorcinol 0.05% en HCl 1:3 recin preparado. Este compuesto es el que se condensa con el
furfural o sus derivados dando productos coloridos. El reactivo de lugol es una solucin de yodo en yoduro
de potasio. Este reactivo reacciona con algunos polisacridos como los almidones, glucgeno y ciertas
dextrinas formando un complejo de inclusin termolbil que se caracteriza por ser colorido, dando un color
diferente segn las ramificaciones que presenta la molcula.
Evidencias de aprendizaje
1) Cules de estos glcidos tienen estructura cristalina? Por qu?
Evidencias de aprendizaje
1) Por qu la glucosa, la manosa y la fructosa dan la misma osazona?
Tubo Solucin
1 Formaldehdo
2 Glucosa
3 Fructosa
4 Arabinosa
5 Sacarosa
6 Almidn
Agregar a todos los tubos 2 gotas del reactivo de Molisch-Udransky (solucin de alfa-naftol al 5% en
alcohol) y agitar para mezclar.
Aadir a todos los tubos en la CAMPANA DE EXTRACCIN 1 mL de H 2SO4 (cido Sulfrico)
PRECAUCIN!, estratificando (inclinando el tubo y dejando resbalar el cido LENTAMENTE por las
paredes). La reaccin es positiva si aparece en la interfase un anillo de color violeta.
Registrar sus resultados en la tabla siguiente.
Evidencias de aprendizaje
1) Diga por qu la solucin de formaldehdo da positiva la reaccin.
2) Se puede considerar como una reaccin til para diferenciar un glcido de otro? Por qu?
3) Qu utilidad puede tener la reaccin de Molisch-Udransky?
4) Escribir la reaccin que se efecta.
Tubo Solucin
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Arabinosa
4 Sacarosa
5 Almidn
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin durante 5 minutos.
Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Observar y registrar sus resultados en la tabla siguiente.
Resultado Clasificacin:
Propiedad de monosacrido, disacrido o
Tubo Solucin (precipitado rojo o color
reductor o no reductor polisacrido
azul)
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Arabinosa
4 Sacarosa
5 Almidn
Evidencias de aprendizaje
1) Qu azcares dan positiva la reaccin de Fehling?
2) Explicar por qu algunos azcares dan negativa la reaccin.
3) Mencionar 3 sustancias que usted considere puedan dar positiva la reaccin de Fehling y no sean azcares.
4) Escribir la reaccin que se efecta.
Tubo Solucin
1 Glucosa
2 Arabinosa
3 Lactosa
4 Maltosa
Colocar los tubos en bao Mara a ebullicin.
Observar y registrar el tiempo que tarda en aparecer el precipitado rojo de xido cuproso durante la
incubacin.
Registrar los resultados en la tabla siguiente.
Evidencias de aprendizaje
1) Explicar las diferencias observadas.
Resultados Clasificacin
Tubo Solucin
color minutos (aldosa o cetosa)
1 Glucosa
2 Fructosa
3 Agua
Evidencias de aprendizaje
1) Observar alguna diferencia en las soluciones?
2) Escribir la reaccin que se efecta.
En ambos tubos agregar una gota de lugol y registrar el color producido en cada uno de ellos.
Colocar el tubo que contiene el almidn en bao Mara a ebullicin durante 5 a 10 minutos.
Dejar enfriar a temperatura ambiente.
Observar lo que sucede con la coloracin.
Registrar sus resultados.
Evidencias de aprendizaje
1) Por qu el complejo almidn-yodo es termolbil?
2) Se puede considerar la reaccin del lugol caracterstica para cualquier polisacrido?
