PROBLEMAS DE INHIBICIN

1. Se estudia la cintica de una enzima en ausencia y presencia de un inhibidor A, a

una concentracin 10 mM. La velocidad inicial viene dada en funcin de la
concentracin de sustrato. Los datos obtenidos son:

[S] (mM) V (mM min-1)

Sin inhibidor Inhibidor A
1.25 1.72 0.98
1.67 2.04 1.17
2.50 2.63 1.47
5.00 3.33 1.96
10.00 4.17 2.38

a. Determina Vmax y KS en ausencia y presencia del inhibidor

b. Qu tipo de inhibicin se produce?
c. Calcula la constante de disociacin (Ki) de la reaccin de inhibicin.
Solucin:
Graficar 1/v versus 1[S]
1.2

0.8 y = 0.8582x + 0.3369

0.6 1/Vo
1/Vi
0.4

0.2 y = 0.4843x + 0.1951

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

Sin inhibicin
1 1
Vmax = = = 5.13mM / min
b 0.1951
K S = Vmax * (m ) = 5.13 * 0.4843 = 2.48mM

Con inhibicin
1 1
app
Vmax = = = 2.97 mM / min
b 0.3369
K Sapp = Vmax
app
* (m ) = 2.97 * 0.8582 = 2.55mM

Comaprando:
Vmax > Vmax
app

K S K Sapp
Por lo tanto es una INHIBICIN NO-COMPETITIVA

KI =
[I ] =
10mM
= 13.75mM
Vmax 5.13mM / min
app
1 1
Vmax 2.97mM / min

2. En un experimento se midi la tasa inicial de una reaccin enzimtica, v, a varias

concentraciones de substrato [S]. La concentracin de la enzima es 10 nM. Se grafic
1/v versus 1/[S] y se observ una lnea recta en la cual el intercepto-y es 0.005 nM-1 seg
y la pendiente es 200 seg. Cul es el valor de KM y el de Vmax para esta reaccin
enzimtica? Cul es el valor de kcat para esta enzima? Determine el coeficiente de
especificidad? 30 M de un inhibidor, E, es adicionado y se observ que el intercepto-
y es 0.0065 nM-1 seg y la pendiente es 260 seg. Qu tipo de inhibicin se observ?
Cul es el valor de Ki para el inhibidor con esta enzima?

Solucin:
Se observa que se utiliz la ecuacin de Lineweaver-Burk
1 KM 1 1
= +
v Vmax [S ] Vmax
1/v

1/Vmax KM/Vmax

Los datos del problema son:

m = 200 s -1/KM
1/[S]
b = 0.005 s nM-1
1
Vmax = = 200 nM s 1
0.005
K M = 200 Vmax = 200 200 = 40,000 nM
Sabemos que Vmax = kcat [E]t, por lo tanto
V 200 nM s 1
k cat = max = = 20 s 1
[E ]t 10 nM
El coeficiente de especificidad es:
k 20 s 1
= cat = = 0.0005 s 1 nM 1
K M 40,000 nM
En presencia del inhibidor tenemos
m = 260 s
b = 0.0065 s nM-1
 1
app
Vmax = = 153.846 nM s 1
0.0065
K Mapp = 260 Vmax = 260 153.846 = 40,000 nM

Se observa que: K M = K Mapp , y Vmax > Vmax

app

Por lo tanto se trata de una Inhibicin no competitiva, entonces

Vmax
app
Vmax =
[I ]
1 +
K i
Despejando Ki

Ki =
[I ] =
30,000
= 100,000 nM
V max 200
app
1 1
V max 153.846

3. Para una reaccin enzimtica en presencia de un inhibidor competitivo, la

velocidad de reaccin observada a una concentracin de sustrato [S]i = 1.5 x 10-3 M es
igual a la velocidad de reaccin sin el inhibidor a una concentracin de sustrato [S]0 =
7.69 x 10-5 M. Calcule la constante de inhibicin, Ki, del inhibidor si su concentracin
[I] = 3.7 x 10-4 M.

Solucin:

Para un inhibidor competitivo la relacin [S]0 a [S]i para observar una misma velocidad es:

[S ]i = [S ]0 1 + [I ]

Ki
Despejando Ki

[I ]
4
3.7 x10 M 5
Ki =
[S ]i 1 = 1.5x10 3 M = 2x10 M
1
[S ]0 7.69 x10 5 M