BIOQUMICA

1er c u a t r i m e s t r e

Alberto Fonte Polo

2 BIOLOGA
 NDICE
I: INTRODUCCIN
Tema 1.- Composicin qumica de los seres vivos.

II: PROTEINAS: ESTRUCTURA Y FUNCIN

Tema 2.- Papel funcional de las protenas.
Tema 3.- Estructura primaria y estructura secundaria de las protenas.
Tema 4.- Estructura terciaria de las protenas.
Tema 5.- Mioglobina y hemoglobina.
Tema 6.- Propiedades fsico-qumicas de las protenas.

III: ENZIMAS
Tema 7.- Concepto, clasificacin y nomenclatura de las enzimas.
Tema 8.- Mecanismo de la catlisis enzimtica.
Tema 9.- Factores que modifican la actividad enzimtica.
Tema 10.- Control de la actividad enzimtica.
Tema 11.- Vitaminas hidrosolubles y coenzimas derivados.

IV: BIOQUIMICA DE MEMBRANAS Y HORMONAS

Tema 12.- Estructura y funcin de las membranas celulares.
Tema 13.- Las hormonas.

V: INTRODUCCIN A LA BIOLOGA MOLECULAR

Tema 14.- Propiedades fisicoqumicas y estructura de los cidos nucleicos.
Tema 15.- Replicacin del ADN.
Tema 16.- Transcripcin.
Tema 17.- Traduccin.
Tema 18.- Regulacin de la expresin gentica.
Tema 1 Composicin Qumica de los Seres Vivos

Introduccin: historia y objetivos de la bioqumica

El objetivo de estudio de la bioqumica son los seres vivos, a nivel molecular, subcelular y
celular.

Niveles de organizacin:
molecular subcelular celular tisular orgnico sistema de rganos organismo
BIOQUMICA

La bioqumica es una ciencia que ha nacido a partir de otras, como la fsica, biofsica,
qumica, matemticas, fisiologa, patologa, microbiologa, zoologa, botnica A partir de
la bioqumica tambin han surgido nuevas ciencias, como la biotecnologa y la biologa
molecular, esta ltima estudia la estructura y propiedades de polmeros celulares (ADN,
protenas), y procede adems de la qumica orgnica y de la gentica.

Historia:
La protobioqumica ocup el lugar de la bioqumica hasta el siglo XIX, estudiaba
las enzimas y los aminocidos. Pasteur y Bernard realizaron grandes aportaciones a
la bioqumica.
En 1877, se publica la primera revista de qumica fisiolgica, ciencia que acabara
llamndose bioqumica.
En 1911 ocurre la fundacin de la Real Asociacin Bioqumica de Londres
(Biochemical Society). Surgen tambin otras sociedades internacionales de
bioqumica: JUB, FEBS (Federation of European Biochemical Societies), SEBBM
(Sociedad Espaola de Bioqumica y Biologa Molecular).
En 1949 se separa la fisiologa de la bioqumica.

Objetos de estudio actuales de la bioqumica:

Produccin de anticuerpos.
Explicar los procesos de diferenciacin y proliferacin celular, en relacin con el
cncer.
Explicar la apoptosis de las clulas cancerosas.
Explicar los mecanismos de la morfognesis.
Mejora gentica de especies.
Estudio de los sentidos

Biomolculas
De los 111 tomos conocidos, slo encontramos 27 elementos qumicos diferentes en los
seres vivos, y de ellos slo 4 (C, H, O, N) son cuantitativamente importantes.
Relativamente importantes son: Na, K, Mg, Ca, S, Cl, P. Poco importantes son Fe y Co
(solo trazas).

C, H, O, N forman fcilmente enlaces covalentes dobles (muy fuertes), y el carbono incluso

triples.
1
Alberto Fonte Polo

Las biomolculas de los organismos se hallan ordenadas en una jerarqua de complejidad

molecular creciente, as pues, segn su estructura, podemos clasificar los elementos que
estudia la bioqumica en:

Jerarqua de la organizacin molecular de las clulas

Orgnulos subcelulares
Complejos supramoleculares
106-109 dalton
Macromolculas
103-109 dalton
Unidades o sillares estructurales
100-400 dalton
Metabolitos intermediarios
50-300 dalton
Precursores del entorno ~50 dalton
tomos 10-100 dalton
Clula
Ncleo celular, mitocondria, cloroplasto,
aparato de Golgi
Ribosomas, complejos multienzimticos,
microtbulos
Protenas, cidos nucleicos, lpidos,
polisacridos
Aminocidos, nucletidos, glicerina,
monosacridos, cidos grasos libres
Piruvato, malato, gliceraldehido-3-fosfato,
citrato
H2O, CO2, N2, NH3

Las cantidades relativas de las clases principales de biomolculas en la bacteria comn

Escherichia coli son las siguientes:

Componentes moleculares de una clula de E. coli

Componentes % del peso total N de especies moleculares
Agua 70 1
Protenas 15 3000
c. Nucleicos: ADN, ARN 1, 6 1, 1000
Carbohidratos 3 50
Lpidos 2 40
Molculas sillares estructurales
e intermediarios 2 500
Iones inorgnicos 1 12

En realidad, todas las clulas vivas contienen aproximadamente las mismas proporciones de
las clases principales de biomolculas. As la porcin viva de todos los tipos de clulas
posee casi la misma composicin molecular.

70 % H2O
Clula tpica
30 % Residuo seco 50 % Protenas
50 % Lpidos, cidos nucleicos,
glcidos y minerales

Los tipos principales de biomolculas ejercen idnticas funciones en todas las especies de
clulas.
Los cidos nucleicos actan universalmente almacenando y transmitiendo la
informacin gentica.
Las protenas son los productos directos y los efectores de la accin de los genes.
Algunas protenas poseen actividad cataltica especfica y actan como enzimas;
otras desempean el papel de elementos estructurales. Las protenas son las ms
verstiles de todas las biomolculas.
2
 Bioqumica - Tema 1

Los carbohidratos desempean dos funciones principales en todas las clulas.

Algunos, como el almidn, sirven a modo de almacenes de combustibles que
proporcionan energa para la actividad celular, y otros, como la celulosa, sirven de
elementos estructurales extracelulares.
Los lpidos, a su vez, tambin desempean el mismo papel en todas las clulas, bien
como componentes estructurales principales de las membranas o como forma de
almacenar combustible rico en energa.
El agua, los minerales y las vitaminas tienen funcin reguladora en el organismo.

Nutricionalmente hablando, carbohidratos, lpidos y protenas son macronutrientes. El

agua, los minerales y las vitaminas son micronutrientes (no aportan energa).

Las biomolculas primordiales (3040 en la clula) son aquellas de las que derivan todas
las dems. Por ejemplo: en la clula hay 20 aminocidos esenciales, de los que derivan 150
molculas con estructura de aminocido. A partir de la glucosa se forman 50 molculas
diferentes.
Puesto que las macromolculas de todos los organismos estn constituidas slo por
relativamente pocas y simples molculas-sillar, se ha sugerido que las primeras clulas que
surgieron sobre la tierra, pudieron haberse construido a partir nicamente de dos o tres
docenas de molculas orgnicas diferentes. Este conjunto de biomolculas primordiales
puede haber incluido 20 aminocidos, 5 bases nitrogenadas y 1 ms cidos grasos, 2
azcares... En definitiva, este conjunto de biomolculas primordiales puede ser considerado
como el antecesor de todas las dems biomolculas.

El agua
El agua constituye el 70 % del peso de una clula corriente (exceptuando el adipocito). Esta
cantidad debe mantenerse constante, si el porcentaje cae en un 10 % hay enfermedades por
deshidratacin, y si se pierde el 20 % de agua se produce la muerte del organismo.
Hay mayores niveles de agua en tejidos jvenes que en tejidos viejos. En tejidos
activos metablicamente tambin hay ms cantidad de agua que en tejidos inactivos.

Estructura y enlace de hidrgeno en el agua

El agua posee un peso molecular de 18 dalton. Tiene un punto de fusin, un punto de

ebullicin, el calor de vaporizacin y el de fusin y la tensin superficial, ms elevados que
otros hidruros comparables, tales como el H2S o el NH3, o que la mayor parte de los
lquidos corrientes. Todas estas propiedades indican que en el agua las fuerzas de atraccin
entre las molculas y, por tanto, su cohesin interna, son relativamente elevadas.

Las potentes fuerzas intermoleculares en el agua lquida estn originadas por la distribucin
especfica de los electrones en la molcula de agua. El tomo de oxgeno comparte un par
de electrones con cada uno de los tomos de hidrgeno, por superposicin de los orbitales
1s de los tomos de hidrgeno con los orbitales hbridos sp3 del tomo de oxgeno.

Configuracin electrnica:
O: 1 s2, 2 s2, px2, py1, pz1 4 orbitales hbridos sp3
H: 1 s1

3
Alberto Fonte Polo

Mediante anlisis espectroscpico y de rayos X se ha determinado el ngulo de enlace

HOH, que es de 104,5. Tericamente debera ser de 109,5, pero es menor debido a la
repulsin de los orbitales libres del oxgeno.

Esta disposicin de electrones en la molcula del agua le comunica asimetra elctrica. El

tomo de oxgeno, ms electronegativo, tiende a atraer los electrones no compartidos del
tomo de hidrgeno, y deja desnudos los ncleos de hidrgeno. El resultado es que cada
uno de los dos tomos de hidrgeno posee una carga local parcial positiva ( +). El tomo de
oxgeno, a su vez, posee una carga local parcial negativa (), situada en la zona de los
orbitales no compartidos. As, aunque la molcula de agua no posee una carga neta, es un
dipolo elctrico.

Cuando dos molculas de agua se aproximan mucho, se establece una atraccin

electrosttica entre la carga parcial negativa situada sobre el tomo de oxgeno de la
molcula de agua y la carga parcial positiva situada sobre un tomo de hidrgeno de una
molcula de agua adyacente. Esta unin electrosttica se llama enlace de hidrgeno. La
molcula de agua tiene gran facilidad de enlazarse formando puentes de hidrgeno consigo
misma y con otras molculas polares.

Los enlaces de hidrgeno son relativamente dbiles comparados con los enlaces covalentes.
Se calcula que los enlaces de hidrgeno en el agua lquida poseen solamente una energa de
enlace de unas 4,5 kcal/mol.

Estructura del agua lquida

La molcula de agua lquida tiene una estructura de racimos

parpadeantes (Frank, 1950). En un instante dado la mayor parte de
las molculas del agua lquida se hallan unidas mediante enlaces de
hidrgeno, la vida media de cada uno de los enlaces de hidrgeno es
solamente de 1010 segundos, por lo que se estn formando y
destruyendo puentes de hidrgeno constantemente.

El establecimiento de puentes de hidrgeno entre las molculas de agua no sucede

solamente en estado lquido, sino tambin en el hielo y en la fase de vapor (por encima de
600 C no se forman puentes de hidrgeno).

En el hielo cada molcula de agua se halla unida mediante enlaces de hidrgeno a las cuatro
molculas de agua ms prximas, constituyendo una red regular.

4
 Bioqumica - Tema 1

Propiedades fsicas del agua

Alto calor latente de vaporizacin (calor necesario para pasar de lquido a gas):
gracias a esta propiedad, la temperatura corporal puede ser menor a la temperatura
externa. La piel y los pulmones pueden eliminar exceso de calor.

Alto calor especfico: son las caloras necesarias para aumentar en 1 grado de
temperatura una masa de agua de 1 gramo. El agua y el amonaco son las molculas
de mayor calor especfico. Gracias a esta propiedad se evita que haya fluctuaciones
grandes de temperatura, estabilizando la temperatura del organismo.

Alto valor de conductividad trmica: sirve para mantener la termorregulacin

(temperatura similar en todo el cuerpo).

Alta densidad: la estructura del agua hace que su densidad sea mayor de lo
esperado.

Alta tensin superficial: slo superada por el mercurio.

Alto punto de fusin y ebullicin.

Gran disolvente: el agua es un disolvente mucho mejor que la mayor parte de los
lquidos corrientes. Muchas sales cristalizadas y otros compuestos inicos se
disuelven con facilidad en el agua, mientras son casi insolubles en los lquidos no
polares, tales como el cloroformo o el benceno. Puesto que la red cristalina de las
sales, por ejemplo el cloruro sdico, se mantiene unida mediante fuertes atracciones
electrostticas entre iones positivos e iones negativos alternantes, se necesita de una
energa considerable para separar a estos iones unos de otros. El agua disuelve el
cloruro sdico cristalizado gracias a las fuertes atracciones electrostticas entre los
dipolos del agua y los iones Na+ y Cl. El NaCl es por tanto un electrolito.

El agua tambin puede disolver molculas anfipticas (molculas apolares, pero

con un grupo polar, como por ejemplo los fosfolpidos) formando micelas.

Polar

Apolar

5
Alberto Fonte Polo

Disoluciones de electrolitos

Electrolitos fuertes: sales inicas, y cidos y bases fuertes.

Electrolitos dbiles: parte en forma molecular y parte en forma inica
(parcialmente disociados).

Grado de disociacin de un electrolito en agua: 1

(Grado de disociacin mximo de un electrolito = 1).

Adems los electrolitos pueden ser:

Electrovalentes: si son iones en estado slido.

Covalentes: dan lugar a iones al disolverse en agua (como el HCl).

En los electrolitos fuertes, no se habla de concentracin, sino de actividad, debido a que

cada in est rodeado de iones con carga opuesta, es decir hay un apantallamiento de
iones. Se define un factor de actividad: f 1. (Actividad mxima de un electrolito = 1). Si
el electrolito es fuerte, f tendr un valor pequeo.

Actividad = f concentracin

En una solucin electroltica:

1
I (fuerza inica) Ci (concentracin molar de i) Z i2
2

Efecto del in comn

Electrolito dbil AB, que se disocia en agua:

AB A + B+

A esta disolucin de electrolito dbil se le aade un electrolito fuerte, lo que provoca un

cambio en el grado de disociacin de la sal dbilmente disociada (electrolito AB).

BC B+ + C

B es el in comn. Al aumentar la concentracin de B (al aadir BC), se desplaza el

equilibrio del electrolito AB hacia la izquierda, para que disminuya la produccin de B, lo
que implica una disminucin del grado de disociacin de AB.

Efecto del in salino

Tenemos en disolucin un electrolito dbil, al que se le aade un electrolito fuerte sin in

comn. Esto provoca el aumento de la solubilidad del electrolito dbil.

AB A + B+
CD C+ + D

6
 Bioqumica - Tema 1

Soluciones tampn y pH
Es una solucin constituida por un cido dbil y una sal (tambin llamada base conjugada
fuerte) con un in comn. Sirven para amortiguar el pH de una disolucin.
cido dbil: AH A + H+
Base conjugada fuerte: BA A + B+

Ka (cte. de disociacin) =
A H
log K a pK a El pKa es el pH en el
AH que la mitad del
Despejando [H+]: cido est disociado.

AH cido
H+ = Ka
A sal / base conjugada
y tomando el logaritmo negativo de ambos miembros:

log H log K a log
AH
log H log K a log
[A ]
[A ] [AH]

Sustituyendo log [H+] por pH y log Ka por pKa obtenemos la ecuacin de Henderson
Hasselbalch:
A
pH = pKa + log
AH

Un tampn es un sistema que tiende a impedir el cambio de pH cuando se aaden iones H+

o OH, es decir, mantiene el pH constante (pH = pKa 1).
Los fluidos intracelulares y extracelulares de los organismos vivos contienen pares
conjugados cidobsicos, los cuales actan como tampones al pH normal de dichos
fluidos.

Ejemplo: Tampn de actico-acetato: AcH (cido actico); pKa = 4,76

+
AcNa (acetato sdico)
Echamos cido, al aadir protones
se desplaza el equilibrio para que
dejen de producirse protones (H+).
Echamos base, se disocia ms c.
actico, producindose ms H+.
Con 50 % de la base se disocia
todo el cido actico.

7
Alberto Fonte Polo

El pH sanguneo

El pH del plasma sanguneo en los vertebrados se mantiene en valores notablemente

constantes. El pH arterial del hombre suele ser de 7,4, mientras que el pH venoso es 7,35
(debido a que contiene ms CO2).

Si fallasen los mecanismos reguladores del pH, el organismo podra sufrir enfermedades:
pH = 7,4 7,9; alcalosis.
pH = 7,0 7,4; acidosis.

Las variaciones de pH se deben al metabolismo, ste produce protones (H+), cidos,

metabolitos cidos (pirvico), cido carbnico (CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3). El
exceso de acidez se compensa mediante:
50%: mediante los alimentos, que contienen sustancias que neutralizan la acidez.
50%: mediante los tampones fisiolgicos (el tamponamiento puede durar un
mximo de 1 segundo), y por eliminacin: por compensacin respiratoria (tarda
minutos) y compensacin renal (tarda horas).

Los tampones fisiolgicos

Los tampones fisiolgicos estn compuestos por electrolitos dbiles, y pueden tener lugar a
dos niveles: intracelular, como el tampn fosfato, Glucosa6P, ATP o extracelular,
como el tampn bicarbonato, albminas Tambin hay que tener en cuenta el tampn
hemoglobina reducida: tampn oxihemoglobinato.

Tampn fosfato:
H3PO4 H2PO4 + H+ pK1 = 2,1
H2PO4 HPO24 + H+ pK2 = 7,2 en el laboratorio, en el cuerpo humano 6,8.
HPO24 PO34 + H+ pK3 = 12,7
Aplicando la ecuacin de HendersonHasselbalch se obtiene la proporcin de cido
disociado:
HPO24
pHsanguneo = pK2 + log 7,4 = 6,8 + 0,6
H2PO4
En el cuerpo humano hay 6 veces menos tampn fosfato que tampn bicarbonato. El
tampn fosfato se encuentra sobre todo en los tbulos renales, donde el pH es algo
ms cido (6,5).

Tampn bicarbonato:
H2CO3 H+ + HCO3 pK = 6,1
El tampn bicarbonato es, en principio, un mal tampn, pero como hay mucho cido
carbnico y bicarbonato en el organismo, resulta efectivo.
En el sistema tampn del bicarbonato la especie dadora de protones, el cido
carbnico se halla en equilibrio reversible con el CO2 disuelto:
H2CO3 CO2(aq) + H2O (reaccin catalizada por la anhidrasa carbnica)

8
 Bioqumica - Tema 1

Si tal sistema acuoso est en contacto con una fase gaseosa, entonces el dixido de
carbono disuelto se hallar, a su vez, en equilibrio entre la fase gaseosa y la acuosa:
CO2(aq) CO2(g)
Si aumenta la presin del CO2 permaneciendo constantes las dems variables, el pH
del tampn bicarbonato disminuye, y viceversa. El sistema tampn del bicarbonato
puede regular con eficacia en las proximidades de pH=7.
Aplicando la ecuacin de HendersonHasselbalch:
[HCO 3 ]
7,4 = 6,1 + log
[H CO 3 ]
2
20

Casi todo el H2CO3 est disociado en el organismo (HCO3).

Un exceso de base (OH) en la sangre se neutraliza con los H+ del H2CO3. En
procesos de acidosis se libera menos CO2 en la respiracin, es decir, se hipoventila.

Tampn hemoglobina:
Acta en el interior del eritrocito. La hemoglobina es un tetrmero, tiene 2 cadenas
y 2 cadenas . Presenta en la posicin 146 de la cadena una molcula de
histidina, que se puede ionizar (sirve como componente del tampn):

La hemoglobina transporta O2, CO2 y acidez (H+).

H Hb (hemoglobina reducida) Hb (desoxihemoglobina) + H+ pKa = 7,9
H Hb O2 (oxihemoglobina) Hb O2 (oxihemoglobinato) + H+ pKa = 6,7
Aplicando la ecuacin de HendersonHasselbalch:
pHeritrocito = 7,3
pKa (en la hemoglobina reducida) = 7,9

[ Hb ] [ Hb ] 1
7,3 7,9 log
H Hb H Hb 4
Hay 4 veces ms hemoglobina en su forma reducida que en su forma oxidada.
Ahora aplicamos la ecuacin de HendersonHasselbalch a la oxihemoglobina:

[ HbO2 ] [ HbO2 ]
7,3 6,7 log 4
H HbO2 H HbO2
Hay 4 veces ms oxihemoglobina disociada que reducida.

9
Alberto Fonte Polo

Ante el exceso de acidez (exceso de CO2 o de H2CO3) la oxihemoglobina (HHbO2)

pasa a hemoglobina (HHb), liberando oxgeno (O2). En el metabolismo se produce
CO2 que pasa al plasma intersticial, de ah al plasma sanguneo y del plasma
sanguneo al eritrocito, y finalmente al pulmn.

o En el eritrocito:
CO2 + H2O H2CO3 (reaccin catalizada por la anhidrasa carbnica)
H2CO3 + Hb HCO3 + H Hb+ (hemoglobina cida), de este modo se
transporta el exceso de acidez a los pulmones para su eliminacin.

o En los tejidos:
tejidos
HbO2 + CO2 + H2O H Hb + HCO3 + O2
pulmones

En este intercambio interviene un intercambiador de aniones. Cada vez que sale

bicarbonato, entra Cl, y viceversa.
HCO3 HCO3
Cl Cl

El CO2 del organismo se puede carbamilar, se une al NH mediante un enlace

covalente, para transportarse a los pulmones:

R-NH2 + CO2 R-NH-COO + H+

Hay dos maneras de que el CO2 llegue a los pulmones: unido covalentemente a la
hemoglobina y disuelto en sangre (mediante la reaccin de carbamilacin).

Regulacin del pH fisiolgico

Si aumenta la concentracin de CO2 aumenta su presin parcial (pCO2), se acidifica la

sangre, y se elimina ese CO2 aumentando la actividad pulmonar (hiperventilacin).

Si disminuye la concentracin de CO2 en sangre, disminuye pCO2, se basifica la sangre, y

por lo tanto, se expulsa menos CO2 por los pulmones (hipoventilacin).

10
Tema 2 Papel Funcional de las Protenas

Introduccin
Las protenas son las molculas orgnicas ms abundantes en las clulas, constituyendo el
50 % o ms de su peso seco. Se encuentran en todas las partes de cada clula, ya que son
fundamentales en todos los aspectos de la estructura y funcin celulares. Existen muchas
clases de protenas diferentes, cada una de ellas especializada en una funcin biolgica
diferente.

Las protenas estas formadas por aminocidos, codificados genticamente. Existen 20

aminocidos diferentes. Los aminocidos estn formados por C, H, O, N y en algunos casos
tambin por S. Adems, las protenas pueden contener P, Fe, Zn y Cu.

Composicin qumica de las protenas:

Carbono 50 %
Hidrgeno 7%
Oxgeno 23 %
Nitrgeno 16 %
Azufre 4%

En las molculas proteicas los sucesivos restos de aminocidos se hallan unidos

covalentemente entre s formando largos polmeros no ramificados. Estn unidos en una
ordenacin de cabeza a cola mediante unas uniones llamadas enlaces peptdicos.

Un oligopptido est formado por menos de 20 aminocidos, como la somatostatina. Un

polipptido est formado por entre 20 y 50 aminocidos, como el glucagn. Y una
protena est formada por ms de 50 aminocidos, como la insulina con 51 aminocidos, o
la protena de la cubierta del virus del mosaico del tabaco con 336.000 aminocidos.

Las protenas se dividen en dos clases principales basndose en su composicin:

Las protenas simples son aquellas que por hidrlisis producen solamente
aminocidos, sin ningn otro producto principal, orgnico o inorgnico. Slo tienen
grupo proteico.
Las protenas conjugadas son aquellas que por hidrlisis producen no solamente
aminocidos, sino tambin otros componentes orgnicos o inorgnicos. Tienen un
grupo proteico y un grupo prosttico (porcin no aminocida).

Clasificacin y propiedades de las protenas

Tipos de protenas segn su estructura espacial:
Cada tipo de molcula proteica posee en su estado nativo una forma tridimensional
caracterstica que es conocida como su conformacin. Las protenas pueden clasificarse en
dos clases principales, segn su conformacin:

11
Alberto Fonte Polo

Protenas fibrosas: se hallan constituidas por cadenas polipeptdicas ordenadas de

modo paralelo a lo largo de un eje, formando fibras o lminas largas. Son materiales
fsicamente resistentes, insolubles en el agua. Las protenas fibrosas son los
elementos bsicos estructurales en el tejido conjuntivo de los animales superiores,
tales como el colgeno de los tendones y de la matriz del tejido seo, la queratina
del cabello, cuerno, cuero, uas y plumas, y la elastina del tejido conjuntivo
elstico.
Protenas globulares: estn constituidas por cadenas polipeptdicas plegadas
estrechamente de modo que adoptan formas esfricas o globulares compactas.
Destacan los anticuerpos (inmunoglobulinas), algunas hormonas y muchas protenas
que desempean una funcin de transporte, tales como la seroalbmina, la
mioglobina y la hemoglobina.

Tipos de protenas segn su solubilidad (clasificacin habitual):

Albminas: solubles en agua, como la albmina srica y la albmina del huevo.
Globulinas: solubles en sales diluidas. Inmunoglobulinas, y globulinas sricas.
Glutelinas: de origen vegetal, solubles en cidos o lcalis.
Gliadinas: solubles en etanol diluido (7080 %).
Histonas: protenas bsicas, solubles en medio cido (en el timo).
Proteaminas: protenas pequeas y bsicas, como la salmina.

Tipos de protenas segn su grupo prosttico:

Ncleoproteinas: presentes en la cromatina.
Glucoprotenas (o glicoprotenas): protenas asociadas a glcidos.
Fosfoprotenas: contienen grupos fosfato.
Cromoprotenas: como la hemoglobina y la mioglobina.
Lipoprotenas: protenas asociadas a lpidos.
Deshidrogenasas: protenas que intervienen en reacciones redox.

Propiedades funcionales de las protenas:

Estructural: se encuentran muchas protenas estructurales sobre todo como
componentes de membranas, y en el tejido conectivo (colgeno).
Biocatlisis: hablamos de enzimas.
Defensa frente agentes extraos: inmunoglobulinas.
Procesos de sealizacin: hormonas proteicas.
Procesos de reconocimiento celular: por receptores.
Transporte: como la hemoglobina.
Almacenamiento: ferritina, como depsito de hierro.
Mecanismos genticos: nucleoprotenas.
Balance hidroelectroltico: albmina.
Generacin y transmisin del impulso nervioso: rodopsina.

Los aminocidos
Son un gran grupo de molculas, que comenzaron a caracterizarse en 1806 con el
descubrimiento de la asparagina, hasta 1938 cuando se descubri el ltimo de los 20
aminocidos comunes, la treonina. Adems de los 20 aminocidos codificados por el
cdigo gentico hay muchos otros aminocidos que desempean otras funciones
importantes en las clulas.

12
 Bioqumica - Tema 2

Los 20 aminocidos hallados corrientemente en las protenas, llamados tambin

aminocidos corrientes, muestran la misma frmula estructural general. Excepto la prolina,
todos ellos tienen como denominadores comunes un grupo carboxilo libre y un grupo
amino libre e insustituido, unidos al tomo de carbono . Difieren entre s en la estructura
de sus cadenas laterales distintivas, llamadas grupos R. La prolina en cambio es un
iminocido, ya que tiene un grupo imino.

Forma no Forma
disociada ionizada

Los aminocidos pueden designarse mediante una notacin trivial, su nombre puede
deberse a su origen, puede hacer referencia a alguna propiedad... tambin pueden
representarse mediante una notacin abreviada de 3 letras, con la primera mayscula, o
mediante una notacin abreviada de una letra, que suele ser la primera letra de la
abreviacin de 3 letras, esta notacin facilita la comparacin de las secuencias aminocidas
de las protenas homlogas.

Smbolos de los aminocidos

Aminocidos Smbolos de Smbolos de
tres letras una letra
Alanina Ala A
Arginina Arg R
Asparagina Asn N
cido asprtico Asp D
Cistena Cys C
Glutamina Gln Q
cido glutmico Glu E
Glicina Gly G
Histidina His H
Isoleucina Ile I
Leucina Leu L
Lisina Lys K
Metionina Met M
Fenilalanina Phe F
Prolina Pro P
Serina Ser S
Treonina Thr T
Triptfano Trp W
Tirosina Tyr Y
Valina Val V

Se han propuesto varios mtodos para clasificar los aminocidos sobre la base de sus
grupos R. El ms significativo se basa en la polaridad de la cadena lateral R. Existen cuatro
clases principales:

13
Alberto Fonte Polo

Grupos R apolares o hidrfobos: Gly, Ala, Val, Leu, Pro, Ile, Phe, Trp y Met.
Grupos R polares, pero sin carga: Ser, Thr, Cys, Asn, Gln y Tyr.
Grupos R con carga positiva (bsicos): His, Lys y Arg.
Grupos R con carga negativa (cidos): Asp y Glu.

Aminocidos alifticos

Glicina (Gly) Alanina (Ala) Valina (Val) Leucina (Leu) Isoleucina (Ile)
Aminocidos con cadenas laterales que contienen hidroxilo o azufre

Serina (Ser) Cisteina (Cys) Treonina (Thr) Metionina (Met)

Aminocidos aromticos Aminocido cclico

Fenilalanina (Phe) Tirosina (Tyr) Triptfano (Trp) Prolina (Pro)

Aminocidos bsicos

Histidina (His) Lisina (Lys) Arginina (Arg)

14
 Bioqumica - Tema 2

Aminocidos cidos y sus amidas

cido asprtico (Asp) cido glutmico (Glu) Asparagina (Asn) Glutamina (Gln)

Aminocidos esenciales

Los aminocidos esenciales son aquellos que no se pueden sintetizar a partir de otros
recursos de la dieta (el cuerpo humano no puede generarlos). Esto implica que la nica
fuente de estos aminocidos es la ingesta directa a travs de la dieta.

En el caso del hombre y de la rata albina son: Thr, Met, Lys, Val, Leu, Ile, Phe, Trp, His y
Arg (en el adulto no es esencial).

Derivados de aminocidos

Adems de los 20 aminocidos corrientes, se han aislado otros aminocidos de aparicin

poco frecuente, todos ellos derivados de algn aminocido comn. Se encuentra entre ellos
la 4hidroxiprolina, derivado de la prolina, y la 5hidroxilisina, derivado de la lisina,
ambos aminocidos estn presentes en el colgeno.

Otros derivados de aminocidos son los aminocidos no proteicos, que actan como
precursores importantes o intermediarios en el metabolismo; as, la alanina es el
precursor de la vitamina cido pantotnico; la citrulina y la ornitina son intermediarios en
la sntesis de la arginina; la homocisteina y la homoserina son intermediarios en el
metabolismo de los aminocidos.

La cistina es un dmero de dos cistenas unidas a travs de un puente

disulfuro. La selenocistena, aparece en algunas protenas, y es el nico
aminocido que entra en la cadena proteica durante la sntesis, debido a
un error en la lectura del cdigo gentico.
selenocistena
Propiedades pticas de los aminocidos

Con la nica excepcin de la glicina, todos los aminocidos obtenidos a partir de la

hidrlisis de las protenas muestran actividad ptica; es decir, pueden hacer girar el plano
de la luz polarizada cuando se examinan en un polarmetro. La actividad ptica se presenta
en todos los compuestos capaces de existir en dos formas cuyas estructuras son como
imgenes especulares, no superponibles; tales compuestos, que pueden existir en formas
que son entre s como la mano derecha y la mano izquierda, se llaman compuestos quirales.

El fenmeno de estereoisomera aparece en todos los compuestos que poseen un tomo de

carbono asimtrico, es decir, uno que posea cuatro sustituyentes distintos. A causa de la

15
Alberto Fonte Polo

naturaleza tetradrica de los orbitales sp3 del tomo de carbono, los cuatro grupos
sustituyentes distintos pueden ocupar dos ordenaciones diferentes en el espacio en torno al
tomo de carbono para dar dos estereoismeros o enantimeros diferentes.

La glicina no posee ningn tomo de carbono asimtrico, los restantes aminocidos poseen
un tomo de carbono asimtrico, a excepcin de la treonina y la isoleucina, que poseen dos
(presentan cuatro estereoismeros, son diastereoismeros).

El nmero de estereoismeros posibles es de 2n, en donde n es el nmero de tomos de

carbono asimtricos.

La actividad ptica es expresada cuantitativamente como la rotacin especfica D :

25

25D rotacin observada (grados)

longitud tubo (dm) concentracin (g/ml)

La temperatura (normalmente 25C) y la longitud de onda de la luz empleada (normalmente

la lnea D del sodio, 589,3 nm) deben especificarse.

