2016

Facultad de Ciencias de la Salud

GUA DE TRABAJOS PRCTICOS DE HISTOLOGA

OBSTETRICIA Y PUERICULTURA

ALUMNO:

Docente: T.M. Adolfo Antonio Ros Alcorta

 GUA DE ACTIVIDADES DE LABORATORIO

NOMBRE:

C.I.:

DIRECCIN:

e-mail:

Telfono:

CARRERA: Obstetricia y Puericultura

SECCIN: GRUPO:

NOTA 1 NOTA 2

20% NOTA 1 80% NOTA 2 PROM:

2016

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 PRLOGO DE LA TERCERA EDICIN

Como parte de la formacin de Pregrado de los estudiantes de las Carreras de la Facultad de Ciencias de
la Salud, la enseanza de la Histologa o Anatoma Microscpica ha sido fundamental para la adecuada
comprensin del cmo aquellas estructuras anatmicas que forman nuestros sistemas de rganos estn
formadas por agrupaciones de clulas que les permiten desempear las funciones que caracterizan a los
tejidos, rganos y sistemas del organismo humano. La adecuada comprensin de esta organizacin
citohistolgica se apoya tanto en la enseanza terica de aquellos conocimientos desarrollados en los
casi 400 aos de historia de la Biologa Celular y la Histologa como en la ejecucin prctica de
actividades, en que la observacin al microscopio por parte de los estudiantes ser fundamental para
que adquieran mediante la visualizacin directa de preparados o de microfotografas el conocimiento y
correlacionen lo que ven con los contenidos tericos, observaciones que dejarn plasmadas mediante el
dibujo y anotaciones que deben realizar en esta Gua.

Dibujar lo observado, tal como histricamente hicieron los microscopistas, bilogos e histlogos antes
del desarrollo de la Fotografa, ayudan precisamente a comprender y fijar el conocimiento basado en la
experiencia implcito en la prctica de la observacin en estas sesiones de microscopa, desglosado en
captulos que dividen el aprendizaje en la Histologa de los 4 tejidos bsicos, y luego en Organologa o
Histologa de Sistemas. Al inicio de esta Gua se encuentran las Normativas pertinentes al adecuado
Trabajo en Laboratorio, divididas en reglas propias de los Laboratorios de la Universidad, y el Protocolo
de Lavado de Manos de la OMS, pertinente tambin a la adecuada labor en el interior de los
Laboratorios.

En esta Tercera Edicin, se ha mantenido el captulo de Microscopa y Uso del Microscopio que fuera
diseado en conjunto con la Prof. Mnica Meza para las Guas de Trabajos Prcticos de Histologa en
Tecnologa Mdica e HistoEmbriologa de Kinesiologa, para que los estudiantes logren utilizar
adecuadamente el microscopio en estas sesiones, y que adems se respalda en la enseanza de los usos
diagnsticos y de investigacin de la microscopa, comprendiendo que existen mltiples variedades de
microscopios con mecanismos de funcionamiento diferentes los que se complementan cuando
deseamos comprender la estructura y funcin de clulas, tejidos y rganos. Para facilitar la asociacin
de los contenidos que se vern durante el semestre, se dej la organizacin a partir de Sistemas de
rganos, eliminndose los resmenes de contenido que haba en cada captulo, y para cada preparacin
se dispuso un espacio para la descripcin de preparados que ser completado a medida que transcurra
el semestre, agregando los aspectos que sean vistos cada vez que las preparaciones sean nuevamente
utilizadas. Esto ser vlido especialmente cuando vea los preparados en el contexto de epitelio, tejido
conectivo y luego rganos. Este material, fruto del exhaustivo anlisis y esfuerzo de los profesores
partcipes del Curso de Histologa, ha sido preparado para complementar el aprendizaje y adecuada
comprensin de los procesos normales del organismo humano como base del entendimiento de las
alteraciones producidas en la enfermedad.

Esperamos les sea de gran utilidad a los estudiantes.

T.M. ADOLFO ANTONIO ROS-ALCORTA

Profesor de Histologa y Embriologa

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 NORMAS DE BIOSEGURIDAD
EN EL LABORATORIO

En la ejecucin de actividades prcticas de Laboratorio de Histologa, en razn de su seguridad y del

grupo de trabajo, usted tendr la obligacin de seguir y respetar las siguientes precauciones de
bioseguridad:

Deber ingresar al laboratorio con delantal blanco, pelo largo tomado (en el caso de los hombres,
idealmente corto), afeitado, y con las uas cortas, sin pintura. Esto tiene por finalidad mantener el
orden y limpieza de sus vestimentas, evitar que el pelo interfiera en la observacin al microscopio y
tambin disminuir los riesgos de accidentes en el laboratorio.

Al comienzo de cada actividad prctica se pasar asistencia, por lo que el tiempo mximo de retraso
para el ingreso a las actividades ser de slo 10 minutos. Pasado ese lapso, el alumno NO PODR
INGRESAR al laboratorio y quedar inasistente.

Se realizarn evaluaciones al inicio de cada actividad prctica y el llegar retrasado disminuye su

tiempo disponible para responder las evaluaciones. Por esto mismo todo retraso mayor de 10
minutos se evaluar con la nota mnima.

Las justificaciones de las inasistencias a los controles debern ser entregadas en la Secretara de la
Escuela correspondiente, en los plazos establecidos por el Reglamento Acadmico.

Al inicio de la evaluacin, recuerde llenar INTEGRAMENTE con LETRA IMPRENTA LEGIBLE todos sus
datos personales.

La hoja de evaluacin deber ser respondida nicamente con lpiz de pasta azul o negro. No se
aceptar responder con lpiz grafito ni con lpices de gel, de tinta o de otros colores que los
indicados.

Una vez terminado el tiempo asignado a las evaluaciones realizadas al ingreso del paso prctico, se
retirar a cada alumno o alumna la hoja de la evaluacin.

Los bolsos o mochilas quedarn en el mesn lateral del laboratorio, en los percheros o en los lockers
destinados para ello.

Ser OBLIGATORIO utilizar la Gua de Trabajos Prcticos durante la sesin de laboratorio.

Cada estudiante deber dibujar en la meencionada Gua los preparados que se estudiarn durante
el paso prctico, por lo que se recomienda cuenten con lpices de colores, sacapuntas, goma y lpiz
grafito, y lpiz de pasta color azul o negro para responder los controles escritos.

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 Cuando deba esperar su ingreso al laboratorio NO MANIPULE la ducha de emergencias que se
encuentra en el pasillo de circulacin.
Mantenga su telfono celular apagado dentro del bolso cuando se encuentre dentro del laboratorio.

Antes de ubicarse en su puesto de trabajo, lave cuidadosamente las manos siguiendo las
indicaciones referidas a lavado clnico.

Todo el material que use en el laboratorio debe considerarse como CONTAMINADO y, por lo
tanto, debe manejarse con cuidado, procurando no dejarlos en los mesones sino eliminarlos slo en
los recipientes dispuestos para ello.

En la eventualidad de cualquier accidente, por pequeo que parezca, debe comunicarse

inmediatamente al profesor a cargo de la actividad.

Respete siempre las indicaciones que se darn durante las primeras actividades prcticas respecto
al uso del mechero para la esterilizacin de asas, tubos u otros materiales.

Est estrictamente prohibido ingerir cualquier tipo de alimento o bebida en el laboratorio. Jams
debe sacar material contaminado o cultivos bacterianos fuera del laboratorio.

No haga bromas, ni permita que sus compaeros las hagan, con cultivos bacterianos o material
contaminado. Quien tenga un comportamiento inadecuado a las normas del laboratorio, deber
abandonar el laboratorio inmediatamente y quedar consignado en el acta de clases.

Cada alumno tendr asignado un microscopio, que deber cuidar y mantener funcionando de
acuerdo a las instrucciones de uso del microscopio adjuntas en esta misma Gua.

Para la limpieza del microscopio y las preparaciones, los alumnos deben contar con un pao de
batista.

A l inicio de cada actividad prctica se entregar una cantidad de preparaciones por mesn, las que
deben ser compartidas. Una vez terminado el paso prctico, las preparaciones deben ser entregadas
en la bandeja correspondiente, al profesor encargado.

Si extrava o rompe un preparado, debe informarlo inmediatamente. La reposicin de cada

preparacin histolgica tiene un costo de $15000, que sern cargados al estudiante o, de no hacerse
responsable quien hubiera roto o extraviado el mismo, el curso completo deber costear dicha
reposicin.

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 Ser responsabilidad de cada estudiante apagar el microscopio que utilice y dejarlo en la posicin
inicial.

Al terminar su trabajo prctico debe limpiar su rea de trabajo con la solucin desinfectante que se
le proporcionar. Su microscopio debe quedar igualmente limpio, apagado, desenchufado y
debidamente guardado.

Antes de abandonar el laboratorio lave cuidadosamente sus manos.

No lo olvide: RESPETAR LAS NORMAS DE BIOSEGURIDAD LE

PERMITE EVITAR ACCIDENTES Y RIESGOS INNECESARIOS

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 INSTRUCTIVO DE LAVADO DE MANOS

1. Aplicar una dosis de producto, extenderlo por toda la superficie de las manos y friccionarlas
hasta que queden secas (IB).

2. Cuando se laven las manos con agua y jabn, mojarlas con agua y aplicar la cantidad de
producto necesaria para extenderlo por toda la superficie de las mismas.

3. Frotarse enrgicamente ambas palmas con movimientos rotatorios y entrelazar los dedos para
cubrir toda la superficie. Enjuagarse las manos con agua y secarlas completamente con una
toalla desechable. Siempre que sea posible, utilizar agua corriente limpia. Utilizar la toalla para
cerrar el grifo (IB).

4. Asegurarse de que las manos estn secas. Utilizar un mtodo que no las contamine de nuevo.
Cerciorarse de que las toallas no se utilicen varias veces o por varias personas (IB). No emplear
agua caliente porque la exposicin repetida a ella eleva el riesgo de dermatitis (IB).

5. Para el lavado de las manos con agua y un jabn no antimicrobiano pueden emplearse jabones
simples lquidos, en pastilla, en hojas o en polvo. Las pastillas de jabn deben ser pequeas y
colocarse sobre rejillas que faciliten el drenaje (II).

IMPORTANTE: EL USO DE GUANTES NO SUSTITUYE AL

LAVADO DE MANOS
(FUENTE: DIRECTRICES OMS SOBRE HIGIENE DE LAS MANOS EN LA ATENCIN SANITARIA, 2009)

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8
 USO DEL MICROSCOPIO

El estudio prctico de la Histologa y la Embriologa basa su ejercicio principalmente en la

observacin al microscopio de las estructuras citohistolgicas componentes de los organismos vivientes.
Para ello, durante el desarrollo de las sesiones prcticas contar con un microscopio ptico que ser su
instrumento de estudio y le sern proporcionadas lminas de preparaciones histolgicas que deber
visualizar con el microscopio.

Antes de proporcionar las instrucciones de uso, se hace necesario recordar los componentes del
microscopio ptico.

Todo microscopio ptico se compone de dos sistemas:

Sistema ptico

Es el eje de observacin de objetos, y consta de los siguientes elementos:

1) Ocular: Lentes situadas cerca el ojo del observador, que amplifican la imagen del objetivo.

2) Objetivo: Lente ms cercana a la preparacin; amplifica la imagen del preparado histolgico. Puede
ser una lente nica o un conjunto de ellas, de diferentes aumentos, montados en un Revlver.
Habitualmente en el caso de un sistema de revlver, tiene los siguientes aumentos: 4x, 10x, 20x y 100x,
este ltimo objetivo es tambin conocido como lente de inmersin por requerir el uso de aceite de
inmersin para poder hacer la observacin de los preparados.

3) Condensador: Lente concentradora de rayos luminosos sobre la preparacin.

4) Diafragma: Estructura anular que regula la cantidad de luz que ingresa al condensador. Se comporta
como el iris del ojo.

5) Foco: Sistema de iluminacin (sea una ampolleta o espejos) que dirigen el haz de luz hacia el
condensador. En caso de ser una ampolleta, el microscopio tendr una fuente de poder controlada con
un interruptor de encendido, un reostato de regulacin de intensidad de la luz y un enchufe que debe
conectarse al sistema elctrico para que pueda encenderse.

Sistema Mecnico

1) Columna o Soporte: Tambin denominado Estativo, es la parte sobre la que se monta el sistema
ptico. Generalmente se compone de un Pie o base que sustenta todo el peso del microscopio dndole
estabilidad, y un brazo en que se montan el condensador, el sistema de objetivos y oculares, y la platina
de observacin.

2) Platina: Superficie plana, paralela al pie de la columna, donde se pone la preparacin histolgica. La
platina puede tener una pinza de sujecin para el preparado histolgico, unas regletas o vernier, que
permiten realizar mediciones de las estructuras observadas, y Tornillos de desplazamiento en los ejes
frontal y lateral (x e y), tornillos que permiten localizar un segmento del preparado en el eje de
visualizacin.

3) Cabezal: Componente del sistema mecnico en que se sitan los lentes oculares. Este cabezal puede
ser monocular (1 nico lente), binocular (2 lentes), trinocular (habitualmente combinando un sistema
binocular con una salida para conexin de cmaras fotogrficas o de video, o de una pantalla de

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proyeccin). Puede ser un nico cabezal o mltiples cabezales, estos ltimos usados preferentemente
en aplicaciones docentes guiadas.

4) Revlver: Pieza rotatoria donde se localizan los lentes objetivos. Esta pieza gira sobre el eje al que
est anclado y, mediante un sistema de encaje, permite el posicionamiento de lentes objetivos de
diferentes aumentos, en el eje de observacin.