PRCTICA No. 9
OXIDACIONES BIOLGICAS
La Bioenergtica es la manera en que el ser vivo, utiliza y transforma la energa del medio ambiente. A estos
procesos qumicos y fsicos se les denominaba respiracin. Sin embargo para evitar ambigedades con el proceso de
la entrada y salida de aire de un compartimiento a otro, se aplica el concepto bioqumico de bioenergtica,
incluyendo este trmino los procesos fotosintticos. Todos los procesos qumicos que constituyen la respiracin
conducen a la oxidacin de sustancias denominadas metabolitos, hasta CO2 y H2O. Por regla general todas las
reacciones de oxidacin son exergnicas, es decir, liberan energa cuando se efectan; en ocasiones toda la energa
se libera en forma de calor, como cuando se quema u oxida un pedazo de madera. Sin embargo un organismo
viviente no es una mquina trmica y, por tanto, debe poseer un mecanismo enzimtico que le permita capturar y
almacenar la energa liberada en los procesos de oxidacin. La utilizacin o captura de la energa involucra la
participacin de enzimas especficas capaces de catalizar la conversin del ADP en ATP (reaccin endergnica).
Siempre que se efecta una oxidacin, simultneamente se efecta una reduccin. Es decir, cuando un compuesto
se oxida, otro forzosamente debe reducirse. Como son fenmenos que ocurren simultneamente se denominan
fenmenos de xido reduccin o reacciones REDOX.
La accin de una sustancia reductora como el hidrosulfito de sodio (NaHSO3), forma leucobases (incoloras)
cuando acta sobre colorantes oxidados como el azul de metileno (indicador de xido-reduccin). El proceso
inverso (oxidacin por prdida de hidrgeno) se puede realizar en diferentes condiciones y determinar el tiempo de
reaccin.
La mayor parte de la energa que utilizan los seres vivos deriva de los procesos de oxidacin, y en cada
oxidacin se desprende una determinada cantidad de energa que el organismo aprovecha para realizar las
funciones vitales y para efectuar fenmenos sintticos endergnicos. Todas las oxidaciones biolgicas se
caracterizan por su rapidez y por la suavidad con que se realizan, todas se llevan a cabo en medio acuoso, a pH
generalmente neutro y a bajas temperaturas. Esto hace pensar que todos estos procesos estn catalizados por
enzimas. Warburg fue uno de los primeros investigadores que trat de explicar las oxidaciones biolgicas
suponiendo una activacin del oxgeno. Actualmente se sabe que en los tejidos existe un sistema de enzimas
que contienen hierro, mediante el cual el oxgeno molecular se activa y acta como un agente oxidante. Wieland
Consideraba que el proceso bsico en la oxidacin de los metabolitos es la activacin del hidrgeno por la
accin de enzimas denominadas deshidrogenasas, las cuales transportan el hidrgeno a diferentes aceptores
que pueden ser el oxgeno u otros agentes oxidantes. Szent Gyrgyi concili las dos teoras al suponer que es
necesaria la activacin del hidrgeno y tambin la del oxgeno. Keilin supuso que interviene como eslabn
intermediario el citocromo. Sin embargo, las oxidaciones biolgicas no son tan sencillas, pues se ha
comprobado que en la oxidacin de cada metabolito interviene una gran cantidad de aceptores de hidrgeno. La
glucosa es el ms comn de los metabolitos debido a que es una molcula altamente reducida. Cuando se oxida
y pierde sus hidrgenos, la liberacin de energa de oxidacin no se realiza en forma brusca, sino que intervienen
varios transportadores de hidrgeno y se inicia por la accin de una deshidrogenasa especfica que no reacciona
directamente con el oxgeno sino que requiere de intermediarios como el NAD+, flavoprotenas y
citocromos. La DESHIDROGENASA SUCCNICA (DHS) cataliza la siguiente reaccin:
Por otro lado para la obtencin de la fraccin mitocondrial del hgado de ratn, se tiene que conocer que
el tejido heptico se dispersa en soluciones isotnicas, el ncleo y las mitocondrias permanecen relativamente
inalterados y pueden separarse con facilidad por centrifugacin diferencial.