Algunos aminocidos aislados a partir de las protenas son dextrgiros (+), mientras que
otros son levgiros (), segn desven el plano de luz polarizada hacia la derecha o hacia la
izquierda, respectivamente. La rotacin especfica de un aminocido vara con el pH al que
se mide.

Todos los compuestos pticamente activos pueden relacionarse de forma estereoqumica

con el centro pticamente activo de un determinado compuesto progenitor que ha sido
arbitrariamente escogido para utilizarlo como patrn de referencia para los estereoismeros.
Es el azcar de tres tomos de carbono llamado gliceraldehdo, el carbohidrato ms
pequeo con un tomo de carbono asimtrico.

Los dos ismeros posibles del gliceraldehdo se designan convencionalmente por L y D.

Vemos que el grupo amino sustituyente del tomo de carbono asimtrico de la alanina (o de
cualquier otro aminocido) puede relacionarse estricamente con el grupo hidroxilo del
tomo de carbono asimtrico del gliceraldehdo, que el grupo carboxilo del aminocido

16
 Bioqumica - Tema 2

puede relacionarse con el grupo aldehdo del gliceraldehdo y que el grupo R del
aminocido puede, a su vez, relacionarse con el grupo CH2OH del gliceraldehdo. De este
modo los estereoismeros de todos los aminocidos que aparecen en la naturaleza pueden
relacionarse estructuralmente con los dos estereoismeros del gliceraldehdo.

Todos los estereoismeros relacionados estereoqumicamente con el Lgliceraldehdo se

designan por L, y los que se hallan relacionados con el Dgliceraldehdo se designan por D,
independientemente de la direccin de rotacin del plano de la luz polarizada que muestren
los ismeros.

Todos los aminocidos que aparecen en la naturaleza y se han hallado en las protenas
pertenecen a la serie estereoqumica L. Los Daminocidos pueden ser txicos, aunque en
pequeas cantidades el organismo puede degradarlos (mediante la accin de las Damino
oxidasas).

La forma L se transforma en la D (por mutarrotacin), esto suele ocurrir con el tiempo, y es

importante en la datacin de fsiles. Cuando D/L = 0,5 (a 17) han pasado 10.000 aos.

Cuando un aminocido es sintetizado en el laboratorio se obtiene, por lo general, una forma

pticamente inactiva denominada racemato, que se haya constituida por una mezcla
equimolar de los estereoismeros D y L.

Aminocidos como electrolitos

Cuando se disuelve en el agua un ion hbrido cristalizado, como la alanina, puede actuar o
bien como cido, (dador de protones) o como base (aceptor de protones):

Como cido: H3N+CH(CH3)COO H+ + H2NCH(CH3)COO

Como base: H+ + H3N+CH(CH3)COO H3N+CH(CH3)COOH

Las sustancias que poseen esta propiedad son anfteras y se llaman anflitos, locucin
abreviada de electrolitos anfteros. Los aminocidos son molculas anfteras, ya que
tienen un grupo amino, y un grupo carboxilo, ambos ionizables.

Esto quiere decir que a pH cido, un aminocido neutro se protona (NH3+). Si a una
disolucin acuosa aadimos base (OH) va aumentando el pH, lo que provoca que el
aminocido libere protones.

Forma AH2 Forma AH Forma A

El punto isoelctrico (pI) es el pH en que la disolucin de un aminocido neutro no tiene

carga (forma AH).
El punto isoelctrico tambin se define como el pH en el que la solubilidad del
aminocido es mnima, pero al ser molculas polares siguen siendo solubles en agua. La
cistina, que son dos cistenas oxidadas unidas por un puente disulfuro, tiene un pI = 50, y
el de la orina es 60. La cistina se libera a la orina y al cristalizar forma piedras debido a

17
Alberto Fonte Polo

su estructura y a su baja solubilidad. La acumulacin de cristales de cistina se conoce con el

nombre de cistinuria.

cistena

cistina

cistena

El punto isoelctrico se corresponde con la semisuma de pK1 y pK2:

pK1 pK 2
pI
2
Ejemplo: Calcular el punto isoelctrico de la alanina:
pK1 = 2,34 2,34 9,69
pI 6,02
pK2 = 9,69 2
Con un pH = 6,02, la disolucin de alanina no tiene carga. Todos los aminocidos
tienen un punto isoelctrico similar, prximo al pH fisiolgico.

La curva de titulacin de la alanina

(aminocido neutro) es la siguiente:

Cuando el pH = 2,34, la mitad del

aminocido est disociado y la otra
mitad reducido.

Ejemplo: cido asprtico, aminocido con grupo R cido:

pH muy cido molcula neutra

A: cido
H: nmero de
grupos ionizables
+/: carga del
aminocido

18
 Bioqumica - Tema 2

pK1 = 2,09
pKR = 3,86
pK2 = 9,82

Clculo del pI: semisuma de los valores de pK ms prximos entre s: pK1 y pKR.
pK1 pK R 2,09 3,86
pI 2,98
2 2
Curva de valoracin:

Ejemplo: Lisina, aminocido con grupo R bsico:

pK1 = 2,18 pK2 = 8,95 pKR = 10,53

Clculo del pI:

pK 2 pK R 8,95 10,53
pI 9,74
2 2

Curva de valoracin:

19
Alberto Fonte Polo

Reacciones qumicas de los aminocidos

Las reacciones orgnicas caractersticas de los aminocidos son las de sus grupos
funcionales, es decir, los grupos carboxilo, los grupos amino y los grupos funcionales
presentes en las distintas cadenas laterales. El conocimiento de estas reacciones es til para
la identificacin y anlisis de aminocidos en los hidrolizados de protena, para la
identificacin de la secuencia aminocida en las molculas de protena, para la sntesis
qumica de los polipptidos

Reacciones de los grupos R:

Reaccin de Millon: reaccin de la tirosina con mercurio, se origina color rojo.
Reaccin de Sakaguchi: reaccin del grupo guanidinio de la arginina con -naftol
y HClO Na, se origina tambin un color rojo.
Reaccin xantoproteica: reaccin de aminocidos aromticos (Phe, Tyr y Trp) con
HNO3, dando lugar a un color amarillo.
Reaccin de FolinCiocalteau: reaccin de la tirosina con cido
fosfomolibdotngstico, se forma color azul.
Reaccin de la cistena con Ag+: Cys + Ag+ mercptidos + Fe3+ cistina

Reacciones de los grupos carboxilo (COOH):

Formacin de amidas (con aminas).
Formacin de steres (con alcoholes).
Formacin de cloruros de acilo.
Reduccin del COOH mediante borohidruro sdico (H4BNa) para obtener alcoholes.

Reacciones de los grupos amino (NH2):

Reaccin de la ninhidrina: puede utilizarse para valorar los aminocidos
cuantitativamente en cantidades muy pequeas. En la reaccin con la ninhidrina
aparece un color azul, o prpura, con todos los aminocidos y pptidos que poseen
grupos amino libres, mientras que con la prolina, en la que el grupo amino se
halla sustituido, se obtiene un color amarillo caracterstico.

20
 Bioqumica - Tema 2

Reaccin de Sanger:

color amarillo
FDNB a pH bsico
(Fluordinitrobenceno)

Reaccin de Edman:

Feniltiohidantona
(incolora, pero se
ITF detecta por
(Isotiocianato de fenilo) cromatografa).

Reaccin de dansilacin: emplea como reactivo marcador el cloruro de 1-

dimetilaminonaftaleno-5-sulfonilo (abreviadamente cloruro de dansilo). Como este
reactivo es muy fluorescente, los derivados de dansilo del aminocido N-terminal
pueden ponerse de manifiesto y medirse en cantidades pequeas mediante mtodos
fluorimtricos. El procedimiento que utiliza el dansilo es 100 veces ms sensible
que el mtodo de Sanger.

Cloruro de dansilo Dansil-aminocido (fluorescente)

21
Tema 3 Estructura Primaria y Estructura
Secundaria de las Protenas

Introduccin
Una protena es una sucesin de aminocidos unidos por enlace covalente. La estructura de
una protena es la forma tridimensional que adopta en el espacio y de ella depende su
funcin. Viene determinada por cuatro niveles estructurales:
Estructura primaria: secuencia de n aminocidos. Condiciona el resto de
estructuras de la protena.
Estructura secundaria: es la disposicin espacial de la cadena de aminocidos, es
decir, el ordenamiento regular de la cadena, con plegamientos, que pueden dar lugar
a la estructura terciaria.
Estructura terciaria: verdadero plegamiento tridimensional de la protena.
Estructura cuaternaria: la que tienen aquellas protenas con ms de una cadena.

Estructura primaria de las protenas

La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena, por lo tanto depende
de la secuencia de bases del ADN. Nos indica qu aminocidos componen la cadena
polipeptdica y el orden en que dichos aminocidos se encuentran. La estructura primaria es
la que condiciona al resto de estructuras y por tanto tambin a la funcin de la protena.

El enlace peptdico

Los aminocidos se unen entre s mediante enlace peptdico, es un enlace covalente que se
establece entre el grupo carboxilo de un aminocido y el grupo amino del siguiente, y se
desprende una molcula de agua.

22
 Bioqumica - Tema 3

El enlace peptdico es un enlace muy fuerte, tiene carcter casi de doble enlace y los tomos
que lo forman: CO-NH, estn inmovilizados en el mismo plano, no pudiendo girar el enlace
peptdico. Los dems enlaces, los del carbono y los de los radicales, s que pueden girar.
El enlace peptdico es un enlace covalente simple, pero algo ms corto de lo
normal, ya que mide 1,32 cuando la longitud normal es de 1,46 . Adems es algo ms
largo que un doble enlace (1,24 ). Esto permite que los tomos que forman parte del
enlace (CO-NH) formen un plano.

Por convencin se representa a la izquierda el aminocido con el grupo -amino libre, y se

dice que es el extremo amino-terminal, a la derecha estar el aminocido con el grupo
-carboxilo libre, se dice que es el extremo carboxilo-terminal.

La estructura primaria es responsable de la actividad de la protena (como la activacin-

desactivacin de enzimas), de muchas enfermedades moleculares (como la anemia
falciforme) y de que existan familias de protenas (explica la evolucin).

Determinacin de la estructura primaria

Composicin de aminocidos: la composicin aminoacdica de la cadena polipeptdica

puede determinarse mediante hidrlisis cida, hidrlisis bsica o hidrlisis enzimtica.
La hidrlisis bsica destruye la Arg, Cys-Cys, los grupos amida y provoca la
racemizacin de los aminocidos (los L-aminocidos pasan a D-aminocidos).
La hidrlisis cida es la ms comn de ellas. Se trata el pptido con HCl (6 N), a
100 C durante 18 horas. As se consigue la ruptura de los enlaces peptdicos, pero
se destruye el triptfano, los hidroxiaminocidos y los aminocidos azufrados.
Tras hidrolizar el pptido se obtiene una disolucin de aminocidos, que se
introduce en la columna. La resina Dowex-50, de intercambio de cationes, retiene
los cationes que se producen tras la hidrlisis, es decir, retiene aminocidos
cargados. Al subir el pH de la disolucin ciertos aminocidos alcanzarn su pI y ya
no sern retenidos por la resina, puesto que se han quedado sin carga. Utilizando
este mtodo se pueden conocer los aminocidos que hay en un pptido y en qu
proporcin, pero no se puede saber su orden en la cadena peptdica.
Aminocidos Solucin de fuerza inica y
Mezcla de aminocidos unidos a la resina pH controlado

Resina aninica

Cargas negativas

Aminocidos liberados:

23
Alberto Fonte Polo

Ruptura de los enlaces disulfuro: antes de comenzar el anlisis de la secuencia

aminocida de una protena el investigador debe determinar si la protena contiene una o
varias cadenas polipeptdicas. Si las cadenas polipeptdicas se hallan unidas
transversalmente por enlaces covalentes mediante uno o varios enlaces disulfuro (SS)
entre hemirrestos de cistina, estos enlaces transversales deben escindirse mediante
reacciones qumicas apropiadas.

Aunque la protena examinada contenga solamente una

cadena polipeptdica, se deben romper, en caso de
poseerlos, sus enlaces disulfuro intracatenarios. Por
ejemplo, la somatostatina es una hormona proteica de 14
aminocidos, que tiene enlaces intracatenarios S-S entre
las cistenas.

El enlace disulfuro dificulta la secuenciacin (puesto que la cadena debe ser lineal), por lo
que debe romperse mediante:

Reduccin con mercaptoetanol: el procedimiento ms corriente consiste en reducir

el enlace disulfuro a grupos sulfhidrilo, empleando un exceso de mercaptoetanol. Es
un mtodo no agresivo y reversible.

Mercaptoetanol

Oxidacin con cido perfrmico: este mtodo permite la escisin oxidativa de los
enlaces disulfuro transversales, por oxidacin con cido perfrmico. Con este
procedimiento se consigue romper el enlace S-S, pero tambin se elimina el
triptfano del pptido.

24
 Bioqumica - Tema 3

Identificacin del aminocido N-terminal:

Reaccin de Sanger: este mtodo permite localizar el aminocido N-terminal. Este

mtodo se basa en que el grupo -amino libre de los pptidos, que no han captado
protones, reacciona con el 2,4-dinitrofluorobenceno (DNFB) y forma derivados 2,4-
dinitrofenilados.
Cuando tales derivados de un pptido, independientemente de su longitud, se
someten a hidrlisis con HCl (6 N), todos los enlaces peptdicos se hidrolizan, pero
el enlace entre el grupo 2,4-dinotrofenilo y el grupo -amino del aminocido N-
terminal es relativamente estable frente a la hidrlisis cida. Por consiguiente, el
hidrolizado del pptido dinitrofenilado contiene todos los restos aminocidos de la
cadena peptdica en forma de aminocidos libres, a excepcin del resto N-terminal,
el cual aparece como derivado 2,4-dinitrofenilado, de color amarillo. Este resto
marcado puede separarse fcilmente de los aminocidos no sustituidos e
identificarse por comparacin cromatogrfica con los derivados dinitrofenilados
conocidos de los diferentes aminocidos.

Reaccin de Edman: en el procedimiento de Edman, el feniltioisocianato (ITF)

reacciona cuantitativamente con el grupo amino libre de un pptido y rinde el
correspondiente pptido feniltiocarbamilado. Por tratamiento cido, el resto N-
terminal se separa en forma de aminocido feniltiocarbamilado, dejando intacto al
resto de la cadena peptdica. El aminocido feniltiocarbamilado se cicla a
continuacin, con lo que se transforma en el correspondiente derivado de la
feniltiohidantona (FTH), que puede separarse e identificarse por cromatografa.

25
Alberto Fonte Polo

El resto N-terminal separado en forma de derivado feniltiocarbamilado puede

identificarse sencillamente por determinacin de la composicin aminocida del
pptido, antes y despus de la eliminacin del resto N-terminal.

Esta reaccin se diferencia de la de Sanger en que cuando tiene lugar la reaccin no

se rompen todos los enlaces peptdicos, el pptido permanece unido. En la reaccin
de Edman, slo se rompe un enlace peptdico (el del primer aminocido, que ser el
que se una al ITF).
Esta reaccin puede repetirse una y otra vez, para secuenciar toda la cadena,
es decir, para conocer que aminocidos la forman y qu posicin ocupan. Pero cada
vez slo se podr determinar el primer aminocido de la cadena (el N-terminal).

Aminopeptidasas: enzimas que rompen el primer enlace peptdico, de este modo se

puede determinar el primer aminocido de la cadena.

Identificacin del aminocido C-terminal:

Hidrazinlisis: el pptido se hace reaccionar con hidracina (NH2-NH2), de este

modo se provoca la ruptura de todos los enlaces peptdicos por conversin de todos
los aminocidos, excepto el aminocido C-terminal, en hidracidas.
La hidracina reacciona con todos los grupos carboxilo (CO-) que formaban
el enlace peptdico (CO-NH), excepto con el ltimo aminocido. El resto C-terminal
aparece como aminocido libre, que puede ser identificado con facilidad mediante
cromatografa.

26
 Bioqumica - Tema 3

Carboxipeptidasas: el aminocido C-terminal de un pptido puede separarse

tambin, selectivamente, por accin de la enzima carboxipeptidasa, que ataca de
modo especfico al enlace peptdico COOH-terminal de los pptidos. Un
inconveniente es que la enzima despus de separar el resto terminal, ataca al nuevo
enlace peptdico C-terminal.

Hidrlisis parcial de las cadenas polipeptdicas: una vez identificados los restos
aminocidos N- y C-terminales de una cadena polipeptdica, la etapa siguiente para
determinar la secuencia de los aminocidos, consiste en fragmentar la cadena para dar un
conjunto de pptidos cortos que puedan separarse e identificarse.

Va enzimtica: se emplean diversas proteasas:

Tripsina: enzima digestiva secretada por el pncreas al intestino delgado,
que rompe las protenas despus de los aminocidos Lys y Arg.
Quimotripsina: rompe protenas despus de Phe, Tyr, y Trp.
Pepsina: enzima gstrica que rompe las protenas despus de Phe, Tyr, Trp,
Leu, Asp y Glu.
Endoproteasa V8: enzima bacteriana que rompe tras Glu.
Va no enzimtica:
Bromuro de ciangeno (BrCN): rompe las protenas despus de Met. Los
restos de metionina se transforman en lactona de homoserina (un derivado
de la metionina).
cido yodosobenzoico: rompe despus de Trp.

27
Alberto Fonte Polo

Parte de la estrategia del anlisis de la secuencia aminoacdica consiste en fragmentar la

cadena polipeptdica, al menos por dos caminos diferentes, de modo que los fragmentos
peptdicos pequeos resultantes de un procedimiento se solapen con los resultantes de otro.
Por ejemplo, si la tripsina se emplea para la primera ruptura, la segunda escisin debe
llevarse a cabo empleando otra proteasa, como la quimotripsina o la pepsina, o mediante la
reaccin con el bromuro de ciangeno. A veces se precisa de una tercera o cuarta hidrlisis
parcial con objeto de obtener los necesarios pptidos solapados.

Estructura secundaria de las protenas

La secuencia secundaria de una protena es la disposicin de la secuencia de aminocidos
en el espacio segn los giros que realicen los enlaces que pueden girar, como los del
carbono , y cmo queden los planos de los enlaces peptdicos.
La secuencia de aminocidos est ordenada en algunos tramos (estructura
secundaria) y en otros presenta una disposicin al azar. Existen distintos tipos de
estructuras secundarias, como la -hlice, la lmina y la hlice de colgeno.

Puesto que los carbonos del enlace peptdico

pueden girar, este puede adoptar dos
configuraciones distintas: cis y trans. En la
cadena polipeptdica la configuracin estable es
la disposicin trans, porque en configuracin cis
se producira repulsin entre los carbonos .

Hlice y estructura de las queratinas

La hlice es una estructura que se da cuando la cadena de aminocidos se arrolla sobre

un cilindro imaginario, en sentido antihorario. En la hlice los grupos R de los
aminocidos se proyectan hacia el exterior de la hlice, bastante compacta, formada por el
esqueleto.

Este tipo de hlice permite la

formacin de puentes de hidrgeno
intracatenarios entre vueltas
consecutivas de la hlice, que son
paralelos al eje mayor de aquella y
que se extienden entre el tomo de
hidrgeno unido al nitrgeno
electronegativo (NH) de un enlace
peptdico, y el oxgeno carbonlico
(CO) del tercer aminocido que le
sucede.
En un giro completo caben 3,6
aminocidos, por cada aminocido
hay un giro de 100. La distancia entre
una posicin y la misma en la vuelta
siguiente es de 0,54 nm.

28
 Bioqumica - Tema 3

Puente de hidrgeno

La extensin con que una determinada cadena polipeptdica puede existir en forma de
hlice estable es reflejo de su composicin aminocida y de su secuencia; no todas las
cadenas polipeptdicas pueden formar una hlice estable.
Los aminocidos de la hlice suelen ser apolares y pequeos, los aminocidos
polares son pocos, o no existen, ya que desestabilizan la hlice.
Aminocidos frecuentes (permiten la hlice estable): Leu, Phe y Ala.
Aminocidos poco frecuentes (inestabilizan la hlice): Arg, Glu y Ser.
Aminocidos inexistentes (rompen la hlice): Pro.

Adems la estructura en hlice depende del pH. Por ejemplo, un polipptido de Lys no
forma hlice a pH 7, sino que existe en forma anrquica e irregular. Ello es debido a que a
pH 7 todos los grupos R de la polilisina poseen una carga positiva y se repelen mutuamente
de un modo tan fuerte que superan la tendencia a la formacin de enlaces de hidrgeno
intracatenarios. Sin embargo, a pH 12, los grupos R de la lisina no son portadores de carga,
y por tanto, no se repelen entre s; a este pH, la polilisina adopta espontneamente la forma
de hlice

Normalmente una protena tendr zonas de hlice y en

lmina . En modelos tridimensionales se representa la
hlice como un muelle y la lmina como dos flechas
paralelas. Algunas protenas ricas en zonas de hlice son la
hemoglobina, la fibrina, la mioglobina y la tropomiosina.

Las queratinas son protenas que se encuentran en el pelo, pezuas, uas, cuernos... Se
llaman as porque su estructura es predominantemente de hlice . Son protenas fibrosas y
muy ricas (20%) en aminocidos apolares, hidrfobos.
El monmero es una cadena polipeptdica que adopta una forma globular en sus
extremos y una hlice (dextrgira) en todo el tramo central. Dos cadenas se asocian y
enrollan entre s en una superhlice levgira, de este modo se forma un dmero. Los
dmeros se alinean cabeza con cola y 2 hileras de ellos, escalonados, forman un
protofilamento, 2 protofilamentos forman una protofibrilla, 4 u 8 protofibrillas forman una
microfibrilla, varias (quizs cientos) microfibrillas se empaquetan en una macrofibrilla.

monmero protofilamento

protofibrilla

dmero

29
Alberto Fonte Polo

En el pelo se establecen enlaces disulfuro entre las cistenas de las macrofibrillas. En la lana
estos enlaces son poco abundantes, por eso es ms flexible, en cambio en los cuernos hay
muchos enlaces disulfuro, de ah su dureza.
El proceso de permanente en peluquera consiste precisamente en tratar el pelo con
un agente reductor para romper los puentes disulfuro, dar la forma deseada (unas cadenas
deslizan con respecto a otras) y tratar con un oxidante para que se formen nuevos puentes
en la nueva posicin.

Seccin transversal
de un pelo
Proceso de rizado del pelo
(por calor, humedad o agente reductor)

Lmina

Al someter las queratinas al calor y humedad, se pasa de una estructura de hlice a

lmina , formndose de este modo queratinas.

En la hoja u hoja plegada los planos de los enlaces

peptdicos adoptan una forma de zigzag. La estructura
se mantiene gracias a los puentes de hidrgeno entre
los grupos C=O y N-H de aminocidos de distintas
cadenas polipeptdicas. Todos los enlaces peptdicos
participan en este enlace cruzado, y as confieren gran
estabilidad a la estructura. Los grupos R se hallan por
encima o por debajo de los planos en zigzag de la
lmina plegada.

Existen dos tipos de lminas : paralelas y antiparalelas.

Representacin grfica de la lmina

antiparalela (izquierda) y paralela (derecha).

30
 Bioqumica - Tema 3

Hoja paralela: las cadenas de aminocidos van siempre en el mismo sentido (-

CO-NH-). Las queratinas tienen hoja paralela.

Hoja antiparalela: est formada por cadenas con enlaces peptdicos en un sentido
(-CO-NH-) y otras en el sentido contrario (-NH-CO-). Esta estructura aparece en la
fibrona de la seda.

La lmina antiparalela se encuentra en la fibrona de la seda segregada por el gusano de

seda Bombyx mori.
La fibrona est formada por una repeticin de tetrmeros (-SerGlyAlaGly-)n.
En la mayor parte de los tipos de fibrona, un aminocido s y otro no es un resto de glicina,
de modo que todos los grupos R de un lado de la lmina plegada,
son tomos de hidrgeno. La mayor parte de los grupos R del otro
lado de la lmina son grupos metilo (por parte de la alanina) y
grupos CH2OH (por parte de la serina). Esta estructura favorece
la disposicin en capas de la fibrona.

31
Alberto Fonte Polo

La fibrona y otras -queratinas son ricas en aminocidos que poseen grupos R

relativamente pequeos, particularmente la glicina y la alanina. Si los grupos R son
voluminosos o poseen cargas, la lmina plegada no puede existir debido a las interacciones
entre los grupos R. A ello es debido que la forma estirada de las -queratinas sea inestable y
adopte, espontneamente, la forma -helicoidal; los grupos R de las -queratinas son ms
voluminosos y poseen carga mayor que los que conforman la lmina .
En la hoja podemos encontrar Met, Val, Leu y Pro, aunque esta ltima provoca
deformaciones en la cadena.

Existen otras dos diferencias entre las -queratinas y las -queratinas nativas. En las formas
, todas las cadenas polipeptdicas son paralelas, es decir, se desarrollan en la misma
direccin N-terminal a C-terminal, mientras que en la fibrona, las cadenas polipeptdicas
adyacentes son antiparalelas, es decir, se desarrollan en direcciones opuestas. Asimismo, las
-queratinas contienen muchos restos de cistina, dispuestos de tal modo que puedan
establecerse enlaces transversales -S-S- entre cadenas polipeptdicas adyacentes. En
contraposicin, las -queratinas tales como la fibrona no poseen enlaces -S-S-
transversales.

Hlice de colgeno

Otro tipo principal de protena fibrosa de los animales superiores es el colgeno de los
tejidos conectivos; es la ms abundante de todas las protenas de los vertebrados superiores
y constituye alrededor de un 25 % de la protena total del cuerpo.

Las fibrillas de colgeno se hallan dispuestas de modos diferentes, que dependen de la

funcin biolgica del tipo particular de tejido conjuntivo. En los tendones las fibras de
colgeno estn dispuestas en haces paralelos que proporcionan estructuras de gran
resistencia, pero de poca o nula capacidad de estiramiento. En la piel las fibrillas de
colgeno forman una red entrecruzada extendida en lminas. El material orgnico de la
crnea del ojo es colgeno casi puro, este colgeno est muy organizado, es cristalino, casi
transparente. Tambin lo hay en las paredes de vasos sanguneos, que son redes helicoidales
elsticas. Se encuentra adems en el hueso y en los dientes, este colgeno tiene un polmero
de fosfato clcico, que confiere dureza.
Cualquiera que sea la ordenacin de las fibrillas de colgeno en el tejido conjuntivo,
las fibrillas muestran siempre un estriamiento transversal caracterstico si las observamos
con el microscopio electrnico. La ebullicin en agua convierte el colgeno en gelatina, una
mezcla de polipptidos.

Aunque los colgenos de diferentes especies difieren algo en la secuencia aminocida, en la

mayor parte alrededor de de los aminocidos del colgeno son glicina y son prolina.
Tambin tiene gran cantidad de aminocidos
hidroxilados, como la 4-hidroxiprolina y la 5-
hidroxilisina, ambos representan del total. Si no
hay ascorbato no tiene lugar la reaccin, no se
hidroxilan los aminocidos. Como consecuencia se
produce un colgeno defectuoso que provoca
escorbuto (encas sangrantes, hemorragia de vasos,
piel dbil).
Estos aminocidos estn glicosilados, ya que
estn unidos a disacridos por su grupo OH.
32
 Bioqumica - Tema 3

El colgeno est construido por estructuras subunitarias

peridicas: las molculas de tropocolgeno, se trata de una
triple hlice formada por tres cadenas (cadenas ) arrolladas
de manera levgira y arrolladas entre s de manera
dextrgira. Esto aporta ms resistencia al colgeno. Esta
molcula tiene un dimetro de 1,5 nm y una longitud de
300 nm aproximadamente.

En cada cadena hay una secuencia de tres aminocidos que

se repite (secuencia GlyXY), por lo tanto, de los
aminocidos de estas cadenas lo forma la glicina. X e Y
suelen ser prolina o hidroxiprolina.
En una vuelta completa de la hlice hay 3
aminocidos, lo que hace que las glicinas del pptido
GlyXY estn en la misma posicin, por lo que los
hidrgenos de las glicinas se dirigen al interior de la triple
hlice. Las prolinas hacen que la hlice sea rgida.

Hay diferentes tipos de colgeno:

Colgeno tipo I: con dos cadenas iguales (1) y una
cadena 2. Es el tipo ms abundante, se encuentra en la dermis, crnea, tendones,
hueso, dentina... Tiene poca glicosilacin y poca hidroxilacin porque es pobre en
hidroxilisina.
Colgeno tipos II, III y IV: 3 cadenas iguales 1.
Colgeno tipo V: dos cadenas 1 iguales, y una diferente 2.

En el retculo endoplasmtico rugoso se inicia la sntesis en la forma de procadenas

precursoras del tropocolgeno. Cada una de estas procadenas consiste en una cadena
extendida con dos propptidos terminales (uno en el extremo carboxilo y otro en extremo
amino). En la luz del retculo endoplasmtico rugoso tiene lugar la hidroxilacin de los
residuos de prolina y lisina. La carencia de vitamina C inhibe la hidroxilacin y las
procadenas se malogran.

33
Alberto Fonte Polo

En el complejo de Golgi las hidroxilisinas son glucosiladas y las procadenas se unen

formando triples helicoides, formando as la molcula de procolgeno. Estas molculas se
segregan al espacio extracelular donde hay peptidasas que se encargan de la eliminacin de
los propptidos terminales, con la consiguiente conversin de las molculas de procolgeno
en tropocolgeno, que se ensamblarn entre s, separadas por una distancia de 35 nm. Esto
dejar poros que permitirn el depsito de fosfato clcico en el hueso.

Los enlaces covalentes de entrecruzamiento se forman a travs de cadenas laterales de

lisina oxidadas a aldehdo y de otras no alteradas.

NH2(CH2)4CHCOOH Lys NH2

NH2

OHC(CH2)3CHCOOH al-Lys COOH

NH2

Reaccin de oxidacin de la lisina:

34
 Bioqumica - Tema 3

La elastina es una protena formada por una cadena de 65 KDa. Forma parte de las fibras
elsticas, que se encuentran en el tejido conjuntivo elstico de la piel y en los vasos
sanguneos. Confiere elasticidad a las paredes arteriales y a los ligamentos.
La elastina es rica en prolina y glicina (como el tropocolgeno) pero pobre en
hidroxiprolina y carece de hidroxilisina. Tambin es rica en lisina y forma cortos enlaces
entre los residuos de Lys y al-Lys, de este modo se forma una red tridimensional con
disposicin al azar, que origina la matriz de las fibras elsticas.

Giros en estructuras secundarias

Las protenas globulares presentan giros en su estructura secundaria. Por ejemplo, si hay
prolina en la cadena polipeptdica se inicia un codo, de este modo la protena adquiere la
forma redondeada.

Estructuras supersecundarias

Las estructuras supersecundarias aparecen en protenas globulares, estn construidas por la

combinacin de elementos de estructura secundaria (hlice , hojas y estructuras no
repetitivas). Se producen al empaquetar las cadenas laterales de elementos de estructura
secundaria adyacentes. Por ejemplo las hlice y hojas adyacentes en la secuencia de
aminocidos estn tambin usualmente adyacentes en la estructura final plegada de la
protena. En una misma protena pueden darse varias estructuras supersecundarias. Algunos
de los motivos ms comunes se muestran a continuacin:

Unidad --: est constituida por dos cadenas paralelas, conectadas por una -
hlice.

35
Alberto Fonte Polo

Greca (clave o llave griega): hoja antiparalela.

Meandro : hoja antiparalela.

Barril : cilindro en el que diversas aristas son hoja conectadas entre s.

Rodeando al cilindro hay una -hlice.

36
Tema 4 Estructura Terciaria de las Protenas

Introduccin
La estructura terciaria es la estructura tridimensional de la protena, es la disposicin
espacial que adopta la estructura secundaria (la -hlice y la lmina ) al sufrir ms giros y
plegamientos.

La conformacin nativa de una protena corresponde a la estructura terciaria, si tiene una

sola cadena, o a la cuaternaria, si tiene ms cadenas.

La estructura terciaria se mantiene estable gracias a las interacciones que se producen entre
los aminocidos de los distintos segmentos de la cadena polipeptdica. Pueden darse cinco
tipos de enlaces:
Enlace inico: son interacciones electroestticas entre grupos con carga elctrica
opuesta de las cadenas laterales. Por ejemplo, entre un grupo carboxilo y un grupo
amino ionizados.
Enlace covalente: como el puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que
tiene azufre. Es el enlace ms fuerte.
Enlace de hidrgeno: entre grupos polares, como los grupos C=O y N-H, y entre
los grupos OH. Este enlace es poco importante, al estar la protena en disolucin
acuosa, se forman y se rompen continuamente los enlaces.
Interacciones hidrofbicas entre cadenas apolares: los grupos apolares se
colocan cerca unos de otros y ocultndose del agua, y los grupos polares se
disponen hacia el exterior en contacto con el agua.
Interacciones dipolo-dipolo: las interacciones de Van der Waals son enlaces muy
dbiles entre polos instantneos opuestos que surgen en los radicales
hidrocarbonados de los aminocidos.

