UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE MEDICINA HIPOLITO UNANUE

ASIGNATURA: EMBRIOLOGIA Y GENETICA HUMAN

Dra. Ismenia Gamboa Or

Especialista en Citogentica Clnica

2017
 Contenido

DEFINICIN
PARTES DEL CROMOSOMA
OBTENCIN DE CROMOSOMAS
SSTEMAS DE BANDAS - IMPORTANCIA
NOMENCLATURA E INTERPRETACIN DE
CARIOTIPOS
 ADN - CROMOSOMA
REGIN CORTA DE ADN

PAQUETE DE NUCLEOSOMA

PAQUETE DE SOLENOIDES

PARTES DE UNA SECCIN CROMATINA

CONDENSACION DEL
CROMOSOMA METAFSICO

CROMOSOMA METAFSICO
NUCLEOSOMA SOLENOIDE
 CROMOSOMAS HUMANOS

NMERO DE CROMOSOMAS:
CLULA SOMTICA = 2n = 46 cromosomas = Diploide
GAMETOS = n = 23 cromosomas = Haploide
22 pares AUTOSMICOS
01 par SEXUAL (X,Y)

CLASIFICACIN: (Convencin Denver 1960)

TAMAO: ORDEN DECRECIENTE
POSICIN DEL CENTROMERO
GRUPOS: AUTOSMICOS: A ,B, C, D, E, F, G,
SEXUALES: X e Y
 NMERO DE CROMOSOMAS
EN DIFERENTES ESPECIES
ESPECIE Nmero de cromosomas
Hormiga 1
Myrmecia pilosula
Mosca de fruta 8
Drosophila melanogaster
Chimpance 48
Pan troglodytes
Gallina 78
Gallus gallus
Mariposa 380
Helecho 1260
Ophioglussum reticulatum
Protozoario 1600
Aulacantha scolymantha
2. MORFOLOGA Y PARTES DE LOS CROMOSOMAS

Satlite
pp
Talo
Centromero
p

q
qq

ACROCNTRICO
Telmero
Secuencias repetidas en tandem (TTAGGG)
 TELOMEROS

Estructuras especializadas que forma los extremos de los

cromosomas eucariontes. Le dan ESTABILIDAD

Los ADN telomricos son regiones no codificantes.

Estn repetidos (TTAGGG)n en tandem RICAS EN GUANINA:

10 Kb en clulas somticas
20 Kb en clulas de placenta

La longitud de las repeticiones est relacionada con el

envejecimiento y dao celular.
 TELOMEROS
FUNCIONES:

1. Evitar la fusin y degradacin cromosmica.

2. Mantienen la estabilidad cromosmica.

3. Intervienen en el apareamiento de los cromosomas

homlogos y el entrecruzamiento durante la profase en
la Meiosis I.

4. Sirven como un reloj mittico.

CLASIFICACIN
CROMOSOMAS
HUMANOS
 PREPARACIN Y OBTENCIN DE
CROMOSOMAS METAFSICOS

MUESTRA:
Sangre Perifrica:
(Cultivo de linfocitos)
Mdula Osea
Piel
Lquido Amnitico
Vellosidades Coriales
Sangre de Cordn Umbilical Jeringa heparinizada
Tumores Slidos
 PREPARACIN Y OBTENCIN DE
CROMOSOMAS METAFSICOS

MEDIOS DE CULTIVO:
Mc Coys
TC 199
F 12 / F 10 S
I
RPMI 1640 E
M
B
ADICIONAR: R
A
Suero de Bovino Fetal
Fitohemaglutinina
Antibitico
OBTENCIN DE CROMOSOMAS METAFSICOS
COSECHA:
COLCHICINA

SOLUCIN HIPOTNICA
CENTRIFUGACIN (KCl)

FIJADOR (CARNOY)