La citocromo-oxidasa es la ltima enzima de la cadena respiratoria y es la responsable de la activacin del
oxgeno para oxidar a los citocromos. Tanto los citocromos como la citocromo-oxidasa son metaloprotenas
(porfirinas). La citocromo-oxidasa se caracteriza por su elevada sensibilidad al cianuro (CN) y al monxido de
carbono (CO). En el ao de 1885 Ehrlich report la reaccin del indofenol. Observ que inyectando alfa naftol y
dimetil-para-fenilendiamina en animales se formaba en los tejidos una sustancia azul llamada azul de indofenol. La
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enzima se denomin indofenol-oxidasa, pero posteriormente se ha podido comprobar que esta enzima slo oxida al
citocromo c, el cual a su vez oxida al indofenol; por lo cual ahora se le conoce como citocromo-oxidasa.
Para comprobar el paso de sal ferrosa a sal frrica, repetir las reacciones con K3[Fe(CN)6] al 0.5% y
KSCN al 0.5% en los cuadrantes inferiores del mosaico.
Registrar los resultados (positivo, si observa presencia de sales ferrosas o frricas o negativo si no
observa nada) en la tabla siguiente.
Solucin K3[Fe(CN)6] KSCN
Sulfato ferroso
Sulfato frrico
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir las reacciones de identificacin que se han efectuado en cada caso.
2) Si el KMnO4 es capaz de oxidar al sulfato ferroso, Qu compuesto se reduce?
3) Escribir la reaccin de xido-reduccin que se ha efectuado.
Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin qumica que se ha efectuado en cada caso.
REACCIONES BIOLGICAS DE OXIDO-REDUCCIN
EXPERIMENTO 3. OBTENCIN DE LA FRACCIN MITOCONDRIAL DEL TEJIDO
HEPTICO
Sacrificar un ratn, extraer el hgado y depositar en un mortero fro.
Macerar hasta obtener una masa homognea.
Aadir gradualmente 7 volmenes de KCl (Cloruro de Potasio) 0.15 M fro.
Vaciar el contenido del mortero en un tubo Falcon de 15 mL.
Centrifugar a 500 rpm durante 15 minutos a 4oC.
Separar el sobrenadante a otro tubo Falcon limpio, aforar a 7 mL con KCl 0.15M y nuevamente centrifugar
a 3000 rpm durante 15 minutos a 4oC.
Durante este tiempo de centrifugacin, preparar un tubo de ensaye con la etiqueta de SOBRENADANTE
DE HGADO y otro tubo de ensaye con la etiqueta de SUSPENSIN DE HGADO y mantenerlos en
fro. Estos sern utilizados ms adelante.
Terminado el centrifugado, separar el sobrenadante en el tubo de ensaye con la etiqueta de
SOBRENADANTE DE HGADO y conservar en fro.
Posteriormente, el residuo o pellet que quede en el Tubo Falcon aadir 7 mL de KCl 0.15M para resuspender
y vaciar en el tubo de ensaye con la etiqueta de SUSPENSIN DE HGADO. Conservar en fro.
EXPERIMENTO 4. DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA SUCCINATO
DESHIDROGENASA.
Preparar una serie de 6 tubos de ensayo, etiquetar y numerar del 1 al 6.
Agregar los reactivos segn se indica en la tabla siguiente:
Reactivo 1 2 3 4 5 6
Tubo
Azul de metileno 0.002M mL 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
Succinato de sodio 0.1M mL --- 0.5 0.5 --- 0.5 0.5
Malonato de sodio 0.1M mL --- --- 0.5 --- --- 0.5
Agua destilada mL 1.5 1.0 0.5 1.5 1.0 0.5
Suspensin de hgado mL 0.5 0.5 0.5 --- --- ---
Sobrenadante de hgado mL --- --- --- 0.5 0.5 0.5
Mezclar bien el contenido de cada tubo y aadir
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Evidencias de aprendizaje
1) Escribir la reaccin de formacin del azul de indofenol.
2) Explicar por qu no se us vaselina en este experimento.
3) Explicar sus resultados sobre la base del anlisis del contenido de cada tubo.