Cada protena tiene una estructura terciaria peculiar, pero se pueden clasificar en dos
grandes tipos:
Conformacin globular: la forma tridimensional de la protena es ms o menos
esfrica. Ejemplos: mioglobina, globulinas, albmina
Conformacin filamentosa: la forma tridimensional es alargada. Ejemplos:
colgeno, elastina, fibrona

37
Alberto Fonte Polo

Cristalografa de rayos X
La cristalografa de rayos X es una tcnica consistente en hacer pasar un haz de rayos X a
travs de un cristal de la sustancia sujeta a estudio. El haz se escinde en varias direcciones
debido a la simetra de la agrupacin de tomos y, por difraccin, da lugar a un patrn de
intensidades que puede interpretarse segn la ubicacin de los tomos en el cristal. Esta
tcnica se utiliza ampliamente en la determinacin de las estructuras de las protenas.

Hasta que se hizo posible el anlisis por rayos X de las protenas cristalizadas, apenas se
saba nada acerca del modo en el que se hallan plegadas tridimensionalmente sus cadenas
polipeptdicas.
La interpretacin de los diagramas de difraccin de rayos X resulta mucho ms
difcil para las protenas globulares que para las fibrosas, debido a que las cadenas
polipeptdicas de las protenas globulares no estn dispuestas a lo largo de un eje, sino que
se hallan plegadas de modo compacto e irregular y adoptan formas casi esfricas.

Bragg: estudi cristales de molculas inorgnicas.

Bernal: realiz los primeros estudios con protenas.
Pauling: estudio de aminocidos y del enlace peptdico.
Kendrew (1959): estudio de la mioglobina de cachalote, a una resolucin de 0,2 nm.

Los rayos X tienen una longitud de onda () de 0,1 nm, pero debido a la imprecisin
instrumental se trabaja a 0,2 nm. Se ven los tomos pero a poca resolucin. En cambio en la
microscopa ptica se trabaja a = 400-700 nm.

Cristalgrafo de rayos X: emisor de rayos x colimador cristal proteico puro placa

fotogrfica estructura tridimensional de la protena.

38
 Bioqumica - Tema 4

Desnaturalizacin y renaturalizacin
La desnaturalizacin es la prdida de la conformacin nativa de una protena. Con
aproximadamente 12 Kcal/mol se puede desestructurar una protena, de hecho, las protenas
tienen un intervalo de estabilidad termodinmica muy pequeo. La desnaturalizacin
conlleva la prdida de la actividad de la protena.
En algunos casos, una protena desnaturalizada puede volver a su anterior
plegamiento o conformacin, proceso que se denomina renaturalizacin. Pero en otros
casos la desnaturalizacin es irreversible. Por ejemplo, la ovoalbmina se desnaturaliza
irreversiblemente con el calor.

Mtodos de desnaturalizacin:
Cambios de pH: se rompen enlaces inicos y puentes de hidrgeno.
Calentamiento: aumenta las energas vibracional y rotacional de los tomos de los
aminocidos que forman la protena.
Adicin de agentes qumicos: como la urea, o el cloruro de guanidinio. Establecen
puentes de hidrgeno con los enlaces peptdicos de la protena, sustituyendo los
puentes de hidrgeno entre la protena y el agua, provocando la distorsin de la
molcula proteica.
Tambin detergentes como el SDS (dodecilsulfato sdico). ste interacciona
con la parte apolar de las protenas. Puede hacerlo ya que tiene una cola apolar.

Dodecilsulfato sdico

Experimento de Anfinsen

Los experimentos realizados por Anfinsen y sus

colaboradores en los aos 60 sobre la
desnaturalizacin de la ribonucleasa mostraron
la importancia de la secuencia aminocida en la
determinacin de la conformacin nativa. La
ribonucleasa es una protena que tiene 124
aminocidos y 4 enlaces disulfuro (SS) entre
cistenas.

El tratamiento de la ribonucleasa nativa con urea

8 M en presencia de mercaptoetanol (un agente
reductor), provocaba el desplegamiento
completo de la molcula de ribonucleasa y
produca una forma al azar. En este proceso los
cuatro puentes disulfuro intracatenarios
aportados por los restos de cistina de la
ribonucleasa, se rompieron por la accin del
mercaptoetanol, convirtindose en ocho restos de
cistena. La combinacin de desplegamiento y
ruptura de los enlaces transversales, provoc la
prdida completa de la actividad enzimtica,
pero a medida que la urea y el mercaptoetanol
Desnaturalizacin reversible de la ribonucleasa

39
Alberto Fonte Polo

eran lentamente eliminados de la disolucin de ribonucleasa por dilisis, retornaba poco a

poco la actividad enzimtica de la ribonucleasa, indicando que an despus de un
desplegamiento completo, la cadena polipeptdica de la ribonucleasa contiene todava la
informacin necesaria para replegarse espontneamente a su estructura terciaria,
catalticamente activa. En este proceso se oxidan de nuevo los ocho restos de cistena por el
oxgeno atmosfrico y se restablecen los cuatro puentes disulfuro transversales.
Lo que es particularmente significativo es que estos cuatro puentes disulfuro
transversales son los correctos, interviniendo los mismos pares de restos de cistena que en
la molcula nativa. Los clculos de probabilidad muestran que 8 restos de cistena (SH) en
una cadena polipeptdica nica pueden formar 105 conjuntos de cuatro pares disulfuro
diferentes (SS).
Al eliminar el mercaptoetanol se inicia la renaturalizacin, pero la urea no permite
el pliegue correcto de la ribonucleasa, debido a que interfiere en los enlaces de azufre. La
urea se elimina mediante dilisis, para ello se
sumerge una bolsa de celofn que contiene la
ribonucleasa y la urea en agua (en disolucin
hipotnica, con baja concentracin de sales). La
membrana del celofn es microporosa, por lo que,
por smosis sale urea y entra agua. La ribonucleasa
no puede atravesar la pared, al tener un gran
tamao.

Si por el contrario se trata la ribonucleasa con cido perydico (HIO4) se produce la

desnaturalizacin irreversible de la enzima.

SO3
Ribonucleasa
HIO4
(forma de cisne) SO3

Desnaturalizacin irreversible de la ribonucleasa

Cintica del plegamiento de las protenas

Una protena se pliega correctamente en un tiempo de 1011013 segundos. Un aminocido

de una protena de 100 aminocidos puede adoptar 10 conformaciones distintas. As que, la
protena podra adoptar 10100 conformaciones. Si la protena fuera buscando la
conformacin termodinmicamente ms estable, tardara en componerse 1087 aos, es decir,
un intervalo de tiempo mayor que la edad del universo (21010 aos). En la prctica, la
protena tarda 1011013 segundos en conformarse.
Cmo resulta posible entonces, que una cadena polipeptdica larga se pliegue tan
rpidamente y adopte su conformacin nativa, sin tantear todas sus conformaciones
posibles? Aunque la contestacin completa no se conoce an, parece probable que este
proceso se vea favorecido por el principio de la cooperatividad. O sea, que una vez que se
han formado correctamente algunos enlaces dbiles (enlaces de hidrgeno o interacciones
hidrofbicas) en una parte de la cadena polipeptdica, aumenta en gran manera la
probabilidad de que se formen posteriormente enlaces correctos, sin que sea necesario que
la cadena tantee todas las conformaciones posibles.

40
 Bioqumica - Tema 4

Protenas globulares
Las protenas globulares tienen una forma esfrica u ovoidal. Tiene estructura globular las
enzimas, muchas hormonas peptdicas, los receptores hormonales, las inmunoglobulinas, la
mioglobina y la hemoglobina.

Cuando estas protenas tienen un tamao superior a 200 aminocidos presentan varias
zonas de estructura globular (dominios), ya que no toda la protena es globular. Adems,
tienen zonas de hlice, lmina , barril y zonas al azar.

Estructura tridimensional de la Dominios estructurales en la

hemoglobina, una protena globular inmunoglobulina G

Muchas cadenas polipeptdicas se pliegan en dos o ms unidades globulares estables que se

denominan dominios. Estos pueden presentarse claramente separados formando zonas
lobulares o interaccionar fuertemente con otros dominios. La relacin entre la estructura de
un dominio y la funcin es compleja. A veces una determinada funcin es realizada por un
dominio individual, mientras que en otras ocasiones la funcin requiere la existencia de
ms de un dominio.

Un motivo es una regin de la protena, con una actividad determinada y que tambin se
encuentra en otras protenas (ejemplo: actividad Tyrquinasa en el receptor de EGF).

41
Tema 5 Mioglobina y Hemoglobina

Introduccin
La mioglobina almacena oxgeno en el msculo esqueltico, al que le da color rojo gracias
a su grupo hemo. La hemoglobina transporta oxgeno en sangre. Un hombre adulto tiene
un volumen de sangre de aproximadamente cinco litros. Los glbulos rojos, hemates o
eritrocitos constituyen aproximadamente el 96 % de los elementos formes de la sangre, su
valor normal en la mujer promedio es de alrededor de 4.800.000, y en el varn, de
aproximadamente 5.400.000 hemates por mm3. Se considera que cada eritrocito tiene 3108
molculas de hemoglobina.
El oxgeno entra por difusin a travs de las membranas en organismos unicelulares,
de las branquias en peces, o de los pulmones en vertebrados terrestres. La difusin de
oxgeno es bsica, para que entre oxgeno a la sangre. Cada molcula de hemoglobina
transporta 4 molculas de O2 en sangre, en forma de oxihemoglobina.

La mioglobina
La mioglobina es una protena globular relativamente pequea, que contiene una sola
cadena polipeptdica, constituida por 153 aminocidos. La mioglobina contiene un grupo
hemo ferroporfirnico, o grupo hemo, idntico al de la hemoglobina y capaz, como ella, de
experimentar oxigenacin y desoxigenacin reversible. Se halla, en realidad, emparentada
funcional y estructuralmente con la hemoglobina, que contiene cuatro cadenas peptdicas y
cuatro hemos, y posee un peso molecular cuatro veces superior al de la mioglobina.

La mioglobina se halla en las clulas del msculo esqueltico, y es especialmente

abundante en mamferos buceadores tales como la ballena, foca y morsa, cuyos msculos
son tan ricos en mioglobina que
presentan una coloracin pardo
oscura. En estos animales la
mioglobina llega a ser el 8 % del
total de protenas musculares. La
mioglobina no solamente acta
almacenando oxgeno, sino que
tambin aumenta la velocidad de
difusin del oxgeno a travs de la
clula.

42
 Bioqumica - Tema 5

La primera informacin importante sobre la mioglobina fue debida a los estudios con rayos
X que efectuaron J. C. Kendrew y sus colaboradores en Inglaterra sobre la mioglobina del
cachalote. El anlisis mediante rayos X de la estructura de la mioglobina tuvo efecto en dos
etapas. En la primera, que se complet en 1957, los resultados se calcularon para una
resolucin de 0,6 nm, logro que requiri el anlisis preciso de 400 manchas de difraccin.
Este grado de resolucin es insuficiente para revelar las posiciones exactas de los tomos
individuales o de los grupos funcionales de la molcula, pero indica de qu modo se halla
plegada la cadena peptdica en la molcula de mioglobina. En una segunda etapa, llevada a
cabo en 1962, el anlisis por rayos X de la mioglobina se realiz hasta una resolucin de
0,2 nm. Ello requiri el anlisis de 25000 reflexiones y el empleo de mtodos de
computacin electrnicos de gran velocidad. Este nivel de resolucin fue lo suficientemente
elevado para revelar la secuencia de la mayor parte de los grupos R, la cual concuerda con
la secuencia aminocida establecida por mtodos qumicos.

La mioglobina tiene un peso molecular de aproximadamente 17815 Da (incluido el grupo

hemo). No es una protena esfrica, sino ovoide, y tiene tres dimetros: 4,5 3,5 2,5 nm.
Los aminocidos de su cadena varan segn la especie. Pero hay 27 aminocidos
invariables, dos de los cuales son una histidina proximal y una histidina distal (segn su
distancia al hierro del grupo hemo), fundamentales para la fijacin de oxgeno y para su
conformacin nativa.

El esqueleto de la mioglobina est constituido por

ocho segmentos relativamente rectos, separados por
curvaturas, que se denominan segmento A, segmento
B, segmento C, y as sucesivamente hasta el
segmento H. Cada segmento est constituido por una
porcin de hlice , y siempre presentan 2
aminocidos en su regin carboxilo-terminal, y 5
aminocidos en su regin amino-terminal.
Adems, presenta 4 restos de prolina que
aparecen en las curvaturas, y marcan la separacin
entre una -hlice y otra.

La molcula es muy compacta, y todos los grupos R polares de los aminocidos se hallan
localizados sobre la superficie externa de la molcula y estn hidratados. Casi todos los
grupos no polares o hidrofbicos R se encuentran en el interior de la molcula, y estn as
protegidos de la exposicin al agua. Por lo tanto la hendidura donde se aloja el grupo hemo
tiene en su interior aminocidos apolares, sin carga, a excepcin de las dos histidinas
(proximal y distal).

La apomioglobina es la cadena proteica, que junto con el grupo hemo forma la mioglobina.

Estructura del grupo hemo

El grupo hemo se compone de protoporfirina IX y de un ion ferroso Fe2+. La protoporfirina

IX es un sistema de anillos derivado de la porfirina, que contiene cuatro anillos pirrlicos.
El tomo de Fe2+ establece seis enlaces de coordinacin, cuatro con los nitrgenos
del anillo tetrapirrlico, los enlaces entre el N y el Fe pueden establecerse con 2 N
cualquiera de los 4 totales. Un quinto enlace con el nitrgeno de la histidina F8,

43
Alberto Fonte Polo

denominada histidina proximal, y el sexto con la

molcula de oxgeno. La molcula de oxgeno
establece un puente de hidrgeno con otra
histidina, la E7, llamada histidina distal.

El grupo hemo est estabilizado en el interior de la

mioglobina y la hemoglobina por inetracciones
hidrofbicas con la fenilalanina CD1 y la valina
E11. Estos dos aminocidos proporcionan una
zona apolar que evita la oxidacin irreversible del
Fe2+ a Fe3+, haciendo posible la unin reversible
del oxgeno al grupo hemo y por tanto el transporte
de oxgeno.
Tanto en la hemoglobina como en la
mioglobina, el hierro siempre est en estado
ferroso, Fe2+. Cuando el ion ferroso, Fe2+, se oxida a frrico, Fe3+, se forma la
metahemoglobina (o metamioglogina), que no es funcional. No hay que confundir
metahemoglobina (o metamioglobina) con oxihemoglobina (u oximioglobina), que es la
forma oxigenada, pero no oxidada, de la hemoglobina (o de la mioglobina).
Desoxihemoglobina + 4O2 Oxihemoglobina
La oxigenacin del grupo hemo altera el estado electrnico del grupo, lo que afecta a sus
propiedades espectrofotomtricas. Esta es la razn del diferente color que presentan la
sangre arterial (rojo vivo) y la sangre venosa (ms oscura).

Ferro-protoporfirina IX

El grupo hemo tambin puede fijar CO (monxido de carbono, txico). El grupo hemo
aislado se une al CO con una afinidad superior en 25.000 veces respecto al O 2. In vivo, el
CO se une tambin con ms afinidad que el oxgeno, pero slo con una afinidad 250 veces
superior a la del O2. Esto se debe a que in vivo la histidina F8 hace que el CO se una
sesgado al hierro, in vitro no.

La mioglobina a pH cido (3,5) y al tratarse con disolventes orgnicos pierde el grupo

hemo. Pasa a convertirse a apomioglobina, parcialmente desplegada. Si se trata con urea
8M la apomioglobina se despliega totalmente. Es decir, ha ocurrido una desnaturalizacin.
44
 Bioqumica - Tema 5

Mediante dilisis puede eliminarse la urea, y de este modo la apomioglobina volvera a

estar parcialmente desplegada. Si se aade el grupo hemo se consigue renaturalizar
totalmente la mioglobina.

Cintica de la unin del oxgeno a la mioglobina: Mb + O2 MbO2

1 Kdis = constante de disociacin

Kdis = K = constante de equilibrio
K

Kdis=
Mb O2 Kdis=
Mb pO2 MbO2
MbpO2
MbO2 MbO2 K dis

Fraccin de saturacin de la mioglobina:

Se define la fraccin de saturacin (Y) como la fraccin de ocupacin de los centros de

unin al oxgeno (el tanto por uno de la ocupacin de los centros que unen oxgeno). El
valor de Y puede variar entre 0 y 1 (0 -todos los centros vacos-, 1 -todos los centros
ocupados-). La representacin de la funcin de saturacin Y frente a la pO2 (presin parcial
de oxgeno) se denomina curva de disociacin del oxgeno.

La fraccin de saturacin se calcula como el cociente entre la mioglobina oxigenada y la

mioglobina total. Resulta la ecuacin de una hiprbola.

Y
MbO2
MbO2 Mb
1
1
Mb 1 1 Mb K dis
1 pO2 K dis
Y
pO2
Y MbO2 Y Mb pO2 Y pO2 pO2 K dis
Saturacin Y

pO2
Y
pO2 P50

P50 = 1 mm Hg = 1 torr, presin parcial de O2 a la

que la mioglobina est saturada al 50 %.

La hemoglobina
La hemoglobina es la primera protena oligomrica cuyas estructuras terciaria y cuaternaria
fueron conocidas gracias al anlisis por rayos X. Este logro, conseguido por M. F. Perutz y
sus colaboradores en Inglaterra, fue la culminacin de 25 aos de estudio detallado sobre
esta importante protena.

45
Alberto Fonte Polo

Es una protena esferoidal compacta, con un dimetro de 5,5 nm, y con 574 aminocidos.
Est formada por 4 cadenas polipeptdicas: 2 cadenas y 2 cadenas .

1
2

Grupo hemo

Hemoglobina A1
2 (forma T, desoxi-)

Tipos de hemoglobinas:
Hb A (2 2): hemoglobina del adulto, constituye el 98 % del total.
Hb A2 (2 2): hemoglobina del adulto, es solo el 2 % de la hemoglobina total.
Hb F (2 2): hemoglobina del feto.
Hb E (2 2): hemoglobina embrionaria.

Las cadenas y son muy semejantes entre s en su estructura terciaria, la cual est
constituida por longitudes semejantes de hlice con curvaturas aproximadamente de los
mismos ngulos y direcciones. Pero lo ms notable es que la estructura terciaria de las
cadenas y es muy semejante a la estructura de la cadena nica de la mioglobina, en
consonancia con la semejante funcin biolgica de ambas protenas, es decir, su capacidad
para unir al oxgeno de modo reversible la mioglobina en el msculo y la hemoglobina en
la sangre.
Se cree que hace millones de aos haba un gen responsable de la sntesis de
globina. Este gen sufri un proceso de duplicacin y mutacin, y dio lugar a dos genes
diferentes: uno contendra informacin para sintetizar la cadena y otro la .

La cadena tiene 141 aminocidos, con 23 aminocidos invariables (en todas las especies).
La cadena tiene 146 aminocidos, con 20 aminocidos invariables. En las cadenas y
hay 9 aminocidos invariables (His distal e His proximal).

Resulta de especial inters la localizacin de los 4 grupos hemo, uno en cada subunidad,
que unen las 4 molculas de oxgeno. Estos grupos hemo son molculas planas en las
cuales los tomos de hierro forman complejos de coordinacin planares cuadrados y se
hallan muy separados unos de otros y situados a diferentes ngulos relativos. Cada uno de
ellos se halla parcialmente envuelto en una bolsa forrada por grupos R no polares. El quinto
enlace coordinado de cada tomo de hierro se establece con un nitrgeno imidazlico de un
resto de histidina; la sexta posicin queda disponible para su coordinacin con una
molcula de oxgeno.

Funciones de la hemoglobina:
Transporte de O2.
Transporte de protones (H+).
Transporte de CO2.

46
 Bioqumica - Tema 5

Fijacin del oxgeno

Es similar a como ocurre en la mioglobina. La fijacin del oxgeno tiene lugar a travs del
grupo hemo.

Hb + 4 O2 Hb(O2)4 Kdis =
Hb O2 4
( pO2 ) 4
Y=
HbO2 4 ( pO2 ) 4 ( P50 ) 4

Las curvas de disociacin del oxgeno de la

Saturacin Y
mioglobina y de la hemoglobina difieren en
dos aspectos. Por un lado, Y es mayor para
la mioglobina que para la hemoglobina
(tiene ms afinidad por el oxgeno la
mioglobina que la hemoglobina). La
segunda diferencia es que la curva de
disociacin del oxgeno de la mioglobina
tiene una forma hiperblica, mientras que la
curva de la hemoglobina es sigmoidea. pO2

Existe una cooperatividad positiva entre la hemoglobina y la mioglobina. Consiste en que

la captacin de oxgeno por la hemoglobina, facilita la entrada de ms oxgeno. El primer
oxgeno entra en la hemoglobina con cierta dificultad, la cuarta molcula de O2 lo hace con
una afinidad 300 veces superior. La molcula de hemoglobina se satura cuando pO2
(presin parcial de oxgeno) = 100 torr. sta es la presin que hay en los alvolos
pulmonares. En el msculo hay una presin pO2 = 1 torr. Como el oxgeno se difunde de
zonas de mayor presin a zonas de menor presin, en el msculo la hemoglobina cede el O 2
a la mioglobina.

Alosterismo

La hemoglobina es una protena alostrica, ya que tiene una serie de propiedades que le
hacen presentar alosterismo, como tener ms de una cadena proteica (subunidad).
Se han propuesto dos modelos generales para interpretar las interacciones entre
subunidades durante la oxigenacin de la hemoglobina. Ambos suponen que cada una de
las subunidades de la molcula de hemoglobina pueden existir en dos conformaciones
diferentes. La desoxihemoglobina es una molcula ms tensa (T), ms contrada que la
oxihemoglobina, a causa de que presenta 8 enlaces salinos (enlaces por fuerzas
electroestticas), mientras que la oxihemoglobina no los presenta, est ms relajada (R).

47
Alberto Fonte Polo

Modelo concertado: fue propuesto por Monod, Wyman y Changeux. La protena

alostrica tiene dos conformaciones, dos estados diferentes: tenso y relajado. La
hemoglobina est en estado tenso en forma de desoxihemoglobina. Cuando la
hemoglobina se asocia con el oxgeno, todas sus subunidades sufren un cambio
conformacional, se llega al estado relajado. Un ligando (como es el O2) aumenta la
probabilidad del cambio. Existe un equilibrio entre las dos conformaciones. La
cooperatividad positiva explica que la entrada de O2 aumenta la afinidad por l.

O2

Tenso Relajado
T4 R4

Modelo secuencial: propuesto por Koshland, Nemethy y Filmer. Este modelo

propone que la protena est en estado tenso y que en contacto con una molcula de
ligando hace que cambie la conformacin de una sola subunidad (no cambian todas
las subunidades como en el modelo concertado), al cambiar su conformacin,
adoptando la forma de afinidad elevada, debido a sus contactos moleculares con sus
vecinas incrementa la probabilidad de que la siguiente subunidad se desplace hacia
la forma de afinidad elevada y capte la molcula de oxgeno siguiente, hasta que las
cuatro se han unido, y las cuatro subunidades han adoptado la conformacin de
afinidad elevada. El punto clave del modelo secuencial es que la molcula pasa por
una serie de estados de conformacin intermedios.

O2 O2 O2 O2

T4 T3R T2R2 TR3 R4

En definitiva, la entrada de oxgeno favorece la entrada de ms oxgeno.

Fijacin de oxgeno por el grupo hemo

En la desoxihemoglobina el tomo de hierro se encuentra por debajo del plano que forma el
grupo hemo, ya que la histidina proximal (F8) produce una atraccin hacia el hierro, hay
0,06 nm de distancia entre el hierro y el plano hemo. En la oxigenacin, el tomo de hierro
se desplaza hacia el plano hemo. La histidina proximal (F8) es arrastrada con el tomo de
hierro y queda menos inclinada. Hay 0,02 nm de distancia entre el hierro y el plano.

En la oxihemoglobina, el tomo de hierro se introduce en el plano de la porfirina de modo

que puede formar un enlace fuerte con el O2, y el grupo hemo se vuelve ms plano. La
entrada de oxgeno produce un cambio conformacional en la hemoglobina, ocurre la
compactacin de la molcula.

48
 Bioqumica - Tema 5

Los grupos COOH terminales de cada cadena establecen dos enlaces inicos/salinos con
cadenas laterales de aminocidos. El movimiento del tomo de hierro provoca el cambio de
la afinidad por el oxgeno en la hemoglobina. La respuesta est en que el hierro arrastra a la
histidina proximal, que estira el resto de la cadena polipeptdica rompiendo algunos enlaces
salinos.
Como cada molcula de hemoglobina tiene cuatro grupos hemos, puede unir 4
molculas de O2. La primera unin de oxgeno implica que para arrastrar la histidina
proximal tiene que luchar con ocho enlaces salinos. Una vez que se ha unido ya no quedan
ocho sino menos porque se han roto varios de estos enlaces salinos, con lo que la segunda
ya no lucha contra ocho sino tal vez con menos, con lo que la resistencia es menor (al tener
que arrastrar menos residuos aminoacdicos) siendo cada vez ms fcil la unin del oxgeno
al grupo hemo. La unin del oxgeno a la mioglobina es ms fcil, ya que la unin del O2 al
grupo hemo tan slo tiene que arrastrar los aminocidos de una nica cadena.

Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato

El 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG) es un derivado del glicerol que

se produce en la gluclisis. La presencia de 2,3-BPG en la sangre
disminuye la afinidad de la hemoglobina por el oxgeno.
Las cargas negativas del 2,3-BPG interaccionan con las
cargas positivas de las cadenas de la hemoglobina. De este modo,
la hemoglobina en presencia de 2,3-BPG se une a ste y libera el
O2. En el eritrocito, la hemoglobina est unida a 2,3-BPG.

Hb(O2)4 + 2,3-BPG Hb(2,3-BPG) + 4O2

El 2,3-BPG se sita en el centro de la molcula de hemoglobina, as las cargas negativas de

los grupos fosfatos establecen enlaces inicos con las cargas positivas de las cadenas
laterales de los aminocidos que forman las cadenas de la hemoglobina.
En los alvolos pulmonares, la entrada de oxgeno distorsiona la molcula de
hemoglobina, y hace que se rompan los enlaces inicos entre la desoxihemoglobina y el
2,3-BPG, haciendo que pase a oxihemoglobina.
Saturacin Y

A ms de 4.500 m de altura, se acelera la gluclisis, por

lo tanto se produce mucho 2,3-BPG, dificultando el paso
de desoxihemoglobina a oxihemoglobina, y disminuye la HbA
afinidad al O2. La hemoglobina fetal (HbF 22) tiene HbS +
mayor afinidad por el oxgeno. Esta hemoglobina tiene 2,3-BPG
cadenas en lugar de cadenas , eso hace que tenga HbA + 2,3-BPG
menos cargas positivas, y por lo tanto tiene menor
afinidad por el 2,3-bisfosfoglicerato, aumentando la
afinidad por el O2.
26 Torr pO2

Efecto Bohr

La posicin del equilibrio hemoglobina-oxgeno se ve tambin afectada por el pH. Cuanto

mayor es el pH de la disolucin de hemoglobina a una determinada presin parcial de
oxgeno, mayor es el porcentaje de su saturacin con oxgeno. Este efecto reversible es

49
Alberto Fonte Polo

debido a que cuando la hemoglobina se oxigena, queda

Saturacin Y
ionizada y deja libre un protn por cada molcula de
oxgeno unida, de acuerdo con la ecuacin siguiente:
pH=7,6
HHb + O2 HbO2 + H
+ +
pH=7,4
+
en la que HHb es una subunidad que posee protones de
pH=7,2
una molcula de desoxihemoglobina. Puesto que esta
reaccin es libremente reversible, el incremento de la
concentracin de ion hidrgeno provocar el pO2
desplazamiento del equilibrio a la izquierda, hacia un
descenso de saturacin, mientras que la disminucin de la concentracin de hidrgeno
provocar que el equilibrio se desplace a la derecha esto es, hacia un incremento en la
saturacin. Este efecto del pH sobre el equilibrio oxgeno-hemoglobina recibe el nombre de
efecto Bohr.

Christian Bohr observ el metabolismo de los tejidos y vio que el CO2 del metabolismo
tisular disminuye la afinidad de la hemoglobina por el O2.
* H2CO3 H+ + HCO3
CO2 + H2O
Los protones que se originan en esta reaccin disminuyen la afinidad por el O2, sern
recogidos por la desoxihemoglobina. El descenso de pH, implica una disminucin de
afinidad por el O2.

La histidina de la posicin 146 del extremo COOH de la cadena de la hemoglobina est

protonada a pH cido, y a pH bsico se desprotona, es decir pasa a una forma sin carga.

His 146

La forma protonada es la predominante en los tejidos, y forma un enlace con el Asp 94 (con
carga negativa), un enlace inico que slo se forma en la desoxihemoglobina. El O 2
provoca el alojamiento de la His y el Asp. La forma no protonada es la que predomina en
los pulmones, tiene mayor afinidad por el O2 que la forma protonada.

En msculo y otros tejidos activos se produce CO2, baja el pH y disminuye la afinidad de la

hemoglobina al O2. Se favorece la formacin de desoxihemoglobina. En los alvolos
pulmonares disminuye la concentracin de CO2, aumenta el pH y aumenta la afinidad por el
oxgeno, se favorece la formacin de oxihemoglobina.

Transporte de CO2 por la hemoglobina

* H2CO3 H+ + HCO3
CO2 + H2O

HCO3 (en tejidos) H+ (en los pulmones, protones aportados por la Hb) H2CO3 CO2 + H2O

En estas reacciones acta la anhidrasa carbnica (*).

50
 Bioqumica - Tema 5

El CO2 se une a los grupos amino terminales de la hemoglobina, del siguiente modo:

R-NH2 + CO2 R-NH-COO (carbamato) R-NH2 + CO2 (aire espirado)

tejidos pulmones

En los pulmones hay alta presin parcial de CO2 (pCO2), por lo que es expulsado al
exterior. A pH = 7,4; el 25 % de los grupos amino de la Hb estn sin ionizar. Los
carbamatos se forman principalmente con la desoxihemoglobina, sus cargas negativas
ayudan a estabilizar la estructura de la hemoglobina.

La desoxihemoglobina puede fijar 0,4 moles de CO2/mol de hierro.

La oxihemoglobina puede fijar 0,15 moles de CO2/mol de hierro.

Hemoglobinopatas

En sentido amplio, el trmino hemoglobinopata designa la existencia de un trastorno de la

molcula de hemoglobina. Las hemoglobinas anormales pueden deberse al cambio de algn
aminocido en la cadena o en la cadena , a causa de mutaciones. Se conocen ms de 300
hemoglobinas mutantes.

Alteraciones de la hemoglobina y hemoglobinas anormales:

Exterior alterado: hemoglobina S. Las mutaciones que afectan a aminocidos

externos suelen ser inocuas.

Cambios a nivel del centro activo: hemoglobina M, en ella la histidina F8 ha sido

sustituida por una tirosina, lo que provoca que el Fe2+ se oxide a Fe3+, es por ello
una metahemoglobina incapaz de transportar oxgeno. Los homocigotos para este
carcter no sobreviven, slo los heterocigotos pueden sobrevivir (ellos producen
eritrocitos con hemoglobina normal y eritrocitos con hemoglobina M). Los
heterocigotos nacen con cianosis (coloracin azulada de la piel y mucosas).

Alteraciones en la estructura terciaria: hemoglobina Riverdale-Bronx, tiene una

Arg B6 en lugar de una Gly.

Alteraciones en la estructura cuaternaria: afecta al plegamiento de las 4 cadenas de

la hemoglobina. Esto disminuye al alosterismo de la molcula, aunque sigue
teniendo afinidad por el O2 del mismo modo que la mioglobina.

Hemoglobina S

Ocasiona la anemia falciforme, nombre motivado en que los eritrocitos tienen forma de hoz
o media luna. Se conoce desde 1904, cuando el doctor Herrick detecta en un joven
estudiante negro de 20 aos con anemia, que algunos de sus eritrocitos tenan forma de hoz.