5) Tornillos de enfoque: Situados a los costados del brazo del estativo, permiten ajuste fino
(micromtrico) y ms tosco (macromtrico) de la preparacin. Ajustando ambos se logra el enfoque
correcto. Estos tornillos pueden estar separados, o bien integrados, siendo el tornillo macromtrico
controlado por una perilla grande y el micromtrico con una perilla ms pequea habitualmente central
respecto del eje de ambas perillas.

Teniendo clara la composicin de todo microscopio ptico antes descrita, revisaremos a continuacin las
instrucciones de uso.

INSTRUCCIONES

Retire la funda del microscopio

Verifique que el microscopio est enchufado y encienda el microscopio.

Ponga el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y descienda totalmente la platina.

Si en el ltimo uso que tuvo el microscopio fue dejado correctamente, se encontrar en esta
posicin.

Ponga la preparacin sobre la platina, sujetndola con las pinzas de sujecin.

Cercirese que el objetivo 4x est bien encajado en su posicin.

Proceda a enfocar de la siguiente manera:

1. Acerque cuidadosamente al mximo la lente objetivo a la preparacin, empleando el tornillo

macromtrico. Durante este procedimiento mire directamente, no por el ocular, para evitar
la posible ruptura del preparado y posibles daos al objetivo.

2. Mire a travs de los oculares y separe lentamente el objetivo de la preparacin, usando el

tornillo macromrico hasta que se vea relativamente ntida la muestra.

3. Gire el tornillo micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

Cambie al objetivo 10x. Tendr una imagen casi enfocada, por lo que deber mover muy poco el
tornillo micromtrico para conseguir el enfoque fino. Si al realizar el cambio de objetivo pierde
totalmente la imagen, vuelva a enfocar con el lente objetivo anterior y repita los pasos 1 a 3
antes descritos.

Con el objetivo 40x debe tener precaucin por cuanto su enfoque es a muy poca distancia del
preparado, pudiendo suceder que preparacin y objetivo choquen y se incrusten, o bien, que de
haber observado previamente un preparado con el lente de inmersin, hayan quedado restos
de aceite de inmersin y se manche el objetivo.

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 Respecto del lente de inmersin, siga estos pasos:

1. Baje totalmente la platina.

2. Mirando directamente, Suba totalmente el condensador para ver claramente el crculo de

luz que indica la zona a visualizar y donde se habr de echar el aceite.

3. Gire el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo en un punto intermedio entre ste
y el objetivo 40x.

4. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.

5. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin.

6. Mirando directamente el objetivo, suba lentamente la platina hasta que toque la gota de
aceite. Notar que la gota parece ascender y adosarse al lente.

7. Enfoque con precaucin el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de

inmersin y el preparado es mnimo, por lo que hay grandes riesgos de romper el
preparado.

8. Una vez puesto el aceite de inmersin en el preparado, recuerde que no puede volver a
enfocar con el objetivo 40x pues existe riesgo de manchar el lente con aceite. Si desea
enfocar otro campo baje la platina y repita la operacin desde el paso 3 de esta secuencia.

9. Finalice la observacin bajando la platina y colocando el objetivo de menor aumento

girando el revlver. Proceda al retiro de la preparacin desde la platina.

10. Recuerde que nunca debe retirar el preparado con el objetivo de inmersin puesto en
posicin de observacin.

11. Limpie el objetivo de inmersin con cuidado usando pao de batista o papel especial para
ptica. Compruebe tambin que el objetivo de 40x est limpio.

Al terminar la sesin siga los siguientes pasos:

Retire el ltimo preparado que est observando

Baje la platina
Ponga el revlver del microscopio en el lente de 4x
Baje la perilla reguladora de la intensidad lumnica hasta el mnimo
Apague el microscopio y desenchfelo
Cbralo con la funda protectora

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Mantenimiento y precauciones:

Cuando finalice el trabajo, deje puesto el objetivo menor en posicin de observacin. Asegrese
que la parte mecnica de la platina n sobresale del borde de la misma y cbralo con su funda.

Cuando el microscopio no est en uso tpelo con su funda para evitar que se ensucien y daen
las lentes. Si no usar el microscopio por largos perodos, gurdelo en la caja del mismo, dentro
de un armario para protegerlo del polvo.

No tome jams las lentes con las manos. Si se ensucian, lmpielas muy suavemente con papel
filtro, pao suave sin pelusas o pao de ptica.

Si no est usando el microscopio, no deje puesta ninguna preparacin sobre la platina.

Si ha usado el lente de inmersin, despus de su uso limpie el aceite remanente del objetivo con
paos especiales de ptica o papel filtro. Cuando pase el pao o papel, debe hacerlo SIEMPRE
en un mismo sentido y con suavidad. Si el aceite se ha secado y se ha adherido al objetivo, se
limpia con una mezcla de alcohol-acetona (70%:30%) o con xilol. El uso de estos solventes
orgnicos se hace ocasionalmente, y teniendo en claro que puede daar las lentes y su sujecin
por disolver la grasa mineral que se emplea en la lubricacin del mecanismo de sujecin y
desplazamiento.

Recuerde no forzar los tornillos giratorios del microscopio (macro y micromtrico, platina,
revlver, condensador).

Tenga presente que el cambio de objetivos se realiza girando el revlver y mirando siempre en
forma directa (ojo desnudo) la preparacin, para prevenir el roce entre el lente y la muestra.
Jams cambie el objetivo agarrndolo por el tubo ni mientras se observa a travs del ocular.

Debe mantener siempre seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama algn lquido
sobre ella, squelo con un pao. Si se mancha con aceite, lmpiela con un pao humedecido con
xilol, o con isopropanol si dispone de l.

Recuerde revisar y limpiar siempre el microscopio al final de cada sesin prctica.

T.M. Adolfo Antonio Ros Alcorta

Profesor Histologa y Embriologa Obstetricia y Puericultura
Profesor Microbiologa y Parasitologa Obstetricia y Puericultura
Profesor Histo Embriologa Nutricin y Diettica (2011)
Profesor Histologa Tecnologa Mdica
UNICIT

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 LABORATORIO N 1 : MICROSCOPIA

Introduccin

La Histologa, literalmente es el estudio de los tejidos, actualmente se le considera como una rama de
la anatoma.
Este estudio de los tejidos se refiere al anlisis de la composicin microscpica y la respectiva funcin
del material biolgico de animales y vegetales.
A partir del ao 1600, se hicieron las primeras investigaciones histolgicas gracias al invento del
Microscopio, instrumento que con el correr del tiempo y los avances de la ciencia ha evolucionado
facilitando mucho ms el conocimiento de los tejidos.
La Histologa est relacionada de manera directa con la Anatoma, que es el estudio de la forma y la
estructura de los organismos vivos, comienza entonces a dividirse gradualmente en anatoma
macroscpica y anatoma microscpica. Siendo la Histologa usada muchas veces como un sinnimo de
anatoma microscpica, que requiere el uso auxiliares pticos en el estudio no slo de tejidos sino
tambin de la clula, rganos y sistemas.
El cuerpo se compone de clulas, matriz intercelular y una sustancia lquida, el lquido extracelular
(hstico) que impregna estos componentes.
Actualmente el objetivo de la histologa no se enfoca de manera exclusiva a la estructura el cuerpo, sino
tambin de su funcionamiento. Por este motivo hay que interrelacionarla con la biologa celular,
bioqumica, fisiologa y cuando corresponde con la patologa.
Marcello Malpighi es el fundador de la Histologa, su nombre est relacionado a varias estructuras
histlgicas. En 1665, Hooke descubre que el tejido vegetal est formado por pequeas cmaras, que las
llam clulas, pas un tiempo mas para descubrir el ncleo, debido al desarrollo del microscopio
compuesto alrededor de 1830.
Gradualmente se desarrollo el conocimiento de la clula, es decir, la Citologa. Las evidencias cientficas
demostraron con el paso del tiempo que toda clulas se origina de otra clula, esta importante
conclusin permite que actualmente se consideren a 4 tejidos fundamentales: Tejido Epitelial, Tejido
Conectivo, Tejido Muscular y Tejido Nervioso.
El Tejido se forma por la agrupacin de clulas con la misma funcin. Los rganos son unidades
funcionales mayores compuestas por distintos tipos de tejidos, por ejemplo el hgado. Los Sistemas de
rganos son varios rganos con funciones relacionadas , como el sistema digestivo formado por el tubo
digestivo y las glndulas anexas .Existen tambin los llamados sistemas difusos, que se definen grupos
celulares con funciones relacionadas, ubicados en diferentes rganos, como el Sistema Inmune.
Los mtodos histolgicos se basan en:
La observacin directa de la clula y tejidos vivos., adems de los que se analizan material
muerto o inanimado.

Las Tcnicas de asilamiento de los componentes de las clulas vivas, mediante mtodos de
centrifugacin.

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Cualquier sea el estudio comienza con el anlisis microscpico, EL Microscopio es el instrumento ms
importante en la histologa debido al pequeo tamao de las estructuras estudiadas, existiendo diversos
tipos, a los que se asocian tcnicas de identificacin generales y especficas.

Microscopio ptico (M.O), de Campo Claro o Fotnico:

La luz, al atravesar el preparado cito-histolgico, es modificada en algunas de sus caractersticas, las que
pueden ser captadas por el ojo:
-Variaciones de luz (contraste de luz y sombras).
- Variaciones de color (diferentes longitudes de onda).
Dado que la mayor parte de las clulas, tejidos y rganos carecen de color, el paso de la luz a travs de
ellos no nos permite observer todas sus caractersticas, por este motive, debe modificarse la
preparacin cito-histolgica mediante la aplicacin de tinciones histolgicas, obteniendo una absorcin
diferencial de luz permitiendo la visualizacin de diferentes estructuras.
El M.O, presenta dos caractersticas importantes:
1. Poder de resolucin: Distancia mnima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se
visualicen separadas
2. Aumento: que es la relacin entre el tamao de la imagen y del objeto,en valores lineales.

La calidad de una imagen, su claridad y riqueza de detalles, depende del poder de resolucin.
El M.O, tiene un mximo poder de resolucin de 0,2 micrometros, aunque en forma rutinaria es de 0,5
micrometros; este tipo de microscopio est formado por partes mecnicas (tornillos macro y
micromtrico, platina, verniers, columna, base o estativo) y pticas (condensador y diafragma , lente
objetivo y lente ocular).

Las clulas son las unidades bsicas de los seres vivos. La mayora de ellas son de pequeo tamao por
lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su visualizacin. Por lo
general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 m), o sea la menor distancia vista o
resuelta por el ojo humano es de dos lneas separadas a algo menos de 1mm de distancia; si hay dos
lneas a 200 m de distancia, veremos una sola lnea. Los microscopios se utilizan para mejorar la
resolucin.

La invencin del microscopio en el siglo XVII posibilit la serie de descubrimientos posteriores de las
mismas. En 1665 Robert Hooke utilizando un microscopio ptico simple, examin un corte de corteza,
encontr que esta estaba compuesta por una masa de diminutas cmaras, que llam clulas, en
realidad slo vi las paredes celulares, ya que este tejido est muerto a la madurez y las clulas ya no
tienen contenido. Ms tarde, Hoock y algunos de sus contemporneos observaron clulas vivas.

Microscopio ptico (MO)

El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una
imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una
distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan

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microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores.
Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces.

El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en

extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una
imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma
que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una
imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las
longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazn con un soporte que sostiene el

material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra.
Los especimenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con
una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectngulo fino de vidrio. El soporte tiene un
orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que
atraviese el espcimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz elctrica que dirige la luz a
travs de la muestra.

Los MO actuales tiene un poder resolutivo de 0,2 m, unas mil veces la del ojo humano.
El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una
imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una
distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan
microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores.
Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces.

El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en

extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una
imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma
que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una
imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las
longitudes focales de los dos sistemas de lentes.

El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazn con un soporte que sostiene el

material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra.
Los especmenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con
una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectngulo fino de vidrio(portaobjeto).

El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la
luz para que atraviese el espcimen.

El microscopio puede contar con una fuente de luz elctrica que dirige la luz a travs de la muestra.

Los MO actuales tiene un poder resolutivo de 0,2 m, unas mil veces la del ojo humano

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Todo microscopio ptico se compone de dos sistemas:

Sistema ptico

Es el eje de observacin de objetos, y consta de los siguientes elementos:

1) Ocular: Lentes situadas cerca el ojo del observador, que amplifican la imagen del objetivo.

2) Objetivo: Lente ms cercana a la preparacin; amplifica la imagen del preparado histolgico. Puede
ser una lente nica o un conjunto de ellas, de diferentes aumentos, montados en un Revlver.
Habitualmente en el caso de un sistema de revlver, tiene los siguientes aumentos: 4x, 10x, 20x y 100x,
este ltimo objetivo es tambin conocido como lente de inmersin por requerir el uso de aceite de
inmersin para poder hacer la observacin de los preparados.

3) Condensador: Lente concentradora de rayos luminosos sobre la preparacin.

4) Diafragma: Estructura anular que regula la cantidad de luz que ingresa al condensador. Se comporta
como el iris del ojo.

5) Foco: Sistema de iluminacin (sea una ampolleta o espejos) que dirigen el haz de luz hacia el
condensador. En caso de ser una ampolleta, el microscopio tendr una fuente de poder controlada con
un interruptor de encendido, un reostato de regulacin de intensidad de la luz y un enchufe que debe
conectarse al sistema elctrico para que pueda encenderse.