PRCTICA No. 10
LPIDOS
Este es un conjunto heterogneo de molculas orgnicas cuyas propiedades comunes son su insolubilidad en
agua y solubilidad en solventes no polares como el benceno, cloroformo, ter, etc. Por lo que este grupo
incluye sustancias de muy diversa estructura. Suelen ser molculas de nmero relativamente alto de tomos
de carbono e hidrgeno y bajo en tomos de oxgeno; ciertos lpidos tambin poseen tomos de fsforo,
nitrgeno y azufre en su molcula. Cualquier clasificacin presenta sus limitaciones y la nomenclatura puede
producir falsas interpretaciones ya que idntica terminologa ha sido empleada por diferentes autores para
denominar a distintos grupos de lpidos. Los lpidos son los compuestos ms recientemente estudiados por
ejemplo: prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos, etc., ya que este tipo de sustancias hace poco se
consideraban complejas y de poco inters. Las funciones de los lpidos son muy variadas y las ms aceptadas
actualmente son las siguientes:
a) Funcin estructural, principalmente en las membranas celulares,
b) Actan como material energtico y de reserva,
c) Intervienen en el transporte de compuestos energticamente activos,
d) Componentes protectores de la pared celular de ciertas bacterias, plantas, insectos y vertebrados,
e) Sustancias de gran actividad biolgica como vitaminas y hormonas; las cuales se consideran como
verdaderos reguladores metablicos,
f) Actan como aislante trmico y proteccin alrededor de determinados rganos
Una de las formas de identificacin en la prctica es la reaccin de Hanus a travs del grado de insaturacin
de los cidos grasos que forman parte de un lpido es uno de los factores determinantes de sus propiedades
fsicas, qumicas y fisiolgicas. Se ha observado que aparecen ms dobles enlaces en los triacilgliceroles de
almacenamiento y en los lpidos estructurales cuando la temperatura ambiente disminuye. Los dobles
enlaces disminuyen el punto de fusin por lo que se cree que sea un mecanismo del organismo para impedir
la cristalizacin de los lpidos en los tejidos. El reactivo de Hanus es una solucin de yodo y bromo que
nos permite determinar el grado de insaturacin de un lpido midiendo la capacidad que tiene para fijar
halgenos en su molcula. Una de las reacciones ms usadas para la identificacin de acilglicridos es la
formacin de acrolena o aldehdo acrlico, el cual se puede obtener por deshidratacin del glicerol o de
cualquier glicrido y se reconoce fcilmente por su fuerte olor acre caracterstico.
En esta prctica de lpidos no podemos dejar de mencionar a las membranas ya que hacen posible la
existencia de organismos complejos porque separan las clulas en el interior de los tejidos y los organelos
celulares, formando compartimientos con propiedades fisicoqumicas diferentes, lo que permite una diferente
Evidencias de aprendizaje
1) Se puede considerar esta reaccin general para cualquier lpido? Por qu?
2) Escribir la reaccin que se ha efectuado.
Evidencias de aprendizaje
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MEDICINA, IPN
Reactivo Tubo 1 2 3 4
Agua destilada mL 5 5 5 5
Azul de metileno ms monoestearato de glicerilo en butanol mL 2 --- --- ---
Azul de metileno ms fosfolpidos en butanol* (VER NOTA) mL --- 2 --- ---
Evidencias de aprendizaje
1) Observ el paso del colorante en todos los tubos? Explique a qu se debe esa diferencia.
PRCTICA No. 11
CIDOS NUCLEICOS
El control de todos los procesos vitales en la forma tan ordenada que realiza una clula, como son la
transformacin de energa en sus diferentes formas, la sntesis de molculas propias, la degradacin de los
metabolitos, el transporte de diferentes materiales a travs de sus membranas, la formacin de nuevas clulas, la
diferenciacin celular, la creacin de nuevos seres, etc.; se puede explicar debido a la existencia de protenas
especficas, fundamentalmente enzimas. Sin embargo, para la biosntesis de protenas las molculas que
poseen la informacin necesaria son el cido desoxirribonuclico (DNA) y el cido ribonuclico (RNA). Estas
molculas son los llamados cidos nuclicos. Rompiendo la mxima bioqumica de que todas las enzimas son
protenas, se descubri que algunos RNA pueden funcionar como catalizadores. Los cidos nuclicos reciben
este nombre debido a que en el ao de 1871 el qumico suizo Friedrich Miescher logr aislar del ncleo
celular una sustancia que llam nuclena, la cual debido a su carcter cido se denomin posteriormente cido
nucleico.