La anemia falciforme fue la primera enfermedad molecular en caracterizarse. En 1954

Ingram demuestra que la alteracin en la hemoglobina S es debido a la alteracin del gen
que codifica la cadena de la hemoglobina, esta cadena tienen un aminocido valina en el
lugar que normalmente ocupa un cido glutmico en el puesto nmero 6 (6 GluVal).

51
Alberto Fonte Polo

Esto provoca que haya una zona apolar (debido a la

valina), una zona pegajosa que se une a otras zonas
pegajosas, y hace que se forme un filamento que ir
enrollndose y creciendo. Estos filamentos formarn
precipitados dentro de los glbulos rojos,
confirindoles la forma de hoz caracterstica. Los
eritrocitos falciformes obstruyen los vasos sanguneos,
provocando un trombo.

Los homocigotos tienen un 50 % de hemoglobina S,

mueren jvenes (30 aos) por fallo renal, cardaco,
infecciones y trombosis.

Los heterocigotos tienen un 1 % de hemoglobina S.

En la poblacin negra americana el 4 son

homocigotos, y el 10 son heterocigotos. En
poblaciones negras del frica subsahariana, 4/10 son
heterocigotos.

La anemia falciforme es muy frecuente en forma

heterocigtica (ya que en homocigosis es letal) en
regiones asociadas a malaria (o paludismo), dado que la
estructura celular asociada a esta patologa es resistente
a la infeccin por Plasmodium falciparum.

Talasemia

Bajo el nombre de talasemia (del griego thalassa que significa mar) se incluyen un grupo
muy heterogneo de alteraciones congnitas cuya caracterstica comn es un defecto en la
sntesis de una o varias cadenas de hemoglobina normales. La disminucin de la sntesis de
cadenas se denomina -talasemia, la de cadenas , -talasemia. El nombre es debido a
que esta enfermedad fue primeramente descrita en poblaciones costeras del Mediterrneo;
sin embargo, la enfermedad tambin es prevalente en frica, Oriente medio y Asia.
La herencia de la talasemia muestra un patrn autosmico dominante y su
frecuencia dentro del conjunto de la poblacin mundial es muy elevada, presentando una
distribucin que se correlaciona con las zonas donde existe o ha existido paludismo
endmico. Ello obedece al efecto protector que frente al parsito ejerce la
hemoglobinopata, lo que significa una presin gentica positiva de sta sobre la poblacin
afectada.
La baja produccin de hemoglobina puede deberse a una baja transcripcin de
ARNm, a una transcripcin defectuosa o a defectos en la traduccin que dan lugar a
protenas de hemoglobina inestables.

52
Tema 6 Propiedades Fsico-Qumicas
de las Protenas

Las protenas pueden separarse entre s basndose en las diferencias de tamao,

propiedades de solubilidad, carga elctrica y afinidad biolgica de una protena para un
ligando especfico.

Solubilidad
Las protenas en disolucin muestran cambios de su solubilidad, en funcin del pH, la
fuerza inica, las propiedades dielctricas del disolvente y la temperatura. Estas variables
pueden utilizarse para separar mezclas de protenas, ya que cada protena posee una
composicin en aminocidos caracterstica, la cual determina su comportamiento como
electrlito.

Precipitacin completa: precipitan todas las protenas, mediante la adicin de

cidos fuertes como el TCA (cido tricloroactico), HClO4, cido tngstico, o por
accin de Zn2+ o de Pb2+. Si se quiere purificar una protena, primero debe extraerse
la parte proteica, mediante precipitacin completa.

Precipitacin fraccionada: precipitan solo algunas protenas de la muestra, en

funcin del punto isoelctrico (pI), la fuerza inica, en base a las propiedades
dielctricas del solvente o en base a cambios de temperatura.

o Punto isoelctrico: la solubilidad de la

mayor parte de las protenas globulares se (gr/l)
NaCl
halla profundamente influida por el pH del (10mM)
sistema. La solubilidad de la -
lactoglobulina, una protena de la leche, es
mnima cuando el pH se encuentra entre 5,2
y 5,3 (este valor corresponde al pI),
independientemente de la concentracin de
NaCl presente. En presencia de una sal diluida (una disolucin salina de baja
concentracin) mejora la solubilidad, puesto que las sales disminuyen la
tendencia a agregarse de las protenas, esto se conoce como efecto salino
interno.

o Fuerza inica (): la fuerza inica de la

disolucin afecta a la solubilidad de la protena.
A altas fuerzas inicas, disminuye la
solubilidad de la protena, ya que las altas
concentraciones de sales deshidratan las
protenas y hacen que precipiten, este proceso
se conoce como efecto salino externo.

= Ci Zi 2 Ci: concentracin del in

Zi: n atmico

53
Alberto Fonte Polo

o Propiedades dielctricas del solvente: la adicin de disolventes orgnicos

neutros miscibles con el agua, particularmente etanol o acetona, disminuye la
solubilidad de la mayor parte de las protenas globulares en el agua, de tal
manera que precipitan de su disolucin.
Puesto que el etanol posee una constante dielctrica menor que la del
agua, su adicin a una disolucin acuosa de protena incrementa la fuerza de
atraccin entre las cargas opuestas, disminuyendo de este modo el grado de
ionizacin de los grupos R de la protena. Como resultado, las molculas de
protena tienden a agregarse y precipitan.

o Temperatura: dentro de una fluctuacin limitada

solubilidad
entre los 0 y los 40 C aproximadamente, la
solubilidad de las protenas globulares aumenta al
aumentar la temperatura. Por encima de los 40 C, la
solubilidad empeora, ya que las protenas comienzan a
desnaturalizarse, se agregan y precipitan. 40 C T

Protenas como electrolitos

Los procedimientos de separacin de protenas basados en la carga elctrica dependen en
ltimo trmino de sus propiedades cido-bsicas, las cuales se hallan determinadas en gran
medida por el nmero y los tipos de grupos R ionizables de sus cadenas polipeptdicas.
Puesto que las protenas difieren en composicin aminocida y secuencia, cada protena
posee propiedades cido-bsicas caractersticas.

Por ejemplo, la ribonucleasa nativa posee 124 aminocidos, 34 de los cuales tienen grupos
R ionizables, la mayora de ellos de carcter bsico.
Los valores de pK' de algunos tipos de grupos R de la ribonucleasa pueden variar
algo con respecto a los valores de pK' de estos grupos en los aminocidos libres debido a
los efectos de las cargas prximas.
Todos los grupos R de la ribonucleasa son accesibles a la valoracin cido-base, ya
que normalmente casi todos los grupos R de las protenas globulares nativas se hallan
situados sobre la superficie exterior de la molcula. Algunas protenas nativas, sin embargo,
poseen uno o ms grupos ionizables que no son
accesibles a la valoracin, probablemente debido Zona de pH
a que se hallan ocultos (como los grupos que de carga
estn en el interior de una protena globular) o a negativa neta
que participan en enlaces de hidrgeno. Por ello
se habla de pKa' y no de pKa.

Curva de valoracin de la ribonucleasa: la

valoracin comienza en el punto isoelctrico de
la ribonucleasa (pH 9,6) y se efecta (hacia la
izquierda) por adicin de cido, o (hacia la
derecha) por adicin de base. La adicin de H+
lleva a la protena a la zona de pH donde posee
carga positiva neta, y la adicin de base la lleva
a la zona pH en la que tiene carga negativa. La
forma de la curva de valoracin refleja el
nmero y el tipo de los grupos que se ionizan.

54
 Bioqumica - Tema 6

La curva de valoracin de la ribonucleasa muestra tambin su punto isoelctrico, al cual la

molcula no porta carga elctrica neta y es incapaz de migrar en un campo elctrico. El pI
est determinado por el nmero y por el pK' de los grupos R que se ionizan. Ser
relativamente elevado, por encima del pH 7, si la protena posee un contenido relativamente
elevado de aminocidos bsicos (lisina, arginina) como ocurre en el caso de la ribonucleasa,
que posee un pI de 9,6. Pero ser relativamente bajo si la protena posee una
preponderancia de restos acdicos (cidos asprtico y glutmico).

Las propiedades caractersticas cido-bsicas de las protenas son utilizadas de modo

directo, en dos mtodos generales muy empleados, que permiten la separacin y el anlisis
de mezclas de protenas: la electroforesis y la cromatografa de intercambio inico.

Electroforesis

La electroforesis permite la separacin de molculas segn su carga. Actualmente se realiza

la electroforesis de zona, en la que la disolucin acuosa de protenas se inmoviliza en una
matriz slida o soporte, un material poroso hidratado. Los soportes ms ampliamente
utilizados son el papel de filtro, o las tiras de acetato de celulosa, gel de slice, agarosa o
poliacrilamida. Son materiales relativamente inertes y que no interactan con las protenas
que emigran, ni las retardan en su movimiento.
El proceso electrofortico se deja proseguir hasta que los principales componentes
proteicos se separan en zonas distintas; de aqu el nombre de electroforesis de zona. La
posicin y la cantidad de protena existente en cada una de las zonas separadas se
determinan por aplicacin de un colorante que tie a las protenas; la densidad de la
coloracin retenida es proporcional a la cantidad de protena y puede valorarse mediante un
densitmetro.

1. Se realiza sobre un soporte slido o semislido, para

minimizar efectos de difusin.

2. Se somete el conjunto a un campo elctrico constante, a un

pH fijo; las protenas migran conforme a su carga elctrica.

3. Terminada la carrera electrofortica, las protenas se tien

con un colorante adecuado.

En la electroforesis en acetato de celulosa se usan dos compartimentos con una disolucin

tampn en cada uno, a un cierto pH, que estn separados por dos tabiques. Sobre los
tabiques se sita una tira de acetato de celulosa, que est en contacto con ambos
compartimentos. En un compartimento se coloca un nodo y en otro un ctodo.

Las protenas cargadas positivamente se

desplazan hacia el nodo y las que poseen
carga negativa hacia el ctodo. Finalmente se
obtiene una tira de acetato en la cual se han
distribuido las protenas en grupos segn su
carga elctrica. Las protenas se separan mejor
si hay grandes diferencias de carga entre ellas.

55
Alberto Fonte Polo

El mtodo se utiliza frecuentemente en los laboratorios de los hospitales para medir las
cantidades de las protenas principales en el plasma sanguneo. Para separar las protenas
del plasma sanguneo se aplican 500 V durante 1 hora.

Electroforesis de zona sobre una tira de acetato de

celulosa. Despus del teido, la tira se somete a un
barrido en el densitmetro para obtener el trazado
de los picos de protena.

Trazado del
densitmetro

Tira teida despus de la electroforesis

Diagrama electrofortico de las protenas

del plasma sanguneo humano (pH 8,6).
A = seroalbmina; = fibringeno; 1, 2,
y , son diversas globulinas.

Cuando hay pequeas diferencias de carga (azcares, aminocido y bases nitrogenadas) se

utilizan altos voltajes (1000-10000 V), es la electroforesis de alto voltaje.

El mtodo electrofortico de separacin

de protenas ms ingenioso y eficaz es,
quizs, la electroforesis de frente mvil
tambin denominada isoelectroenfoque.
En este caso la mezcla de protenas se
somete a la accin de un campo elctrico
en un soporte gelificado, en el que se ha
establecido con anterioridad un gradiente
de pH. Para ello, en tubos de vidrio se
aade una mezcla de anfolitos (molculas
que pueden actuar como cidos o bases),
al aplicar corriente elctrica los anfolitos
se distribuyen segn su carga, dando
lugar al gradiente de pH.
Cada protena migra y queda
enfocada, en aquella porcin del
gradiente de pH cuyo valor es igual al de
su pH isoelctrico, y forma all una banda
estacionaria bien definida. La capacidad
del enfoque isoelctrico es extraordinaria:
puede resolver las protenas del plasma
sanguneo humano en 40 bandas o ms.

56
 Bioqumica - Tema 6

En la electroforesis en gel de poliacrilamida se separan las molculas en funcin de sus

pesos moleculares. Se trabaja con una mezcla de protenas a un pH al que todas estn
cargadas, en presencia del detergente SDS (dodecil sulfato de sodio). Este detergente hace
que las protenas se desnaturalicen, de modo que se desplacen segn su tamao. Las
protenas ms pequeas se movern ms rpido. Se emplea una lmina de acrilamida y un
gel de poliacrilamida. Las protenas atravesarn los huecos de la lmina de acrilamida (la
lmina es una malla tridimensional), por ello, las protenas pequeas la atravesarn ms
rpido.
Se aplica voltaje y empiezan a migrar las protenas. Al cabo de un tiempo, las
protenas se habrn ordenado segn su tamao. Para calibrar un determinado sistema de gel,
se hacen circular protenas de peso molecular conocido que actan como marcadores. Con
los datos obtenidos se elabora una recta patrn, y se comparan con la protena problema. Se
representa el logaritmo del peso molecular en funcin de la distancia recorrida.

Cromatografa

Fundamento de la cromatografa:

Se dispone una mezcla sobre una fase

estacionaria.

Se hace fluir una fase mvil sobre la

estacionaria.

Dependiendo de la afinidad relativa por

ambas fases, los componentes de la
mezcla primitiva se separan.

Otro mtodo general para utilizar el comportamiento cido-bsico de las protenas como
base para su separacin, es la cromatografa de intercambio inico.

57
Alberto Fonte Polo

Los materiales utilizados

ms corrientemente para la
cromatografa de protenas
son resinas, celulosas o geles
inicos. Son soportes con
microesferas que tienen
grupos con cargas (+) y ().

Hay resinas de derivados

sintticos de la celulosa que
contienen grupos cargados
positivamente a pH 7, es por
tanto, un intercambiador
aninico. En cambio, otras
resinas contienen grupos
cargados negativamente a
pHs neutros, se dice que son
intercambiadores catinicos.

intercambiador aninico

Se consigue la resolucin de las mezclas de protenas y la elucin sucesiva de los

componentes individuales de las columnas de celulosa, haciendo pasar una serie de
tampones de pHs decrecientes, o una serie de disoluciones salinas de fuerza inica
creciente, las cuales provocan el efecto de disminuir las uniones de las protenas aninicas.
Al subir el pH, las protenas irn desprotonndose. Cuando la protena deje de tener carga
positiva (al llegar a su punto isoelctrico), se separar del resto, y ya que no ser atrada por
la resina.

58
 Bioqumica - Tema 6

Algunas protenas pueden aislarse a

partir de mezclas muy complejas y
alcanzar un grado de purificacin muy
elevado, frecuentemente en una sola
etapa por empleo de la cromatografa
de afinidad. Este mtodo se basa en
una propiedad biolgica de algunas
protenas: su capacidad de unin
especfica, no covalente, con otra
molcula llamada ligando. Es, por
ejemplo, la unin de un anticuerpo con
el antgeno que reconoce, o la unin de
una enzima con su coenzima especfica.

En la cromatografa de afinidad se usan

columnas que contienen partculas
hidratadas de gran tamao (por
ejemplo, el polisacrido agarosa) sobre
cuya superficie se sita el ligando
especifico para la protena que se quiere
aislar.
Cuando una mezcla de protenas
que contiene la molcula que se desea
aislar, se introduce en una columna de
este tipo, la molcula de protena, que
es capaz de unirse ntima y
especficamente a la molcula del
ligando inmovilizado, se adhiere a las
partculas de agarosa que contienen
dicho ligando unido, mientras que todas
las dems protenas, que carecen de
centro especfico de unin para aquella
molcula concreta de ligando, pasarn a
travs de la columna.

Este mtodo depende, por tanto, de la afinidad biolgica de la protena por su ligando
caracterstico. La protena unida especficamente a las partculas de la columna puede
despus ser eluida, frecuentemente con una disolucin de la molcula de ligando libre.

59
Alberto Fonte Polo

Peso molecular

Composicin qumica

Determinacin del peso molecular mnimo a partir de la composicin qumica:

Peso molecular del componente

PMmn = 100
% del componente

Por ejemplo, la mioglobina contiene 0,335 % de hierro. Su peso molecular mnimo puede
calcularse del modo siguiente:
55,85 (masa Fe)
PMmn = 100 16700 daltons
0,335

El peso molecular verdadero es n veces el peso molecular mnimo, siendo n el nmero de

tomos de hierro por molcula. Puesto que n = 1 en la mioglobina, su peso molecular
verdadero ser 16700. La hemoglobina contiene tambin hierro, pero posee 4 tomos de
hierro por molcula. Por tanto, n = 4, y el peso molecular verdadero ser 4 veces el peso
molecular mnimo (16700 4 = 66800 Da), calculado a partir del contenido en hierro.

Presin osmtica

La presin osmtica es la fuerza que debe aplicarse para contrarrestar la fuerza del flujo
osmtico. La presin osmtica depende del nmero de partculas de soluto por unidad de
volumen, pero es independiente de la naturaleza molecular del soluto y de la forma de sus
partculas.

Determinacin del peso molecular a partir de medidas de presin osmtica:

c
PM = RT

En esta frmula c es la concentracin en gramos por litro, R la constante de los gases (0,082
litros por atm mol-l K-l), T la temperatura absoluta, expresada en kelvins, y la presin
osmtica en atmsferas.

Sin embargo, puesto que la presin osmtica depende del nmero de molculas en
disolucin, una molcula de masa pequea pero que no atraviese la membrana ejerce el
mismo efecto que una molcula de masa mucho mayor. Por ello, esta expresin es vlida
cuando se trabaja a muy bajas concentraciones (dilucin infinita).

Filtracin por gel en columna

Uno de los medios ms tiles para la separacin de protenas entre s, basndose en el

tamao, es la cromatografa de exclusin molecular, conocida tambin como filtracin
sobre gel. Es diferente a la cromatografa de intercambio inico, que separa los solutos
basndose en la carga elctrica y en sus propiedades cido-base. En la cromatografa de

60
 Bioqumica - Tema 6

filtracin por gel en columna, la mezcla de protenas disueltas en un tampn apropiado, se

deja fluir por gravedad, a lo largo de una columna empaquetada con grnulos, o perlas, de
un material polmero inerte, de elevado grado de hidratacin, que ha sido previamente
lavado y equilibrado con el tampn.
Los geles usados para el llenado de las columnas son el Sephadex, nombre
comercial de un gel de dextrano, el Bio-Gel, un derivado comercial de poliacrilamida, y la
Sepharosa, nombre comercial de un gel de agarosa. Los geles de dextrano sirven para
separar molculas de peso molecular de 700-600.000 Da, el Sephadex G-50 separa
molculas de peso molecular de 1.500-30.000 daltons. Los geles de poliacrilamida separan
molculas de peso molecular de 100-400.000 Da. Y los geles de agarosa sirven para separar
molculas de peso molecular de 10.000-4107 Da.

En las columnas, las protenas de diferente tamao molecular van penetrando en los poros
internos de los grnulos en grados diferentes de intensidad, y descendiendo a lo largo de la
columna a velocidades distintas. Las microesferas del gel estn atravesadas por canalculos,
a travs de los cuales entrarn las protenas de pequeo tamao. Las molculas de protena
muy grandes no pueden penetrar en los poros de las partculas; se dice que son excluidas, y
permanecen por ello en el volumen de exclusin (V0) de la columna, definido como
volumen de la fase acuosa en el exterior de los grnulos. Las protenas pequeas ven
obstaculizado su paso a travs de la columna, mientras que las protenas de gran tamao la
atraviesan con rapidez, ya que no pueden penetrar en las partculas polmeras hidratadas.
Las protenas de tamao intermedio resultarn excluidas de las partculas en un grado que
depender de sus dimensiones. Por lo tanto, primero saldrn las molculas grandes, despus
las de tamao intermedio, y por ltimo las molculas pequeas.
A partir de las medidas de concentracin de protena en pequeas fracciones del
eluato se puede construir una curva de elucin.

Proceso de exclusin visto con

aumento.

Pequeas molculas de soluto

penetran en los intersticios del
Sephadex y se retardan

Las molculas grandes de

soluto no pueden penetrar y
son excluidas

Separacin de dos protenas de diferente tamao mediante una columna de Sephadex

61
Alberto Fonte Polo

En el interior de una columna de cromatografa pueden distinguirse varios volmenes:

El volumen total (VT), que es el volumen que ocupa el cilindro de gel hidratado.
El volumen vaco (V0), o el volumen existente entre las esferas del gel.
El volumen ocupado por las esferas del gel, que se expresa como la diferencia entre
los dos volmenes anteriores: VT-V0.

VT V0 VT-V0

Se pueden utilizar varios parmetros para caracterizar el comportamiento cromatogrfico de

una sustancia:
Volumen de elucin (Ve), se define como el volumen de lquido necesario para
extraer una determinada sustancia. Presenta el inconveniente de depender
fuertemente del volumen total de la columna. El volumen de elucin de una
sustancia vara entre VT y V0. Es pequeo para protenas grandes, y viceversa.
Coeficiente de particin (Kav). Es el parmetro ms correcto y tambin el ms
ampliamente utilizado. El Kav de una sustancia se define como:

Ve V0
K av
VT V0

Perfil de elucin:
Densidad ptica
(280 nm)

V0 Ve 1 Ve 2 VT (ml)

Determinacin del peso molecular:

Para calibrar la columna se permite
que dos o ms protenas (A, B y C) de
peso molecular conocido pasen a
travs de la columna, y se representan
los picos de sus volmenes eluidos en
funcin del logaritmo de su peso
molecular. A partir del volumen de
elucin de una protena desconocida
puede extrapolarse su peso molecular
en la grfica de calibrado. Esta
relacin es cierta solamente para
protenas esfricas.

62
 Bioqumica - Tema 6

Filtracin por gel en capa fina

Es una variante del proceso anterior, en el que en lugar de usar

una columna se usa una repisa inclinada sobre la que se ponen
placas de plstico con un gel adherido. Sobre estas se colocan las
muestras que caern por gravedad a lo largo de la repisa. Este
mtodo es ms impreciso que el de la columna.

Centrifugacin

La centrifugacin permite la separacin de molculas en funcin de su peso molecular por

anlisis de la sedimentacin. La centrifugacin puede ser cualitativa o cuantitativa.
La ultracentrfuga, inventada por Svedberg en 1925, puede proporcionar campos
centrfugos muy superiores a la fuerza de la gravedad. Un campo centrfugo tan elevado
provoca la sedimentacin de las molculas proteicas de sus disoluciones, oponindose a la
fuerza de difusin la cual normalmente tiende a mantenerlas uniformemente dispersas en la
disolucin.

La fuerza centrfuga es la fuerza que desplazar la protena, una fuerza positiva:

F = m2 x

m es la masa de la protena, es la velocidad angular, y x es la distancia recorrida.

A esta fuerza se opondrn otras, como la fuerza hidrosttica de flotacin:

Fh = m2 x

Tambin hay fuerzas de friccin, negativas, que se oponen al movimiento de la protena:

dx
Ff = f
dt
f representa el coeficiente de friccin.

Cuando el frente de sedimentacin de una protena se mueve a velocidad constante, la

fuerza centrfuga contrarresta exactamente la resistencia a la friccin del disolvente. El
coeficiente de sedimentacin S de la protena viene dado por la ecuacin:

dx/dt
S=
2 x
en la que x es la distancia desde el centro de rotacin, expresada en centmetros, t el tiempo
en segundos, y es la velocidad angular expresada en radianes por segundo.

Un coeficiente de sedimentacin de 110-13 segundos se llama unidad Svedberg o

simplemente un Svedberg (S). Por tanto, un coeficiente de sedimentacin de 810-13
segundos se representa por 8 S.
Las protenas suelen tener coeficientes del orden de 2-25 S. Los cidos nucleicos de
3-100 S. Los virus de 40-1000 S.
63
Alberto Fonte Polo

A altas velocidades, el peso molecular se calcula por medio de la ecuacin de Svedberg:

SRT
M=
D (1 )

en donde R es la constante de los gases, T la temperatura absoluta expresada en kelvins, S el

coeficiente de sedimentacin, el volumen especfico parcial de la protena, la densidad
del disolvente y D el coeficiente de difusin. El volumen parcial especfico () es el
aumento de volumen cuando se aade 1 g de soluto seco a un volumen infinitamente
grande de disolvente.

Tipos de centrifugacin:

Centrifugacin en gradiente de densidad (o centrifugacin zonal): constituye un

til procedimiento ampliamente utilizado para la separacin, no solamente de
protenas y otros tipos de macromolculas, sino tambin de orgnulos y virus. En
primer lugar, se prepara un gradiente continuo de densidad de sacarosa en un tubo
de centrfuga, en proporcin descendente a medida que se llena el tubo, de modo
que la densidad del medio es mxima en el fondo del tubo. La mezcla de
macromolculas que hay que resolver se deposita formando un estrato en la parte
superior del gradiente. Posteriormente se centrifuga durante 2-3 horas a 20.000-
30.000 rpm, esto provoca la sedimentacin de cada tipo de macromolcula a travs
del gradiente de densidad a su velocidad propia, la cual viene determinada en primer
lugar por el peso de su partcula, pero tambin por su densidad y por su forma,
provocando la aparicin de bandas o zonas separadas. Las protenas de mayor
densidad avanzarn ms. Generalmente la centrifugacin se interrumpe antes de
alcanzar el equilibrio.

Separacin de protenas
por centrifugacin en un
gradiente de densidad de
sacarosa. Las protenas se
separan individualmente en
bandas, segn su tamao,
forma y densidad.

Centrifugacin isopcnica: se utiliza cloruro de cesio (ClCs) 6 M. Se centrifuga el

cloruro de cesio junto con las protenas problema a 40.000-50.000 r.p.m. durante 2-
3 das, de este modo se forma un gradiente continuo de densidad. Las protenas se
depositan en el lugar en que la densidad del ClCs es igual a la suya.

64
Tema 7 Concepto, Clasificacin y
Nomenclatura de las Enzimas

Energa libre de activacin y efectos de los catalizadores

Una reaccin qumica, tal como reactivos productos, tiene lugar porque cierta fraccin
del conjunto de molculas de reactivos, en cualquier instante dado, posee la suficiente
energa como para alcanzar un estado activado, llamado estado de transicin, en el que es
muy elevada la probabilidad de que se establezca o se rompa un enlace qumico para formar
el producto. Este estado de transicin reside en la cima de la barrera de energa que separa a
los reactivos y a los productos. La velocidad de una reaccin qumica dada es proporcional
a la concentracin de estas especies caractersticas del estado de transicin.
K1 K1 C D
A+BC+D v = K1 [A] [B] K (cte. de equilibrio)
K2 K 2 A B

La energa libre de activacin G* (el smbolo * se emplea para representar el proceso de

activacin) es la cantidad de energa necesaria para llevar todas las molculas de 1 mol de
sustancia a una temperatura determinada, al estado de transicin, en la cima de la barrera de
activacin.

G = G0 + RT ln
C D G0 (energa libre estndar) = RT ln K
A B
Si G < 0 la reaccin ser exergnica (exotrmica), y por lo tanto espontnea. Si por el
contrario G > 0 la reaccin ser endergnica (endotrmica), y no espontnea.

Hay dos mtodos generales, mediante los cuales, puede acelerarse la velocidad de una
reaccin qumica. Uno de ellos es la elevacin de la temperatura, ya que provoca un
incremento del movimiento trmico y de la energa, aumenta el nmero de molculas
capaces de alcanzar el estado de
transicin, y acelera, de este modo, la
velocidad de las reacciones qumicas. En
muchas reacciones la velocidad de
reaccin se duplica, por cada 10 C de
aumento de la temperatura. La velocidad
de una reaccin qumica puede verse
incrementada tambin por la adicin de
un catalizador; ste se combina con los
reactivos de modo transitorio y se
produce un estado de transicin de menor
energa de activacin que el
correspondiente a la reaccin no
catalizada. As los catalizadores aceleran
las reacciones qumicas porque
disminuyen la energa de activacin.
Cuando se forman los productos de la
reaccin se regenera el catalizador libre.
65
Alberto Fonte Polo

Las enzimas: los catalizadores de los seres vivos

Introduccin histrica

En 1850, Luis Pasteur estudia la produccin de etanol a partir de azcares. Pasteur

reconoci que la fermentacin es catalizada por unas sustancias a las que denomin
fermentos. En 1878, Khne estudia la tripsina y llama a esos fermentos enzimas. En
1897, Bchner consigue extraer las enzimas que catalizan la fermentacin alcohlica de las
clulas de levadura. Este hecho demostraba claramente que estas importantes enzimas, que
catalizan una ruta metablica principal productora de energa, pueden actuar
independientemente de la estructura celular.
Hasta muchos aos despus, sin embargo, no fue aislada por vez primera una
enzima en forma cristalina; ello lo consigui Sumner, en 1926, con la ureasa, aislada de
extractos de alubia. Sumner demostr que los cristales se hallaban constituidos por protena
y lleg a la conclusin, contraria a la opinin que prevaleca por aquel entonces, de que las
enzimas son protenas.

Concepto de enzima

Las enzimas son protenas que actan como catalizadores en las reacciones biolgicas:
aumentan la velocidad en la que tiene lugar una determinada reaccin bajando la energa de
activacin (energa que necesitan los reactivos para que ocurra la reaccin).
Las enzimas se unen a las molculas de sustrato gracias a su centro activo y
catalizan su transformacin qumica. La enzima no sufre ninguna modificacin qumica en
este proceso y se suelta al finalizar la transformacin del sustrato (la unin es reversible).
Actan como los catalizadores de las reacciones no biolgicas, pero a diferencia de estos,
son muy especficas respecto a la sustancia inicial a la que se unen (sustrato) y respecto al
tipo de reaccin que catalizan, y normalmente actan a temperatura, presin y pH del
medio intracelular.
Casi la totalidad de las enzimas son qumicamente protenas pero hay unas
sustancias formadas por ARN que tiene actividad enzimtica, se denominan ribozimas.

Tipos de enzimas

Las enzimas se clasifican segn el tipo de reaccin que catalizan:

Hidrolasas: son enzimas que utilizan H2O para romper sustratos (hidrlisis). Como
por ejemplo las esterasas que rompen enlaces ester, las carbohidrasas rompen
carbohidratos y las proteasas rompen protenas (lo son las enzimas digestivas).
Fosforilasas: utilizan cido fosfrico (H3PO4). Actan a nivel de polisacridos
(polisacrido-F) o a nivel de nucletidos (polinucletido-F).
xido-reductasas: catalizan reacciones de oxidacin-reduccin, como las oxidasas
y las deshidrogenasas.
Transferasas: catalizan el paso de un grupo qumico a otro. Ejemplo:
transaminasas.
Descarboxilasas: son enzimas que se encargan de eliminar los radicales carboxilo
(COOH) liberando CO2 como producto de desecho.
Hidrasas: eliminan H2O de un sustrato.
Isomerasas: catalizan reacciones de isomerizacin, es decir, cambian de posicin
un grupo.
66
 Bioqumica - Tema 7

Estructura molecular de las enzimas y concepto de centro activo

Una enzima es una protena con estructura globular y con una zona llamada centro activo.
El centro activo es una concavidad de la
enzima que tiene unos aminocidos y
una forma tridimensional que le permite
unirse y transformar a una sustancia
determinada: su sustrato.
La forma del centro activo es
complementaria con la molcula de
sustrato con la que se une y los radicales
de los aminocidos que estn en el
centro activo establecen enlaces dbiles
con el sustrato (enlaces inicos, puentes
de hidrgeno, interacciones
hidrofbicas) para unirse con l y
despus mediante enlaces dbiles y
fuertes (covalentes) interaccionan con el
sustrato y favorecen su transformacin.

Holoenzimas y coenzimas
Una holoenzima es una enzima formada por la unin de una molcula proteica: apoenzima
y una molcula no proteica: cofactor. Ambos componentes son necesarios para que la
enzima sea funcional. La apoenzima, o parte proteica, suele determinar con qu sustrato o
sustratos se une, determina la especificidad de sustrato.

Los cofactores pueden ser:

Iones metlicos como el Zn2+, el Fe2+, el Cu2+, el Mg2+
Coenzimas: son molculas orgnicas no proteicas que se asocian con la enzima para
catalizar una reaccin. Cada coenzima acta en un mismo tipo de reaccin, es pues
quien determina la especificidad de la reaccin. Las coenzimas se unen
temporalmente con la enzima, catalizan la reaccin y se liberan despus pudiendo
unirse posteriormente a otras enzimas. Ejemplos: CoA, las coenzimas
deshidrogenasas (FAD, NAD, NADP)
Los grupos prostticos son coenzimas que se asocian a la apoenzima de
manera permanente mediante enlaces covalentes, como por ejemplo algunas
vitaminas.