COLORACION GIEMSA
PREPARACIN Y OBTENCIN DE CROMOSOMAS METAFSICOS

COLORACIN:
CONVENCIONAL: GIEMSA
BANDEO:
Bandas G Bandas Q
MICROFOTOGRAFIA
Bandas C Bandas R
ARMAR CARIOGRAMAS
Bandas NOR
Bandas G-11
ICH
FISH
ALTA RESOLUCIN
REGIONES, BANDAS Y SUB-BANDAS
 BANDEO GTG
BANDAS G
Summer, 1971
UTILIZA:
TRIPSINA (desnaturaliza las protenas)
Las bandas G (+) corresponden a CROMATNA LIBRE
para unirse al colorante.
Las bandas G (-) son DNA cubierto o no disponible
y en parte extrado.
COLORANTE:
* GIEMSA derivado TIAZINAS, son molculas
planas con carga (+) que, interactan con GRUPOS
FOSFATOS ADN por fuerzas inicas
CARACTERSTICAS DE LAS BANDAS G
BANDAS GTG

Bandas G- (claras) Bandas G+ (oscuras)

DNA rico en GC DNA rico en AT

Replicacin temprana Replicacin tarda

GENES DE TEJ. ESPECIFICO
GENES ESTRUCTURALES
(ej. gen de la -globina),

Muchos genes Pocos genes

 CARIOGRAMA: BANDEO GTG

1 A2 3 4 B 5

6 7 8 9 10 11 12
C

13 14 15 16 17 E 18
D

F G X Y
19 20 21 22
 BANDEO CBG

BANDAS C
PARDUE Y GALL, 1970
HETEROCROMATINA EN REGIN CENTRMERICA
(Extraccin del ADN no pericentromrica)
20% genoma humano

Se trata con : Hidrxido de Bario a 65C

OBSERVA: HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA de
distribucin pericntrica en todos los cromosomas 1, 9,16
excepto en el cromosoma Y (regin distal del brazo largo). Y
Tie: Constricciones secundarias cromosomas: 1, 9, 16, y el brazo
largo del cromosoma Y.
CARIOGRAMA
BANDEO CBG

Y
 BANDEO RHG

BANDAS R

DUTRILLAUX y LEJUENE 1971

Llamadas Bandas REVERSAS G, y Q.
Temperatura altas y colorante Giemsa.
Detecta: ADN rico en G-C (bandas oscuras).
Denatura el ADN rico en A-T
Utilidad: Muestra re-arreglos terminales (deleciones,
traslocaciones, etc) y polimorfismos de los cromosomas.
 BANDEO Q

BANDAS Q
CASPERSSON 1971
Colorante: Mostaza de quinacrina
dihidroclorato de quinacrina
Visualiza: Microscopio de fluorescencia
Fluorece: Presencia de ADN rico en A-T (Ellison y Barr 1972)
Las bases G-C rompen la fluorescencia (Comings 1975-1978)
Las protenas NO HISTONAS limitan el acceso a la zona G-C
(Pachmann y Riegler, 1972)
BANDAS NOR

Ferguson-Smith, 1961.
FUNDAMENTO:
Emplea plata amoniacal o nitrato de plata para teir regiones
de los organizadores nucleolares, que contienen ARNr
localizados. Para ver polimorfismo de los satlites.
Las regiones NOR se ubican en el tallo del satlite de los
cromosomas acrocntricos, correspondiendo a protenas NO
HISTONAS que aparecen con la sntesis del ARNr.
RESULTADOS: Las constriciones secundarias de los
cromosomas acrocntricos con satlite se tien en los tallos
con plata amoniacal.
ICH (INTERCAMBIO DE CROMATIDES HERMAN

Utiliza Bromo-deoxiuridina que sustituye a la

timidina Mediante autoradiografa
Se observa el intercambio entre los segmentos de
las cromtides hermanas.
Normalmente se visualiza de 6-9 intercambios por
metafase, y
Aumentan cuando se exponen a mutgenos o en
algunas enfermedades donde se observan los GAPS
sitios frgiles como brechas que no se tien bien.
 TCNICA DE BANDEO EN ALTA RESOLUCIN

CROMOSOMAS:
* PROMETAFASE
* RESOLUCIN DE 850 BANDAS ( 850 bandas)

DETECTA ALTERACIONES ESTRUCTURALES

SUBMICROSCPICAS:
* MICRODELECIONES
* MICROINVERSIONES, y
* REORDENAMIENTOS CROMOSMICOS
FISH HIBRIDACIN IN SITU POR FLUORESCENCIA

COMBINA: CITOGENTICA CLSICA CON LA GENTICA MOLECULAR.

