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02 Ancash
03 Apurmac
04 Arequipa
05 Ayacucho
06 Cajamarca
09
Huancavelica
10 Hunuco
11 Ica
12 Junn
13 La Libertad
14
Lambayeque
16 Lima
19 Moquegua
21 Piura
24 Tacna
I.2. Industrializacin de la tara (Caesalpinia spinosa)
Semillas Goma
Fruto
A. glico
Vainas Tara en polvo Derivados de a. glico
I.1. Taninos de la tara OH
OH
O OH
quercitol O
OH
Ester digaloil
(Enlace para-depsdico)
Taninos de la tara
despidos relacionados a la
estructura 3,4,5-trigaloil,
considerados como los
mayores componentes de
los taninos de tara y
cido 4-galoil-5-(digaloil)qunico, R1 = C OH
cido 3-(digaloil)-4,5-digaloilqunico,
cido 4-(digaloil)-3,5-digaloilqunico, R 1O OR2
tara
cido 5-(digaloil)-3,4-digaloilqunico, y OR1 O OH
cido 1,3,4-trigaloilqunico. R2 = C OH O OH
cido qunico
Los galotaninos de tara cido 1,3- R1 = R 2 = H
O C OH
Galotaninos de la tara
Hidrlisis de los taninos
O O OH
OH
+ H 2O OH +
HO OH
OH
HO OH OH
OH
Objetivos especficos
Determinar los parmetros ptimos de extraccin de taninos hidrolizables a
partir de la vaina de tara, determinando en el extracto ptimo los compuestos
fenlicos, actividad antioxidante, as como el perfil de compuestos fenlicos
principales mediante HPLC DAD.
Estudiar la cintica de hidrlisis qumica de los taninos del extracto de tara.
Determinar la influencia del grado de hidrlisis de los taninos en la capacidad
antioxidante in vitro y evaluar la eficacia antioxidante en aceite de soya y en
carne.
III. MATERIALES Y METODOS
Materia prima
Se trabaj con vainas de tara (Caesalpinia spinosa) provenientes del
Departamento de Ancash, adquiridas en un mercado local
3.2. Mtodos de anlisis
Tara en polvo
b. Pruebas preliminares
Variables a evaluar:
Solvente: Metanol 80% (v/v), etanol 80% (v/v), agua y acetona 80% (v/v)
Nivel de pH: 2, 3 y 5
Constantes:
Temperatura y tiempo de extraccin: 4C por 20 h
Relacin materia prima/solvente: 1/375
Tamao de partcula: < 1 mm
Variables
Relacin materia prima:solvente: 1/10 1/ 60
Temperatura de extraccin: 25 75C
Tiempo de extraccin: 0.5 3 h
Constantes
Solvente de extraccin : Agua
pH : nivel que den las variables
Tamao de partcula: < 1 mm
Niveles
Variables 1 2
Mnimo Mximo
Materia prima/solvente (p/v) (A) 10 60
Temperatura (C) (B) 25 75
Tiempo (h) (C) 0.5 3
Tabla Y. Distribucin de las variables y sus niveles en el diseo experimental de
Taguchi
con arreglo ortogonal L4 (23)
Variables de control
Tratamientos A B C
1 1 1 1
2 1 2 2
3 2 1 2
4 2 2 1
d. Mtodo de Superficie Respuesta (MSR) para la optimizacin de la extraccin de
los
taninos hidrolizables de tara
Se emple el Diseo Central Compuesto Rotable (DCC) con las variables que
resultaron ser significativas del diseo Taguchi.
Se estableci el criterio del mayor es mejor.