Sistema Mecnico

1) Columna o Soporte: Tambin denominado Estativo, es la parte sobre la que se monta el sistema
ptico. Generalmente se compone de un Pie o base que sustenta todo el peso del microscopio dndole
estabilidad, y un brazo en que se montan el condensador, el sistema de objetivos y oculares, y la platina
de observacin.

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 2) Platina: Superficie plana, paralela al pie de la columna, donde se pone la preparacin histolgica. La
platina puede tener una pinza de sujecin para el preparado histolgico, unas regletas o vernier, que
permiten realizar mediciones de las estructuras observadas, y Tornillos de desplazamiento en los ejes
frontal y lateral (x e y), tornillos que permiten localizar un segmento del preparado en el eje de
visualizacin.

3) Cabezal: Componente del sistema mecnico en que se sitan los lentes oculares. Este cabezal puede
ser monocular (1 nico lente), binocular (2 lentes), trinocular (habitualmente combinando un sistema
binocular con una salida para conexin de cmaras fotogrficas o de video, o de una pantalla de
proyeccin). Puede ser un nico cabezal o mltiples cabezales, estos ltimos usados preferentemente
en aplicaciones docentes guiadas.

4) Revlver: Pieza rotatoria donde se localizan los lentes objetivos. Esta pieza gira sobre el eje al que
est anclado y mediante un sistema de encaje, permite el posicionamiento de lentes objetivos de
diferentes aumentos, en el eje de observacin.

5) Tornillos de enfoque: Situados a los costados del brazo del estativo, permiten ajuste fino
(micromtrico) y ms tosco (macromtrico) de la preparacin. Ajustando ambos se logra el enfoque
correcto. Estos tornillos pueden estar separados, o bien integrados, siendo el tornillo macromtrico
controlado por una perilla grande y el micromtrico con una perilla ms pequea habitualmente central
respecto del eje de ambas perillas.

Existen distintas variantes de observacin en MO:

Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se colorea con
colorantes especficos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera

Clula de Arveja (Pisum sp.) Traqueidas del leo de Pino (Pinus sp.)
coloracin: safranina-fast-green Coloracin: safranina

Microscopa de campo brillante: el material se observa sin coloracin. La luz pasa directamente y se
aprecian detalles que estn naturalmente coloreados.

17
El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado
sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo
recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un
fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el
fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin manchas,
invisibles con iluminacin normal.

Microscopa en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras
y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para especmenes delgados, o clulas aisladas. El microscopio
de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin
embargo en el microscopio de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del
objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un
cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminacin provoca variaciones
minsculas en el ndice de refraccin de un espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de
microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa
y medicina.
Microfotografa en Contraste de Fase de cultivo de clulas epiteliales. Objetivo 20X.

Nomarski, microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC). Utiliza dos rayos de luz polarizada
y las imgenes combinadas aparecen como si la clula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue
diseado para observar relieves de especmenes muy difciles de manejar, es muy utilizado en los
tratamientos de fertilizacin in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espcimen es muy grueso para usar
contraste de fases.

Microfotografa en Contraste de Interferencia Diferencial de Nomarsky de cultivo de Clulas epiteliales

200X

http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/images/20x_dic.tif

18
Microscopia polarizacin

Es un microscopio de campo claro al cual se le adicionan filtros que modifican la luz. Tambin se
denomina microscopio petrogrfico o metalrgico por su uso inicial en el estudio de minerales, sin
embargo su aplicacin se ha extendido al campo de la biologa, medicina, qumica y muchas otras
disciplinas. Esta tcnica microscpica puede emplear tanto la luz transmitida como la luz incidente (trans-
iluminacin y epi-iluminacin respectivamente).

Comparada con las otras tcnicas de incremento de contraste, el uso de la luz polarizada es la ms
efectiva en el estudio de muestras ricas en materiales birrefringentes, puesto que mejora de manera
incomparable la calidad de la imagen.

La luz proveniente de una fuente estndar de iluminacin vibra y se propaga en todas las direcciones,
pero al pasar por un filtro polarizador las ondas y su campo elctrico oscilan todos en un mismo plano. El
polarizador es un dispositivo que solo deja pasar la luz que vibra en un plano determinado denominado
eje de polarizacin.

Esquema que muestra el efecto de filtros polarizadores en un rayo de luz. A la izquierda la luz no
polarizada se distribuye en todos los planos, pero al pasar por el primer filtro (horizontal) ste slo deja
pasar las ondas que se propagan en un plano horizontal. Si se interpone un filtro polarizador orientado de
manera vertical (rotado 90 en relacin al horizontal) la luz polarizada no pasa y se detiene. Tomada de
Multimedia Encarta Luz Polarizada.

Muchos materiales tienen sus tomos uniformemente distribuidos en las tres direcciones principales del
espacio y presentan una mxima simetra (cbica o regular) o por el contrario, en algunos materiales sus
tomos carecen de organizacin. Los primeros tienen las mismas propiedades pticas,
independientemente de la direccin en que se midan. Cuando la luz atraviesa sustancias con estas
caractersticas, la velocidad es la misma en todas las direcciones y gracias a ello se denominan istropos.
Por el contrario, los materiales cuya organizacin cristalina es diferente (hexagonal, trigonal, tetragonal,
rmbico, entre otras) poseen sus constituyentes dispuestos de manera asimtrica y varan segn la
direccin; en consecuencia el comportamiento de las ondas luminosas tambin en diferente,
denominndose anistropos.

19
La estructura interna del espcimen determina su comportamiento istropo o anistropo.

Cuando se estudia el comportamiento de la luz al atravesar un espcimen, los materiales anistropos

presentan distintos ndices de refraccin en relacin a la direccin del haz de luz; por el contrario, los
materiales istropos presentan un ndice de refraccin constante. Cuando un rayo de luz incide sobre la
superficie de un material anistropo transparente se presenta el fenmeno de la doble refraccin o
birrefringencia; esto quiere decir que se producen dos rayos refractados distintos que vibran en planos
diferentes que se propagan con diferentes velocidades en el interior del material.

Este microscopio facilita la investigacin de las propiedades pticas de los especmenes y es ideal para
observar y fotografiar aquellos elementos que son visibles gracias a la anisotropa, de all su uso en
cristalografa; sin embargo, tambin se emplea para estudiar el carcter birrefringente de muchas
estructuras celulares anistropas.

El contraste de la imagen se observa gracias a la interaccin de la luz polarizada con los elementos
birrefringentes del espcimen que producen las dos ondas refractadas, cada una de ellas polarizada en
planos perpendiculares. Una vez que las ondas de luz salen del espcimen lo hacen de manera desfasada
(ver fig. 6-9) pero son recombinadas al pasar por otro filtro o filtro analizador. De esta manera, el
microscopio de luz polarizada permite el estudio comparativo entre minerales tomando en cuenta la
absorcin del color e ndices de refraccin. Sin embargo, en biologa su principal utilidad consiste en
distinguir las sustancias isotrpicas de las anisotrpicas, revelando informacin detallada sobre la
estructura y composicin de los materiales con la finalidad de caracterizarlos para fines diagnsticos
(102). El ojo humano no capta las direcciones en las que vibra la luz y la luz polarizada puede ser
detectada como un incremento en la intensidad luminosa o como un efecto de color. O en lo cotidiano,
por ejemplo, con el uso de lentes de sol polarizados se logra reducir el resplandor de la luz ambiental.

El 90% de las sustancias slidas son anisotrpicas y como materiales isotrpicos se pueden enumerar una
variedad de gases, lquidos y cristales.

Este microscopio est equipado con:

Polarizadores: Un primer filtro polarizador colocado entre la fuente de luz y el condensador que se
puede rotar 360 y un analizador o segundo polarizador, colocado por encima del objetivo, entre su lente
posterior y el tubo de observacin o cmara fotogrfica. Tambin puede rotarse 90 o 360. Los
polarizadores antiguos conocido como nicoles estaban conformados por un sistema de prismas de calcita
descrito por W. Nicol y. En los microscopios actuales el polarizador est constituido por una lmina
polaroid, que consiste en una pelcula de un polmero transparente (revestida de cristales minsculos de
sulfato de iodoquinina orientados en la misma direccin) interpuesta entre dos placas de vidrio.

Condensador polarizador: Debe estar libre de desperfectos en sus componentes pticos.

Platina circular: Con capacidad de rotar 360 para facilitar la orientacin del eje ptico con el campo de
visin. Puede contener un vernier para medir los ngulos de rotacin. El espcimen debe rotarse y
colocarse en una posicin diagonal en la cual los elementos anisotrpicos se observarn ms brillantes
(birrefringentes).

Objetivos polarizadores: Diferentes a los objetivos comunes, estos deben estar libres de desperfectos y
tener capacidad polarizadora. Son ensamblados de manera que se evita en lo posible el dao de las lentes
ya que cualquier dao por mnimo que sea compromete el rendimiento del objetivo. Poseen la inscripcin
P, PO, o Pol.

20
 Ocular con una cruz visible en el campo visual: Para marcar el centro del campo visual.

Lente de Bertrand: Situada inmediatamente debajo del ocular, es removible y sirve para ver la
interferencia con la finalidad de ajustar la iluminacin de una manera precisa.

Esquema simplificando la tcnica

de iluminacin con luz polarizada.
El filtro polarizador (1) est
localizado por debajo del
condensador (2) y el espcimen (3)
es iluminado con luz polarizada
lineal. El analizador (5) rotado en
ngulo de 90 en relacin a (1) est
localizado detrs del objetivo (4).
Una lente (6) en el tubo forma la
imagen intermedia (7). Tomada de
Kapitza H G. (1997). Microscopy from
the very begining (13).

Si no hay espcimen en la platina el campo se observar completamente oscuro. Al colocar un

portaobjeto con alguna muestra, los elementos anistropos cambian la direccin de la vibracin de la luz
polarizada y el contraste se evidencia en la imagen con algunos colores cuando se emplea otro dispositivo
denominado plato lambda.

21
Micrografa de cartlago hialino visto con luz polarizada en donde se aprecia la birrefringencia del
colgeno que forma parte del pericondrio, correspondiendo a las estructuras rosadas brillantes. Tomado
de Laboratorio de Investigaciones Histolgicas Aplicadas. Universidad Nacional del Litoral. Santa Fe,
Argentina.

Figura Micrografa de luz polarizada de fibroclulas musculares estriadas en la cual se aprecia el patrn
de bandas y estriaciones transversales. Tomado de Junqueira y Carneiro (2005).

Aplicaciones del microscopio de luz polarizada

Identificar sustancias cristalinas o fibrosas intracelulares (como el citoesqueleto) y extracelulares

(sustancia amiloide, asbesto, colgeno, cristales de uratos y otras de origen exgeno).

Identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales.

Microscopa de fluorescencia
Una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un
haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbida como rayas luminosos: esto se conoce como
fluorescencia.
La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del colorante.
Clulas epiteliales, triple coloracin: ncleo (azul), microtubulos (verdes), actina (rejo). 200X (izq.) y
1000X (der.).

22
 Filamentos intermedios y protenas del citoesqueleto vistos con microscopa de fluorescencia
www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/images/100x_fluor.tif

Microscopio de fluorescencia

Este microscopio hace uso de la fluorescencia y se convierte en una herramienta de inestimable valor para
la investigacin cientfica, ya que permite alcanzar altos niveles de sensibilidad y resolucin microscpica,
permitiendo una apreciacin diferente de la informacin que se puede obtener de los especmenes y que
generalmente pasa desapercibida.

La fluorescencia es un fenmeno de luminiscencia que fue observado inicialmente por Sir George Stokes
en el ao 1852, para luego ser explicada fsicamente en el ao 1935 por Alexander Jablonski. Es la
propiedad que tienen ciertos elementos qumicos denominados fluorforos o fluorocromos de emitir luz
visible cuando sobre ellos incide una radiacin intensa; en otras palabras, absorben una luz de una longitud
de onda determinada (por ejemplo luz ultravioleta o luz monocromtica azul) y luego emiten otra luz de
una mayor longitud de onda (de un determinado color, verde, rojo, amarillo). Es un fenmeno de
luminiscencia de vida corta, emitida simultneamente con la excitacin.

Los trminos de fluorocromo y fluorforo definen los siguientes conceptos:

Fluorocromo: Marcador colorante fluorescente empleado en investigacin para crear contraste en zonas
determinadas de los especmenes.

Fluorforo: Parte de una molcula (fluorocromo, protena) que le imparte la propiedad de fluorescencia.

Existen numerosos tipos de fluorocromos y cada uno de ellos tiene su espectro de absorcin y de emisin
especfico que depende de la composicin y estructura de la molcula fluorescente.
Longitud de onda de absorcin Longitud de onda de
Fluorocromo
(nm) emisin (nm)
Cascade blue 374-403 422-430
Fluorescena (FITC) 494 520
Rodamina (TRITC) 540 570
Naranja de acridina 460-502 526-650
Yoduro de propidio 536 617

Tabla :Algunos de los principales fluorocromos empleados en inmunofluorescencia y sus respectivos

espectros de absorcin y emisin en valores aproximados. Modificado de Costa J. 2004.

23
Espectro de excitacin y de emisin de dos fluorocromos de uso comn. La lnea negra continua representa
el espectro de excitacin, la lnea negra punteada muestra el espectro de emisin. La fluorescena al ser
excitada por una luz de longitud de onda de aproximadamente 495 nm (azul) emite una luz de color verde
cuya longitud de onda esta alrededor de 519 nm. Modificado de Excitation and Emission Spectra of
Fluorescent Dyes. Leica Microsystems.