Tipos de coenzimas

Segn su funcin biolgica se distinguen:

Coenzimas de transferencia de protones (H+): NAD+, NADP+, FAD, CoCl.
Coenzimas de transferencia de grupos: ATP, CDP, UDP, piridoxal-P.
Coenzimas de transferencia de 1 carbono: biotina, cido tetrahidroflico (FH4),
adenosilmetionina.
Coenzimas de transferencia de 2 carbonos: CoA, PPT (pirofosfato de tiamina).
Coenzimas de isomerasas y liasas: Co B12, PPT, UDP.

67
Alberto Fonte Polo

Unidades de actividad enzimtica

La unidad de actividad enzimtica empleada ms corrientemente se define como la cantidad
de enzima que origina la transformacin de 1 mol de sustrato por minuto a 25 C, en
condiciones ptimas de medida. La actividad especfica es el nmero de unidades de
enzima por miligramo de protena. Constituye una medida de la pureza de la enzima, que
aumenta durante el proceso de su purificacin, y llega a ser mxima y constante cuando
sta se halla en estado puro. La actividad molecular, que antiguamente se llamaba nmero
de recambio, es el nmero de molculas de sustrato transformadas por minuto por una sola
molcula de enzima (o por un solo centro activo).
La enzima anhidrasa carbnica posee la actividad molecular ms elevada de
cualquiera de las enzimas conocidas, 36.000.000 minl por molcula.

La Comisin de Enzimas (Enzyme Commission) propuso una nueva unidad internacional

para la actividad enzimtica, el catal (abreviadamente cat), que se define como la cantidad
de actividad enzimtica que transforma 1 mol s1 de sustrato. El catal es una unidad muy
grande, por eso se suele utilizar el microcatal (mcat). La actividad especfica se expresa en
catales por kilogramo de protena, equivalente a microcatales por miligramo de protena, y
la actividad molecular en catales por mol de enzima.

Nomenclatura de las enzimas

Muchas enzimas han sido designadas aadiendo el sufijo asa al nombre del sustrato, es
decir, de la molcula sobre la cual la enzima ejerce su accin cataltica. Por ejemplo, la
ureasa cataliza la hidrlisis de la urea con produccin de amoniaco y CO2.
Esta nomenclatura, sin embargo, no siempre ha resultado prctica, lo cual ha
ocasionado que muchas enzimas hayan recibido nombres que qumicamente son poco
informativos; por ejemplo la catalasa. Por dicha razn, y porque el nmero de enzimas que
se descubren est aumentando rpidamente, se ha adoptado una clasificacin sistemtica de
las enzimas segn recomendacin de la Comisin de Enzimas. El nuevo sistema divide a
las enzimas en seis clases principales (1. xido-reductasas, 2. transferasas, 3. hidrolasas, 4.
liasas, 5. isomerasas y 6. ligasas), cada una de las cuales se divide a su vez en subclases, de
acuerdo con el tipo de reaccin catalizada.

Cada enzima es designada por un nombre recomendado, generalmente corto y apropiado

para su uso habitual; por un nombre sistemtico, que identifica la reaccin que cataliza, y
por un nmero de clasificacin, que se emplea cuando se precisa la identificacin
inequvoca de la enzima, tal como ocurre en las revistas internacionales de investigacin, en
los resmenes y en los ndices. Se da como ejemplo, la enzima que cataliza la reaccin:
ATP + creatina ADP + fosfocreatina
El nombre recomendado de esta enzima, el que se emplea normalmente, es creatn-quinasa
y el nombre sistemtico, que se basa en la reaccin catalizada, es ATP creatn-
fosfotransferasa. Su nmero de clasificacin es EC 2.7.3.2, en donde EC significa,
abreviadamente, Comisin de Enzimas; la primera cifra (2) representa el nombre de la clase
(transferasas), la segunda cifra (7) representa a la subclase (fosfotransferasas), la tercera
cifra (3) la sub-subclase (fosfotransferasas con un grupo nitrgeno como aceptor) y la
cuarta cifra (2) designa a la creatn-quinasa.

68
Tema 8 Mecanismo de la Catlisis Enzimtica

Reaccin enzimtica
En una reaccin catalizada por una enzima, primero la enzima se une al sustrato mediante
su centro activo, con enlaces dbiles formando el complejo enzima-sustrato. Despus el
centro activo de la enzima favorecer la transformacin del sustrato con enlaces fuertes y
dbiles, formndose el producto que cuando an est unido a la enzima se llama complejo
enzima-producto. Finalmente se libera el producto y la enzima, que no se ve alterada en el
proceso y que puede volver a unirse a otras molculas de sustrato.

Una de las propiedades ms notables de las enzimas es su especificidad de accin, por la

que actan slo sobre determinados sustratos y producen slo un tipo de reaccin. El centro
activo es el responsable de la especificidad de la enzima. Por ejemplo, la reaccin glucosa
glucosa6fosfato est catalizada en el hgado por la glucoquinasa y en otros tejidos por
la hexoquinasa. La enzima hexoquinasa es menos especfica que la glucoquinasa, puesto
que reconoce otras hexosas, como la fructosa, adems de la glucosa.
Sobre la glucosa6fosfato actan la deshidrogenasa para dar lugar a 6P
gluconolactona; la fosfatasa, que da lugar a glucosa + Pi; la isomerasa, que origina
fructosa6fosfato; y la mutasa (fosfoglucomutasa), que transforma la glucosa6fosfato
en glucosa1fosfato.

Adems el grado de especificidad puede ser muy variado. Una misma enzima puede tener
una especificidad de sustrato casi absoluta, pero puede presentar una estereoespecificidad
estricta. Por ejemplo, una enzima estereoespecfica es la lactato deshidrogenasa (LDH),
slo acta sobre el enantimero Llactato.

Enlaces enzima-sustrato

El centro activo es una hendidura en la estructura globular de la enzima, donde hay

aminocidos apolares que forman un entorno hidrfobo. Algunos aminocidos polares del
centro activo establecen interacciones con el sustrato.
La enzima y el sustrato forman enlaces inicos, que son termodinmicamente
fuertes; enlaces de hidrgeno, que pueden ser lineales (fuerte) o angulares (dbil); fuerzas
de Van der Waals (dbiles) o interacciones dipolo-dipolo. El conjunto de interacciones
tiene una energa desde -3 hasta -12 Kcal/mol, es una energa dbil, y por lo tanto los
enlaces son temporales.

69
Alberto Fonte Polo

Formacin del complejo enzima-sustrato

Modelo llave-cerradura (Fischer, 1890): la

molcula del sustrato se adapta al centro activo
de la enzima del mismo modo que lo haran
una llave y una cerradura, es decir, que el
centro activo y el sustrato son perfectamente
complementarios.

Modelo de adaptacin inducida (Koshland,

1958): el centro activo no es complementario al
sustrato. La unin del sustrato induce un
cambio en el centro activo que aumenta la
complementariedad entre ambos. La
especificidad radica en la naturaleza de los
aminocidos de fijacin del centro activo.
De modo similar tambin puede
cambiar de conformacin el sustrato para
hacerse complementario al centro activo, como
ocurre en el caso de la lisozima.

Ecuacin de Michaelis-Menten
L. Michaelis y M. L. Menten desarrollaron en 1913 una teora general acerca de la accin y
cintica de las enzimas. La teora de Michaelis-Menten supone que la enzima E se combina
en primer lugar con el sustrato S para formar el complejo enzima-sustrato ES; a
continuacin este ltimo se escinde en una segunda etapa, para formar enzima libre y
producto P:
K1 K3
E + S ES E + P
K2 K4

Deduciremos a continuacin la ecuacin de Michaelis-Menten, que es la ecuacin de

velocidad para las reacciones catalizadas por enzimas que slo actan sobre un nico
sustrato. En la deduccin, [E] representa la concentracin de la enzima libre o no
combinada, [ES] la concentracin del complejo enzima-sustrato, y [E0] la concentracin
total de la enzima (suma de las formas libre y combinada: E0 = ES + E). La concentracin
del sustrato se representa por [S].

La velocidad inicial, v0, de una reaccin catalizada enzimticamente es igual a la velocidad

de ruptura del complejo enzima-sustrato, ES, para dar lugar a E+P.
v0 = K3 [ES]
Sin embargo, ya que ni K3, ni [ES], pueden determinarse directamente, debemos encontrar
otra expresin para v0 en funcin de otras variables que puedan medirse con ms facilidad.
Para ello escribiremos en primer lugar la ecuacin de velocidad de formacin de ES a partir
de E y de S, que es la siguiente:
d ES d ES
K1 E S sustituyendo [E] K1 ([E0] - [ES]) [S]
dt dt
70
 Bioqumica - Tema 8

Aunque ES puede formarse tambin a partir de E y de P por inversin de la reaccin, la

velocidad de la reaccin inversa puede despreciarse, ya que estamos considerando que la
reaccin se inicia en el sentido directo, cuando [S] es muy elevado y [P] es cero, o prximo
a este valor.

A continuacin escribiremos la ecuacin de velocidad de destruccin de ES por suma de

dos reacciones; en primer lugar, la reaccin que rinde el producto (reaccin directa) y
despus la reaccin que produce E + S. Tendremos entonces:

d ES
K 2 ES K 3 ES ( K 2 K 3 ) ES
dt

Cuando la velocidad de formacin de ES es igual a su velocidad de desaparicin, es decir,

cuando el sistema ha alcanzado el estado estacionario, que se define como aquel en que la
concentracin de ES permanece constante, entonces en el equilibrio:

K1 ([E0] - [ES]) [S] = ( K 2 K 3 ) ES

Reordenando la ecuacin anterior, obtenemos:

E 0 ES S K 2 K 3
Km
ES K1

La constante Km se denomina constante de Michaelis-Menten.

A partir de esta ecuacin puede obtenerse la concentracin del complejo ES en el estado

estacionario, despejando dicho trmino:

ES E 0 S
K m S

Podemos sustituir el trmino [ES] de la ecuacin de la velocidad inicial de reaccin, por su

valor en la ecuacin anterior:

v0 K 3
E 0 S
K m S

Cuando la concentracin del sustrato es tan elevada que prcticamente toda la enzima del
sistema est presente en forma de complejo ES, es decir, cuando la enzima se halla
saturada, se alcanzar la velocidad inicial mxima, Vmx, dada por:

Vmx = K3 [E0]

en la que [E0] es la concentracin total de la enzima. Sustituyendo K3[E0] por su valor

deducido de la ecuacin anterior, se obtiene la ecuacin de Michaelis-Menten:

Vmx S
v0
K m S

71
Alberto Fonte Polo

De la ecuacin de Michaelis-Menten se deriva una relacin numrica importante en el caso

especial en que la velocidad inicial de la reaccin sea exactamente la mitad de la velocidad
mxima; es decir, cuando v0 = Vmx.

1 V S
Vmx mx
2 K m S

Al dividir por Vmx se obtiene:

1

S
2 K m S

Reordenando, se transforma en:

Km + [S] = 2[S] Km = [S]

Vemos as que la constante de Michaelis Km es igual a la concentracin de sustrato en la

que la velocidad inicial de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima. Cuanto ms
pequea es Km, mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato. La Km no depende de la
concentracin de la enzima, pero s de la concentracin de sustrato y de la temperatura.
El valor aproximado de Km se obtiene grficamente al representar la velocidad
inicial frente a la concentracin inicial del sustrato; se obtiene una hiprbole rectangular.

Transcurso de la formacin de un complejo enzima-sustrato en funcin del tiempo e iniciacin del

estado estacionario. La porcin sombreada del grfico de la izquierda es la que aparece ampliada en la
grfica de la derecha.

Mtodos de linearizacin de la ecuacin de Michaelis-Menten

La ecuacin de Michaelis-Menten puede transformarse algebraicamente en otras formas
que son ms tiles para calcular Km y Vmx. Hay varios mtodos para hacerlo, veremos los
ms comunes:

Mtodo de Lineweaver y Burk o mtodo de los dobles recprocos: es el mtodo

ms corriente. Se obtiene, sencillamente, tomando los recprocos de ambos
miembros de la ecuacin de Michaelis-Menten:
72
 Bioqumica - Tema 8

Vmx S 1 K m S
v0
K m S v0 Vmx S

Reordenando, tendremos la ecuacin de Lineweaver-Burk:

1 K
m
1 S 1 K m 1 1
v0 Vmx S Vmx S v0 Vmx S Vmx

Cuando 1/v0 se representa frente a 1/[S], se

obtiene una lnea recta. La pendiente de la
recta es Km/Vmx, y la interseccin sobre el
eje 1/v0 es l/Vmx; la interseccin sobre el
eje 1/[S] es 1/Km. Tal representacin
doble-recproca tiene la ventaja de que
permite una determinacin mucho ms
exacta del valor de Vmx.

Km 1 1 1
0 K m 1
Vmx S Vmx S
1 1

S K m

Mtodo de Eadie y Hofstee: es un mtodo menos usado. Esta transformacin de la

ecuacin de Michaelis-Menten se obtiene del siguiente modo:

Vmx S v Vmx
v0 0
K m S S S K m
Aplicando la multiplicacin de diagonales:

v0 S v0 K m S Vmx v0 S v0 K m Vmx S

Reordenando obtenemos la ecuacin de Eadie-Hofstee:

v0
v0 K m V
S mx
La representacin de v0 frente a v0/[S] da una
lnea recta, que no solamente da los valores de
Vmx y de Km en forma muy sencilla, sino que
tambin ampla las desviaciones del carcter
lineal que pueden no aparecer en una
representacin doble recproca. La pendiente de
la recta es Km.

v0 v v V
v0 K m Vmx K m 0 Vmx 0 mx
S S S K m

73
Tema 9 Factores que Modifican
la Actividad Enzimtica

Influencia del pH en la actividad enzimtica

Las enzimas tienen grupos ionizables en el centro activo, y el pH afecta a la interaccin
enzima-sustrato.
Cada enzima tiene un pH ptimo, para el cual la velocidad de la reaccin enzimtica
es mxima, suele ser en torno a un pH=7. Valores por debajo y por encima del pH ptimo
van descendiendo la velocidad de la reaccin, y puede llegar a detenerse por
desnaturalizacin de la enzima.
Por ejemplo, la pepsina tiene un pH ptimo entre 1,5 y 3,5. La tripsina, que acta en
el intestino (un medio alcalino) tiene un pH ptimo entre 8 y 11.

Influencia de la temperatura en la actividad enzimtica

El aumento de la temperatura hace aumentar la velocidad de la reaccin enzimtica hasta
una temperatura ptima para la cual la velocidad es mxima. Esa T ptima depende de
cada enzima y si sigue aumentando la temperatura disminuye la velocidad de la reaccin
enzimtica, y puede llegar a detenerse la reaccin si se desnaturaliza la enzima.

Efecto de la T sobre la actividad de una enzima.

La porcin descendente de la curva se debe a la desnaturalizacin trmica.

74
 Bioqumica - Tema 9

Aunque la mayora de las enzimas se inactivan a temperaturas comprendidas entre 55 y

60C, algunas son estables y conservan su actividad a temperaturas muy superiores; por
ejemplo, las enzimas de las bacterias termfilas que siguen siendo activas a temperaturas
superiores a los 85 C.

Representacin en funcin del tiempo. Representacin de Arrhenius: se representa el

logaritmo de la Vmx, en funcin de la inversa de la
temperatura.

log Vmx
1/T

Los iones metlicos activan a las enzimas

Hay iones metlicos activadores, que se unirn al centro activo de la enzima, actuando
como cofactores. Son necesarios para la buena fijacin del sustrato, en general, facilitan la
unin de la enzima con el sustrato. Son por ejemplo: K+, Cl, Mg2+, Mn2+, Cu2+, Zn2+.

Inhibicin de las enzimas

Inhibicin irreversible: algunas enzimas experimentan inactivacin irreversible cuando se
tratan con agentes capaces de unirse covalentemente y que modifican de modo permanente
a un grupo funcional, necesario para la catlisis, con lo que se inactiva la molcula de
enzima. Casi todos los inhibidores enzimticos irreversibles son sustancias txicas
(naturales o sintticas).

El diisopropilfluorofosfato (DFP) es una sustancia txica sinttica que inhibe enzimas con
serina en el lugar activo, como la acetilcolinesterasa. El grupo OH de la sern-proteasa
interacta con el flor unido a fosfato del DFP, y se forma cido fluorhdrico.

Otro ejemplo es la yodoacetamida, que es un agente alquilante. El grupo SH de la enzima,

con cistena en el sitio activo, reacciona con el yodo de la yodoacetamida, y se forma cido
yodhdrico.

EnzimaSH ICH2CONH2 EnzimaSCH2CONH2 + HI

75
Alberto Fonte Polo

Inhibicin reversible: los principales tipos de inhibicin reversible de las enzimas son:
competitiva, no competitiva, acompetitiva y por exceso de sustrato. Pueden distinguirse
experimentalmente por los efectos que produce el inhibidor sobre la cintica de reaccin de
la enzima, la cual puede analizarse mediante la ecuacin bsica de velocidad propuesta por
Michaelis-Menten.

Inhibicin competitiva: la caracterstica de la

inhibicin competitiva es que el inhibidor puede
combinarse con la enzima libre de tal modo que compite
con el sustrato normal para unirse al centro activo. Un
inhibidor competitivo reacciona reversiblemente con la
enzima para formar un complejo enzima-inhibidor (EI)
anlogo al complejo enzima-sustrato:
E + I EI
La molcula del inhibidor no resulta qumicamente alterada por la enzima.
Siguiendo el formalismo de Michaelis-Menten, podemos definir la constante del
inhibidor KI, como la constante de disociacin del complejo enzima-inhibidor:

KI =
E I
EI
La inhibicin competitiva se reconoce experimentalmente con facilidad, debido a
que el porcentaje de inhibicin para una concentracin de inhibidor constante
disminuye al incrementarse la concentracin del sustrato.

K m 1
I
Vmx S
v0
1
KI 1 1
I S v0 Vmx S Vmx
K m 1
KI
Se realizan representaciones de 1/v0 frente a 1/[S], para cada una de las
concentraciones del inhibidor. Estas representaciones se caracterizan por
proporcionar unas lneas
rectas cuyo punto de
interseccin comn se halla
sobre el eje de 1/v0.

Como la pendiente de la
representacin de la reaccin
no inhibida es Km/Vmx, y la
pendiente de la recta para la
reaccin inhibida es Km/Vmx(1
+ [I]/KI), se observa que ha
1/Km 1/Km'
experimentado un incremento,
expresado por el factor 1 +
[I]/KI. A partir de esta relacin
puede calcularse el valor de
KI.

76
 Bioqumica - Tema 9

La Km se determina calculando los puntos de corte con el eje 1/[S]. La pendiente

tambin sirve para calcular KI, aunque los clculos son ms largos.

K m K m 1
I

KI
Por otra parte, un inhibidor competitivo se caracteriza por no afectar al valor de
Vmx, indicando con ello que no interfiere con la velocidad de ruptura del complejo
enzima-sustrato.

Vmx

Un ejemplo de inhibicin competitiva lo constituye la inhibicin de la alcohol

deshidrogenasa (ADH), enzima que metaboliza etanol que pasa a acetaldehdo.

CH3CH2OH + NAD+ CH3C=O + NADH + H+

H
Etanol Acetaldehdo

Esta enzima tambin reconoce al metanol y al etilenglicol, estos forman

formaldehido y cido oxlico respectivamente, ambos son txicos. En caso de
ocurrir una ingestin accidental de anticongelante (que puede ser de metanol o de
etilenglicol), puede administrarse una bebida alcohlica (etanol) hasta que pueda
comenzarse un tratamiento adecuado, de este modo se ralentiza la conversin del
metanol a formaldehido y del etilenglicol a cido oxlico. Es decir, el etanol
compite con el anticongelante.

Metanol

Inhibicin no competitiva: un inhibidor no competitivo

puede combinarse con la enzima libre o bien con el complejo
enzima-sustrato, interfiriendo con la accin de ambos. Los
inhibidores no competitivos se unen a un centro de la enzima
distinto del centro activo, a menudo para deformar la enzima,
de modo que no pueda formarse el complejo ES a su velocidad normal y que una
vez formado no se descomponga a su velocidad habitual para liberar los productos
de reaccin. Sus efectos no se anulan al aumentar la concentracin del sustrato. En
la inhibicin no competitiva la reaccin con el inhibidor produce dos formas
inactivas, EI y ESI:

77
Alberto Fonte Polo

E + I EI
ES + I ESI
para las que existen dos constantes del inhibidor:

KI
E I
EI
KI '
E I
ESI
Normalmente KI = KI'. La inhibicin no competitiva se reconoce tambin con gran
facilidad en las representaciones de 1/v0 frente a 1/[S], en presencia de diferentes
concentraciones del inhibidor, que se mantienen constantes.

K m 1
I
1 K I 1 1 I
1
v0 Vmx S Vmx KI

1
1
I

Vmx KI

1/Vmx

Las representaciones difieren en pendiente pero no comparten un punto de

interseccin comn sobre el eje l/v0. El valor de la interseccin sobre dicho eje es
mayor para la enzima inhibida que para la no inhibida, lo que indica que la Vmx
decrece en presencia del inhibidor y no puede restablecerse su valor a pesar de que
la concentracin del sustrato pueda ser elevada.

78
 Bioqumica - Tema 9

Inhibicin acompetitiva: en este tipo de inhibicin, que es muy poco comn, el

inhibidor no se combina con la enzima libre ni afecta a su reaccin con el sustrato
normal; sin embargo, el inhibidor se combina con el complejo enzima-sustrato para
formar un complejo inactivo enzima-sustrato-inhibidor, el cual no experimenta su
transformacin posterior en el producto habitual de la reaccin:
ES + I ESI
La constante del inhibidor es, por tanto:

KI
ES I
ESI
Estas relaciones demuestran que el grado de inhibicin puede aumentar cuando la
concentracin de sustrato se ve aumentada. La inhibicin acompetitiva puede
reconocerse con gran facilidad en las representaciones de 1/v0 frente a 1/[S] para
concentraciones constantes del inhibidor.

1 K
m
1 1
1
I
v0 Vmx S Vmx
KI

1
1
I

Vmx KI

1/Vmx

1/Km' 1/Km

K m K m 1
I

KI
Lo caracterstico de la inhibicin acompetitiva es que la pendiente de las rectas
permanece constante al aumentar la concentracin del inhibidor, pero la Vmx,
decrece. La inhibicin acompetitiva es poco frecuente en las reacciones de un solo
sustrato, pero es corriente en las reacciones de dos sustratos.

79
Alberto Fonte Polo

Inhibicin por exceso de sustrato: a altas concentraciones de sustrato, el sustrato

puede unirse a localizaciones secundarias de ciertas enzimas, deformando la
enzima. Aumentando la concentracin de sustrato disminuye la velocidad de la
reaccin.
E + S ES E + P

Por ejemplo, las hidrolasas se inhiben por exceso de sustrato en reacciones

bisustrato.

Reacciones bisustrato
Muchas enzimas catalizan reacciones con dos sustratos que se influyen mutuamente; estas
reacciones muestran una cintica mucho ms compleja que las reacciones sencillas de un
solo sustrato consideradas anteriormente. El anlisis cintico de las reacciones de dos
sustratos, simbolizado por la ecuacin:
E
A+BP+Q
es ms complicado que el de las reacciones con un solo sustrato, puesto que pueden existir
varios complejos enzima-sustrato, tales como los complejos binarios EA, EB, EP y EQ; y
los complejos ternarios EAB, EPQ, EAQ y EPB.
La concentracin de un sustrato, por ejemplo B, se mantiene constante normalmente
a nivel saturante, mientras que la concentracin del sustrato A se cambia para determinar su
efecto sobre la velocidad inicial de la reaccin y se obtiene as la constante de Michaelis-
Menten para el sustrato A. A continuacin se invierte el dispositivo experimental; la
concentracin del sustrato A se mantiene constante a nivel saturante, y se determina el
efecto que produce sobre la velocidad inicial de la reaccin la variacin de la concentracin
del sustrato B; se obtiene de este modo el valor de Km para el sustrato B. Las reacciones
bisustrato se reducen, por tanto, al caso de la reaccin de un solo sustrato cuando uno de los
sustratos se mantiene constante a una concentracin saturante.

La mayora de las reacciones de dos sustratos pueden incluirse en una de las dos clases
siguientes: reacciones de desplazamiento simple y reacciones de doble desplazamiento, las
cuales pueden generalmente distinguirse por anlisis cintico.

Reacciones de desplazamiento simple

En este tipo de reacciones, los dos sustratos A y B, deben hallarse presentes

simultneamente sobre el centro activo de la enzima para formar un complejo ternario EAB
con objeto de que tenga lugar la reaccin.
80
 Bioqumica - Tema 9

Las reacciones de desplazamiento simple se producen de dos formas, ordenadas y al azar;

ambas difieren en la secuencia con que ambos sustratos se unen a la enzima.

En las reacciones de desplazamiento simple ordenado, existe una secuencia de

reaccin obligatoria, de modo que un sustrato especfico, el sustrato conductor, es
el que se fija en primer lugar, antes de que pueda unirse el segundo sustrato tambin
llamado sustrato acompaante. Tal como se muestra en la siguiente secuencia:

B P Q

E + A EA EAB EPQ EQ E

en la que A es el sustrato conductor, y B el sustrato acompaante.

Muchas deshidrogenasas NAD+ dependientes, que utilizan el dinucletido de

adenina (NAD+) como coenzima para aceptar electrones de sus sustratos, catalizan
reacciones bisustrato ordenadas. Por ejemplo, la malato-deshidrogenasa, que
cataliza la reaccin:

Malato + NAD+ oxalacetato + NADH + H+

La enzima debe unirse, en primer, lugar al NAD+ y rinde el complejo E-NAD+; el

malato se combina con este ltimo, con lo que se forma el complejo ternario E
NAD+malato.

En las reacciones bisustrato al azar, cualquiera de los dos sustratos puede unirse a
la enzima en primer lugar, indicando con ello, que el complejo ternario EAB puede
formarse por dos caminos diferentes:

B P Q

E + A EA EAB EPQ EQ E

o del siguiente modo:

A Q P

E + B EB EAB EPQ EP E

Muchas de las fosfotransferasas catalizan reacciones de desplazamiento simple al

azar. Constituye un ejemplo la reaccin catalizada por la creatina-quinasa:

ATP + creatina ADP + creatina-P

En esta reaccin tanto el ATP como la creatina se unen al centro activo, en cualquier
secuencia, formando un complejo ternario. Despus de la transferencia del grupo
fosfato, desde el ATP ligado a la creatina ligada, ambos productos abandonan el
centro activo, en una u otra secuencia.

81
Alberto Fonte Polo

Reacciones (ping-pong) de doble desplazamiento

En las reacciones bisustrato de este tipo, un sustrato debe hallarse unido a la enzima y debe
liberarse un producto, antes de que tenga lugar la entrada del segundo sustrato y la partida
del segundo producto. En estas reacciones el primer sustrato reacciona con la enzima y
origina una forma modificada de la misma (E*), habitualmente por transferencia de un
grupo funcional. En la segunda etapa este grupo funcional se transfiere desde la enzima al
segundo sustrato.

P B Q

E + A EA E*P E* E*B EQ E

Constituye un ejemplo de reaccin de doble desplazamiento la catalizada por la aspartato-

amino-transferasa, tambin llamada aspartato-transaminasa, que cataliza la reaccin:

Aspartato + -cetoglutarato oxalacetato + glutamato

El aspartato, sustrato conductor, es el primero que se combina con la enzima. El grupo

amino del aspartato se transfiere despus al piridoxal-P, que es el grupo prosttico de la
enzima al que se halla ntimamente unido. A continuacin, el oxalacetato, primer producto
de la reaccin, abandona el centro activo en el que es sustituido por el segundo sustrato, el
-cetoglutarato, al cual el enzima transfiere el grupo amino para formar glutamato, el cual
entonces, abandona el centro activo. A estas reacciones bisustrato que se verifican en dos
etapas, se las ha designado con el descriptivo apelativo de reacciones ping-pong.

82
Tema 10 Control de la Actividad Enzimtica

Control del flujo metablico

Una ruta enzimtica es la secuencia de reacciones desde el reactivo inicial hasta el
producto final. Las rutas metablicas pueden ser lineales, cclicas, ramificadas

Cada reaccin enzimtica es una etapa de una ruta metablica, y cada etapa est catalizada
por una enzima. Cada reaccin debera tener la misma Vmx, aunque no es as, hay siempre
una etapa con una Vmx menor: la reaccin limitante de la va metablica.

Reaccin limitante es un trmino qumico que se emplea para designar el paso ms lento
de una reaccin qumica. Una reaccin limitante se compara a menudo con el cuello de una
botella: la velocidad de la reaccin depende de la velocidad a la que sucede el paso ms
lento de sta. A partir de esta reaccin, los metabolitos producidos (los productos) tendrn
unas concentraciones menores. La enzima de la etapa limitante suele ser alostrica, muy
regulada por metabolitos posteriores de la ruta, podr ser inhibida o activada.
El flujo a travs del paso limitante de la velocidad de una va puede verse
modificado por diversos mecanismos: control alostrico, modificacin covalente, ciclos de
sustrato, control gentico

En la gluclisis, la reaccin catalizada por la fosfofructoquinasa es la siguiente:

Fructosa6fosfato + ATP Fructosa1,6bisfosfato + ADP

La fructosa1,6bisfosfatasa cataliza, sin embargo, la hidrlisis de la Fru-1,6-BP:

Fructosa1,6bisfosfato + H2O Fructosa6fosfato + Pi

Obsrvese que, en conjunto, las reacciones catalizadas por la fosfofructoquinasa y la

fructosa1,6bisfosfatasa dan lugar a la hidrlisis neta de ATP:
ATP + H2O ADP + Pi

Este conjunto de reacciones en direcciones opuestas se conoce como ciclo ftil, ya que su
resultado neto parece ser el consumo intil de ATP. Estas dos reacciones de sentido inverso
no tienen lugar simultneamente en la clula. Hay mecanismos de control que determinan
el sentido de la reaccin.

Tipos de control de la actividad enzimtica

Regulacin por cambios en la concentracin de enzima:

Sntesis.
Degradacin.

83
Alberto Fonte Polo

Regulacin de la eficiencia cataltica de la enzima:

Rupturas proteolticas: zimgenos.
Mltiples formas de la enzima: isoenzimas.
Disponibilidad de sustratos y cofactores: compartimentacin celular,
asociaciones multienzimticas, y concentraciones efectivas de sustratos y
coenzimas.
Modificacin covalente: fosforilacin, ADP-ribosilacin, metilacin y
acetilacin, y modificaciones lipdicas.
Regulacin feed-back.
Regulacin por interaccin de subunidades: enzimas alostricas.

Activacin por ruptura proteoltica

Un zimgeno (o proenzima) es un precursor enzimtico inactivo, es decir, no cataliza
ninguna reaccin. Para activarse, necesita de un cambio bioqumico en su estructura que le
lleve a conformar un centro activo donde poder realizar la catlisis. En ese momento, el
zimgeno pasa a ser una enzima activa. El cambio bioqumico suele ocurrir por protelisis
parcial de parte de la molcula de zimgeno para dar lugar a la enzima activa.

Por ejemplo, el pepsingeno es una enzima precursora de la pepsina, liberada por las
glndulas fndicas del estmago. Este pepsingeno se activa transformndose en pepsina al
entrar en contacto con el cido clorhdrico del estmago.
+
Pepsingeno H Pepsina

En el pncreas se produce tripsingeno (enzima inactiva), y luego es activado en el

duodeno por la enteroquinasa intestinal a tripsina (enzima activa) mediante corte
proteoltico.

Tripsingeno enteroquinasa Tripsina

El quimotripsingeno (enzimticamente inactivo) se rompe por accin de la tripsina en dos

partes que permanecen unidas por un enlace S-S, y estas molculas de quimotripsingeno
pueden activar a otras eliminando dos pequeos pptidos en una trans-proteolisis. La
molcula resultante es una quimotripsina (enzimticamente activa), una molcula
tripeptdica interconectada por enlaces disulfuro.

84
 Bioqumica - Tema 10

Isoenzimas
Las isoenzimas o isozimas son diferentes formas estructurales de una enzima que catalizan
la misma reaccin. Se expresan en diferentes tejidos, tienen un patrn diferencial de
expresin. As ocurre por ejemplo con la enzima lactato deshidrogenasa (LDH), que
cataliza la reduccin del piruvato en lactato.

La LDH est formada por cuatro subunidades, son cuatro cadenas polipeptdicas del mismo
tamao pero pueden ser de dos tipos: M (muscle) y H (heart). Hay por lo tanto diferentes
variedades (isoenzimas) de lactato deshidrogenasa: M4, M3H, M2H2, MH3 y H4. La
isoenzima M4 est presente en el msculo esqueltico, es la que tiene mayor afinidad por el
piruvato y menor valor de Km. La variedad H4 aparece en el msculo cardiaco, y tiene un
valor muy alto de Km pero muy poca afinidad por el piruvato. La LDH M4 fermenta el
piruvato en lactato, mientras que la LDH H4 degrada el piruvato a CO2 y H2O.