Utiliza molculas fluorescentes para localizar genes o fragmentos de DNA,
mapea genes localizar anormalidades cromosmicas.
IDENTIFICA: REGIONES COMPLEMENTARIAS DE LOS CROMOSOMAS.
UTILIZA: SONDAS (secuencias de ADN conocidas) MARCADAS CON
FLUOROCROMOS QUE HIBRIDAN CON EL ADN PROBLEMA.
VISUALIZA: CROMOSOMAS METAFASE, PROFASE, e INTERFASE,
CLULAS COMPLETAS, TEJIDOS.
ANALIZA RAPIDAMENTE:
* GENES O REGIONES ESPECIFICAS DEL ADN
* CROMOSOMAS INVOLUCRADOS EN DIVERSAS ENFERMEDADE
PERMITE REALIZAR ESTUDIOS CITOGENTICOS EN FORMA
RETROSPECTIVA EN EMBRIONES O FETOS QUE HAN SIDO FIJADOS Y
QUE MUESTRAN ALTERACIONES EN EL FENOTIPOS
FISH (HIBRIDACION IN SITU POR FLORESCENCIA

Emplean sondas (PROBES) especficas para la

coloracin de determinados cromosomas, y
diagnostican anomalas cromosmicas.

FUNDAMENTO: A partir del ADNc o ADN

genmico. La sonda se marca y se aade por
hibridacin, y la seal se identifica por
autoradiografa o fluorescencia. Se observan
grnulos en la zona que hubo hibridacin
FISH
 FISH TIPOS DE SONDAS

1. SONDAS ESPECIFICAS DE UN LOCUS:

Hibridan una regin particular del gen.
Identifica microdeleciones
SPW y SA del(15)(q11q13) S. Wolf-Hirschhom del (4)(p16.3)
Retinoblastoma del (13q) S. Cri Du Chat del(5)((p15.3)
En ncleos interfsicos (muestras de clulas fijadas)
Identifican regiones pericentromricas.
Detecta regiones crticas que resultan de una translocacin. Ej.
Leucemia Mieloide Crnica t(9;22)
Leucemia aguda promieloctica t(15;17)
Sonda: marca los dos cromosomas 22 y un
cromosoma marcador derivativo del 22

mar

SONDA ESPECIFICA
DE UN L0CUS
FISH TIPOS DE SONDAS

2. SONDAS ALFOIDES O
CENTROMERICAS:
Contienen secuencias complementarias
de las secuencias repetidas que se
encuentran en los centrmeros de los
cromosomas.

Utilizan sondas de diferentes colores, para

cada cromosoma

Detecta anomalas numricas y

estructurales en cromosomas
Metafsicos o en Interfase.
 FISH TIPOS DE SONDAS

3. SONDAS PARA CROMOSOMAS

COMPLETOS:

Cada SONDA se hibrida a una

secuencia diferente a lo largo de todo
un cromosoma generando un
cariotipo espectral.

Se consiguen imgenes de un color

diferente para cada cromosoma.
Detecta anomalas numricas y
estructurales
Mujer con cariotipo y FISH normal, se uso sonda
para el locus D22S75 (S. de Di George)
46,XX.ish 22(q11.2)(D22S75X2)

Seal verde: control

interno marca el
cromosoma 22 en
22q13
Seal Roja: marca la
regin DiGeorge, en
22q11.2.
Cariotipo normal

SONDA UNIL0CUS
NIVELES DE RESOLUCIN EN BANDAS

350 bandas. Mdula Osea

450-550 bandas. Lquido Amnitico

550-750 bandas. Sangre Perifrica

750-850 bandas ALTA RESOLUCION
(cromosomas en prometafase)
 ANLISIS CROMOSMICO

Conteo de cromosomas: 20 30 clulas en metafase.

Sospecha de mosaicismo: Contar por cada metafase
alterada 5 metafases ms.
El patrn de bandas de cada cromosoma es especfico,
se compara con el IDEOGRAMA.