Tambin existen fluorocromos intracelulares naturales, tales como nucletidos de nicotina reducidos
(NADH, NADPH), nucletidos de flavina oxidados, clorofilas, protenas fluorescentes (Green Fluorescent
Protein GFP) y esto debe ser tomado en cuanta al realizar esta tcnica con marcadores fluorescentes.

La microscopa de fluorescencia es muy til porque la molcula fluorescente, an cuando sea muy
pequea, puede ser observada debido a la luz que emite. Los fluorocromos actan como fuentes de luz de
un color determinado que pueden ser localizadas en reas especficas de la muestra que se estudia. El
marcaje selectivo de molculas y otros compuestos celulares se realiza mediante la tcnica de
inmunofluorescencia.

Requerimientos para el microscopio de fluorescencia

Fuente de luz: Se necesita una intensa fuente de luz para excitar la fluorescencia en el espectro
especfico de cada fluorocromo. Hay que tomar en cuenta que la fluorescencia es pasajera y la iluminacin
produce un efecto de fotoblanqueo en el fluorocromo; adems, las clulas vivas pueden ser daadas por la
intensa radiacin. La luz debe ser de una longitud de onda corta. Se emplean lmparas de mercurio a alta
presin que funcionan de un modo diferente a las lmparas de filamentos incandescentes. Tambin se
utiliza luz ultravioleta (ptica convencional) y rayos laser (ptica confocal y Nomasky). Muchos modelos
funcionan con epi-iluminacin.

Filtros: Son los que permiten el paso de luz de una determinada longitud de onda, la del rango y color
necesario para excitar al fluorocromo y bloquean las longitudes no deseadas. Una vez filtrada, la luz incide
sobre el espcimen por reflexin de un espejo dicroico (epi-iluminacin) y es nuevamente filtrada para
poder ser observada.

Objetivos: Deben tener gran capacidad para transmitir la luz y proveer una imagen de alta calidad. De
igual manera deben poseer una gran apertura numrica.

24
Esquema bsico de la iluminacin en el microscopio de fluorescencia. La luz blanca emitida por la fuente de
luz es filtrada dejando pasar por ejemplo, solo la luz azul. El espejo dicroico refleja la luz de cierta longitud
de onda (en este caso azul) pero deja pasar otras. Filtra la luz azul que excita al fluorocromo (fluorescena)
pero por el contrario, deja pasar la luz verde emitida. Tomada de wikipedia.org).

Los filtros empleados son tiles porque por ejemplo, cuando se emplea la fluorescena, el espcimen se
ilumina con una luz azul monocromtica pura y filtrada. Para visualizarlo se emplea otro filtro el cual es
completamente opaco a la luz azul pero deja pasar la luz verde (o amarilla y roja emitidas por otros
fluorocromos). Las estructuras celulares marcadas mediante inmunofluorescencia aparecen iluminadas de
verde contrastando con un fondo negro.

25
Micrografias de clulas en divisin, tomadas con un microscopio de fluorescencia. Se emplearon tres
fluorocromos: DAPI (emite luz azul) para marcar cromosomas, GFP (protena verde fluorescente intracelular
que emite luz verde) y rodamina (luz roja) para marcar microtbulos. Cada fluorocromo amerita el uso de
filtros especficos, dependiendo de la longitud de onda necesaria para su excitacin, sealada arriba y a la
izquierda en cada imagen y expresada en nm. Tomada de wikipedia.org.

Aplicaciones del microscopio de fluorescencia

Son numerosas las aplicaciones de la microscopa de fluorescencia, notablemente en biologa y medicina:

Marcaje de molculas en clulas y tejidos para su caracterizacin e identificacin.

Estudio de clulas normales y patolgicas.
Estudios inmunolgicos.
Mineraloga.

MICROSCOPIO CONFOCAL

La Microscopa Confocal es una tecnologa que permite observaciones a una resolucin mayor que la que
se puede lograr con la microscopa ptica convencional.

La microscopa lser confocal es una nueva tcnica de observacin microscpica que est logrando
excelentes resultados en diversas ramas de la ciencia (medicina, biologa, materiales, geologa, etc.) Su
xito se debe a las indudables ventajas que ofrece frente a la microscopa ptica tradicional (imgenes de
mayor nitidez y contraste, mayor resolucin vertical y horizontal, etc.) y, sobre todo, a la posibilidad de
obtener "secciones pticas" de la muestra, lo que permite su estudio tridimensional. ea un sistema lser
que aplica el haz de luz en forma de barrido, en una pequea parte del espcimen. El laser aplicado a una
longitud de onda determinada en la muestra, hace que molculas excitadas de la misma, emitan
fluorescencia a una longitud de onda mayor a la aplicada. La fluorescencia en una muestra puede ser
debida a molculas que se encuentran de forma natural (autofluorescencia como en el caso de la clorofila)

26
o puede ser producida por molculas aplicadas artificialmente a la muestra llamadas fluorocromos. Hay
una gran cantidad de fluorocromos especficos en el mercado usados para diferentes estructuras celulares
y para diferente emisin de fluorescencia. El uso de varias combinaciones de laser capaces de detectar y
producir fluorescencia a diferentes longitudes de onda, permite un escaneo de la muestra en un amplio
rango del espectro de luz, permitiendo la observacin de estructuras teidas con tal detalle como no se
puede lograr con tcnicas convencionales.

Debido a que penetra fcilmente la muestra, el microscopio confocal logra imgenes en diferentes planos
focales que ligados a un programa de computo, puede reproducir una imagen tridimensional del material
observado.

Las siguientes caractersticas han hecho de la microscopia con focal una de las herramientas de trabajo
predilectas por cientficos de las ciencias biolgicas mdicas y de materiales de todo el mundo:

1. Alta sensibilidad en la observacin.

2. Especificidad en la emisin de la fluorescencia.
3. Mayor Resolucin.
4. Tridimensionalidad de las imgenes.

El principio de la microscopa confocal se basa en eliminar la luz reflejada o fluorescente procedente de los
planos fuera de foco. Para ello se ilumina una pequea zona de la muestra y se toma el haz luminoso que
proviene del plano focal, eliminndose los haces procedentes de los planos inferiores y superiores (Boyde,
1988).

2.- BASES INSTRUMENTALES

Parte de la luz procedente de la fuente de iluminacin atraviesa un primer diafragma,

es reflejada mediante un espejo dicroico y se enfoca en un punto del espcimen mediante la lente de un
objetivo. La seal emitida por el punto iluminado (fluorescencia o luz reflejada) vuelve por el mismo
camino ptico, pasa a travs del espejo dicroico y es enfocada en un detector, un segundo diafragma o
pinhole es colocado delante del detector para eliminar las seales procedentes de la zona fuera de foco.

El principio del funcionamiento del Microscopio Confocal se basa en la existencia de dos diafragmas
(pinhole), uno entre la fuente de luz y el objetivo y el otro entre el objetivo y el detector. Ambos pinhole
deben de estar perfectamente alineados de forma que el segundo de ellos nicamente deje llegar al
detector la luz procedente del plano focal.

La utilizacin de un lser como fuente de luz permite focalizar la iluminacin en una regin muy pequea
de la muestra y con una gran intensidad.

27
Anlisis de colocalizacin.

Mediante microscopa confocal son posibles estudios de coexpresin de protenas u otro tipo de
molculas en una misma clula /preparacin. Usando un mximo de 4 marcajes/canales simultneos: -
Rojo Verde Infrarrojo - Dapi(azul)

La colocalizacin permite determinar si una molcula de inters se expresa simultneamente en una

misma regin de nuestra preparacin y se pone de manifiesto mediante la visin de la mezcla de colores
de los diferentes fluorocromos/marcadores (canales -DAPI, 2-verde y 3-rojo) en un mismo canal (canal 4-
mezcla). Ejemplos:

Colocalizacin de protenas en sinaptosomas

Colocalizacin de protenas en cultivo de clulas PC12

Colocalizacin de protenas virales (virus sincicial) en clulas dentdrticas

Inmunofluorescencias y deteccin de sondas.

Mediante ensayos multicolor basados en el uso de fluorocromos/marcadores especficos para hasta 4

marcajes simultneos (ej: fluorocromos Rojo, Verde, Infrarrojo, Dapi ) y aplicables a numerosos estudios(
apoptosis y proliferacin celular, localizaciones celulares y subcelulares, estudios de difusin,expresin de
protenas,etc)

El uso de marcadores especficos permite poner de manifiesto molculas especficas en nuestra

preparacin basadas en la interaccion Ag-Ac y la emisin de fluorescencia.

28
Ejemplos:

Estudio de identificacin de tipos celulares como neuronas en distinta etapa de crecimiento.

Estudio de identificacin de stem cells.

Estudio de viabilidad celular a travs de perdida de intensidad de fluorescencia o presencia o ausencia de

marca fluorescente especfica

En las imgenes se muestran un Microscopio confocal (izq) y la microfotografa de un

Cultivo de fibroblastos (ncleos en Rojo y microfilamentos en verde)

MICROSCOPIA ELECTRNICA

La microscopa electrnica es una tcnica que requiere instrumentos de alta complejidad y personal
altamente especializado. Se utilizan la microscopa electrnica de transmisin o convencional y la de
barrido.

Las muestras para microscopa electrnica deben fijarse en glutaraldehdo, que se solicita al laboratorio de
Anatoma Patolgica con las instrucciones para la toma y fijacin de la muestra. Los fragmentos deben ser
pequeos y tienen que fijarse en forma de varios trocitos cuboideos de tejido de no ms de 1 mm,
obtenidos con hoja de afeitar o bistur limpios. Las muestras se incluyen en resinas sintticas (Epon) y se
practican cortes 10 veces ms delgados que los de microscopa de luz llamados cortes ultrafinos. La tincin
se realiza con sales de metales pesados como citrato de plomo, tetrxido de Osmio o acetato de uranilo,
que permiten un contraste adecuado del tejido bajo el haz de electrones. Los cortes ultrafinos se montan
sobre grillas de cobre, se tien y se observan al microscopio electrnico. Para documentar los hallazgos es
necesario obtener fotografas en blanco y negro de las preparaciones. Las grillas, muestras, inclusiones y
fotografas se guardan en un archivo especial durante aos.

Como es sabido, la utilidad del microscopio ptico se acaba cuando queremos observar detalles de tamao
inferior al rango de longitudes de onda que abarca la luz visible en el espectro electromagntico (Ley de

29
Abbe). Es entonces cuando entra en juego el microscopio electrnico, cuya fabulosa capacidad de
resolucin es debida a que utiliza como fuente de luz una emisin lineal de electrones. Los electrones
acelerados, como toda carga elctrica en movimiento, producen una radiacin electromagntica cuya
longitud de onda es proporcionalmente inversa a la velocidad, resultando varios rdenes de magnitud
inferior a la luz visible.

Todo microscopio electrnico basa su funcionamiento en tres ejes fundamentales:

Fuente de electrones que ilumina la muestra.

Lentes electromagnticas que dirigen el haz de electrones haca la muestra de la manera ms
conveniente.
Sistema que capta los efectos de dicho haz al incidir sobre el espcimen y los visualiza.
Al entrar en ms detalles veremos que, segn a que tipo de microscopio nos refiramos, estos principios se
implementan tcnicamente de distintas maneras. La fuente de energa

En los microscopios electrnicos considerados se utiliza un mismo caudal energtico: electrones. stos
pueden ser generados mediante tres tipos de fuente:

Filamento de tungsteno: el ms econmico, pero tambin el que produce un haz de mayor

tamao. Corta duracin.
Filamento de hexaboruro de lantano: mayor duracin y haz ms fino. Tambin es ms caro y
precisa un vaco mayor.
Emisor de efecto de campo: continuando la progresin, es ms caro y precisa an mayor
vaco, pero ofrece el haz ms fino.

Mientras en los dos primeros los electrones son expelidos por calentamiento, en el de efecto de campo
son extraidos por un intenso camp elctrico. Una vez libres, los electrones son acelerados sometindolos a
una gran diferencia de potencial elctrico.

Lentes electromagnticas

Los electrones acelerados son moldeados por una serie de lentes electromagnticas dispuestas en serie
que se distinguen segn su funcin:

Condensadoras: su misin es afinar el haz, definiendo su tamao y el nivel de convergencia.

Objetivo: forman la imagen inicial del especimen.
Intermedia: aumenta la imagen inicial y define el foco.
Proyectoras: junto a la intermedia, proporcionan el nivel de aumento de la imagen inicial.

Adems de las lentes, existen diversas bobinas electromagnticas que se encargan de desplazar el haz
longitudinalmente cuando es necesario.

Microscopa electrnica de transmisin

En esta tcnica la preparacin teida es traspasada por un haz de electrones, lo cual proporciona la imagen
ultrafina sobre una pantalla ad hoc. El microscopio electrnico de transmisin es capaz de generar un haz
de electrones a alta tensin (80kV) y concentrarlo sobre la preparacin mediante un complej sistema de
campos electromagnticos equivalentes a las "lentes" del microscopio de luz.
En microscopa de transmisin, al utilizar especmenes muy finos, se producen adems las siguientes
reacciones:

30
Electrones transmitidos o no dispersados: Son los que atraviesan la muestra limpiamente sin interactuar
con ella. Son inversamente proporcionales al grosor de la muestra y producen las zonas ms claras o
brillantes de la imagen de transmisin.