En el tracto vaginal hay grandes concentraciones de lactato, el cual oxidan los

espermatozoides a piruvato gracias a la isoenzima LDH testicular, para obtener energa
(NADH + H+).

Disponibilidad de sustrato y cofactores

Una reaccin enzimtica es una interaccin entre un sustrato y una enzima. El sustrato y el
cofactor deben ser accesibles a dicha enzima, es ms importante su disponibilidad que su
concentracin.
Los factores que intervienen en la disponibilidad del sustrato y de los cofactores son
la compartimentacin celular, las asociaciones multienzimticas y la concentracin efectiva
de sustrato.

Compartimentacin celular

Cada proceso metablico tiene una ubicacin en el interior celular ya que las enzimas que
lo catalizan se encuentran localizadas en determinados compartimentos celulares.
Numerosas reacciones transcurren en el interior de orgnulos y vesculas delimitadas por
membranas, donde se produce una mayor concentracin de molcula de sustrato y enzimas.
Esta compartimentacin facilita la regulacin independiente de cada proceso y mejora su
eficacia al requerirse menores cantidades de cada enzima.

85
Alberto Fonte Polo

Los mecanismos de transporte pueden ocurrir de dos modos: 1) a favor de un gradiente

electroqumico, en este caso se habla de transporte pasivo, que puede ser por difusin
simple si no intervienen protenas, o por difusin facilitada si intervienen protenas (canales
o protenas transportadoras); 2) en contra de un gradiente electroqumico, se trata de
transporte activo, y requiere energa.

Las molculas de NAD+ y NADH no pueden atravesar la membrana mitocondrial interna,

que es una barrera selectiva. Por ello el NADH generado durante la glicolisis y por otras
deshidrogenasas citoslicas no puede atravesar dicha membrana para llegar a la matriz
mitocondrial y dar su par de electrones al complejo I de la cadena transportadora. Para
poder transferir ese poder reductor generado en el citosol hasta la cadena transportadora
de electrones existen en las clulas dos sistemas de lanzadera de solutos que permiten la
transferencia de pares de electrones y protones (pares de tomos de hidrgeno) bien
directamente hasta la cadena transportadora, bien hasta la matriz mitocondrial. Estas
lanzaderas son la lanzadera malato-aspartato, y la lanzadera del glicerol-3-fosfato.

A E C C E' A

B D D B

citosol mitocondria
membrana
mitocondrial interna

Mecanismo general de un sistema de lanzadera (E y E' son isoenzimas)

Asociaciones multienzimticas

Todos los sustratos que participan en una ruta metablica se encuentran prximos en la
clula, del mismo modo ocurre con las enzimas, las cuales forman asociaciones
multienzimticas. La existencia de estas agrupaciones facilita la regulacin del conjunto y
mejora la eficacia individual. Las asociaciones multienzimticas pueden ser de varios tipos:

Complejos multienzimticos: son asociaciones de varias enzimas que participan en

un mismo proceso metablico, mediante interacciones no covalentes. De este modo
se evitan las prdidas de velocidad por dilucin, ya que los productos resultantes de
una reaccin catalizada por una enzima son los sustratos de la enzima siguiente, que
se encuentra as en su proximidad.

Por ejemplo, la piruvato deshidrogenasa es un complejo multienzimtico formado

por tres enzimas (piruvato deshidrogenasa, dihidrolipoil transacetilasa y
dihidrolipoil deshidrogenasa) y cinco coenzimas asociadas (pirofosfato de tiamina,
cido lipoico, CoASH, FAD y NAD+).

86
 Bioqumica - Tema 10

Enzimas multifuncionales: son cadenas proteicas con varios dominios, cada uno
con una actividad enzimtica caracterstica. Se llaman tambin enzimas
policeflicas, quimricas o de cabeza mltiple. Desde el punto de vista evolutivo,
las enzimas multifuncionales se han formado a partir de la unin de enzimas
individuales.
E1 E2 E3

Por ejemplo, la cido graso sintasa est formada por dos cadenas ( y ), que son
dos enzimas multifuncionales idnticas. La cadena (185 KDa) tiene 3 dominios,
uno de ellos sirve de portador de sustratos, y la cadena (175 KDa) tiene 4
dominios. En las levaduras, la cido graso sintasa est formada por una cadena y
una . En mamferos hay 6 cadenas y 6 cadenas (66).

El complejo cido graso sintasa cataliza la unin entre el acetil-CoA y malonil-CoA:

Acetil CoA + Malonil CoA Butiril CoA + CO2 + CoA-SH

Enzimas unidas a estructuras subcelulares: son enzimas unidas a membranas de

estructuras subcelulares o a polirribosomas. Como las enzimas de la cadena
respiratoria de la membrana interna de la mitocondria, y las enzimas de sntesis de
protenas en los ribosomas.

Concentraciones efectivas de sustrato

En la clula, los sustratos y cofactores estn unidos a molculas transportadoras. Es

necesaria la forma libre del sustrato para que ste pueda unirse a la enzima.

Control alostrico

Regulacin feed-back

En muchos sistemas multienzimticos el producto final de la secuencia de reacciones puede

actuar como un inhibidor especfico de una enzima situada al comienzo de la secuencia, lo
cual determina que la velocidad de la secuencia completa de reacciones resulte
condicionada por la concentracin de producto final. De este modo se evita un exceso de
producto. Este tipo de inhibicin se designa de diversas maneras: inhibicin por el producto
final, inhibicin feed-back o retroinhibicin. La primera enzima de esta secuencia, la cual
es inhibida por el producto final, se llama enzima alostrica.

Va lineal: ()

E1
ABCDP

E1 es una enzima alostrica

87
Alberto Fonte Polo

Va ramificada:
()

E1
E2

()

La primera etapa est catalizada por isoenzimas (E1 y E2).

Tipos de inhibicin:

Inhibicin concertada (multivalente): ocurre cuando slo acta una enzima en la

primera etapa. Tiene lugar si la concentracin de ambos productos (P y Q) es muy
alta, si solo es alta la concentracin de uno de los productos no ocurre.

()

()

Inhibicin cooperativa: el exceso de un producto inhibe la va parcialmente. Cada

producto por s solo inhibe poco, pero si hay exceso de ambos productos la
inhibicin es ms efectiva.

()

()

Inhibicin cumulativa: cada uno de los productos inhibe la va, y los dos a la vez
inhiben con un efecto que es suma de los dos por separado.

Inhibicin secuencial: cada producto inhibe a la enzima primaria, y a la enzima de

su ramificacin.

()
()

() ()

88
 Bioqumica - Tema 10

Enzimas alostricas

Una enzima alostrica es una enzima cuya actividad est regulada mediante un centro
alostrico, que es un sitio, distinto del centro activo de la enzima, al que se une un
regulador (llamado regulador alostrico) de manera reversible y no covalente.
La unin de este regulador modifica la estructura tridimensional de la enzima y
llega a afectar la configuracin del sitio activo, por lo que aumenta o disminuye su
actividad, segn el caso.

Una enzima alostrica debe cumplir las siguientes caractersticas:

Protena con estructura cuaternaria.
Tienen un centro activo y un centro regulador. La enzima
puede tener subunidades catalticas y subunidades
reguladoras.
Presenta un estado tenso (de baja afinidad al sustrato) y un
estado relajado (de alta afinidad al sustrato).
Cintica sigmoidea.

El alosterismo es una de las principales formas de regulacin en la clula debido a que

puede producir cambios rpidos y fcilmente reversibles en la actividad de las enzimas (y,
por lo tanto, en el metabolismo) sin depender de que el regulador tenga una estructura
similar al sustrato de la enzima (lo que puede ayudar a conectar vas metablicas).

Las enzimas alostricas tienen subunidades reguladoras que unen molculas efectoras:
inhibidores o activadores. Los inhibidores promueven que las enzimas alostricas adopten
su conformacin inactiva y los activadores favorecen la conformacin activa.
La unin del sustrato promueve que la enzima asuma la conformacin activa y se
favorezca la unin cooperativa de sustrato adicional, induciendo la formacin del producto
(cooperatividad positiva).

La unin de inhibidores o activadores alostricos no afecta a la Vmx, pero s altera la Km

89
Alberto Fonte Polo

Las enzimas alostricas muestran dos tipos de control diferentes: heterotrpico y

homotrpico, segn la naturaleza de la molcula moduladora. Las enzimas heterotrpicas
son estimuladas o inhibidas por la molcula de un modulador o efector distinta de la de sus
sustratos. Por otra parte, en las enzimas homotrpicas, el sustrato acta tambin como
modulador. Estas enzimas homotrpicas contienen dos o ms centros de unin para el
sustrato: la modulacin de estas enzimas depende de cuntos sean los centros del sustrato
que estn ocupados.

Mecanismo de accin de las enzimas alostricas

Hay dos modelos que explican el comportamiento cintico de las enzimas alostricas:

Modelo concertado (Monod): postula que las enzimas alostricas poseen mltiples
subunidades, que se supone existen en dos conformaciones diferentes o estados:
relajado (R) o tenso (T). La unin de la primera molcula de sustrato incrementa la
tendencia de las restantes subunidades a experimentar transicin a la forma de
elevada afinidad a travs de un efecto de todo o nada, hallndose todas las
subunidades o bien en estado de baja afinidad o en la forma de afinidad elevada.

T R R
T R R

Modelo secuencial (Koshland): tambin postula que las subunidades catalticas

poseen dos estados de conformacin (T y R), pero difiere del modelo anterior en
que postula que las subunidades pueden experimentar cambios secuenciales
individuales en su conformacin. Es decir, las subunidades de la enzima cambian
secuencialmente de la forma T a la forma R. El enlace del sustrato induce que la
otra subunidad cambie al estado R, la cual tiene mayor afinidad por el sustrato.

T T R
T R R

Modificacin covalente
Consiste en modificar la conformacin de una enzima, como consecuencia de la unin
reversible, de tipo covalente, que se establece entre grupos qumicos de la protena y una
molcula de baja masa molecular.

90
 Bioqumica - Tema 10

Los procesos que participan en estas modificaciones incluyen: fosforilacin

desfosforilacin, acetilacindesacetilacin, adenilacindesadenilacin, metilacin
desmetilacin de diversas protenas, tambin las interconversiones de grupos tioles (SH) a
enlaces covalentes disulfuros (SS) corresponden a este tipo de alteracin estructural.

De todas las posibles modificaciones, quizs sean las fosforilacionesdesfosforilaciones las

que por su frecuencia juegan un rol de mayor trascendencia en el control del metabolismo
intracelular.
ATP ADP

Quinasa

enzimaOH enzimaO P
Fosfatasa

Pi H2O
Fosforilacin de enzimas con aminocidos hidroxilados

Reacciones que participan en los mecanismos enzimticos

Catlisis cido-bsica

Los cidos y las bases son los catalizadores ms verstiles y universales de las reacciones
orgnicas. Al proporcionar grupos funcionales capaces de actuar como dadores o aceptores
de protones, la enzima puede efectuar una catlisis general cida o bsica. La catlisis
cido-base proporciona un medio para efectuar la catlisis a pH neutro (en el que las
concentraciones de H+ y de OH son muy bajas) de reacciones qumicas que de otro modo
necesitaran concentraciones muy elevadas de esos iones.

La catlisis cido-bsica depende de la donacin y aceptacin de protones:

cido (donante de protones): RH+ + RO R + ROH
Base (aceptador de protones): R + ROH RH+ + RO

Catlisis cida-bsica en el centro activo de la ribonucleasa

La ribonucleasa, abreviada comnmente como RNasa, es una enzima que cataliza la

hidrlisis del ARN en componentes ms pequeos. La RNasa rompe la cadena de ARN en
el enlace 3'-fosfodister de nucletidos pirimidnicos, con la formacin obligatoria del
intermediario pirimidina 2',3'-fosfato cclico.
La His-119 acta como un cido general para protonar el enlace fosfodister,
mientras que la His-12 acta como una base generando un alcxido sobre el hidroxilo 3' de
la ribosa. Este ltimo ataca entonces al fsforo, dando as lugar a la formacin del fosfato
cclico y a la rotura de la cadena de ARN en este lugar. El fosfato cclico se rompe entonces
en la fase 2 mediante la inversin de las reacciones de la fase 1, pero aqu el agua
reemplaza al grupo saliente. Las histidinas del centro activo revierten a su estado de
protonacin original.

91
Alberto Fonte Polo

1 etapa

Producto 1

2 etapa

Producto 2

Los residuos de His 12 y 119 del centro activo de la ribonucleasa funcionan, respectivamente,
como catalizadores bsico y cido facilitando la formacin del intermedio 2',3'-fosfato cclico y
liberando un fragmento de ARN ms corto (producto 1). Estas mismas histidinas juegan un papel
inverso en la hidrlisis del fosfato cclico y en la liberacin del otro fragmento del ARN (producto
2) que finaliza con pirimidina 3'-fosfato. Como consecuencia de la formacin del producto 2 se
regenera el centro activo de la enzima.

Mecanismo de tensin elctrica sobre el sustrato

Una segunda forma de catlisis cido-base refleja otra definicin ms general de los cidos
y bases. En la formulacin de Lewis, un cido es un aceptor de pares de electrones y una
base es un donador de pares de electrones. Los iones metlicos (Mn2+, Mg2+ y Zn2+) son
cidos de Lewis. Por tanto, pueden desempear un papel en la catlisis por ion metlico.

La participacin del in Zn2+ en la actividad enzimtica de la carboxipeptidasa A es un

ejemplo de este tipo de comportamiento. Esta enzima cataliza la hidrlisis de enlaces
peptdicos en el extremo carboxilo-terminal de las protenas. El Zn2+ se encuentra en las
proximidades del centro activo de la carboxipeptidasa A, y es necesario para la actividad de
la enzima. El in se acompleja con las cadenas laterales imidazlicas de las histidinas 69 y
196 y con el grupo carboxilo del glutamato 72. El ion zinc tambin se acompleja con el
sustrato.

92
 Bioqumica - Tema 10

La unin del sustrato al ion zinc polariza el grupo carbonilo, lo hace susceptible al ataque
del agua y permite que la hidrlisis se efecte con mayor rapidez que en la reaccin no
catalizada. El sustrato provoca un cambio conformacional en la enzima (adaptacin
inducida).

Modelo combinado

En el modelo mixto se da tensin sobre el sustrato y catlisis cido-bsica. Un ejemplo de

esto lo constituye la lisozima.

La lisozima es una enzima que daa las clulas bacterianas catalizando la hidrlisis de los
enlaces O-glucosdicos (1-4) entre los residuos de cido N-acetilmurmico (NAM) y N-
acetilglucosamina (NAG) del peptidoglicano de la pared bacteriana.
La lisozima es abundante en numerosas secreciones como la saliva, las lgrimas y el
moco. Est presente tambin en los grnulos citoplasmticos de los neutrfilos
polimorfonucleares.

93
Tema 11 Vitaminas Hidrosolubles
y Coenzimas Derivados

Concepto de cofactor
Un cofactor es una sustancia no proteica que necesitan algunas enzimas proteicas para
realizar su actividad. Ciertos cofactores, que actan de grupo prosttico, estn fuertemente
unidos (mediante enlaces covalentes) a la enzima.
Una holoenzima est formada por una apoprotena (parte proteica) y un cofactor
(parte no proteica). Los cofactores pueden ser coenzimas o iones inorgnicos (Zn2+, Mg2+,
Mn2+...).

Concepto y tipos de vitaminas

Las vitaminas son molculas orgnicas, diversas en su composicin qumica, que debido a
que no pueden ser sintetizadas por el propio organismo (o las cantidades sintetizadas son
muy pequeas) son necesario ingerir en pequeas cantidades en la dieta para el buen
funcionamiento de nuestro organismo.
La funcin de las vitaminas es biocatalizadora: favorecen determinadas reacciones
qumicas celulares, muchas son coenzimas o sustancias precursoras de los coenzimas.

Las vitaminas se clasifican en dos grupos:

Vitaminas liposolubles: son sustancias apolares insolubles en agua, pero solubles
en lpidos. Son las vitaminas A, D, E y K. Son muy difciles de extraer de los
alimentos, pero como se pueden almacenar en los tejidos no necesitamos un aporte
continuo. No pueden excretarse con la orina, por lo que un exceso puede provocar
un fallo heptico.
Vitaminas hidrosolubles: son sustancias polares solubles en el agua. Son las
vitaminas del complejo B (B1, B2, B3, B5, B6, B12, cido flico y biotina) y la
vitamina C. No se pueden almacenar, excepto la vitamina B12, por lo que se necesita
un aporte continuo. Al eliminarse fcilmente a travs de la orina, un exceso no
produce problemas.

La mayora de coenzimas derivan de vitaminas hidrosolubles. Algunas son directamente

enzimas o pueden ser necesarias para la sntesis de otras coenzimas. Las vitaminas
liposolubles no son coenzimticas, excepto la vitamina K.

Coenzimas vitamnicas
De acuerdo a la funcin pueden distinguirse dos tipos de coenzimas vitamnicas:
coenzimas de xido-reduccin, que participan en reacciones de oxidacin (prdida de
electrones) o de reduccin (ganancia de electrones), de modo que estas coenzimas son
transportadoras de electrones; y coenzimas transportadoras de grupos, que transportan
grupos qumicos (por ejemplo CO2), pero no transportan electrones.

94
 Bioqumica - Tema 11

Coenzimas de xido-reduccin

Dentro de las coenzimas de transporte electrnico se distinguen dos tipos: los nucletidos
de nicotinamida (NAD+ y NADP+) y los nucletidos de flavina (FMN y FAD).

Nucletidos de nicotinamida: derivan del cido nicotnico o niacina (vitamina B3).

El cido nicotnico se designa de este modo porque es un componente de la nicotina
del tabaco, un alcaloide txico.

Las dos coenzimas que contienen nicotinamida como componente esencial son el
dinucletido de nicotinamida y de adenina (NAD) y el fosfato del dinucletido de
nicotinamida y de adenina (NADP).

Nicotinamida + (H+ + 2e)

(H+ + 2e)

NADH

Adenina

NAD+

Los nucletidos de piridina actan como coenzimas de un gran nmero de

oxidorreductasas, llamadas colectivamente deshidrogenasas dependientes de la
piridina. El anillo de nicotinamida es el que deriva del cido nicotnico, es decir, es
la parte vitamnica y activa de la coenzima (donde se transportan electrones de
reacciones redox).
Actan como aceptores electrnicos durante la eliminacin enzimtica de
tomos de hidrgeno procedentes de molculas de sustrato especficas. Un tomo de
hidrgeno del sustrato se transfiere en forma de in hidruro a la porcin
nicotinamida de las formas oxidadas de estas coenzimas (simbolizadas por NAD+ y
NADP+) para rendir las coenzimas reducidas (simbolizadas por NADH y NADPH,
respectivamente); el otro tomo de hidrgeno del sustrato se transforma en un in
hidrgeno (H+) que se libera al medio, y el e se une tambin al anillo de
nicotinamida.

95
Alberto Fonte Polo

La coenzima NAD+ es transportadora de 2 e y 1 H+, es decir,

un in hidruro. El NADP+ es una forma fosforilada de la NAD+,
y tambin transporta dos electrones y un protn. Pero a
diferencia de la anterior suele trabajar con enzimas llamadas
reductasas. Las NAD+ intervienen en el catabolismo, mientras
que las NADP+ lo hacen en vas anablicas.

Las formas oxidadas y las formas reducidas de estas coenzimas no absorben la luz
de igual modo. Tienen diferente espectro de absorcin, el espectro de absorcin es
la representacin grfica de la absorbancia a distinta longitud de onda ().

El dficit de vitamina B3 (niacina) produce pelagra. La pelagra es una enfermedad

causada por una dieta deficiente o por una insuficiencia del organismo para absorber
la vitamina B3 o el aminocido triptfano.
Esta enfermedad es comn en pases cuya base de la dieta es el maz. Suele
denominarse como la enfermedad de las tres D: dermatitis, diarrea y demencia; ya
que se caracteriza por lceras cutneas escamosas, diarrea, adems de confusin
mental y alucinaciones. La pelagra es una alteracin reversible.

Nucletidos de flavina: existen dos tipos, el flavin-mono-nucletido (FMN) y el

flavin-adenin-dinuctetido (FAD), ambos derivan de la riboflavina, o vitamina B2.
El FMN es slo el 5'-fosfato de riboflavina.

La riboflavina es un derivado de la isoaloxacina. La parte activa de las coenzimas es

el anillo de isoaloxacina, es el lugar donde se transportan electrones.

96
 Bioqumica - Tema 11

Los nucletidos de flavina actan como grupos prostticos de las enzimas de

oxidacin-reduccin conocidas como flavoprotenas, que son un tipo concreto de
deshidrogenasas. Las dos coenzimas estn unidas covalentemente a la enzima
(deshidrogenasa).

En cuanto se forma el FADH2, debe ceder dos electrones a otro

sustrato y as volver a la forma oxidada y poder participar en una
nueva reaccin. Un ejemplo importante es la succinato
deshidrogenasa, enzima clave del ciclo de Krebs.

La carencia de vitamina B2 genera trastornos oculares, bucales y cutneos.

Coenzimas de transporte de grupos qumicos

Estas coenzimas transportan radicales, grupos

qumicos. Son la coenzima A, la biotina, el cido
flico, el fosfato de piridoxal, la tiamina
pirofostato, la vitamina B12 y la vitamina C.

Coenzima A: se sintetiza a partir del cido

pantotnico (vitamina B5). Es producido
por las plantas y por muchos
microorganismos, pero es necesario en la
dieta de los vertebrados. Las bacterias del
intestino humano sintetizan la cantidad
necesaria de vitamina B5. Es una de las
vitaminas ms abundantes, de hecho, no se
conoce ninguna alteracin por deficiencia
de cido pantotnico.

La coenzima A se designa abreviadamente

como CoA (o CoA-SH, en que se hace
resaltar la funcin tiol). La coenzima A se
encuentra unida a un producto de
descarboxilacin de la cistena. La parte
funcional de la CoA es el SH (grupo tiol),
es el encargado de transportar grupos
acetilo. Cuando la coenzima A presenta un
grupo acetilo unido al tomo de S, se
denomina acetil-coenzima A.

97
Alberto Fonte Polo

La funcin de la coenzima A es la de actuar como transportador de grupos acilo en

las reacciones enzimticas implicadas en la oxidacin de los cidos grasos, en la
sntesis de los cidos grasos, en la oxidacin del piruvato y en las acetilaciones
biolgicas.
El acetil-CoA permite la activacin de los cidos grasos (una activacin
consiste en un aumento del contenido energtico de un compuesto para que ocurra
la reaccin).

Ejemplo: la enzima piruvato deshidrogenasa interviene en la oxidacin de los

glcidos. En la gluclisis, la glucosa (6C) sufre
degradaciones hasta formar piruvato (3C). Y la
enzima piruvato deshidrogenasa transforma el
piruvato en acetil CoA, este es un transportador
temporal, transporta el acetilo al oxalacetato, el
cual es el primer compuesto del ciclo de Krebs.

Biotina: es una vitamina del grupo B, llamada

vitamina H, es adems una coenzima por s sola. Est
ampliamente distribuida, por ejemplo la flora intestinal
(E. coli) sintetiza biotina.

En su forma activa, acta como grupo prosttico de las

carboxilasas, a las que se une covalentemente. La
biotina unida desempea el papel de transportador Biotina
intermediario de dixido de carbono en reacciones de
carboxilacin.
Las reacciones ocurren en dos etapas. En primer lugar, antes de que se una el
sustrato a la enzima, entra una molcula de bicarbonato. El CO2 carboxila a la
biotina, formando carboxibiotina. En segundo lugar, entra el sustrato que se va a
carboxilar, la biotina cede el grupo CO2 al sustrato, de este modo se recupera la
forma inicial.

ATP + HCO3 + enzima-biotina ADP + Pi + enzima-carboxibiotina

enzima-carboxibiotina + sustrato enzima-biotina + producto carboxilado

Ejemplo: la reaccin de la piruvato carboxilasa requiere biotina. El piruvato (3C)

puede transformarse en oxalacetato (4C), para ello se requiere CO2, y tras una serie
de reacciones adicionales se obtiene glucosa (6C).
piruvato carboxilasa
Piruvato + Carboxibiotina Oxalacetato + Biotina

98
 Bioqumica - Tema 11

cido flico: el cido flico (del latn folium, hoja), que se encontr
primeramente en las hojas de espinaca, est ampliamente distribuido en las plantas;
su deficiencia en los mamferos provoca una disminucin del crecimiento, y la
aparicin de diversas formas de anemia.

El cido flico se convierte, por reduccin en dos etapas, en su forma de coenzima,

el cido tetrahidroflico.

El tetrahidrofolato, designado con frecuencia en su forma abreviada FH4 acta como

transportador intermediario de fragmentos monocarbonados: grupos hidroximetilo
(CH2OH), formilo (CHO) o metilo (CH3), en gran nmero de reacciones
enzimticas en las que tales grupos se transfieren desde un metabolito a otro o son
interconvertidos.
La parte activa del tetrahidrofolato es el
anillo de pteridina. La reaccin puede tener lugar
en el N5, en el N10 o puede que en ambos.
Participa en la sntesis de la glicina a
partir de la serina, o viceversa. Y en la sntesis de
la metionina a partir de la homocistena, el FH4
cede un metilo a la homocistena para formar
metionina. Y participa tambin en la biosntesis Anillo de pteridina del FH4
de purinas y pirimidinas, que se requieren para la
proliferacin celular.

Homocistena Homocistena metil-transferasa Metionina

N5CH3FH4 N5FH4

La deficiencia de cido flico provoca anemia megaloblstica: los precursores de

los glbulos rojos se agrandan, pero sin cido flico no pueden dividirse, esto
produce un acmulo de megaloblastos en la mdula sea roja, con el consiguiente
dficit de hemates en la circulacin. A las embarazadas se les suministra cido
flico, ya que hay una relacin entre la deficiencia de cido flico y la espina bfida.
El dficit de cido flico durante el embarazo produce espina bfida: no se
cierra correctamente el tubo neural, y sobresale la mdula espinal y la membrana
que la rodea por la espalda del neonato.

99
Alberto Fonte Polo

Fosfato de piridoxal: la piridoxina (vitamina B6) se convierte biolgicamente en

otros dos compuestos, el piridoxal y la piridoxamina, que son precursores de las
formas activas de esta vitamina. Las formas coenzimticas activas de la vitamina B6
son el fosfato de piridoxal y el fosfato de piridoxamina.

El fosfato de piridoxal es la forma activa, es coenzima de las transaminasas, estas

enzimas catalizan reacciones de transaminacin, transferencia del grupo -amino de
un aminocido al tomo de carbono de un -cetocido.

aa1 + -cetocido2 -cetocido1 + aa2

Estas reacciones tienen lugar en dos etapas. En la primera, el grupo amino del -
aminocido reacciona con el grupo carbonilo del fosfato de piridoxal, unido
ntimamente a la enzima, y se forma el correspondiente -cetocido, y se libera de la
enzima con el grupo amino unido covalentemente en forma de fosfafo de
piridoxamina. En la segunda etapa, por inversin de esta secuencia de reacciones, la
forma aminada de la aminotransferasa puede transferir entonces su grupo amino a
otro -cetocido, para producir el aminocido correspondiente.

Enzima-Fosfato de piridoxal + aa1 Enzima-Fosfato de piridoxamina + -cetocido1

Enzima-Fosfato de piridoxamina + -cetocido2 Enzima-Fosfato de piridoxal + aa2

El fosfato de piridoxal interviene tambin en la descarboxilacin de compuestos

biolgicamente funcionales. Por ejemplo:
CO2
Glutamato descarboxilasa
c. glutmico (Fosfato de piridoxal)
c. -aminobutrico (GABA)

El GABA es un neurotransmisor del sistema nervioso central. La carencia del

fosfato de piridoxal no suele generar enfermedades graves.

Otro ejemplo:
CO2
L-His descarboxilasa
L-His (Fosfato de piridoxal) Histamina

100
 Bioqumica - Tema 11

Pirofosfato de tiamina: la tiamina (vitamina B1) est constituida por una

pirimidina sustituida unida mediante un puente metileno a un tiazol sustituido (este
es el grupo activo). La tiamina aparece en las clulas, mayormente en su forma de
coenzima activa, el pirofosfato de tiamina.

El pirofosfato de tiamina desempea el papel de coenzima en las reacciones de

descarboxilacin de los -cetocidos. En estas reacciones, el anillo de tiazol del
pirofosfato de tiamina acta como transportador transitorio de un grupo aldehdo
unido covalentemente.

La enzima piruvato deshidrogenasa es un complejo multienzimtico que requiere

varias coenzimas, como el cido lipoico, la coenzima A y el pirofosfato de tiamina;
adems del NAD+ y el FAD+2.
El tomo de hidrgeno en la
posicin 2 del anillo de tiazol del PPT,
se ioniza fcilmente para dar un
carbanin, que reacciona con el tomo
de carbono carbonlico del piruvato a
temperaturas elevadas para formar CO2
y el hidroxietil derivado del anillo
tiazlico.
El radical hidroxietilo es
transferido desde el PPT al cido lipoico, Pirofosfato de hidroxietilamina
y de ste a la coenzima A.

La vitamina B1 se encuentra de forma natural en levaduras, carnes, legumbres,

cereales integrales, huevos y vsceras.
El beriberi es una enfermedad producida por carencia de vitamina B1, se
manifiesta mediante neuropatas graves, y cardiopatas que pueden desencadenar
infartos. El beriberi fue, hasta el siglo XX, una enfermedad endmica en muchas
poblaciones de Asia Oriental cuya dieta se restringa a un elevado consumo de arroz
molido, y por lo tanto carente de su cascarilla (lugar donde se concentra la tiamina).
Por otra parte, la ingesta crnica de alcohol acelera la degradacin de la
tiamina e impide su absorcin.

Vitamina B12: la vitamina B12, conocida tambin como cianocobalamina, posee dos
componentes caractersticos. El mayor es el sistema de anillos de corrina, que se
parece al sistema de la porfirina de la hemoglobina en que contiene cuatro anillos

101
Alberto Fonte Polo

del tipo pirrol. Coordinado con los cuatro tomos de nitrgeno internos del sistema
anular de la corrina hay un tomo de cobalto. El segundo componente principal de
la vitamina B12 es el ribonucletido de 5,6-dimetilbenzimidazol.

Anillo de corrina

Bencil imidazol

El grupo R cambia segn la forma de la vitamina, en la cianocobalamina el grupo R

es cianuro, en la 5-desoxiadenosilcobalamina (coenzima B12) R es el grupo 5'-
desoxiadenosilo, en la metilcobalamina es un grupo metilo, y en la
hidroxicobalamina R es un grupo hidroxilo. La cianocobalamina no es una forma
activa, en el hombre la metilcobalamina y la 5-desoxiadenosilcobalamina son las
ms comunes.

La 5-desoxiadenosilcobalamina participa en reacciones de isomerizacin.

Metilmalonil CoA Succinil CoA

La metilcobalamina interviene en reacciones de metilacin. En estas reacciones, la

metilcobalamina funciona como un transportador de un grupo metilo procedente del
N5-metiltetrahidrofolato, a ciertas molculas de aceptor, particularmente la
homocistena, que se metila para transformarse en metionina.

metilcobalamina
Homocistena Metionina

N5CH3FH4 FH4 (tetrahidrofolato)

Cobalamina Metilcobalamina

Si no hay vitamina B12, no se recicla el cido flico (FH4). De ah que los sntomas
de una deficiencia de vitamina B12 son iguales a los de una deficiencia de cido
flico. La vitamina B12 slo se encuentra en alimentos de origen animal.
La anemia perniciosa es un tipo de anemia megaloblstica causada por
dficit de vitamina B12 debido a un defecto en la absorcin de sta. La falta del

102
 Bioqumica - Tema 11

factor intrnseco, glucoprotena producida en el aparato digestivo y esencial para la

absorcin de vitamina B12, es uno de sus principales desencadenantes. El factor
intrnseco facilita la absorcin de la vitamina B12 por el enterocito, y su paso a la
sangre.

Vitamina C: la vitamina C o cido ascrbico es un potente reductor, pierde con

facilidad tomos de hidrgeno y se transforma en cido deshidroascrbico, que
tambin posee actividad de vitamina C.