El DCC estableci 13 corridas por triplicado y cinco rplicas alrededor del punto
central
ANLISIS DOSIMETRIA
A 140 C
Ta Tb Tc
C1 C2 C3 C4 C1 C2 C3 C4 C1 C2 C3 C4
Variables a evaluar:
ndice de perxido
Valor de p-anisidina
Dienos conjugados
Tiempo de induccin residual a 140 C
C1 C2 C3 C4 C1 C2 C3 C4 C1 C2 C3 C4
Ta Tb Tc
60 C
C1 C2 C1 C2 C1 C2
q1 q2 q3 q4 q5 q1 q2 q3 q4 q5 q1 q2 q3 q4 q5 q1 q2 q3 q4 q5 q1 q2 q3 q4 q5 q1 q2 q3 q4 q5
100 ppm 600 ppm 100 ppm 600 ppm 100 ppm 600 ppm 200 ppm
300 ppm 300 ppm 300 ppm
Molienda, moldeado
ETA = -10*log10(1/N*Sum(1/y))
Mean=51,4585
hidrolizables extrados aplicando el diseo Sig ma=1,99322
Taguchi MS Error=,013743
con arreglodf=8 ortogonal L4 (23)
(Dashed lin e in dicates 2*Standard Error)
53,5
53,0
52,5
52,0
51,5
51,0
50,5
50,0
49,5
(materia prima/solvente) (Temperatura) (Tiempo)
49,0
1 2 1 2 1 2
ABC
ANOVA mostr diferencias significativas en las variables temperatura y
tiempo pero no para materia prima/solvente (p < 0.05).
Segn la premisa mayor es mejor se trabaj con los mayores niveles
de las variables temperatura y tiempo.
c. Mtodo de Superficie Respuesta (MSR) para la optimizacin de la
extraccin de los taninos hidrolizables de tara
(*) Las trece corridas se hicieron por triplicado y con cinco puntos en el punto central. Condiciones de extraccin
constantes: solvente de extraccin agua, pH ~3.50 y relacin materia prima/solvente: 1/60.
Superficie Respuesta para el contenido de taninos de la tara en funcin a la
Estimated Response Surface
temperatura y tiempo de extraccin
TH(mg / g bs) 306.85 7.51T - 32.46q - 0.075T 0.035Tq 5.97q2
2
470
460
Taninos
450
440
430 3
2,6
420 2,2
1,8
60 62 64 66 68 1 1,4
70 Tiempo
Temperatura
Modelo matemtico que predice el comportamiento de extraccin de los taninos:
Taninos hidrolizables (mg AGE/ g, b.s) = 306,85 + 7,51*Temp - 32,46*Tiempo
-0,075*Temperatura^2 + 0,036*Temperatura*Tiempo + 5,97*Tiempo^2
Modelo se ajusta en un 65.5%
Curva de nivel de la Superficie Respuesta para los factores tiempo y temperatura en
Contours of Estimated Response Surface
la recuperacin de los taninos de la tara
3 Taninos
425,0
2,6 430,0
Tiempo 435,0
2,2 440,0
445,0
1,8 450,0
455,0
1,4 460,0
465,0
1
60 62 64 66 68 70
Temperatura
Se logr maximizar la extraccin de los taninos.
Condiciones: temperatura de 57.9 C; tiempo de 0,58 h; solvente: agua, pH ~
3.56 y relacin materia prima/solvente de 1/60; bajo estas condiciones la
cantidad mxima de taninos recuperados fue de 473.4 mg AGE/g, b.s. El modelo
pas por una validacin
4.2. Estudio de la cintica de hidrlisis de los taninos
.