Electrones dispersados elsticamente: Aquellos que son desviados de su trayectoria original por los
tomos de la muestra sin prdida de energa, y posteriormente transmitidos a travs de ella. En materiales
cristalinos, estos electrones son desviados en un ngulo fijo que viene marcado por la longitud de onda del
haz y la distancia entre los planos atmicos de la muestra (Ley de Bragg), proporcionando imgenes de
difraccin de electrones que revelan valiosos detalles sobre la estructura espacial de los tomos en la
muestra observada. La interferencia de estos electrones con los transmitidos aumentan dramticamente el
contraste y son esenciales para obtener imgenes de alta resolucin (HRTEM).

Electrones dispersados inelsticamente: Aquellos que son desviados de su trayectoria original por los
tomos de la muestra con prdida de energa, siendo posteriormente transmitidos o bien dispersados de
nuevo. Los que son dispersados por segunda vez elsticamente forman las llamadas lneas de Kikuchi, de
gran importancia en el estudio de estructuras cristalinas. Estos electrones tambin son utilizados en
espectroscopa de prdida de energa de electrones (EELS), que proporciona informacin tanto de los
elementos presentes en la muestra como de la naturaleza de sus enlaces.

Microscopa electrnica de barrido

La microscopa electrnica de barrido permite el estudio de superficies celulares. La imagen se obtiene

rastreando la superficie de la muestra con un haz electrnico ultrafino. Las seales generadas se
recolectan, amplifican y captan en un tubo de rayos catdicos. Se utiliza en forma rutinaria en el estudio de
enfermedades del tallo piloso. En estas condiciones hay anomalas estructurales y de superficie de los
pelos, que pueden identificarse fcilmente con esta tcnica. De esta forma, es posible incluso establecer
un pronstico de reversibilidad de las alteraciones utilizando esta tcnica.
Al incidir el haz de electrones sobre la muestra, interacta con ella y se producen diversos efectos
que sern captados y visualizados en funcin del equipo que utilicemos.

Electrones secundarios: se producen cuando un electrn del haz pasa muy cerca del ncleo de un tomo
de la muestra, proporcionando la suficiente energa a uno o varios de los electrones interiores
para saltar fuera de la muestra. Estos electrones son de muy baja energa (por debajo de 5eV), por lo que
deben encontarse muy cerca de la superficie para poder escapar. Precisamente por eso proporcionan una
valiosa informacin topogrfica de la muestra, y son los utilizados principalmente en microscopa de
barrido.

31
Electrones retrodispersados: se producen cuando un electrn del haz choca frontalmente con el ncleo de
un tomo de la muestra, siendo repelido en sentido contrario fuera de la muestra. La intensidad de dicho
efecto vara proporcionalmente con el nmero atmico de la muestra. Por esta razn se utilizan para
obtener un mapa con informacin sobre la composicin superficial de la muestra, tambin utilizado en
microscopa de barrido.

Electrones Auger: cuando un electrn secundario es expulsado del tomo, otro electrn ms externo
puede saltar hacia el interior para llenar este hueco. El exceso de energa provocado por este
desplazamiento puede ser corregido emitiendo un nuevo electrn de la capa ms externa. Estos son los
llamados electrones Auger, y son utilizados para obtener informacin sobre la composicin de
pequesimas partes de la superficie de la muestra.

Rayos X: en el proceso descrito anteriormente, el exceso de energa tambin puede ser balanceada
mediante la emisin de rayos X; stos son caractersticos de cada elemento de la muestra, por lo que se
utilizan para obtener informacin sobre la composicin de la muestra. A diferencia de los electrones auger
de baja energa, los rayos X proporcionan informacin analtica de un volumen considerable de la muestra.

Aplicaciones

Las aplicaciones ms importantes de las diferentes tcnicas disponibles son:

Microscopa electrnica de barrido

1. Estructura y ultraestructura de tejidos y rganos animales y vegetales.

2. Inmunocitolocalizacin de macromolculas.
3. Patologas animales y vegetales.
4. Estudios forenses (bsqueda de partculas, tejidos, hilos, semen...)
5. Identificacin de minerales y susteancias sintticas.
6. Estudios de corrosin de metales y aleaciones.
7. Biodeterioro de obras de arte.
8. Textura de rocas y minerales.
9. Irregularidades de piezas fabricadas en cadena.

La mayor utilidad de la microscopa electrnica de transmisin es en Oncologa. Es particularmente til en

el diagnstico de neoplasias malignas, ya que permite identificar la estirpe o diferenciacin de una
neoplasia. Por ejemplo, al demostrar elementos de diferenciacin no apreciables a microscopa de luz
como desmosomas, propios de clulas epiteliales, que orientan hacia carcinoma; microvellosidades bien
desarrolladas, que sugieren adenocarcinoma; melanosomas en melanoma y grnulos densos rodeados por
membrana en carcinoma neuroendocrino.

En conjunto con la inmunohistoqumica permite identificar un alto procentaje de las neoplasias malignas
(95%). Igualmente, en el diagnstico diferencial de metstasis tumor maligno indiferenciado en ganglio
linftico (melanoma maligno, carcinoma, linfoma). En el frecuente dilema adenocarcinoma versus
mesotelioma maligno pleural; tambin en el diagnstico de la granulomatosis de clulas de Langerhans.

Esta tcnica juega un papel muy importante en el estudio de las enfermedades del rin, en particular en
glomerulopatas primarias y secundarias. Junto con la inmunofluorescencia directa representan el estudio
bsico para llegar a un diagnstico preciso en cada caso.

32
Difraccin de Rayos X

La aplicacin de los rayos X a la investigacin de la estructura fina de la materia, tuvo su origen en 1912, cuando
los primeros materiales cristalinos fueron expuestos a ese tipo de radiacin, dando lugar a un diagrama de
difraccin caracterstico de la muestra.

En la actualidad, a casi 80 aos de ese descubrimiento, la Difraccin de rayos X es un mtodo de anlisis

estructural que ha revolucionado el entendimiento de la qumica, la fsica y la biologa.

Las tcnicas de anlisis de la estructura cristalina son de carcter complejo, y su xito depende casi enteramente
de los recursos computacionales con que cuente el investigador.

Desde el punto de vista de la aplicacin prctica, sin embargo, las tcnicas de Difraccin de rayos X derivan en un
ptimo aporte a la identificacin y caracterizacin de especies cristalinas, sin las necesarias complejidades del
anlisis estructural.
Las tcnicas de difraccin permiten observar en forma indirecta detalles del orden de 10-8 cm, esto es, en el
rango atmico. Es gracias a esta posibilidad que la difraccin ofrece tantas y variadas aplicaciones al estudio de los
materiales, siendo una de ellas la caracterizacin e identificacin de muestras cristalinas.

Microscopio de Fuerza atmicas

El Microscopio de Fuerza Atmica (MFA) es un instrumento mecano-ptico capaz de detectar fuerzas del
orden de los nanonewton. Al analizar una muestra, se registra continuamente la altura sobre la superficie
de una sonda o punta cristalina de forma piramidal. La sonda va acoplada a un listn microscpico, muy
sensible al efecto de las fuerzas, de slo unos 200 m de longitud.

La fuerza atmica se puede detectar cuando la punta se aproxima a la superficie de la muestra. Se registrar
la pequea flexin del listn mediante un haz lser reflejado en su parte posterior. Un sistema auxiliar
piezoelctrico desplaza la muestra tridimensionalmente, mientras que la punta recorre ordenadamente la
superficie.

Todos los movimientos son controlados por una computadora. La resolucin del instrumento es de menos
de 1 nm, y la pantalla de visualizacin permite distinguir detalles en la superficie de la muestra con una
amplificacin de varios millones de veces. El microscopio de MFA, puede realizar dos tipos de medidas:

33
imagen y fuerza. En la modalidad de imagen, la superficie es barrida en el plano de la superficie por la
punta. Durante el barrido la fuerza interatmica entre los tomos de la punta y los tomos en la superficie
de la muestra, provoca una flexin del listn. Esta flexin es registrada por un sensor adecuado
(normalmente balanza ptica) y la seal obtenida se introduce en un circuito o lazo de realimentacin. La
fuerza interatmica se puede detectar cuando la punta est muy prxima a la superficie de la muestra. En
medidas de fuerza la punta se hace oscilar verticalmente mientras se registra la flexin del listn. Las
medidas de fuerza son tiles en estudios de fuerzas de adhesin y permiten estudiar a nivel de una sola
molcula interacciones especficas entre molculas (ej: interaccin antgeno-anticuerpo, interaccin entre
hebras complementarias de ADN) o interacciones estructurales de las biomolculas (plegado de protenas)
as como caracterizar la elasticidad de polmeros. Tambin es til en estudios de indentacin de materiales
blandos (polmeros) que permitan caracterizar propiedades elsticas de la muestra como el mdulo de
elasticidad o visco elsticas.

El Microscopio de Fuerza Atmica provee la imagen de una superficie sin que intervengan los efectos
elctricos, al medir las fuerzas mecnicas en la punta detectora, por lo que tambin resulta til para
materiales no conductores. A principios de este ao, un equipo liderado por el Consejo Superior de
Investigaciones Cientficas (CSIC) perfeccion la tcnica empleada por los microscopios atmicos. La nueva
tcnica, denominada Phase Imaging AFM, est basada en la microscopa de fuerzas, y permite realizar
medidas tanto en aire como en medios lquidos o fisiolgicos. El desarrollo de esta tcnica podra tener
aplicaciones en reas diferenciadas, como la biomedicina, la nanotecnologa, la ciencia de materiales o
estudios medioambientales.

INSTRUCCIONES DE USO DEL MICROSCOPIO PTICO

Teniendo clara la composicin de todo microscopio ptico antes descrita, revisaremos a continuacin las
instrucciones de uso.

1. Retire la funda del microscopio

2. Verifique que el microscopio est enchufado y encienda el microscopio.

3. Ponga el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y descienda totalmente la platina. Si en

el ltimo uso que tuvo el microscopio fue dejado correctamente, se encontrar en esta posicin.

4. Ponga la preparacin sobre la platina, sujetndola con las pinzas de sujecin.

5. Cersirese que el objetivo 4x est bien encajado en su posicin.

6. Proceda a enfocar de la siguiente manera:

7. Acerque cuidadosamente al mximo la lente objetivo a la preparacin, empleando el tornillo

macromtrico. Durante este procedimiento mire directamente, no por el ocular, para evitar la posible
ruptura del preparado y posibles daos al objetivo.

8. Mire a travs de los oculares y separe lentamente el objetivo de la preparacin, usando el tornillo
macromrico hasta que se vea relativamente ntida la muestra.

9. Gire el tornillo micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

34
10. Cambie al objetivo 10x. Tendr una imagen casi enfocada, por lo que deber mover muy poco el
tornillo micromtrico para conseguir el enfoque fino. Si al realizar el cambio de objetivo pierde
totalmente la imagen, vuelva a enfocar con el lente objetivo anterior y repita los pasos 1 a 3 antes
descritos.

11. Con el objetivo 40x debe tener precaucin por cuanto su enfoque es a muy poca distancia del
preparado, pudiendo suceder que preparacin y objetivo choquen y se incrusten, o bien, que de haber
observado previamente un preparado con el lente de inmersin, hayan quedado restos de aceite de
inmersin y se manche el objetivo.

12. Respecto del lente de inmersin, siga estos pasos:

13. Baje totalmente la platina.

14. Mirando directamente, Suba totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que
indica la zona a visualizar y donde se habr de echar el aceite.

15. Gire el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo en un punto intermedio entre ste y el
objetivo 40x.

16. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.

17. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin.

18. Mirando directamente el objetivo, suba lentamente la platina hasta que toque la gota de aceite.
Notar que la gota parece ascender y adosarse al lente.

19. Enfoque con precaucin el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y el
preparado es mnimo, por lo que hay grandes riesgos de romper el preparado.

20. Una vez puesto el aceite de inmersin en el preparado, recuerde que no puede volver a enfocar con
el objetivo 40x pues existe riesgo de manchar el lente con aceite. Si desea enfocar otro campo baje la
platina y repita la operacin desde el paso 3 de esta secuencia.

21. Finalice la observacin bajando la platina y colocando el objetivo de menor aumento girando el
revlver. Proceda al retiro de la preparacin desde la platina.

22. Recuerde que nunca debe retirar el preparado con el objetivo de inmersin puesto en posicin de
observacin.

23. Limpie el objetivo de inmersin con cuidado usando pao de batista o papel especial para ptica.
Compruebe tambin que el objetivo de 40x est limpio.

Mantenimiento y precauciones:

Cuando finalice el trabajo, deje puesto el objetivo menor en posicin de observacin. Asegrese
que la parte mecnica de la platina n sobresale del borde de la misma y cbralo con su funda.

Cuando el microscopio no est en uso tpelo con su funda para evitar que se ensucien y daen
las lentes. Si no usar el microscopio por largos perodos, gurdelo en la caja del mismo, dentro
de un armario para protegerlo del polvo.

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 No tome jams las lentes con las manos. Si se ensucian, lmpielas muy suavemente con papel
filtro, pao suave sin pelusas o pao de ptica.

Si no est usando el microscopio, no deje puesta ninguna preparacin sobre la platina.

Si ha usado el lente de inmersin, despus de su uso limpie el aceite remanente del objetivo con
paos especiales de ptica o papel filtro. Cuando pase el pao o papel, debe hacerlo SIEMPRE
en un mismo sentido y con suavidad. Si el aceite se ha secado y se ha adherido al objetivo, se
limpia con una mezcla de alcohol-acetona (70%:30%) o con xilol. El uso de estos solventes
orgnicos se hace ocasionalmente, y teniendo en claro que puede daar las lentes y su sujecin
por disolver la grasa mineral que se emplea en la lubricacin del mecanismo de sujecin y
desplazamiento.