Sin embargo, existen otros tipos de cidos nuclicos. El cido desoxirribonuclico se encuentra
fundamentalmente en el ncleo y es el que posee la informacin gentica y la transmite al citoplasma y por ser
capaz de replicarse puede transmitir la informacin de padres a hijos. En la clula, fuera del ncleo,
normalmente existen tres tipos de cidos ribonuclicos que son: el cido ribonuclico ribosomal (RNAr), el
cido ribonuclico mensajero (RNAm), y el cido ribonuclico soluble o de transferencia (RNAt). El RNAr se
encuentra en los ribosomas y su peso molecular es de 2 000 000. El RNAm tiene un peso molecular de 300 000,
se forma en el ncleo y lleva la informacin al citoplasma. El RNAt tiene un peso molecular de 25 000 a 30
000 y se encuentra disuelto en el citoplasma. El DNA es una de las biomolculas ms grandes que se conocen
hasta ahora y su peso molecular es mayor a un billn.
Tanto el DNA como el RNA se encuentran asociados con protenas fuertemente bsicas (histonas o
protaminas) formando las llamadas nucleoprotenas. La estructura qumica es similar en todos los cidos
nuclicos, todos estn constituidos por bases pricas, bases pirimdicas, pentosa y cido fosfrico. El DNA
tiene como bases pricas adenina y guanina, como bases pirimdicas, citosina y timina, como pentosa la 2-
desoxiribosa y cido fosfrico H3PO4. Los cidos ribonuclicos tienen como bases pricas la adenina y
guanina y como bases pirimdicas uracilo y citosina, como pentosa la Dribosa y H3PO4.
Los cidos nuclicos son macromolculas formadas por la unin de varios nucletidos. Un nucletido se puede
considerar como un ster fosfrico de un nuclesido, que es la unin de una base prica o pirimdica con
una pentosa. Los mononucletidos se unen entre s por medio de un enlace fosfodiester 3- 5, formando los
polinucletidos.
Por otro lado cuando se desea purificar una sustancia se deben seleccionar las clulas o tejidos que se van a
utilizar como materia prima. En el caso del DNA esta seleccin es en especial importante porque el contenido
de DNA es pequeo en la mayor parte de las clulas. La clula ideal ser aquella que tenga una relacin
ncleo/citoplasma alta, como en los linfocitos y clulas del tumor asctico de Ehrlich. Sin embargo, no es
fcil obtener este tipo de clulas por lo que frecuentemente se usan rganos tpicamente linfoides como el timo
y el bazo. El primer paso en la extraccin del DNA es la homogeneizacin del tejido. Este paso puede
degradar en parte la molcula del DNA si no se toman las precauciones necesarias, la solucin reguladora es de
citrato 0.01M y NaCl 0.14M, a pH de 7.2 a 7.4; la fuerza inica de esta solucin hace insoluble a la
desoxirribonucleoprotena. Si se centrifuga este homogeneizado, en el residuo quedarn los restos celulares y
las desoxirribonucleoprotenas insolubles. En el sobrenadante se encuentran compuestos solubles como la
mayor parte de los cidos ribonuclicos.
Al homogeneizar el tejido se liberan las enzimas de los lisosomas, entre ellas la DNAasa, la cual hidroliza el
DNA. Se sabe que el Mg++ es indispensable para la actividad de esta enzima; si en la solucin existe citrato,
ste se une al Mg++ e impide la accin de la DNAasa. Otra forma de evitar la accin hidroltica de la enzima
es trabajar a temperaturas bajas (0C a 2C). El siguiente paso en la purificacin est basado en que las
desoxirribonucleoprotenas y el DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, mientras que la
mayor parte de las protenas precipitan en estas condiciones. Si el residuo se suspende en solucin de NaCl
2.6M y se centrifuga, el residuo insoluble estar formado fundamentalmente por protenas, mientras que el
DNA permanecer en solucin. Este DNA se puede precipitar selectivamente por la adicin selectiva de 2
volmenes de alcohol etlico al 95% formndose un precipitado blanco fibroso, el cual se puede recoger por
rotacin de un agitador de vidrio con pequeos salientes.