ab ab 22
a a
Extracto
Extracto
Contenido de: Bruto
Entero (EE)
(EB)
Comp. fenlicos tot. (mg . 568,76
516,46 1,89
glico equiv./g. ms) 14,97
g o SD
80
0 0 0
70 0.5 10.264 0.531
60 f 1 16.971 1.636
1.5 22.606 1.347
50
e 2 23.302 0.93
40 4 38.852 2.835
5 55.252 0.083
30 dd
6 77.156 2.318
20 c 8 88.445 0.503
b
10 9 93.773 2.242
12 97.045 0.453
0 a 16 98.869 0.834
0 6 12 18 24 30 20 100 0
Tiempo (h) 24 86.122 0.832
28 86.128 1.42
600
Incre.cap.an
Cap. antioxidante
tioxidante
500 d
Grado de
Hidrlisis (%)
(umol trolox
equiv./ mg . (%)
Tiemp
f g
Capacidad antioxidante
o (h) glico)
(umol trolox equi./ml)
e e
d Prome
dio
SD
Prome
dio
SD
400
17.61
c 0 0 0 3 0.194 0.00
10.26 18.70
b 0.5 5 0.567 9 0.199 6.22
300
22.60 20.52
1.5 6 1.36 1 0.315 16.51
a
38.84 25.98
4 4 2.667 6 0.269 47.54
200
55.25 25.64
5 2 0.21 7 0.481 45.61
77.16 25.29
6 3 2.666 7 0.327 43.63
100
88.44 25.59
0 5 10 15 20 8 7 0.895 4 1.457 45.31
93.76 25.78
9 7 1.837 3 0.662 46.39
Tiempo (h)
25.74
20 100 0.448 9 0.198 46.19
a
15
10
umol
5
(
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Grado de hidrlisis (%)
93.7%
38.8% 100%
Blanco sin
antioxidante 22.6%
10.3% 55.2%
88.4.1
%
77.1%
TBHQ
Capacidad antioxidante especfica de taninos hidrolizados de vainas de tara
a diferentes grados de hidrlisis y su eficacia en aceite de soya a 140 C
1,6
30
d d d d d d
1,4 g g
d e f
25 d
Actividad antirradical especifica
b c
(umol Eq Trolox / mg EAG)
1,2
c a
b
Factor Estabilizacion
20 a
1,0
15 0,8
0,6
10
Factor de estabilizacin
0,4 Polinmica (Factor de estabilizacin)
5 y = -2E-05x 2 + 0,0049x + 1,077
0,2 R2 = 0,97
0
0,0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Grado de hidrlisis Grado de hidrlisis
% %
Cromtogramas HPLC-DAD de los extractos de
tara de diferentes grados de hidrlisis
0.50 0.50
A. glico
0.40 Extracto sin hidrolizar
GH = 93.7 % (9 h)
0.40
0.30 0.30
AU
AU
0.20 0.20
0.10 0.10
0.00 0.00
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00
Minutes Minutes
0.50 0.50
A. glico
GH = 38.8% (4 h) GH = 100% (20 h)
0.40 0.40
A. glico
0.30 0.30
AU
AU
0.20 0.20
0.10 0.10
0.00 0.00
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00
Minutes Minutes
Influencia de la concentracin de antioxidantes en el factor de
estabilizacin de aceite de soya a 140 C.
2,0
1,9
94%
Factor de estabilizacin
1,8
1,7
40%
1,6
1,5
1,4
H>caox
1,3
1,2 H>F
1,1 TBHQ
1,0
0 100 200 300
Concentracin (ppm)
Las curvas se ajustan a los siguientes modelos:
-H>caox: F= 0,8451 + 0,0054 C 6E-06 C2 , - TBHQ: F = 0,966 + 0,0039 C -8E-06 C2 , R2
R2 = 0,998 = 0,977
-H>F: F = 0,9732 + 0,0029 C 8E-07 C2 , R2 Donde F= factor de estabilizacin y C=
= 0,999 concentracin (ppm)
4.6. Evaluacin de la actividad antioxidante de los hidrolizados en
aceite de soya a 60 C (Estufa de Schall)
. Evaluacin del ndice de perxido en aceite de soya a 60 C (Estufa de Schall)
180
160
(meq peroxido/kg aceite)
140
Indice de peroxidos
120
100
80
60
40
20
0
0 5 10 15 20
Tiempo (das)
20
% Dienos Conjugados
15
10
0
0 5 10 15 20
Tiempo (das)
25
Valor p-anisidina
20
15
10
0
0 5 10 15 20
Tiempo (das)
Blanco TBHQ 100 ppm H>F 100 ppm
H>caox 100 ppm TBHQ 200 ppm H>F 200 ppm
H>caox 200 ppm
. Evaluacin del tiempo de induccin en aceite de soya a 60 C
(Estufa de Schall)
80
70
60
Tiempo onset
50
(minutos)
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20
Tiempo (das)