Recuerde no forzar los tornillos giratorios del microscopio (macro y micromtrico, platina,
revlver, condensador).

Tenga presente que el cambio de objetivos se realiza girando el revlver y mirando siempre en
forma directa (ojo desnudo) la preparacin, para prevenir el roce entre el lente y la muestra.
Jams cambie el objetivo agarrndolo por el tubo ni mientras se observa a travs del ocular.

Debe mantener siempre seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama algn lquido
sobre ella, squelo con un pao. Si se mancha con aceite, lmpiela con un pao humedecido con
xilol.

Recuerde revisar y limpiar siempre el microscopio al final de cada sesin prctica.

TCNICAS DE IDENTIFICACIN EN HISTOLOGA

Introduccin
Las clulas en su mayora son incoloras, aquellas que en su citoplasma poseen Inclusiones que son
sustancias o partculas coloreadas de origen endgeno como caroteno, melanina, licopenos o exgenos
como carbn.

Cuando se trata de estudiar clulas aisladas o disociadas, tejidos delgados el proceso de coloracin no
tiene problemas. El problema se produce cuando se tiene que analizar rganos o tejidos ms
voluminosos, en donde por la densidad celular se dificulta la coloracin y la observacin de ellos; sobre
todo en la observacin al microscopio ptico, que se basa en lo delgado de la muestra que debe ser lo
ms trasparente para que el haz de luz la atraviese.

Es recomendable que su grosor est entre 7 a 10 micrometros o micras ( m), para una clara
observacin, adems debern ser teidos los tejidos.

Al realizer el corte, depender de la orientacin especial el cmo se observe el preparado, como

observaremos en el esquema:

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Para lograr la adecuada preparacin y observacin de los preparados, se debe realizar el siguiente
procedimiento con los siguientes pasos:

Coloracin
Luego de realizado el corte, se procede a rehidratarlo (sumergindolo sucesivamente en alcoholes de
concentracin decreciente) para permitir su coloracin.

Colorantes: reciben esta denominacin las sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos.
Coloracin: es el proceso mediante el cual un cuerpo es teido por una sustancia colorante, sin perder el
color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solucin colorante. Este proceso se
aplica a cortes con cualquier tipo de micrtomo.

Clasificacin de los colorantes:

Segn su origen se clasifican en:
COLORANTES NATURALES:
- Animales (carmn)
- Vegetales (hematoxilina, orcena, azafrn)
COLORANTES ARTIFICIALES O SINTTICOS (COLORES DE ANILINA):
- cidos: sales cuya base es incolora y su cido es coloreado (eosina o eosinato de sodio). Son colorantes
citoplasmticos.
- Bsicos: sales cuya base es coloreada y el cido es incoloro (azul de metileno o clorhidrato de azul de
metileno). Son colorantes nucleares.
- Neutros: sales en las que tanto el cido como la base son coloreados. Tien el ncleo de un color y el
citoplasma de otro.
- Indiferentes: no forman sales. Tien aquellas sustancias que tienen un poder disolvente superior al del
lquido que ha servido para preparar la solucin colorante (Sudn lll, rojo escarlata).

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Por otro lado, las coloraciones pueden ser:
- Ortocromticas: los tejidos adquieren un color igual al de la solucin colorante empleada.
- Metacromticas: una sustancia o un componente celular se tie con un color diferente al del colorante
empleado.

Mtodos de coloracin:

- Coloracin directa: existe una verdadera afinidad entre el colorante y el objeto.

- Coloracin indirecta: requiere la intervencin de intermediarios o mordientes para que la coloracin
tenga lugar.
- Coloracin progresiva: se hace actuar el colorante hasta que llegue a su punto ptimo.
- Coloracin regresiva: se realiza primero una sobrecoloracin y luego se elimina el resto del colorante
por medio de diferenciadores. A este proceso se lo denomina diferenciacin.
- Coloracin simple: se colorean solamente algunos elementos del preparado (ncleo, fibras elsticas,
etc.).
- Coloracin combinada: se tien los elementos nucleares y citoplasmticos recurrindose,
generalmente, al empleo sucesivo de colores bsicos y cidos que contrastan por sus colores.
- Coloracin panptica: es una coloracin combinada realizada sucesivamente por colorantes neutros
(May-Grnwald-Giemsa).
- Coloracin pancrmica: en un solo bao colorante actan todos los colorantes neutros que se
necesiten.

Colorantes ms utilizados en histologa humana:

Hematoxilina
- Es un colorante vegetal.
- Para ser utilizada debe ser oxidada previamente. Los agentes oxidantes pueden ser: el aire (varios
meses de exposicin) u oxidantes artificiales (xido de mercurio, permanganato de potasio, dicromato
potsico, etc.)
- Es un colorante directo, pero en la prctica se lo utiliza en forma de lacas hematoxilnicas
(se utiliza alumbre de potasio o de sodio como mordiente para preparar la solucin
colorante), comportndose en este caso como un colorante indirecto.

Eosina
- Es un colorante artificial (se trata de derivados hidroxixantnicos halogenados con tres grupos arilo).
- Presenta autofluorescencia espontnea.
- Se la emplea tanto en soluciones acuosas como alcohlicas.
Para colorear se emplea generalmente una batera de coloracin.
Otras Tcnicas de identificacin:
Tcnicas de rutina en animales
Descalcificacin

Tcnicas especiales:

Tinciones tricrmicas para identificacin de componentes fibrilares del tejido conectivo:

En estas tcnicas se utilizan colorantes de alto peso y tamao molecular que se intercalan en la
estructura de las fibras de colgeno y soluciones de heteropolicidos (cido fosfotngstico, cido
fosfomolbdico).

38
Entre stas tinciones se cuentan:

Identificacin de colgeno:

Van Gieson
Tincin de Mallory-Azan
Tincin Tricrmica de Masson
Tincin Tricrmica de Gomori
Tincin Tricrmica de Arteta

Impregnacin argntica para identificacin de fibras reticulares (colgeno tipo III) o elementos del
Sistema Nervioso:

Tcnica de Gomori
Tcnica Metenamina de Plata- cido Perydico de Schiff
Tcnica de Ramn y Cajal

Identificacin de Fibras elsticas:

Orcena actica de Unna-Tanzer

Hematoxilina de Verhoeff

Identificacin de elementos celulares de la sangre y cromosomas:

Giemsa
May-Grnwald-Giemsa
Wirght

Identificacin de microorganismos:

Tincin de Gram
Kinyoun
Ziehl-Neelsen
Tcnica de Shikata de orcena modificada

Histoqumica:

Disciplina que estudia la composicin qumica y la actividad metablica en clulas y tejidos en los
que ha sido preservada su organizacin estructural, mediante reacciones qumicamente demostrables y
justificables.

Para que la reaccin qumica tenga validez se requiere:

Que la sustancia investigada conserve su localizacin: esto se puede lograr con una adecuada
fijacin.

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 La reaccin qumica debe ser especfica: debe haber mecanismos comprobables, reconocidos por
los cuales se demuestre que es eso y no otra cosa lo que se est identificando.

Debe ser suficientemente sensible para la deteccin: muchas veces el tejido est incluido en
parafina, lo que junto a la fijacin, deshidratacin y aclaramiento produce la extraccin en parte de las
sustancias a identificar, e incluso en estos casos la reaccin debe ser capaz de detectar las sustancias,
debe tener tal sensibilidad y no obtener falsos negativos.

Se debe conservar de la mejor forma la estructura. Para algunas tcnicas se puede conservar la
estructura bastante parecida a lo que estamos acostumbrados, pero para otras tcnicas es necesario
realizar cortes por congelacin, en los que la estructura est medianamente conservada; en otras
ocasiones la reaccin qumica es agresiva y suele destruir ciertas estructuras, pero de igual manera se
debe tratar de conservar las estructuras tisulares morfolgicamente lo mejor posible, si no, no estamos
haciendo histoqumica.

Entre algunas tcnicas se encuentran:

Identificacin de carbohidratos o sustancias ricas en carbohidratos:

cido Perydico de Schiff (P.A.S.)

Azul de Alcian
Rojo Congo

Identificacin de protenas ricas en grupos SH (sulfhidrilo):

Azul de toluidina

Estos compuestos suelen ser de color azul y al teir estructuras ricas en grupos SH dan una tonalidad
prpura, condicin denominada metacromasia, que se observa ms intensa cuando ms concentracin
de dichos residuos sulfhidrilo existan (por ejemplo, en grnulos de histamina de los mastocitos o clulas
cebadas), lo que se suele vincular a una mayor cantidad de aminocidos cistena e histidina.

Tionina
Metionina
Azul de Metileno
Cristal Violeta

Identificacin de pigmentos:

Azul de Prusia y Azul de Turnbull (Hemosiderina)

Melanina (Oxidacin de melanina con permanganato de potasio o perxido de hidrgeno)

Lpidos (Sudan III, Sudn IV, Oil Red O, Sudn Black)

40
Enzimohistoqumica: Determinacin de la presencia y funcionalidad de enzimas dentro del tejido. Para
esto se necesita conservar la morfologa del tejido y la funcionalidad de la enzima. Algunas enzimas, al
pasar por el procesamiento histolgico, conservan su funcionalidad, su sitio activo, en cambio hay otras
enzimas que no pueden ser fijadas.

Neurohistoqumica: Variante de la enzimohistoqumica. Comprende el estudio de enzimas en el sistema

nervioso y tambin incluye el estudio de marcadores neuroqumicos.

Histoqumica cuantitativa: no todas las reacciones histoqumicas son cuantificables, por ejemplo, una
reaccin enzimtica va a depender de cuanto tiempo se deje la enzima con el sustrato para que se de un
producto coloreado, si se deja ms tiempo va a haber ms color, lo que complica comparar dos tejidos
cuantitativamente, pero hay reacciones que son cuantificables, porque reaccionan con el tejido en
forma estequiomtrica, es decir, se produce tanto color como sustancia hay y eso es cuantificable a
travs de instrumentos.

Ultrahistoqumica o Citoqumica: se refiere a la histoqumica aplicada a la M.E.

Inmunohistoqumica: es el estudio de componentes cito-histolgicos mediante reacciones antgeno-

anticuerpo especficas. Se les utiliza generalmente para el estudio de marcadores tumorales o de
enfermedades autoinmunes

Dentro de esta rea se encuentran 3 modalidades de aplicacin:

Inmunohistoqumica: con cromgenos: Utiliza compuestos coloreados denominados cromgenos (pues

no se unen directamente a las macromolculas del tejido o clulas) que se adsorben sobre la zona
donde ocurre la reaccin antgeno-anticuerpo que evidencia la existencia de un marcador.

Inmunofluorescencia: Utiliza compuestos coloreados denominados fluorocromos (que se hacen

evidentes solamente al ser estimulados con radiacin o luz ultravioleta o con un lser de cierta
longitud de onda) que se encuentran unidos a un anticuerpo utilizado para identificar un marcador. Esta
puede ser directa (usando solamente un anticuerpo primario), o indirecta (que emplea adems un
anticuerpo secundario dirigido contra el anticuerpo primario, lo que amplifica la reaccin y
visualizacin).

Se aplican a estudio de tejidos

Inmunocitoqumica: Es la aplicacin al estudio en clulas, mediante microscopa electrnica, de

marcadores o macromolculas, utilizando para la visualizacin algunos cromgenos, o principalmente,
sales metlicas acopladas a anticuerpos o a cromgenos.

Citometra de flujo:

Se realiza una reaccin antgeno-anticuerpo contra clulas (en particular linfocitos) usando anticuerpos
unidos a fluorocromos. Permite el conteo en un instrumento denominado citmetro de flujo, de clulas
y se utiliza tanto para investigacin como para diagnstico, por ejemplo, neoplasias de linfocitos
(linfomas, leucemias), inmunodeficiencias, entre otros.

Biologa molecular in situ: Se refiere a los estudios moleculares del DNA aplicados in situ.

Utilizando fluorocromos o sondas de cidos nucleicos marcadas con cromgenos, pueden estudiarse
alteraciones genticas, cromosmicas y tambin patrones de expresin gnica en tumores.

41
Montaje

Luego de la coloracin, se deshidrata el corte y se procede a la aclaracin y montaje definitivo, dado que
nos hemos propuesto hacer un preparado en condiciones de ser observado y protegido del ambiente
para evitar su deterioro.
La deshidratacin se realiza con alcoholes de graduaciones crecientes.
La aclaracin se realiza con xilol o carboxilol. El objetivo de este paso es impregnar el corte con un
disolvente del Blsamo de Canad, que al mismo tiempo le confiere un ndice de refraccin semejante al
del vidrio.
Para el montaje se limpia el portaobjeto alrededor del corte y se deposita sobre el mismo una gota de
Entelln o Eukitt disuelto en xilol y se cubre con un cubreobjeto.

Se deja secar unas horas antes de su observacin al microscopio.

Protocolo general

A continuacin se presenta el protocolo de trabajo utilizado por nuestra ctedra para la tcnica de
Hematoxilina - Eosina para preparados de uso didctico, los alumnos no deben memorizar el mismo, se
describe ser usado como una herramienta para razonar los conceptos expuestos anteriormente.
Ctedra de -Histologa
I. Fijacin
En formol al 10% (1 parte de formol y 9 partes de agua destilada) por lo menos
durante 6 hrs.

II. Moldeado de la pieza

Se le da el tamao deseado a la pieza y se la coloca en una bolsa de gasa, con el fin de
enjuagarla en agua corriente durante, por lo menos, 15'.

III. Deshidratacin:

La deshidratacin se realiza pasando la muestra por una serie de baos de alcohol/agua.Para evitar un
cambio de volumen brusco por la deshidratacin (distorsin del tejido) la concentracin de alcohol va
aumentando en pequeos pasos.