El cido ascrbico es la forma activa, reductora. El Fe3+ no se puede absorber, para

ello la vitamina C lo reduce a Fe2+. Esta vitamina acta como cofactor en las
reacciones de hidroxilacin enzimtica, como por ejemplo el paso de prolina a
hidroxiprolina en la sntesis del colgeno.
Procolgeno (prolisina) Colgeno (hidroxiprolina, hidroxilisina)
En esta reaccin intervienen la prolilhidroxilasa y la lisilhidroxilasa, ambas son
enzimas que tienen como cofactor la vitamina C.

La deficiencia de cido ascrbico impide la correcta hidroxilacin de la lisina y la

prolina, por tanto se obtienen cadenas de procolgeno defectuosas y la sntesis no
puede finalizarse correctamente. Esto da lugar a una avitaminosis conocida como
escorbuto, que hace que los capilares sean frgiles, provoca hemorragias, y encas
sangrantes.

El cido ascrbico tambin interviene en la sntesis de adrenalina:

Dopamina noradrenalina adrenalina
La dopahidroxilasa es la enzima que cataliza el paso de dopamina a noradrenalina,
su cofactor es la vitamina C.

103
Tema 13 Las Hormonas

Concepto de hormona
Las hormonas son mensajeros qumicos que necesitan los organismos pluricelulares para
que haya una comunicacin entre las clulas. Permiten que los rganos y tejidos funcionen
de manera organizada.

Hay varios tipos de mensajeros qumicos:

Hormonas: son producidas por el sistema endocrino.
Neurotransmisores: producidos por el sistema nervioso central.
Factores de crecimiento: regulan procesos de diferenciacin y proliferacin celular.
Citoquinas: regulan tambin procesos de diferenciacin y proliferacin celular.

Las hormonas participan en la digestin, el metabolismo, el crecimiento y la diferenciacin

celular, en la reproduccin y en la homeostasis de electrolitos.
Son mensajeros qumicos liberados por una clula (clula secretora) para actuar
sobre otra clula (clula diana) provocando una determinada respuesta biolgica, la
mayora de las hormonas son liberadas a la sangre. Para que una clula diana responda ante
una determinada hormona tiene que tener receptores para dicha hormona, pueden ser
receptores de membrana o receptores intracelulares: en el ncleo o en el citosol.

Clasificacin de las hormonas

Segn el radio de accin: dependiendo de la distancia que hay desde la clula secretora
hasta la clula diana, pueden diferenciarse tres modos de accin:

Accin endocrina: la hormona se libera a la sangre para actuar sobre una clula
diana alejada del lugar de liberacin. El ejemplo ms representativo es la insulina.

104
 Bioqumica - Tema 13

Los islotes de Langerhans del pncreas producen hormonas de accin endocrina, las
clulas liberan glucagn, las clulas liberan insulina, y las clulas liberan
somatostatina. Ante niveles elevados de glucosa en sangre se incrementa la
secrecin de insulina.

Accin paracrina: son hormonas de accin local, que se liberan al espacio

extracelular para actuar sobre una clula diana vecina. La insulina tambin tiene
accin paracrina. La insulina y el glucagn funcionan de forma sinrgica para
mantener normales las concentraciones de glucosa en sangre, ambas hormonas
tienen efectos contrarios, por ello cuando los niveles de insulina son altos los niveles
de glucagn son bajos.

Accin autocrina: en este caso la hormona es liberada por la clula secretora,

difunde al espacio extracelular, e influye sobre la misma clula que la ha producido.
Este es el modo de accin, por ejemplo, de la somatostatina.

Segn la estructura qumica:

Pptidos o protenas: son la mayora de las hormonas. Todas las hormonas

hipotalmicas son peptdicas, as como las hipofisiarias (son ms grandes), y
tambin la insulina, glucagn, somatostatina... Tienen diferentes tamaos, desde 3
aminocidos (como la TRH) hasta 200 aminocidos (GR, PRL).
Son sintetizadas como protohormonas y posteriormente sufren variaciones
postraduccionales, son almacenadas en vesculas hasta su secrecin. Cuando se
estimulan, se hidrolizan y se segregan al torrente sanguneo como hormonas, y
tienen una funcin endocrina en el animal.
Todas son hormonas hidrosolubles, y viajan en la sangre libremente.
Cuando llegan a la clula diana no pueden atravesar la bicapa lipdica, necesitan
receptores de membrana. Nunca pasan al interior de la clula, el simple hecho de la
interaccin provoca una respuesta en la clula. Tienen una vida media corta (de
varios minutos), y son inactivadas por enzimas.

Derivados de aminocidos: se distinguen dos tipos, ambos derivan del aminocido

tirosina (L-Tyr):

o Catecolaminas: son un grupo de sustancias que incluyen la adrenalina, la

noradrenalina y la dopamina (neurotransmisor), las cuales son sintetizadas a
partir del aminocido tirosina. Contienen un grupo catecol y un grupo
amino. Las catecolaminas pueden ser producidas en las glndulas
suprarrenales, ejerciendo una funcin hormonal, o en las terminaciones
nerviosas del SNC, en este caso actan como neurotransmisores.
Son hormonas pequeas, e hidrosolubles, poseen muchos grupos
hidroxilo (OH). Viajan libremente en sangre, e interaccionan nicamente
con receptores de membrana (receptores adrenrgicos y receptores
dopaminrgicos). No se sintetizan en forma de protohormonas. Tienen una
vida media circulante corta (varios minutos).

105
Alberto Fonte Polo

Biosntesis de las
catecolaminas

o Hormonas tiroideas: son producidas por la glndula tiroides, se distinguen

dos hormonas: la T4, tetrayodotironina o tiroxina; y la T3 o triyodotironina.
Estas hormonas no son solubles en agua, sino que son liposolubles.
Su mecanismo de accin, por lo tanto, es muy diferente: interaccionan con
receptores intracelulares, y modifican la sntesis de ARN. Viajan por la
sangre unidas a protenas y tienen una vida media ligeramente mayor.

T4 T3

Esteroides u hormonas esteroideas: estas hormonas tienen en comn que se

sintetizan a partir del colesterol, son las siguientes:
Corticoides, son producidos por la corteza de las glndulas suprarrenales:
glucocorticoides (cortisol) y mineralocorticoides (aldosterona).
Hormonas sexuales masculinas: son los andrgenos como la testosterona y
sus derivados.
Hormonas sexuales femeninas: son los estrgenos y la progesterona.

Las hormonas esteroideas son hormonas lipfilas que atraviesan libremente la

membrana plasmtica, se unen a un receptor citoplasmtico, y este complejo
receptor-hormona tiene su lugar de accin en el ADN del ncleo celular, activando
genes o modulando la transcripcin del ADN.

106
 Bioqumica - Tema 13

Los esteroides son derivados del ncleo del ciclopentanoperhidrofenantreno, que se

compone de cuatro anillos de carbono fusionados que poseen diversos grupos
funcionales. El esterol ms importante es el colesterol, del cual derivan todos los
dems.
A partir del colesterol se sintetiza la pregnenolona, es la molcula precursora
para todos los esteroides. A partir de la pregnenolona se genera la progesterona, y de
esta se forma la aldosterona. La pregnenolona tambin es el precursor de los
andrgenos, y a partir de los andrgenos se forman los estrgenos.

107
Alberto Fonte Polo

Hormonas derivadas de vitaminas liposolubles

A partir de la vitamina A (retinol) se generan metabolitos

como el retinal, que da lugar al cido retinoico. El cido
retinoico es una hormona liposoluble que regula la
cido retinoico
expresin gnica en la piel.

La vitamina D3, o colecalciferol, es una vitamina

esteroidea que se forma en la piel. Esta vitamina es una
prohormona, y en el hgado se activa a 25-
hidroxicolecalciferol, que pasa al rin donde se
transforma en 1,25-dihidroxicolecalciferol. El 1,25-
dihidroxicolecalciferol, o calcitriol, es la forma hormonal
de la vitamina D3, su funcin es regular los niveles de
calcio en la sangre, y ayudar a mantener el calcio en los
huesos y el equilibrio qumico en el cuerpo (homeostasis calcitriol
del Ca2+).

Organizacin del sistema endocrino

El sistema nervioso central (SNC) recibe y procesa informacin, hace llegar estmulos al
sistema endocrino mediante neurotransmisores, el cual responde liberando hormonas en
sangre para estimular al rgano diana.

Cuando el hipotlamo, situado en la base del cerebro, recibe mensajes nerviosos

procedentes del SNC, secreta pequeas cantidades de unas hormonas denominadas factores
de liberacin (hormonas peptdicas), que a lo largo de las fibras nerviosas pasan a la
glndula pituitaria anterior (tambin llamada hipfisis anterior). En sta, cada uno de los
factores liberadores puede disparar la liberacin de una hormona especfica por parte de
la glndula pituitaria anterior. Por ejemplo, el factor liberador de tirotropina (TRH)
provoca la liberacin de la hormona tirotrpica (TSH), y el factor liberador de
corticotropina (CRH), induce la liberacin de la hormona adrenocorticotrpica (ACTH).
El hipotlamo tambin secreta otras sustancias parecidas a las hormonas denominadas
factores inhibidores, que son capaces de inhibir la liberacin de algunas de las hormonas
hipofisarias.
Las distintas hormonas liberadas de la pituitaria anterior pasan por la sangre hasta
las glndulas especficas que constituyen sus objetivos. El blanco u objetivo de la
adrenocorticotropina es el crtex adrenal, y el de la hormona tirotrpica es la glndula
tiroides.
Estas glndulas, as como las glndulas objetivo de otras hormonas de la pituitaria
anterior, especialmente las gnadas, son, a su vez, estimuladas a producir sus hormonas
caractersticas, que actan finalmente sobre varios tejidos que son sus blancos de accin.
Por ejemplo la accin de la adenocorticotropina sobre la corteza suprarrenal, hace que esta,
en respuesta, segregue cortisol, corticosterona y aldosterona. Y la tirotropina hace que la
tiroides produzca tiroxina (T4) y triyodotironina (T3), estas hormonas tiroideas actan sobre
el msculo y el hgado. La prolactina es la nica hormona que no tiene intermediarios, se
secreta en la hipfisis anterior y acta directamente en las glndulas mamarias.

108
 Bioqumica - Tema 13

1 diana

2 diana

Tejido diana final

Aparte de secretar varios factores liberadores e inhibidores que actan sobre la pituitaria
anterior, el hipotlamo tambin produce hormonas, la oxitocina y la vasopresina (u
hormona antidiurtica), importantes en la secrecin lctea y en el equilibrio del agua,
respectivamente. Estas hormonas pasan a la pituitaria posterior, desde la cual son liberadas
a la sangre del cuerpo, para actuar sobre el msculo liso de la glndula mamaria y las
arteriolas, respectivamente.
Por otra parte, la mdula adrenal segrega adrenalina, en respuesta a un estmulo
directo del SNC a travs del hipotlamo, que acta sobre el hgado, el corazn y el
msculo.

Regulacin de las secreciones hormonales

La secrecin hormonal est regulada por una compleja red de controles. Los estmulos
externos transmitidos por el sistema nervioso modulan la actividad del hipotlamo. La
secrecin de las hormonas trpicas por parte de la pituitaria anterior es, a su vez, modulada
por una retroalimentacin negativa (feed-back) ejercida por las secreciones caractersticas
de sus glndulas blanco. Por ejemplo, una elevada concentracin en sangre de las hormonas
glucocorticoides, secretadas por el crtex adrenal, induce una retroinhibicin de la
secrecin pituitaria de ACTH.
La secrecin de algunas hormonas es modulada por la concentracin de metabolitos
especficos de la sangre; por ejemplo, la liberacin de insulina por el pncreas es estimulada
cuando el nivel de glucosa en sangre se eleva. Por otra parte, las concentraciones

109
Alberto Fonte Polo

sanguneas elevadas de tiroxina inhiben la accin del factor liberador de tirotropina en la

pituitaria anterior.
()

SNC Hipotlamo TRH Hipfisis anterior Tirotropina Tiroides T3 y T4

Mecanismos de accin hormonal

La primera etapa es la unin de la hormona a un receptor hormonal. Los receptores
hormonales presentan elevada especificidad para una determinada hormona, el receptor
puede diferenciar entre esa hormona y las dems. Los receptores hormonales son protenas
con alta afinidad por la hormona a la que se unen, por lo que pueden activarse con bajos
niveles de hormona. La unin receptor-hormona es una unin saturable, ya que hay un
nmero definido de receptores en la clula. Las uniones que se producen son dbiles, pues
son reversibles y no covalentes.

Bmx 100% unin

[Hormona-Receptor]
Bmx

Curva de saturacin
de un receptor
0 Kd [Hormona] por una hormona

Kd es la constante de disociacin, corresponde al valor de la concentracin de hormona a la

cual el 50% de los receptores estn unidos. A menor valor de Kd, mayor afinidad del
receptor por la hormona.
A partir de estos anlisis se obtiene informacin sobre el nmero mximo de sitios
de receptor (nmero de receptores) en el sistema, corresponde al valor de Bmx.

Clasificacin de los receptores

Existen dos superfamilias de receptores: los receptores de membrana, son los que se
encuentran en la superficie de la clula diana; y los receptores intracelulares, que pueden
estar localizados en el citosol o en el ncleo.

110
 Bioqumica - Tema 13

Receptores nucleares

Los ligandos tpicos de los receptores nucleares son hormonas liposolubles, como las
hormonas esteroideas, las hormonas tiroideas, y los derivados de la vitamina A y vitamina
D. Estas hormonas desempean una funcin muy importante en la regulacin del
metabolismo, en las funciones de muchos rganos, en el proceso de desarrollo y
crecimiento de los organismos y en la diferenciacin celular. Actan regulando la
transcripcin gnica.

A cierta distancia de la clula diana se encuentra una clula endocrina que vierte la
hormona liposoluble a la sangre, donde se asociar a una protena de transporte, como por
ejemplo la albmina, o la TBG (globulina ligante de tiroxina). La hormona se disocia de la
protena transportadora al llegar a la clula diana, y atraviesa la membrana lipdica,
normalmente por difusin pasiva.
En el interior se asocia a su receptor hormonal, formando un complejo hormona-
receptor e inicia la cascada de seales. Los receptores nucleares son activadores de la
transcripcin, y junto con el ligando u hormona pasan a travs de la membrana nuclear al
interior del ncleo y activan la transcripcin de ciertos genes y por lo tanto la produccin de
una protena.

Los receptores nucleares que son activados por hormonas activan receptores especficos del
ADN llamados elementos de respuesta a hormonas (ERH), que son secuencias de ADN
que estn situadas en la regin promotora de los genes que son activados por el complejo
hormona-receptor. Existen secuencias ERG: elementos de respuesta a los glucocorticoides,
y secuencias ERE: elementos de respuesta a los estrgenos. La interaccin de la hormona-
receptor con la secuencia ERH correspondiente produce un aumento en la cantidad de
ARNm transcrito, el cual llegar al citosol para ser traducido a una protena determinada. El
efecto de las hormonas liposolubles es aumentar la cantidad de una protena especfica, que
suele ser una enzima. Controlando la concentracin de la enzima se puede controlar la ruta
metablica que cataliza.
La activacin de la transcripcin de genes es mucho ms lenta que las seales que
directamente afectan a protenas ya existentes. Como consecuencia, los efectos de las
hormonas inductoras de la expresin gentica se producen a largo plazo.

111
Alberto Fonte Polo

Receptores de membrana

Los receptores de membrana son protenas integrales, con una porcin extracelular a la cual
se unen las hormonas hidrosolubles. Se distinguen distintos tipos de receptores:

Receptores acoplados a protenas G: cuando la hormona se une al receptor, la

protena G, que estaba unida al receptor, estimula a una enzima de la membrana
para dar lugar a un segundo mensajero. Por ejemplo, la adrenalina y el glucagn son
hormonas que se unen a este tipo de receptores.

Receptores con actividad enzimtica: estos receptores son protenas

transmembrana, que tienen una porcin extracelular y una porcin intracelular. El
dominio externo es el receptor al que se une la hormona (ej: la insulina), mientras
que el interno tiene actividad enzimtica.
Por ejemplo, hay protenas receptoras
como las protenas tirosina-quinasa que tienen
actividad cataltica, de manera que cuando la
hormona se une al receptor se inicia la
actividad enzimtica, esto es, se dimerizan y
se autofosforilan.

Canales inicos regulados por ligando: cuando se une el ligando al receptor se

produce la apertura del canal inico, permitiendo la entrada o salida de iones. Estas
hormonas (neurotransmisores) regulan la permeabilidad de las neuronas a los iones,
y por lo tanto su excitabilidad.

Receptores acoplados a protenas G

La mayor familia de receptores de membrana est constituida por los receptores que, desde
el punto de vista estructural, poseen 7 dominios transmembrana y desde el punto de vista
funcional, estn acoplados a protenas G heterotrimricas. Esta familia de protenas se
caracteriza por la fijacin de GTP y su posterior hidrlisis a GDP durante su ciclo
funcional, a lo cual deben su nombre.

112
 Bioqumica - Tema 13

Estructura de los receptores con 7 dominios transmembrana

Estn formados por:

Un dominio extracelular, en el extremo N-terminal. En ciertos grupos de receptores
esta regin posee la funcin de reconocimiento especfico del ligando.
Un dominio transmembrana, formado por 7 segmentos transmembrana hidrfobos,
que forman 7 hlices . Estos segmentos se unen entre s mediante 6 bucles
hidrfilos, de los cuales 3 son intracelulares y otros 3 extracelulares. El tercer bucle
intracelular constituye la zona de fijacin de la protena G.
Un dominio citoplasmtico que contiene la regin C-terminal.

Extracelular
1 2 3

1 2 3
Intracelular

Esquema de un receptor con 7 dominios transmembrana. En realidad, las 7 hlices estn unidas
formando un crculo, delimitando as una especie de hendidura o cavidad dentro de la membrana.

Estructura de las protenas G

Las protenas G aseguran el acoplamiento, es decir, actan de intermediarios entre el

receptor que recibe la seal y el efector responsable de la accin.
Son protenas heterotrimricas, estn formadas por 3 subunidades proteicas
llamadas , y , que se localizan en la hemimembrana interna de la bicapa lipdica.
Existen muchos tipos de subunidades que difieren en su secuencia primaria, pero toda
subunidad se caracteriza por tener: 1) un sitio de interaccin con el receptor; 2) un sitio de
unin con GDP (guanosn difosfato) o GTP (en estado basal une preferentemente GDP); 3)
la propiedad de pasar a ser activa (es decir, de desencadenar una accin) cuando se une a
GTP, y 4) una actividad GTPasa intrnseca (GTP GDP + Pi).

Unin del ligando y activacin de las protenas G

Ciclo de activacin/desactivacin
Cuando el ligando se une al receptor, se produce un de las protenas G
cambio conformacional en el receptor. Este cambio de
conformacin permite el acoplamiento del receptor a
la subunidad de una protena G. El dominio del
receptor ms importante para el acoplamiento con la
subunidad se localiza en el tercer bucle intracelular
del receptor. El segundo bucle intracelular y el
extremo C-terminal del receptor, si bien son menos
importantes, tambin estn implicados en la unin. La
interaccin receptor-protena G reduce la afinidad de

113
Alberto Fonte Polo

la subunidad por el GDP. El GTP, abundante en las clulas, ocupa los lugares que deja
libres el GDP. La subunidad , activada as por la unin a GTP, se disocia a la vez del
receptor y de las subunidades -, y puede entonces activar (o inhibir) todo un abanico de
efectores.
Estos efectores pueden ser, segn el caso, enzimas como la adenilato ciclasa, la
fosfolipasa, etc., que provocan a su vez un aumento del nmero de molculas llamadas
segundos mensajeros, o incluso de canales inicos. As se obtiene el resultado deseado: ha
tenido lugar la transduccin de la seal. Posteriormente, la actividad GTPasa intrnseca de
la subunidad ser la responsable del retorno al estado inicial y, por tanto, pondr fin a la
accin observada.

Esquema del modo de accin de una protena G heterotrimrica. a) Despus de la estimulacin

de una protena G, desencadenada por la unin de un ligando (p. ej., una hormona) sobre su
receptor, el complejo subunidad -GDP, se convierte en subunidad -GTP, se disocia del
complejo -. b) Despus el complejo subunidad -GTP activa el efector (p. ej., la
adenilciclasa). La actividad GTPasa de la subunidad provoca el retorno al estado inicial.

Efectores hormonales

Va de la adenilato ciclasa (va del AMP cclico): el AMP cclico (adenosina-3',5'-

monofosfato, AMPc) constituye un ejemplo de segundo mensajero. Su modo de
accin se inicia por el enlace de una hormona con el receptor especfico (receptor
adrenrgico), lo cual desencadena la produccin de AMPc a partir de ATP, reaccin
catalizada por la adenilato ciclasa, enzima localizada en la membrana celular. Esta
reaccin es mediada por una protena G estimulatoria, denominada Gs. El enlace de
la hormona con el receptor produce en l un cambio conformacional, que permitir
que el receptor pueda interaccionar con la protena G. La subunidad se enlaza con
GTP y libera GDP, y posteriormente la subunidad se separa de -.
La subunidad , denominada en este caso subunidad s, interacciona con la
adenilato ciclasa, esta interaccin favorece una conformacin de la enzima
catalticamente ms activa, lo que estimula un aumento de la concentracin de
AMPc a partir de ATP.
114
 Bioqumica - Tema 13

Representacin de la reaccin
catalizada por la adenilato
ciclasa y la fosfodiesterasa

El AMP cclico estimula la fosforilacin de muchas molculas diana mediante la

activacin de la protena quinasa A. La protena quinasa A (PKA) es una enzima
citoslica que est formada por dos
cadenas reguladoras (R) y dos cadenas
catalticas (C). Cada subunidad reguladora
tiene dos sitios de unin a AMP cclico.
En ausencia de AMPc, el complejo R2C2
es catalticamente inactivo. La unin de
AMPc a las subunidades reguladoras
libera las cadenas catalticas, las cuales
tienen actividad cataltica intrnseca. La PKA activada puede entonces fosforilar
residuos especficos de serina y treonina de las protenas diana y modificar su
actividad. En muchos casos la fosforilacin de la enzima provoca su activacin,
activando as la ruta metablica en la que participa dicha enzima.

Activacin de la protena quinasa A mediante

una va de protena G. La unin de una hormona
a un receptor de 7 dominios transmembrana
inicia una va de transduccin de seales que
acta a travs de una protena G y AMPc para
activar a la protena quinasa A.

115
Alberto Fonte Polo

Por ejemplo, en el hgado, un aumento de AMPc activa a la PKA, la cual fosforila

dos enzimas que son responsables de la degradacin de glucgeno a glucosa, o en el
corazn aumenta la frecuencia cardiaca y la fuerza de contraccin. En algunas
clulas animales, un incremento en el AMP cclico activa la transcripcin de genes
especficos.

La terminacin de la seal hormonal puede ocurrir de varias formas: 1) por

disociacin de la hormona de su receptor; 2) por inactivacin de la protena Gs,
mediante hidrlisis del GTP; o 3) por degradacin del AMP cclico ya formado. El
AMPc como los dems segundos mensajeros se degrada rpidamente tras activar la
enzima. La fosfodiesterasa rompe el enlace fosfodister del AMPc y lo convierte en
AMP (no funcional). Por ejemplo, la cafena inhibe la fosfodiesterasa, que es
responsable de la desactivacin del AMPc, por lo tanto hace que se libere glucosa
durante ms tiempo.

Va de la fosfolipasa C (va de los fosfoinostidos): el Ca2+ tambin puede actuar

como segundo mensajero. La calmodulina es una protena reguladora dependiente
del calcio, tiene cuatro sitios para fijacin del calcio y la ocupacin total de estos
sitios conduce a un cambio conformacional. Se presume que este cambio de
conformacin confiere a la calmodulina la propiedad para activar o inactivar
enzimas (por ejemplo, a la protena quinasa C). La interaccin de calcio con la
calmodulina es conceptualmente anloga a la fijacin del AMPc a la protena
quinasa y la activacin subsiguiente de esta molcula.
Los niveles de calcio citoslicos pueden modificarse tanto por ingreso del
calcio extracelular como por la liberacin desde su principal depsito intracelular: el
retculo endoplsmico. La variacin de los niveles de calcio puede controlarse
directamente por ligado de la hormona al receptor (ej: neurotransmisores) y a travs
de las modificaciones en los niveles de IP3-DAG por accin de la fosfolipasa C.

Una hormona que opera a travs de este sistema se une a un receptor especfico de
la membrana celular, que interacciona con una protena G segn un mecanismo
similar al de la ruta de la protena quinasa A y transduce la seal, lo que da como
116
 Bioqumica - Tema 13

resultado la estimulacin de la fosfolipasa C. Esta enzima

cataliza la hidrlisis de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato
(PIP2) para formar dos segundos mensajeros,
diacilglicerol (DAG) e inositol 1,4,5-trifosfato (IP3).
El inositol 1,4,5-trifosfato difunde hacia el
citoplasma y se une a un receptor de IP3 en la membrana
de un depsito de calcio, que puede estar separado del retculo endoplasmtico, o
bien formar parte del mismo. Esta unin da como resultado la liberacin de iones
calcio, que contribuye a un gran incremento del calcio citoplasmtico.
Por otro lado, el IP3 se metaboliza por eliminacin progresiva de grupos
fosfato hasta formar inositol. Este se combina con cido fosfatdico (PA) para
formar fosfatidilinositol (PI) en la membrana celular. Este ltimo es fosforilado
doblemente por una quinasa para formar PIP2, que bajo estmulo hormonal ya puede
entrar en otra ronda de hidrlisis y formacin de segundos mensajeros (DAG e IP3).

Simultneamente al aumento de Ca2+ citoplasmtico inducido por el IP3, el DAG

activa la ruta de la protena quinasa C (PKC), una importante protena quinasa de
serina/treonina denominada protena quinasa C por su dependencia de calcio. El
aumento inicial del calcio citoplasmtico inducido por IP3 parece alterar de algn
modo la protena quinasa C, de modo que sta es translocada desde el citoplasma
hacia la cara citoplasmtica de la membrana plasmtica. Una vez translocada, es
activada por una combinacin de calcio, DAG y el fosfolpido negativo de la
membrana, fosfatidilserina.
Tras su activacin, la protena quinasa C fosforila protenas especficas en el
citosol o, en ocasiones, en la membrana plasmtica. Estas protenas fosforiladas
llevan a cabo funciones especficas que no pueden realizar en el estado
desfosforilado. Por ejemplo, de este modo se activan muchas enzimas o se abren
canales inicos, tambin una protena fosforilada podra migrar hasta el ncleo y
regular la expresin gnica.
117
Alberto Fonte Polo

El clera y la tosferina se deben a una actividad alterada de la protena G

El clera y la tosferina son dos patologas de las vas de sealizacin dependientes de la

protena G.

La toxina colrica producida por la bacteria Vibrio cholerae es un heterodmero, una de

cuyas subunidades es una enzima que cataliza la modificacin covalente de la protena Gs;
la subunidad se modifica por la unin de una ADP-ribosa a un residuo de arginina. Esta
modificacin estabiliza la forma unida a GTP de Gs bloqueando la molcula en la
conformacin activa. La protena G queda permanentemente activada, ello conduce a una
estimulacin excesiva de la adenilato ciclasa y a una elevacin crnica de los niveles de
AMPc. Esto produce diarreas graves, que provocan una pronunciada secrecin de
electrolitos y fluidos por va intestinal. El clera es una enfermedad potencialmente mortal.

Mientras que el clera es el resultado de la actividad de una protena G mantenida en su

conformacin activa, lo que hace que la va de transduccin de seales est
permanentemente activada, la tosferina, es el producto de una situacin opuesta. La toxina
pertsica, secretada por la bacteria Bordetella pertussis, tambin aade un grupo ADP-
ribosa a una protena G, en este caso una protena Gi (protena G inhibitoria) que inhibe a la
adenilato ciclasa, cierra los canales de Ca2+, y abre canales de K+. El efecto de esta
modificacin, sin embargo, es disminuir la afinidad de la protena G por GTP,
mantenindola en la conformacin inactiva. La tosferina se caracteriza por inflamacin
traqueobronquial y accesos tpicos de tos convulsiva.

118
Tema 14 Propiedades Fisicoqumicas y
Estructura de los cidos Nucleicos

Dogma central de la biologa molecular

Crick alumbr la idea de un sistema fundamental de mantenimiento y flujo de la
informacin gentica en los organismos vivos, que denomin: Dogma Central de la
Biologa Molecular. De manera que la informacin gentica contenida en el ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin. La informacin contenida en el ADN se
expresa dando lugar a protenas, mediante los procesos de transcripcin, paso por el que la
informacin se transfiere a una molcula de ARNm, y mediante el proceso de la traduccin
el mensaje transportado por el ARNm se traduce a protena:

Composicin general de los cidos nucleicos

En 1869 Miescher, un bilogo suizo, aisl por primera vez ADN de las clulas del pus.
Extrajo pus, lo trat con suero salino, e identific los elementos que lo componan.
Encontr que estaba compuesto por C, H, O y N como las protenas, pero adems tena un
alto contenido en P. Intent hidrolizar esta molcula desconocida con pepsina, que rompe
los enlaces peptdicos, pero no se hidroliz. A esta nueva molcula la denomin nuclena.

En 1889 R. Altmann descubri el carcter cido de dicha molcula, y la denomim cido

nucleico.

Estructuralmente, un cido nucleico es un polmero de nucletidos. Los nucletidos, tanto

los libres como aquellos que forman parte del ADN o del ARN, estn compuestos por:
Una molcula de cido fosfrico en forma de grupo fosfato (PO43-).
Un monosacrido del tipo pentosa.
Una base nitrogenada.

119
Alberto Fonte Polo

Estructura de la pentosa

Hay dos tipos de pentosa: ribosa y desoxirribosa, presentes en el ARN y en el ADN

respectivamente. Por lo que las unidades monmeras del ARN se llaman ribonucletidos y
las del ADN, desoxirribonucletidos.

Tanto la ribosa como la desoxirribosa adoptan la forma de anillo de furanosa de cinco

vrtices.

Ribosa (Dribofuranosa) Desoxirribosa (D2desoxirribofuranosa)

El grupo hidroxilo (OH) del C1 est en posicin (hacia arriba), esta posicin es ms
estable que la posicin .

Debido a que el ADN est formado por desoxirribosa es ms resistente a la hidrlisis

qumica que el ARN, ya que la desoxirribosa carece de un grupo OH (compuesto alcalino).

Tipos de bases nitrogenadas

Bases pricas: son la adenina y la guanina, presentes en el ADN y en el ARN.

Derivan de un anillo de purina, que es un compuesto heterocclico formado por
pirimidina e imidazol.

Purina Adenina (A) Guanina (G)

(6aminopurina) (2amino6oxopurina)

Estas bases pueden existir de dos formas diferentes, presentan tautomera:

Tautomera
aminoimino
A (amino) A* (imino)

Tautomera
cetoenlica
G (ceto) G* (enol)

120
 Bioqumica - Tema 14

Esta tautomera se debe al desplazamiento de los electrones. Las bases tautomricas

no se aparean con la misma base que las bases normales, por lo que si en el
momento de la replicacin se producen apareamientos errneos, pueden surgir
mutaciones puntuales.

Bases pirimidnicas: en el ADN las bases pirimidnicas son citosina (2oxo4

aminopirimidina) y timina (2,4dioxo5metilpirimidina), mientras que en el
ARN son citosina y uracilo (2,4dioxopirimidina), aunque en el ARNt puede
haber timina. Derivan de un anillo de pirimidina.

Pirimidina Uracilo (U) Timina (T) Citosina (C)

La citosina puede presentar tautomera aminoimino y tautomera cetoenlica,

pero el uracilo y la timina solo presentan tautomera cetoenlica.

Propiedades fisicoqumicas de las bases nitrogenadas

Carcter ligeramente bsico.
En su forma libre presentan una escasa solubilidad en agua. Esta escasa solubilidad
determina la conformacin del ADN.
Absorben intensamente luz ultravioleta (mxima absorbancia: = 260 nm), al ser
compuestos aromticos, y tener los electrones deslocalizados.

El cido fosfrico es un cido muy fuerte, a un pH = 7 se encuentra ionizado:

Nuclesido = base nitrogenada + azcar

La molcula de pentosa junto a la base nitrogenada forma el nuclesido. Existen dos tipos
de nuclesidos: los ribonuclesidos, que contienen ribosa como componente glucdico, y
los desoxirribonuclesidos, que contienen desoxirribosa.

En la formacin del nuclesido se establece un enlace Nglucosdico entre el C1 del

azcar y el N9 de las bases pricas, o el N1 de las bases pirimidnicas. Se libera una
molcula de agua por cada enlace.

ste enlace no es un enlace rgido, tiene libertad de giro, puede girar 180 y pasar de una
configuracin sin a una configuracin anti. La configuracin anti es la forma ms
estable y la ms comn en los cidos nucleicos, ya que presenta menos impedimentos.