CARIOGRAMA: ordenamiento de los cromosomas por

pares del 1 al 23
HETEROMORFISMOS CROMOSMICOS

> Las diferencias interindividuales en el contenido de ADN de

los cromosomas se han precisado mediante la CITOMETRIA
DE FLUJO O MICRODENSITOMETRIA.

Existen cuatro grupos principales:

1. TAMAO DEL BRAZO q DEL CROMOSOMA Y:
FRECUENCIA: 10% de los hombres tienen el cromosoma
Y mas largo y mas corto que lo usual.
COLORACION: BANDAS Q Y BANCAS C.
 HETEROMORFISMOS CROMOSOMICOS
2. TAMAO DE LA HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA:
Variaciones en los cromosomas 1, 9, 16.
Tincin: BANDAS C.
3. POLIMORFISMOS DE LOS SATLITES:
Variaciones en los cromosomas 13, 14, 15, 21, 22.
Tincin: BANDAS Q Y NOR.
4. SITIOS FRGILES:
Rasgos estructurales de los cromosomas que se hacen
visibles en ciertas condiciones en el cultivo de tejidos.
Se heredan en forma codominante, por lo menos existen 20
sitios frgiles comunes y 18 sitios raros.
 SSTEMA INTERNACIONAL DE
NOMENCLATURA CITOGENTICA (ISCN) 2009

RESULTADO DE CONFERENCIAS INTERNACIONALES:

DENVER 1960 1 REUNIN

LONDRES 1963 CLASIFICACIN CROMOSOMAS GRUPOS A-G
CHICAGO 1966 SSTEMA ESTANDAR DE NOMENCLATURA
PARIS 1971 DESCRIPCIN DE BANDAS Y REGIONES
ISCN 1978 DOCUMENTO
ISCN 1981 BANDEO DE ALTA RESOLUCIN
ISCN 1985 DOCUMENTO
ISCN 1991 NOMENCLATURA CITOGENTICA DEL CANCER
ISCN 1995 NOMENCLATURA FISH
ISCN 2005 NOMENCLATURA CROMOSOMAS EN MEIOSIS
ISCN 2009 Nomenclatura del MLPA(Amplificacin de sondas mltiples
 SMBOLOS Y ABREVIATURAS

ace fragmento acntrico Upd disomia uniparental

c anomala constitucional rea rearreglo
cen centrmero g gap
chr cromosoma h heterocromatina
del delecin fra fragilidad
der cromosoma derivativo i isocromosoma
dic dicntrico inc cariotipo incompleto
dmin doble minut ins insercin
s satlite inv inversin
stk talo satelital mar marcador
t traslocacin tan tandem
pat origen paternal mat origen materna
p brazo corto del cromosoma q brazo largo del cromosoma
de novo cromosoma anormal el cual no ha sido heredado
add material adicional de origen desconocido
International System for Human Cytogenetics ISCN (2013)

:
> En cromosomas normales : Varn normal : 46,XY
Mujer normal : 46,XX
> Anomalas numricas : S. de Down : 47,XY,+21
S. de Klinefelter : 47,XXY
S. Turner : 45,X
> Anomalas estructurales : S. Cri-duchat : 46,XY,del(5)(p15)
S. de Down : 46,XX, der ( 14;21) (q10;q10),+21
Anomala en cromosoma sexual X : 46,X, r (X) (p13 q26)
S. Prader Willy: 46,XY, del(15)(q11q13)
 MOSAICOS
CONSTITUCIONAL: dotacin cromosmica al nacer
45,X 10 / 46,X X 20
45,X 15 / 47, XXX 10 / 46, XX 23
La lnea celular normal se indica al final, independientemente del tamao.
En las lneas celulares anormales, el clon mayor se indica en primer lugar.

ADQUIRIDAS: aparece en enf. Hematolgicas,tumores,etc

46,XX,t(8;21)(q22;q22) 12 / 45,X,-X,t(8;21)(q22;q22) 19 / 46,X,-X,+8t(8;21)(q22;q22) 5

La lnea celular normal, se indica al final, independiente de su tamao

Los clones anormales, se indican en orden creciente de complejidad,
independientes a sus tamaos.
GRACIAS