1) Alcohol 70, 1h30'.

2) Alcohol 96, 1h30'.
3) Alcohol 100 (l), 1h30'.
4) Alcohol 100 (ll), 1h30'.
5) Toluol, entre 1h30' y 3hs.

Luego de la deshidratacin total en alcohol 100%, el siguiente paso es la aclaracin o diafanizacin.

Lamentablemente la parafina no es soluble en el alcohol 100% y por lo tanto se utiliza una sustancia
intermedia (soluble en alcohol 100% y en parafina). Antes de incluir la muestra en parafina se extrae el
alcohol 100% mediante el uso de xilol. Este compuesto altera el ndice de refraccin de la muestra y la
torna ligeramente translcida. Debido a este hecho este paso de la tcnica histolgica se denomina
ACLARAMIENTO.

42
IV. Inclusin
1) Secado de la muestra con gasa.
2) Parafina 56 (l), 1h30'.
3) Parafina 56 (ll), 1h30'.
4) Formacin de la barra.
5) 30' de frezzer.
6) Fractura del taco

V. Corte con el micrtomo

VI. Coloracin

1) Secado de los cortes en estufa a 58C, 15'.

2) Xilol o toluol (I), 15' en estufa.
3) Xilol o toluol (II), 2'.
4) Alcohol 100, 30".
5) Alcohol 96, 30".
6) Alcohol 70, 30".
7) Alcohol 50, 30".
8) Agua destilada, 30".
9) Hematoxilina, 130".
10) Agua corriente, 2.
11) Alcohol 50, 15".
12) Eosina, (preparada en base alcohlica), 30".
13) Alcohol 96, 10".
14) Alcohol 100, 10".
15) Xilol, 1 por lo menos.
16) Montaje con Blsamo de Canad sinttico.

43
Objetivos

1.- Comprender los principales tipos de microscopio usados en los estudios citohistolgicos.

2.- Enfocar con los diferentes aumentos de manera progresiva las preparaciones histolgicas,
presentadas.

3.-Comparar el poder de resolucin de los diferentes lentes objetivos, ante la aparicin detalles en la
muestra, imperceptibles a la visin humana, mediante el uso progresivo de los diversos aumentos.

Actividades

1.- Se le entregarn 3 preparaciones de aprendizaje:

a) Hilos.
b) Letras y nmeros
c) Cuadrcula de papel milimetrado

2.- Observe en los aumentos de 4x, 10x y 40x, las muestras preparadas entregadas.

3.- a) Identifique y rotule cada una de las partes del esquema de microscopio
b) Anote qu observa con la nitidez de la imagen cuando mueve el tornillo micromtrico
c) Anote qu observa con la nitidez de los planos ms superficial y profundo cuando mueve el
tornillo micromtrico
d) Anote qu observa con la orientacin de la imagen a cada aumento
e) Anote qu observa con la resolucin de la imagen a diferentes aumentos

44
 2a.- Observe la muestra entregada con los aumentos del microscopio incluyendo inmersin. (Hilo de
colores). Reconozca las formas a cada aumento y describa lo observado.

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN

ELEMENTOS QUE
RECONOCE FUNCIN

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

45
 2b.- Observe la muestra entregada con los aumentos del microscopio incluyendo inmersin. (Letras y
nmeros). Reconozca las formas y posicin a cada aumento y describa lo observado.

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN

ELEMENTOS QUE
RECONOCE FUNCIN

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

46
2c.- Observe la muestra entregada con los aumentos del microscopio incluyendo inmersin. (Cuadrcula
de papel milimetrado). Anote las mediciones realizadas a cada aumento.

Cada cuadrcula mide 20 mm x 20 mm. Ubique la preparacin de manera que la cruz de lneas ms
gruesas quede en el centro preciso del campo. Cada divisin de la cuadrcula representa 1 mm

En cada aumento, cuente la cantidad de lneas que dividen a la lnea central. Anote este valor frente a
cada aumento en la tabla que sigue bajo el encabezado N DE DIVISIONES CONTADAS:

AUMENTO SEGN N DE DIVISIONES

AUMENTO REAL
LENTE OBJETIVO CONTADAS

4x

10x

40x

En cada aumento, cuente la cantidad de lneas que dividen a la lnea central. Anote este valor frente a
cada aumento en la tabla que sigue bajo el encabezado N DE DIVISIONES CONTADAS:

Calcule el aumento real de cada campo segn la siguiente frmula:

AUMENTO REAL: __________20___________

N DE DIVISIONES CONTADAS

Donde 20 corresponde al total de divisiones (mm) de la cuadrcula.

47
3.- Identifique las partes del Microscopio y seale sus funciones:

NOMBRE FUNCIN
LETRA
A

48
INSTRUCCIONES PARA TODAS LAS PREPARACIONES QUE OBSERVAR DURANTE
LAS SESIONES PRCTICAS DE HISTOLOGA

a) Verifique que el microscopio tenga adecuadamente conectado el enchufe en su puerto de

conexin y en el enchufe bajo su estacin de trabajo. Encienda su microscopio con el botn de
encendido (0 I) y luego con el restato (perilla <<<) aumente gradualmente la intensidad.
b) Una vez encendido su microscopio, asegrese que la lmpara est encendida
c) Enfoque en aumento 4x (lupa o aumento menor) la muestra, utilizando para ello el micro y
macromtrico cuidando de no romper la preparacin
d) Identifique los componentes, estructuras, clulas y matriz extracelular de los preparados.
e) Dibuje y rotule cada capa identificada
f) A aumento mayor (10x), identifique las clulas que componen a cada capa
g) Dibuje y rotule lo observado
h) Repita estos ltimos 2 pasos a aumento 40x
i) Baje la intensidad de la iluminacin. Si es su ltimo preparado a observar, apague el microscopio,
ponga el objetivo 4x volviendo de mayor a menor aumento, baje la platina, retire el preparado y
vuelva a dejarlo en la bandeja que est al comienzo del mesn

49
LABORATORIO 2: EPITELIOS DE REVESTIMIENTO, GLANDULARES Y TEJIDOS
CONECTIVOS

N PREPARACIN NOMBRE MUESTRA TINCIN

INTESTINO DELGADO
MALLORY
41 o 51 (DUODENO, YEYUNO H-E
AZAN
O LEON)
MALLORY
57 RION H-E
AZAN
ESTMAGO (REGIN
MALLORY
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO Y GLANDULARES

49 o 50 CORPOFNDICA O H-E
AZAN
REGIN PILRICA)
PIEL DELGADA O PIEL MALLORY
2 o 22 H-E
GRUESA AZAN
1, 15 o
AORTA H-E ORCENA
38
MALLORY
58 VEJIGA URINARIA H-E
AZAN
GLNDULAS
SALIVALES
54, 55 o MALLORY
(PARTIDA, H-E
56 AZAN
SUBLINGUAL O
SUBMAXILAR)
MALLORY
27 TIROIDES H-E
AZAN
MALLORY
32 o 62 OVARIO H-E
AZAN
MALLORY AZUL DE
59 TESTCULO H-E
AZAN TOLUIDINA
MALLORY
30 SUPRARRENAL H-E
AZAN
TENDN MALLORY
H-E
(COLGENO) AZAN
TEJIDO CONECTIVO

GOMORI
BAZO (FIBRAS
39 H-E RETICULINA
RETICULARES)
DE PLATA
AORTA CORTE
TRANSVERSAL O
1, 15 o
CORTE H-E ORCENA
38
LONGITUDINAL
(FIBRAS ELSTICAS)

50
IV. CUESTIONARIO DE AUTOAPRENDIZAJE

1. Cules son los tejidos bsicos del cuerpo? Qu funciones generales cumplen
2. Qu relaciones celulares y fisiolgicas hay entre las clulas que componen cada tejido.
3. Indique los tamaos celulares de cada tipo celular que compone a los tejidos analizados.
4. Qu caractersticas tienen los epitelios de revestimiento?
5. Cules son las variedades y cules son los criterios de clasificacin?
6. Qu caractersticas tienen las glndulas endocrinas y las exocrinas.
7. Qu modalidades de secrecin exocrina existen?

8. En un cuadro comparativo, relacione la estructura histolgica de cada variedad de tejido conectivo,

indicando qu clulas y fibras presentan y qu elemento predomina
9. Relacione la histologa con su funcin.
10. Dibuje un fibroblasto en detalle, indicando sus organelos y la funcin desempeada por ellas.
Relacione con la sntesis de la matriz extrafibrilar
11. Qu capa germinativa embrionaria origina el tejido conjuntivo.
12. En el cuadro comparativo que realiz en la primera pregunta, aada una columna donde enliste la
ubicacin de las variedades de tejidos conjuntivos en los diversos rganos que conforman nuestro
organismo.
13. Seale las funciones de los tejidos conectivos, explicando cada una de ellas.
14. Cules son Ios componentes ms importantes en los tejidos conectivos? Qu funcin cumplen?
15. Cules son las variedades especializadas de tejido conectivo?
16. Cmo se relaciona el tejido conectivo con los epitelios? Qu parte del tejido conectivo compone la
membrana basal?

51
 LABORATORIO 2: VARIEDADES ESPECIALES DE TEJIDO CONECTIVO. TEJIDO ADIPOSO, SANGRE, CARTLAGO,
HUESO

TEJIDO ADIPOSO
1. Grasa blanca o amarilla. Aorta. Adventicia. Tincin: Orcena Actica/Hematoxilina y Eosina (H-E)

Plano de orientacin: Longitudinal

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

52
 2. Tejido adiposo submucoso. Piel de yema de dedo Humano, Corte longitudinal vertical
Tincin: Tricrmico de Mallory/Hematoxilina y Eosina (H-E)
Plano de orientacin: Longitudinal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

53
 3. Vrtebra de ratn. Grasa parda. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)
Plano de orientacin: Longitudinal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

54
 4. Tejido adiposo. Grasa. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E) /Sudn III-IV
Plano de orientacin: Longitudinal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

55
 SANGRE

5. Frotis de sangre humana o sangre de pollo. Tincin: Giemsa

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

56
 CARTLAGO

6. Cartlago Fibroso. Disco Intervertebral. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Longitudinal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

57
 7. Cartlago Hialino. Trquea. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Longitudinal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

58
 HUESO

8. Hueso Compacto. Corte sagital o transversal. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Longitudinal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

59
 9. Hueso Esponjoso y Mdula sea. Disco Intervertebral. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico
de Mallory
Plano de orientacin: Longitudinal

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

10. DIENTE. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

60
 Plano de orientacin: Longitudinal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

61
IV. CUESTIONARIO DE AUTOAPRENDIZAJE

1. En un cuadro comparativo, relacione la estructura histolgica de cada variedad de tejido conectivo

especializado, indicando qu clulas y fibras presentan y qu elemento predomina
2. Relacione la histologa con su funcin.
3. Qu diferencias histolgicas y funcionales existen entre la grasa blanca y la grasa parda?
3. Qu caractersticas tiene la sangre? Cul es su composicin?.
4. En una tabla, indique las fracciones de la sangre, los componentes de estas fracciones y la funcin de
dichos componentes.
5. Qu funcin cumple el cartlago?. Qu variedades existen y cul es la composicin de cada una de
ellas?
6. Cmo se origina el hueso? Qu tipos de osificacin existen? Explquelas
7. Qu diferencia existe entre hueso esponjoso y hueso compacto?
8. Qu funciones cumple el eje osteoarticular?
9. Cules son los tipos de articulaciones y qu funciones cumplen cada una de ellas?
10. Cules son los componentes de una articulacin?
11. Investigue en internet qu funcin cumple la snfisis pubiana y cmo sta se modifica durante la
gestacin
12. Investigue qu diferencias existen entre la artritis reumatoidea y la artrosis, y cmo afectan el
funcionamiento articular.