Existen varios mtodos para identificar y cuantificar a los cidos nuclicos. El mtodo ms utilizado es el
espectrofotomtrico, el cual est basado en que tanto el DNA como el RNA absorben a 260 nm. La absorbancia
es proporcional a la concentracin del cido, por lo tanto, el medir la absorbancia es un mtodo cuantitativo
muy sensible y sencillo, pero no distingue entre DNA y RNA. Es de gran utilidad cuando las muestras estn
puras. Una reaccin muy utilizada para identificar y cuantificar DNA es la llamada reaccin de Dische, la cual
est basada en que el reactivo de difenilamina reacciona especficamente con el DNA dando una coloracin
azul cuya intensidad es proporcional a la concentracin de DNA. En realidad, la especificidad de esta
reaccin no es absoluta, ya que la difenilamina es un reactivo especfico para las 2-desoxipentosas en general,
pero en condiciones normales la cantidad de azcares capaces de interferir es despreciable.
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA MDICA I
AGOSTO-DICIEMBRE 2017
= =
69
DEPTO. DE FORMACIN BSICA DISCIPLINARIA ESCUELA SUPERIOR DE
MEDICINA, IPN
Agregar 300 mL de solucin reguladora de Citrato 0.01M-NaCl 0.14M, pH=7.2 fra, en un vaso de
licuadora previamente enfriado.
Hacer funcionar la licuadora a baja velocidad y aadir los trozos de bazo de todos los equipos, esperar a
que se homogenice completamente el primero antes de aadir el segundo y as sucesivamente.
Terminada la adicin, continuar homogeneizando por 30-60 segundos ms.
Vaciar a tubos Falcon de 50 mL teniendo cuidado de tarar perfectamente los tubos opuestos
PRECAUCIN! (CONSULTE A SU MAESTRO).
Centrifugar a 5000 rpm durante 15 minutos.
Agitar el tubo hasta obtener un completo homogenizado. El DNA es soluble en esta solucin mientras que
la mayor parte de las protenas son insolubles.
Centrifugar a 8000 rpm durante 30 minutos.
Evidencias de aprendizaje
1) Explicar por qu se utiliz bazo como materia prima y no otro rgano cualquiera.
2) Sera conveniente utilizar solucin reguladora de fosfatos para la extraccin del DNA? Por qu?
3) Por qu es conveniente trabajar durante toda la extraccin a baja temperatura?
[DNA]
Tubo Absorbancia
mg/mL
1 1
2 0.5
3 0.25
4 0.125
5 -------- Blanco
6 Problema
Evidencias de aprendizajes
1) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde las absorbancias sern las ordenadas y los mg de
DNA las abscisas.
2) Interpolar la absorbancia del tubo No. 6 para encontrar la concentracin de DNA (mg/mL) y calcular la
cantidad total de DNA en su problema.
1) Construir la curva tipo con los datos de la tabla, donde las absorbancias sern las ordenadas y los mg de
RNA las abscisas.
2) Interpolar los valores de absorbancia de su problema y determinar la concentracin real en mg/mL.
Tubo
Reactivo 1 2 3 4 5 6
Buffer de acetato 0.1M pH 4.0 mL 7 7 7 7 8 8
Reactivo molibdato al 2.5% mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solucin de vitamina C al 1% reciente mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Agua destilada mL 2
Solucin tipo 1 M/mL 2
Solucin tipo 2.5 M/mL 2
Solucin tipo 5 M/mL 2
Problema DNA 1
Problema RNA 1
Evidencias de aprendizajes
1) Construir la curva tipo para fosfato con los datos de la tabla, donde las absorbancias sern las ordenadas y
los M/mL de las soluciones tipo las abscisas.
2) Cmo afecta el medio cido al enlace 3-5dister fosfato?
3) Cmo afecta el medio alcalino al enlace 3-5dister fosfato?