62
 LABORATORIO 5: TEJIDO MUSCULAR. TEJIDO Y SISTEMA NERVIOSO, RGANOS DE LOS SENTIDOS, PIEL

TEJIDO MUSCULAR

11. Msculo Estriado o Esqueltico. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte longitudinal /Corte transversal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

63
 12. Msculo Liso. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte longitudinal /Corte transversal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

13. Msculo Cardiaco. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

64
 Plano de orientacin: Corte longitudinal /Corte transversal
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

65
 14. Corazn de Ratn. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

15. Aorta. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

66
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

16. Musculatura lisa. Vejiga. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

67
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

17. Musculatura lisa. tero Humano. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

68
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

69
 TEJIDO Y SISTEMA NERVIOSO

18. Corteza Cerebral. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

70
 19. Cerebelo. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

71
 20. Mdula Espinal corte transversal. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory/
Impregnacin argntica
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

72
 21. Ganglio raqudeo. Nervio. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

73
 RGANOS DE LOS SENTIDOS, PIEL Y ANEXOS

22. Piel de Palma Humana corte transversal. Piel de yema de dedo Humano, corte longitudinal vertical. Piel
delgada.
Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Estratificado Plano Queratinizado. Tejido
Conectivo Laxo (Dermis Papilar); Tejido Conectivo Denso Irregular (Dermis Reticular). Tejido Adiposo
(Hipodermis)
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

74
 23. Globo Ocular. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

75
 24. Odo interno. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

25. Labio. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)

76
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

26. Lengua. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)

77
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

IV. CUESTIONARIO DE AUTOAPRENDIZAJE

78
1. Haga una tabla comparativa resumiento las caractersticas de las variedades de tejido muscular, su
estructura y funciones
2. Defina con sus propias palabras qu es la sarcomera. Dibuje la estructura de sta y seale qu
funciones cumple cada componente de ella
3. Qu organelos estn en relacin con la sarcmera y qu funcin cumplen en la contraccin muscular?
3. Cules son los mecanismos de regulacin de la contraccin muscular? Investigue en Internet y en el
libro Fisiologa Mdica de Guyton.
4. Dibuje la estructura tipo de una neurona e indique qu funciones cumplen dichos componentes.
5. Cules son los tipos de neuronas?
6. Cmo se produce el impulso nervioso? Explique brevemente las dos componentes
7. Cul es la estructura de la corteza cerebral? Cuntas capas de neuronas hay?
8. Cul es la estructura de la corteza cerebelar? Cuntas capas de neuronas hay?
9. Compare la distribucin de sustancia gris y blanca entre cerebro, cerebelo y mdula espinal
10. Cmo est organizado un nervio? Dibuje y describa
11. Qu es la degeneracin walleriana? Investigue en internet
12. Cmo est estructurada la piel? Cules son las capas constitutivas de sta y cmo estn formadas
cada una de ellas?
13. En relacin a la pregunta anterior, explique qu funciones cumple cada segmento de la piel?
14. En un cuadro comparativo, compare las capas del epitelio de la piel o epidermis y sus caractersticas,
comparando diferencias entre piel gruesa y piel delgada
15. Qu glndulas encuentra en piel?
16. Qu es el folculo piloso y cmo est formado?
17. Cmo est formada la ua?
18. Cules son los rganos de los sentidos? En un cuadro comparativo, seale cules son los receptores
sensoriales de estos rganos de los sentidos y qu funciones cumplen

LABORATORIO 6: SISTEMA ENDOCRINO

79
 SISTEMA ENDOCRINO

27. Tiroides. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Simple Cbico. Glndula endocrina. Tejido
Conectivo Laxo.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

28. Paratiroides. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

80
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

29. Pncreas. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Glndula acinar serosa merocrina. Pncreas humano
porcin exocrina. Islotes de Langerhans (endocrino)

81
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

30. Suprarrenal o adrenal. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

82
 MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

31. Testculo. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

83
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

32. Ovario. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

84
 MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

33. Placenta Humana corte transversal. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

85
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

IV. CUESTIONARIO DE AUTOAPRENDIZAJE

86
1. En un cuadro comparativo, indique cules son las glndulas endocrinas, localizacin y sus productos de
secrecin y funcin
2. Respecto a la glndula hipfisis, qu funciones cumplen la adenohipfisis y la neurohipfisis? Cmo se
relacionan entre s y con el hipotlamo?
3. Qu factores u hormonas regulan la liberacin hipofisiaria de las hormonas estimulantes o inhibitorias
del resto del eje endocrino?
3. En la tiroides, cmo est formado un folculo tiroideo? Qu productos secreta esta glndula?
4. Seale dnde se localizan las glndulas paratiroides, su relacin funcional con el metabolismo del calcio
y cmo se relaciona con la estructura tiroidea.
5. En pncreas endocrino, qu clulas tienen los islotes de Langerhans y qu hormonas secretan? Qu
funcin cumplen dichas hormonas?
6.Cul es la estructura de la corteza y la mdula suprarrenal? Qu hormonas se producen en cada
porcin?
7. En el testculo, cul es la porcin secretora endocrina de ste y cul es el producto de secrecin
elaborado? Dnde ejerce su accin y cmo llega a dichos sitios diana?
9. Cul es la estructura del ovario? Cmo se forma el folculo ovrico?
9. Qu partes del folculo ovrico constituyen el componente endocrino? Qu hormonas producen y en
qu perodo?

87
 APARATO CARDIOVASCULAR, SISTEMA LINFTICO, APARATO RESPIRATORIO

APARATO CARDIOVASCULAR

34. Placenta Humana corte transversal. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

88
 35. Msculo Cardiaco corte longitudinal y corte transversal. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/
Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

36. Corazn de Ratn corte longitudinal. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

89
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

37. Vena Cava. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

90
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

38. Arteria Aorta. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Orcena

91
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Simple Plano (Tnica ntima). Fibras elsticas.
Grasa blanca o amarilla.Msculo Liso (Tnica Media)

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

SISTEMA LINFTICO

92
 39. Bazo Humano. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory/ Fibras Reticulares
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

93
 40. Tejido Linftico asociado a mucosas (MALT). Esfago Humano. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/
Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

94
 41. Intestino Delgado Humano. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

95
 42. Ganglios linfticos o linfonodos. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

96
 APARATO RESPIRATORIO

43. Trquea. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ / H-E Azul Alcin/P.A.S./Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte Longitudinal, Corte coronal y corte sagital. Epitelio Pseudoestratificado ciliado
con clulas caliciformes. Tejido Conectivo Laxo. Cartlago Hialino.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

97
 44. Pulmn. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Orcena
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

98
IV. CUESTIONARIO DE AUTOAPRENDIZAJE

1. Cmo se estructura el corazn? Qu funciones cumplen sus capas?

2. En un cuadro comparativo identifique la estructura de los tipos de arterias, venas y redes capilares.
3. Cul es la estructura de los vasos linfticos?
3. Cmo se estructura un ganglio linftico, el bazo, el timo y el tejido linftico asociado a mucosas?
4. Cul es la distribucin de las porciones de las vas respiratorias y qu diferencias histolgicas tienen?
Haga una tabla comparativa.
5. Investigue en el libro Embriologa de Langman cmo se forman los segmentos del rbol respiratorio en
el desarrollo embrio-fetal.

99
 APARATO DIGESTIVO

45. Lengua. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Van Giesson/ Tricrmico de Mallory/ Plata
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

100
 46. Hgado. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Van Giesson/ Tricrmico de Mallory/ Plata
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

101
 47. Pncreas. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory.
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Glndula acinar serosa merocrina. Pncreas humano
porcin exocrina. Islotes de Langerhans (endocrino)

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

102
 48. Esfago. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Estratificado Plano No Queratinizado. Fibras
colgenas. Tejido Linftico asociado a mucosas (MALT). Musculatura esqueltica (tercio alto) lisa (2/3
inferiores)
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

103
 49. Estmago, Regin fndica. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Simple Cilndrico con Clulas Caliciformes.
Glndulas tubulares. Superficie Secretora. Mucosa Gstrica. Tejido Conectivo Laxo.Msculo Liso.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

50. Estmago, Regin pilrica. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

104
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio glandular con predominio de clulas
caliciformes. Superficie Secretora. Mucosa Gstrica. Tejido Conectivo Laxo.Msculo Liso
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

51. Intestino Delgado. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory/P.A.S.

105
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Simple Cilndrico con Microvellosidades y
Clulas Caliciformes. Epitelio Glandular Exocrino. Tejido Conectivo Laxo. Msculo Liso.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

52. Intestino Grueso. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

106
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Glndula tubular simple. Criptas de Lieberkhn,
intestino grueso.

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

53. Intestino Grueso. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

107
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Glndula tubular simple. Criptas de Lieberkhn,
intestino grueso.

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

108
 54. Glndula Partida. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Glndula tbuloalveolar compuesta de secrecin serosa.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

55. Glndula Salival Submaxilar. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

109
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

56. Glndula Salival Sublingual. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

110
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Glndula tbuloalveolar compuesta de secrecin
mucosa.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

111
IV. CUESTIONARIO DE AUTOAPRENDIZAJE

1. En una tabla comparativa establezca similitudes y diferencias de las 3 variedades de glndulas salivales
2. Cmo est formada la lengua?.
3. Cules son los tipos de las papilas gustativas y qu forma tienen? Cmo se distribuyen en la superficie
de la lengua
4. Qu sabores podemos percibir y en qu territorio lingual se capta cada sabor?
5. En un cuadro comparativo, seale similitudes y diferencias de la mucosa esofgica, estomacal o
gstrica, duodenal, yeyunal, ileal y de intestino grueso en cuanto a histologa y funcin.
6. Qu funcin cumple el apndice y cmo est formado?.
7. Dibuje los 3 tipos clasificacin de lobulillos hepticos y las estructuras que los componen?
8. Cmo sucede el flujo de nutrientes y sangre en los sinusoides hepticos?
9. Esquematice el pncreas exo y endocrino. Cmo estn distribuidos en la formacin del pncreas y qu
productos secretan

112
 SISTEMA UROGENITAL, APARATO REPRODUCTOR MASCULINO, APARATO REPRODUCTOR FEMENINO,
PLACENTA Y GLNDULAS MAMARIAS

57. Rin. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Simple Plano (Glomrulo, Cpsula de Bowmann,
Asa de Henle) y Epitelio Simple Cbico (Tbulos contorneados, Tbulos colectores). Fibras colgenas
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

58. Vejiga Urinaria. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

113
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Transicional. Fibras Colgenas. Musculatura Lisa.

4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

APARATO REPRODUCTOR MASCULINO

114
 59. Testculo. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Clulas de Leydig. Porcin endocrina.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

60. Epiddimo. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

115
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Pseudoestratificado con stereocilios. Tejido
Conectivo Laxo.
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

61. Conducto Deferente, cordn espermtico. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Epitelio Cilndrico ciliado. Tejido Conectivo Laxo.

116
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

APARATO REPRODUCTOR FEMENINO

62. Ovario humano y Ovario de Gata. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

117
 Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Clulas de la Granulosa, Clulas de la Teca Interna y
Externa. Estados de la Ovognesis
4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

63. tero Humano. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

118
 MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

64. Trompa de Falopio. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital
4x 10x 40x

119
 MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

65. Placenta Humana. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

120
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

66. Cordn umbilical. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory

Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital

121
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

67. Glndula Mamaria Humana. Tincin: Hematoxilina y Eosina (H-E)/ Tricrmico de Mallory
Plano de orientacin: Corte coronal y corte sagital. Glndula alveolar con secrecin apocrina.

122
 4x 10x 40x

MUESTRA TINCIN
TIPO EPITELIO
TIPO CONECTIVO
TIPO MSCULO FUNCIN

ESTRUCTURAS
NERVIOSAS

DESCRIPCIN 4X

DESCRIPCIN 10X

DESCRIPCIN 40X

IV. CUESTIONARIO DE AUTOAPRENDIZAJE

123
1. Cmo se estructura la nefrona? Dibuje e identifique sus estructuras, explicando brevemente sus
funciones
2. En un cuadro comparativo explique la histologa de estas porciones.
3. Por qu las vas urinarias se revisten de un epitelio transicional?
3. Cules son las vas urinarias?
4. Dibuje y compare la estructura histolgica de la vejiga en distensin y en contraccin.
5. Cmo se estructura el testculo?
6. Cul es la relacin de las clulas de Leydig y los tbulos seminferos?
7. Qu diferencia hay entre espermatognesis y espermiohistognesis?
8. Describa la estructura de la prstata?
9. Cules son las vas o conductos de eyaculacin?
10. Dibuje la estructura, al corte transversal, de la anatoma del cuerpo peneano y explique qu
composicin histolgica tienen?
11. Explique la histologa del tero y la funcin de sta.
12. Investigue los cambios asociados a las fases estrognica y progestacional en la mujer no embarazada;
en la mujer gestante y en la mujer menopusica.
13. Explique los cambios asociados a la gestacin en la mama.
14. Qu cambios experimenta la placenta en su histologa desde que se inicia su formacin hasta el 3er
trimestre gestacional?

BIBLIOGRAFA

BASICA

124
Histologa:
Genesser, F (2000). Histologa. 3a Edicin. Editorial Mdica Panamericana.
Genesser, F (2015). Histologa. 4a Edicin. Editorial Mdica Panamericana.

COMPLEMENTARIA

General:

Alberts B, Bray D, Lewis J, y cols (2000). Biologa Molecular de la Clula. 3a Edicin. Ediciones Omega,
Barcelona, Espaa.

Alberts B, Bray D, Lewis J, y cols (2004). Biologa Molecular de la Clula. 4a Edicin. Ediciones Omega,
Barcelona, Espaa.

Alberts B, Bray D, Lewis J, y cols (2014). Biologa Molecular de la Clula. 6a Edicin. Ediciones Omega,
Barcelona, Espaa.

De Robertis E D P, Hib J (2001). Biologa Celular y Molecular. 15a Edicin. Editorial El Ateneo. Buenos
Aires, Argentina.

Histologa:

Ross M, Pawlina Wojciech (2012). Histologa Texto y Atlas color con Biologa Celular y Molecular. 6a
Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires, Argentina.

Ross M, Pawlina Wojciech (2015). Histology: A Text and Atlas With Correlated Cell and Molecular Biology.
7th Edition. Wolters Kluver.

Gartner L, Hiatt J (2008). Texto y Atlas de Histologa. 3a Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos
Aires, Argentina.

Ovalle WK, Nahirney PC (2013). Netters Essential Histology. 2nd Edition. Elsevier-Saunders.

Kierszenbaum A (2016). Histology and Cell Biology: An introduction to Pathology. 4th Edition. Elsevier-
Saunders.

Weather WK, Nahirney PC (2014). Functional Histology: A text and atlas. 6th Edition. Elsevier-Saunders.

REFERENCIAS DIGITALES

125
1. http://www.rae.es
2. http://www.sinonimos.com
3. http://www.scielo.cl
4. http://www.investigacionyciencia.es
5. http://www.ncbi.nhi.org
6. http://www.medlineplus.com
7. http://www.lilacs.com
8. http://www.sciencephoto.com
9. http://www.nature.com
10. http://www.science.com
11. http://www.sciencedirect.com
12. http://www.cincel.com
13. http://www.beic.com
14. https://www.mega.nz/

126