121
Alberto Fonte Polo

sinadenosina antiadenosina

Nomenclatura de nuclesidos:
Base Ribonuclesido Desoxirribonuclesido
A adenosina desoxiadenosina
G guanosina desoxiguanosina
C citidina desoxicitidina
U uridina
T desoxitimidina

Nucletido = nuclesido + cido fosfrico

El nuclesido se une al grupo fosfato mediante un enlace fosfoster (enlace covalente) para
formar el nucletido (nuclesido5monofosfato).

Nomenclatura de nucletidos:
Base Ribonucletido Desoxirribonucletido
adenosina5'monofosfato desoxiadenosina5'monofosfato
A (AMP o adenilato) (dAMP o desoxiadenilato)
guanosina5'monofosfato desoxiguanosina5'monofosfato
G (GMP o guanilato) (dGMP o desoxiguanilato)
citidina5'monofosfato desoxicitidina5'monofosfato
C (CMP o citidilato) (dCMP o desoxicitidilato)
uridina5'monofosfato
U (UMP o uridilato)
desoxitimidina5'monofosfato
T (dTMP o desoxitimidilato)

Nuclesido Nucletido
(configuracin sin) (configuracin sin)

122
 Bioqumica - Tema 14

Propiedades fisicoqumicas de los nucletidos

Son cidos.
Tienen mayor solubilidad en agua que las bases nitrogenadas, debido al azcar y al
fosfato.
Absorben intensamente luz ultravioleta gracias a la base nitrogenada.

Unin de nucletidos

Los nucletidos pueden unirse para formar oligonucletidos, si es un nmero reducido, o

polinucletidos, si es un nmero elevado, como en el caso del ADN y del ARN.

Los nucletidos se unen entre s mediante un enlace 3,5fosfodister entre el grupo OH

del carbono 3 del nucletido primero y el grupo fosfato unido al carbono 5 del nucletido
siguiente.

Todas las cadenas de nucletidos tienen polaridad, dado que el extremo 3 es un hidroxilo
y el extremo 5 es un grupo fosfato.

extremo 5 dinucletido
(grupo fosfato libre)

extremo 3
(grupo OH libre)

Las enzimas polimerasas catalizan la unin de nucletidos, hay ADN polimerasas y ARN
polimerasas. Los sustratos de estas enzimas son nucletidos trifosfato, es decir, con 3
fosfatos (, y ) en el extremo 5. La ruptura del enlace entre el fosfato y el fosfato
proporciona la energa necesaria para la reaccin de polimerizacin.

La secuencia de nucletidos se escribe en sentido 5 3 por convenio. Hay varios tipos de

representaciones compactas:

pApGpCpT AGCT

123
Alberto Fonte Polo

Niveles estructurales del ADN

Estructura primaria del ADN

Es la secuencia de desoxirribonucletidos del ADN. Aqu se encuentra almacenada la

informacin gentica. En definitiva, la estructura primaria del ADN determina la estructura
primaria de las protenas.

Estructura secundaria del ADN

Watson y Crick, en 1953, propusieron un modelo para explicar la estructura del ADN, para
ello se basaron en los datos obtenidos por Chargaff, y por Wilkins y Franklin.

Chargaff (1950) aisl ADN de diferentes especies y de distintos tejidos, y observ que la
cantidad de bases pricas era similar a la cantidad de bases pirimidnicas. Adems, observ
que [A] [T], y que [G] [C].

Wilkins y Franklin usaron la difraccin de rayos X con ADN puro cristalizado de distintos
organismos. Esta tcnica consiste en emitir un haz de rayos X sobre la fibra de ADN, lo que
provoca la difraccin de los rayos, que quedan impresionados en una pelcula de rayos X.
As puede verse si hay periodicidad de bases y determinar distancias entre tomos. El
patrn de difraccin que obtuvieron era el caracterstico de una estructura helicoidal.

El modelo de Watson y Crick:

El ADN se compone de dos cadenas polinucleotdicas enrolladas en torno a un eje

central, formando una doble hlice dextrgira.

Ambas cadenas tienen polaridad opuesta, es decir, son antiparalelas, el extremo 5

de una est enfrentado al extremo 3 de la otra.

El esqueleto de la molcula est formado por grupos alternantes azcarfosfato. Las

bases nitrogenadas estn hacia el centro de la molcula de manera perpendicular al
eje principal. En medio acuoso, una molcula es ms estable si los grupos apolares
se disponen en el interior y las zonas polares en el exterior, por ello, las cargas
negativas del fosfato interactan con los cationes de las bases, aportando estabilidad
a la molcula.

La molcula de ADN tiene un dimetro de 20 .

124
 Bioqumica - Tema 14

Las dos cadenas se mantienen unidas por puentes de hidrgeno entre las bases
nitrogenadas. No pueden aparear dos bases pricas entre s, debido a que son muy
voluminosas, tampoco pueden unirse dos bases pirimidnicas entre s, ya que a pesar
de entrar en el dimetro de 20 , quedan muy separadas como para establecer
puentes de hidrgeno. Por ello, las uniones se establecen entre una base prica y una
pirimidnica. Citosina y guanina se unen por medio de tres puentes de hidrgeno
(GC), y adenina y timina por medio de dos (A=T).

La hlice da un giro completo cada 34 . La distancia entre bases es de 3,4 , por lo

tanto hay 10 pb/vuelta.

La hlice tiene dos surcos, uno mayor y otro menor. Estos surcos se repiten a lo
largo de la cadena.

Existe complementariedad de bases entre las dos cadenas, es decir, sabiendo una de
las cadenas del ADN, la otra queda determinada de forma automtica, segn las
reglas de apareamiento de las bases (A con T, y G con C).

Formas alternativas del ADN

El modelo de Watson y Crick explica la forma B del ADN, es el que se encuentra

comnmente en las clulas. Sin embargo, el ADN puede adoptar otras dos conformaciones,
la forma A y la forma Z.

El ADNA aparece cuando se deshidrata artificialmente el ADN. La forma A es muy

estable en condiciones de baja humedad relativa. Si se reduce la humedad por debajo del
75%, el ADNB pasa a ser ADNA. Esta forma A se ha visto tambin en el ARN duplexo
(cuando el ARN monocatenario tiene una secuencia que es complementaria con otra
posterior formando una horquilla), y en los heterodplex de ADNARN.
El dimetro de la hlice de ADNA es de 25 , el paso de hlice es de 25,3 . Hay
11 pares de bases por vuelta de hlice. En el ADNA, las bases estn inclinadas 19
respecto al eje central y los surcos son iguales y poco profundos.

125
Alberto Fonte Polo

El ADNZ est localizado en regiones reguladoras de algunos genes en eucariotas, de

hecho, parece estar relacionado con la regulacin de la expresin gnica. In vitro, se obtiene
en altas concentraciones salinas, concretamente en polmeros donde se alternan bases
pricas y pirimidnicas.
El ADNZ es una doble hlice con giro levgiro, con un dimetro de 18 . El paso
de hlice es de 45 , y tiene 12 pares de bases por vuelta. En la forma Z las bases estn un
poco inclinadas (9).

19

giro dextrgiro giro levgiro

ADNA ADNB ADNZ

Estructura terciaria del ADN

La estructura terciaria del ADN no est determinada por la estructura primaria, es decir, por
la secuencia de nucletidos del ADN. Se forma cuando la molcula de ADN se pliega sobre
s misma. El ADN puede aparecer como molcula circular o lineal:
ADN circular:
o en mitocondrias y cloroplastos
o en bacterias: cromosoma bacteriano y plsmidos
ADN lineal:
o en virus
o en cromosomas eucariotas (cromatina)

El ADN circular puede enrollarse, aumentando el enrollamiento de una de las cadenas

sobre la otra, obtenindose una estructura compacta.

Forma Forma Superhlice

Relajada Enrollada (estabilizada por
cromosoma topoisomerasas)
bacteriano

126
 Bioqumica - Tema 14

En eucariotas el ADN lineal forma la cromatina, es

un mecanismo para regular la transcripcin de los
genes. A pH=7, el ADN se comporta como un
polianin, esto le permite interaccionar con
protenas cargadas positivamente, las histonas. Son
protenas de bajo peso molecular y de carcter muy
bsico, cuya estructura se ha conservado a lo largo
de la evolucin. Hay varios tipos: H1, H2A, H2B,
H3 y H4. La interaccin electrosttica entre las
histonas y los grupos fosfato del ADN estabiliza la
molcula de ADN, facilitando el empaquetamiento
del ADN. La compactacin sucede de la siguiente
forma: el ADN se enrolla sobre un octmero de
histonas (compuesto por dos histonas H2A, dos
H2B, dos H3 y dos H4), de forma que da casi dos
vueltas alrededor de ste, adems el ADN se asocia
a la histona H1, de esta manera se forma un
nucleosoma (unidad estructural de la cromatina).
Cada nucleosoma est separado del siguiente por un
ADN espaciador o de conexin, que carece de
histonas, ste ADN aporta elasticidad a la
cromatina. De este modo se origina la fibra de 10
nm, esta forma es transcripcionalmente activa, y
tiene un grado de empaquetamiento = 6 respecto al
ADN sin empaquetar.

Posteriormente, la fibra de 10 nm se enrolla sobre s misma formando un solenoide, con 6

nucleosomas por vuelta y con las histonas H1 en el eje del solenoide. Esta es la fibra de 30
nm, ste ADN tiene un grado de empaquetamiento = 40, no es transcripcionalmente activo.
A partir de ste nivel intervienen protenas no histonas que forman un armazn
proteico, al cual se asocia la fibra de 30 nm, alcanzando un grosor de 300 nm. Esta fibra se
vuelve a enrollar para dar lugar a una fibra de 700 nm, que formar el cromosoma
metafsico. Se consigue un grado de empaquetamiento = 10000.

Propiedades fisicoqumicas del ADN (y del ARN)

Propiedades qumicas en disolucin

El ADN es una molcula hidroflica. La desoxirribosa establece puentes de

hidrgeno con el agua, es por eso por lo que el ADN es soluble en agua. En cambio,
127
Alberto Fonte Polo

el ADN es completamente insoluble en etanol absoluto (etanol 100 %), ya que el

etanol reduce la polaridad del medio, provocando la precipitacin del ADN en
forma de fibras blanquecinas.

Es una molcula cida. Muy estable en disoluciones salinas diluidas, ya que las
cargas de la disolucin salina se neutralizan con las del ADN.

Propiedades fsicas

El ADN absorbe luz ultravioleta, tiene un espectro de absorcin similar al de las

bases nitrogenadas. El ADN desnaturalizado tiene un grado de absorbancia mayor,
ya que las bases quedan ms expuestas a la luz ultravioleta, es lo que se conoce
como efecto hipercrmico. ste efecto permite conocer el grado de
desnaturalizacin del ADN.

Ley de LambertBeer: A260 c l

: coeficiente de extincin molar
c: concentracin de la disolucin
l: longitud de paso de la luz

Para determinar la pureza de una solucin (es decir, para saber la cantidad de
protenas que tiene) se realizan dos mediciones: una a =260 nm, la longitud de
onda a la que tienen mayor absorbancia los cidos nucleicos, y otra a =280 nm, que
es la longitud de onda a la aparece una mayor absorbancia en las protenas.
A
En el ADN : 260 1,6 1,8
A280

Reactividad

Las molculas de ADN son resistentes a hidrlisis bsica, pero son susceptibles a la
hidrlisis cida. En hidrlisis cida con cido fuerte (HCl 1M) se hidrolizan todos
los enlaces fosfodister y todos los enlaces Nglucosdicos, y se liberan todas las
bases nitrogenadas. En hidrlisis con cido dbil se mantienen los enlaces
fosfodister y se hidrolizan los enlaces Nglucosdicos de las bases pricas, de
modo que el ADN se convierte en un cido apurnico. Esto permite conocer la
composicin de bases del ADN, y su nmero. Por el contrario, las molculas de
ARN no son resistentes a hidrlisis en medio bsico.

Las soluciones de ADN duplexo son muy viscosas. Sin embargo, el ARN y el ADN
simplexo no originan soluciones viscosas, sino que forman estructuras globulares,
debido a apareamientos intracatenarios.

ARN: tipos y funciones

La funcin biolgica del ARN es la expresin gentica por medio de la sntesis de
protenas, y ser el material hereditario de algunos virus. Hay muchos tipos de ARN, los tres
tipos principales son: ARNm, ARNt y ARNr, otros ARN de importancia son: ARNsn
(nuclear pequeo) y ARNhn (nuclear heterogneo).
128
 Bioqumica - Tema 14

ARN mensajero

El ARNm transporta la informacin gentica desde el ADN hasta el ribosoma, para que sea
traducido a protena. Hay diferencias entre el ARNm de procariotas y de eucariotas:
En procariotas el ARNm es policistrnico, es decir, contiene informacin para ms
de una protena. Adems, el ARNm sintetizado no necesita pasar ningn proceso de
maduracin.
En eucariotas el ARNm es monocistrnico, slo contiene informacin para una
protena. En ste caso el ADN se transcribe a ARNhn (transcrito primario) que debe
pasar una etapa de maduracin para originar un ARNm funcional. En la etapa de
maduracin intervienen los ARNsn, los llamados nucleares pequeos.

ARN de transferencia

Los ARNt presentan, adems de los cuatro nucletidos bsicos, otros nucletidos poco
frecuentes (suelen ser formas metiladas de las normales, representan el 10 % del total). La
funcin del ARNt es unirse a un determinado aminocido y transportarlo al ribosoma para
que se pueda incorporar a la cadena peptdica. El aminoacilARNt es el ARNt activado.
Son molculas estables, que tienen una vida media de varios das.
El ARNt acta de traductor, permite descifrar el lenguaje de los genes. Como
mnimo se necesitan 32 ARNt para leer cualquier mensaje.

ARN ribosmico

El ARNr tiene un papel estructural: se asocia con protenas para formar las subunidades de
los ribosomas. Hay varios tipos de ARN ribosomal en funcin de su coeficiente de
sedimentacin.
En procariotas:
o 23 S: tiene actividad enzimtica (ribozima), cataliza la formacin de los enlaces
peptdicos durante la traduccin. Tiene actividad peptidiltransferasa o
transpeptidasa.
o 16 S: fija el ARNm a la subunidad menor del ribosoma.
o 5 S.
En eucariotas:
o 28 S
o 18 S
o 5,8 S
o 5S

129
Alberto Fonte Polo

Niveles estructurales del ARN

Estructura primaria del ARN

Es el orden de los ribonucletidos en la cadena. Determina directamente la estructura

primaria de la protena.

Estructura secundaria del ARN

Los ARN son molculas monocatenarias pero mediante apareamientos intracatenarios, los
ARNt y los ARNr, dan lugar a estructuras secundarias locales. Tipos:

Horquillas: adoptan la forma de doble hlice. Se producen por apareamientos de

bases complementarias entre secuencias prximas.

horquilla

Las horquillas giran en sentido dextrgiro, adquiriendo forma de hlice, con las
caractersticas del ADNA. Son estructuras estables gracias a los puentes de
hidrgeno y a las interacciones hidrofbicas por apareamiento de bases.

Bucles / lazos / asas: se forman cuando hay bases no complementarias entre

secuencias de bases complementarias.

bucle a nivel interno

(asa)
bucle

Gracias a la formacin de estas estructuras el ARN se hace tan estable como el ADN. Hay
protenas que evitan estos apareamientos durante la traduccin.

Estructura terciaria del ARN

Si el ARN se sigue plegando aparecen estructuras terciarias. Estas estructuras slo se han
estudiado en los ARNt, ya que son las nicas molculas que se han podido cristalizar y
analizar con rayos X.

130
 Bioqumica - Tema 14

Estructura de los ARN de transferencia

La estructura secundaria de los ARNt tiene una forma tpica de trbol de 3 o de 4 hojas.
En el extremo 3 siempre estn presentes los nucletidos ACC, ste es el lugar
donde se une el aminocido. Las aminoacilARNt sintetasas reconocen la secuencia ACC.
Cuando madura el ARNt se pueden perder los 3 nucletidos, pero hay enzimas que lo
reparan. Dicha zona se denomina tallo aceptor o brazo aceptor.

El primer bucle es el bucle TC, siempre aparecen las siguientes bases: timina (T),
pseudouridina (), y citosina (C). El segundo es el bucle variable, muy variable en longitud
y en composicin. El tercer bucle es el bucle del anticodn, aqu se encuentra el anticodn
(3 nucletidos) que es complementario al codn (triplete de nucletidos) del ARNm. Esto
es necesario para la incorporacin de los aminocidos a la cadena naciente. El cuarto bucle
es el bucle D, en el que hay una dihidrouridina (D). ste bucle juega un papel importante
en el reconocimiento del ribosoma. En el extremo 5 hay, en la mayora de los casos, una
guanosina terminal.

Pseudouridina ()

Dihidrouridina (D)

El ARNt tiene una estructura terciaria en forma L

compacta e invertida, y se produce por plegamiento
de la estructura secundaria. Se pliega el tallo
aceptor, se juntan los bucles TC y D, y abajo
queda el extremo con el anticodn. sta es la forma
activa, que es reconocida por las enzimas y los
ribosomas determinados.

131
Tema 15 Replicacin del ADN

Caracteres generales
La replicacin es el proceso por el cual se obtienen dos molculas duplexas hijas de ADN
a partir de una molcula duplexa de ADN parental, con la misma secuencia de bases. Cada
una de las nuevas molculas se segrega a una clula hija.

Modelos de replicacin

En un principio, se plantearon tres hiptesis alternativas que explicaban el proceso de la

replicacin:
Replicacin conservadora: de una molcula parental surgen dos molculas hijas.
Una de estas molculas hijas es igual a la parental en las dos cadenas y la otra
molcula hija es de nueva sntesis.
Replicacin dispersante: las dos molculas hijas resultantes de la replicacin
tienen parte vieja y parte nueva mezcladas en las cadenas.
Replicacin semiconservadora: las molculas hijas tienen una cadena de la
molcula de ADN parental y otra de nueva sntesis (propuesto por Watson y Crick).

Modelo
semiconservativo

Modelo conservativo

Modelo dispersivo

Experimento de Meselson y Stahl

La hiptesis cierta es la del modelo semiconservativo, fue demostrada por Meselson y Stahl
en 1958.
El material biolgico de este experimento fue la bacteria E. coli y la metodologa
fue la centrifugacin en gradiente de densidad en cloruro de cesio (con este mtodo, las
molculas se detienen en la regin del gradiente donde hay una densidad igual a la suya) y
el uso del istopo pesado 15N (que no es radiactivo). Se basaban en que, si se centrifugaba
una mezcla de tres ADN (ADN14, ADN15 y ADN1415), en el tubo de centrfuga aparecan
tres bandas, donde el ADN14 es el ms ligero, el ADN14-15 es una banda intermedia y el
ADN15 es el ms pesado.
132
 Bioqumica - Tema 15

Meselson y Stahl cultivaron E. coli en un medio con cloruro amnico con 15N (15NH4Cl).
Al centrifugar en gradiente de densidad con CsCl, obtenan una nica banda de ADN15.

Pasaron bacterias a otro medio con 14N, esperaron una ronda de replicacin, y al
centrifugar, obtuvieron una banda de densidad intermedia de ADN hbrido (ADN1415).
Esperaron a que se formara una segunda generacin de bacterias en el medio de cultivo con
14
N, las centrifugaron en cloruro de cesio y vieron en el tubo de centrifuga dos bandas de
ADN del mismo grosor, hay un 50% de ADN14 y un 50% de ADN hbrido.

Dejaron que apareciera una tercera generacin cultivada en un medio con 14N, y tras
centrifugarlas en gradiente de densidad de cloruro de cesio vieron dos bandas de ADN
desiguales, haba un 75% de ADN14 y un 25% de ADN hbrido.

133
Alberto Fonte Polo

Origen de replicacin

El replicn, o unidad de replicacin, es la cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir

de un nico origen de replicacin. El genoma bacteriano es un nico replicn circular.

En el cromosoma bacteriano, al ser circular, la replicacin avanza formando una burbuja de

replicacin denominada estructura (debido a la similitud con la letra griega theta).

Estructura

En organismos eucariotas, la replicacin del ADN se inicia en mltiples orgenes a la vez,

es decir, hay varios replicones, si no la replicacin sera muy lenta. Se crean varias
burbujas de replicacin, as ocurre la replicacin a una velocidad adecuada.

Burbuja de
replicacin

Horquilla de
replicacin

Las secuencias del origen de replicacin son ricas en nucletidos de adenina y timina, que
son ms fciles de separar al formar slo dos enlaces de hidrgeno. Tambin hay secuencias
de reconocimiento para protenas iniciadoras que contribuirn a desnaturalizar el ADN.

Replicacin bidireccional

Cada replicn origina dos horquillas de replicacin, que son el lugar donde realmente se
replica el ADN.

La replicacin es bidireccional en la mayora de los casos, es decir, a partir de un punto se

sintetizan las dos cadenas en ambas direcciones. Esto ocurre en la mayora de los
organismos, pero se dan excepciones, en el ADN mitocondrial, en el ADN de los
cloroplastos, y en algunos genomas bacterianos la replicacin se da unidireccionalmente.

134
 Bioqumica - Tema 15

Replicacin semidiscontnua

La replicacin siempre se da en sentido 53, siendo el extremo 3 OH libre, el punto a

partir del cual se produce la elongacin del ADN. Esto plantea un problema, y es que las
cadenas tienen que crecer simultneamente a pesar de que son antiparalelas, es decir, que
cada cadena tiene el extremo 5 enfrentado con el extremo 3 de la otra cadena. Por ello,
una de las cadenas debera ser sintetizada en direccin 35.

La hebra lder o hebra conductora es la hebra que se sintetiza en el mismo sentido que la
horquilla, es decir, de forma continua. La otra hebra es la hebra retardada o hebra
rezagada, que se sintetiza por medio de cortos fragmentos de ADN, denominados
fragmentos de Okazaki (100200 nucletidos). Posteriormente estos fragmentos se irn
uniendo mediante la accin de la ADN ligasa.

Aunque la replicacin sea semidiscontinua, ocurre de forma simultnea en las dos cadenas.

135
Alberto Fonte Polo

Reaccin de polimerizacin del ADN

Requerimientos para la sntesis de ADN:
Molde de ADN.
Desoxirribonucletidos trifosfato: dATP, dGTP, dCTP y dTTP.
ADN polimerasa.
Mg2+ (cofactor de la ADN polimerasa).
Cebador o primer: secuencia corta de ribonucletidos (oligorribonucletido) que
aporta el OH libre del extremo 3 para formar el enlace fosfodister.

El grupo OH realiza un ataque nucleoflico rompiendo el enlace entre el primer y el

segundo grupo fosfato del desoxirribonucletido. Como consecuencia se forma el enlace
fosfodister. Para que la reaccin sea irreversible el pirofosfato inorgnico se transforma en
dos molculas de Pi, para ello interviene la pirofosfatasa. Tras varias reacciones de
polimerizacin se forma una molcula de ADN.

ADN polimerasas

Tipos

La sntesis de la nueva cadena de ADN es llevada a cabo por las ADN polimerasas, de las
cuales existen varios tipos. En E. coli se han aislado 5 ADN polimerasas diferentes:

ADN polimerasa I: es la primera que se descubri, fue aislada por Kornberg en

1955. Es una enzima con una baja procesividad (nmero total de nucletidos que la
enzima es capaz de incorporar sin liberarse de la cadena molde). Su procesividad es
de 1050 nucletidos, es una sntesis lenta. La ADN polimerasa I elimina los
cebadores de ARN, reemplazndolos por ADN. Adems, repara el ADN daado.
ADN polimerasa II: repara tambin el ADN daado, y se cree que podra sustituir
a la ADN polimerasa I si estuviera daada.
ADN polimerasa III: es la enzima que lleva a cabo la mayor parte de la
replicacin. Es de elevada procesividad, su velocidad de sntesis de ADN es rpida
(1000 nucletidos/segundo).
ADN polimerasa IV y ADN polimerasa V: participan tambin en reparacin,
intervienen en la respuesta SOS.
136
 Bioqumica - Tema 15

Actividades catalticas

Las ADN polimerasas I, II y III tienen actividad polimersica 53, para llevar a cabo la
reaccin de polimerizacin. Tambin tienen actividad exonucleasa 3 (actividad correctora
de pruebas), as pueden liberar los nucletidos del extremo 3 de la cadena, y de este modo
pueden corregir sus propios errores. La ADN polimerasa I adems tiene actividad
exonucleasa 5, provoca la liberacin del nucletido del extremo 5. La ADN polimerasa I
es la nica que tiene tres actividades enzimticas.

Gracias a la actividad correctora de pruebas (actividad exonucleasa 35) las ADN

polimerasas cometen un error cada 107 nucletidos incorporados, cuando la tasa normal de
error es de 104.

Estructura

La estructura de las ADN polimerasas se asemeja a una mano parcialmente cerrada, con
tres dominios:
Dominio de la palma.
Dominio de los dedos.
Dominio del pulgar.

137
Alberto Fonte Polo

La actividad enzimtica de la ADN polimerasa se encuentra en el dominio de la palma.

La ADN polimerasa I es la ms sencilla, es una sola subunidad o cadena polipeptdica. En
cambio, la ADN polimerasa III est formada por 10 subunidades diferentes, 3 de ellas se
asocian entre s para formar el ncleo cataltico de la enzima.

El ncleo por s solo podra catalizar la sntesis de ADN, pero se asociar a dos
subunidades , que forman la pinza deslizante o abrazadera. Esta pinza rodea a la hebra de
ADN, elevando la procesividad de la ADN polimerasa III, explicando la alta velocidad de
sntesis.

Etapas de la replicacin y protenas auxiliares

Iniciacin

En la etapa de iniciacin no hay sntesis de ADN. La replicacin se origina en el origen de

replicacin, que en E. coli es nico y se denomina oriC. Este origen de replicacin se
caracteriza por tener secuencias ricas en adenina y timina, y cuatro sitios (R1, R2, R3 y R4)
de unin para la protena Dna A.

138
 Bioqumica - Tema 15

La clula bacteriana tiene 3 protenas iniciadoras: Dna A, Dna B (helicasa) y Dna C:

La protena Dna A reconoce el origen de replicacin (OriC), y se une a l, haciendo que se

separen las cadenas. El proceso es el siguiente: se asocian 20 molculas de Dna A, que se
unen en las 4 secuencias R, esta unin requiere ATP. Con esta reaccin se pliega el ADN, y
se abre una pequea regin (la regin rica en A y T), para ello se deben romper los puentes
de hidrgeno. Es decir, se forma una pequea burbuja.
Posteriormente, la protena Dna B (o helicasa) se une en el origen de replicacin, y
separa las dos hebras de ADN, formndose una burbuja y dos horquillas de replicacin.
La protena Dna C es la encargada de transportar a la Dna B hasta el origen de
replicacin. Para ello forma un complejo DnaBDnaC, y al llegar al origen se disocia, para
disociarse se hidroliza una molcula de ATP.

Modelo de iniciacin de la
replicacin de ADN en E. coli

Por tanto, la Dna B no es slo una protena iniciadora, sino que interviene tambin durante
toda la sntesis del ADN. Solamente la Dna A y la Dna C son exclusivamente protenas
iniciadoras.

Cuando la helicasa separa las cadenas de ADN, se origina una regin de ADN simplexo,
para proteger este ADN se unen las protenas SSB. Las protenas SSB cumplen dos
funciones: proteger a las cadenas de ADN monocatenario de la degradacin, y evitar que se
unan de nuevo.

139
Alberto Fonte Polo

Adems, cuando la protena Dna B separa las cadenas se genera una enorme tensin de
torsin a ambos lados de la burbuja de replicacin. La topoisomerasa II (que en E. coli es
la Dna girasa) relaja la cadena, puesto que corta las dos cadenas, alivia la tensin y vuelve
a sellar los cortes.

La ADN polimerasa III solamente sabe sintetizar ADN en la direccin 53, aadiendo
nucletidos al extremo 3 OH de otro nucletido. Para que se pueda iniciar la sntesis de
ADN se necesita un extremo 3 OH al que ir aadiendo nucletidos, y ese extremo lo
suministra un ARN de pequeo tamao que se denomina ARN cebador o primer. Dicho
cebador lo sintetiza una enzima denominada primasa.

Elongacin

En la elongacin ocurren dos procesos diferentes, pero a la vez relacionados:

Sntesis de la hebra lder y de la hebra rezagada. Enzimas que intervienen:

o ADN polimerasa III
o Helicasa
o Protenas SSB
o Dna girasa
o Primasa (en la hebra rezagada)

Procesamiento de los fragmentos de Okazaki. Enzimas que intervienen:

o ADN polimerasa I
o ADN ligasa

La sntesis de ADN comienza cuando la primasa sintetiza el cebador. La primasa es una

ARN polimerasa que utiliza como molde ADN. Todos los fragmentos de Okazaki
comienzan por un cebador. Posteriormente, la ADN polimerasa III lleva a cabo la sntesis
del fragmento de ADN correspondiente hasta llegar al siguiente cebador.
140
 Bioqumica - Tema 15

La sntesis es sincronizada, aunque la hebra

lder sea de sntesis continua y la hebra
rezagada sea de sntesis discontinua. La ADN
polimerasa III es dimrica, tiene dos ncleos
catalticos que avanzan en la misma direccin
produciendo una sntesis simultnea. La hebra
rezagada se enrolla alrededor de la enzima,
formando un bucle. Esto hace que el
fragmento de Okazaki se sintetice en sentido
53. Cuando la helicasa deje expuesta una
nueva regin de cadena sencilla se volver a
formar un bucle. De este modo la sntesis es
sincronizada.

La ADN polimerasa I se encarga de retirar el

ARN cebador mediante su actividad
exonucleasa 53, y al mismo tiempo rellena
el hueco sintetizando ADN por medio de su
actividad polimersica 53. Por ltimo, los
fragmentos de Okazaki tienen que unirse, es
necesario enlazar el extremo 3 OH de un
fragmento con el 5 fosfato del siguiente
fragmento. Dicha labor de sellado y unin de
los sucesivos fragmentos la realiza la ligasa.

De una forma ms detallada, el procesamiento

de los fragmentos de Okazaki ocurre en tres
pasos:
eliminacin de un ribonucletido,
sustitucin del ribonucletido por un
desoxirribonucletido,
unin covalente de los fragmentos de
Okazaki.

La ADN polimerasa I realiza los 2 primeros

pasos, mediante la traslacin de mella.

Mella: espacio
donde falta un
enlace covalente.
Hueco: espacio
donde falta uno o
varios nucletidos.

141
Alberto Fonte Polo

La ADN polimerasa I cataliza la hidrlisis del extremo 5 del fragmento de Okazaki 1.

Entra una molcula de agua, hay hidrlisis, y se produce la liberacin de un ribonucletido
(NMP). La actividad polimerasa permite que se rellene el hueco que queda. El sustrato de
esta reaccin es un desoxinucletido trifosfato (dNTP). El extremo 3 del fragmento de
Okazaki 2 se emplea para hacer un ataque nuclefilo, y se forma un enlace fosfodister. El
fragmento 2 se alarga, ocupando el hueco en el que estaba el ribonucletido. La mella sigue
existiendo, pero se ha desplazado.
Este proceso se repite varias veces, tantas como ribonucletidos estn presentes en
el cebador.

En ltimo lugar, la ADN ligasa une covalentemente el extremo 3 del fragmento 2 con el 5
del fragmento 1. Para ello se requiere un cofactor: NAD+ (en procariotas) o ATP (en
eucariotas). La formacin del enlace fosfodister implica un ataque nuclefilo, y para que el
ataque tenga lugar, la ligasa activa el extremo 5 fosfato. La enzima cataliza el transporte de
AMP al extremo 5, entonces el OH del extremo 3 ataca al fosfato del extremo 5, y se
forma el enlace fosfodister.

Terminacin

Las dos horquillas de replicacin avanzan en sentidos opuestos y con una misma velocidad,
hasta encontrarse en un punto diametralmente opuesto a oriC (de donde partieron). Existen
adems sitios especficos de terminacin, las secuencias Ter (secuencias consenso), que
garantizan que ambas horquillas se encuentren si ocurre algn retraso de una con respecto a
la otra. Estas secuencias son reconocidas por la protena Tus. La unin de la protena Tus a
la secuencia Ter frena a la horquilla de replicacin, mediante una actividad antihelicasa
(inhibe a la protena Dna B), de este modo no se desenrollarn las dos cadenas de ADN.

A veces una horquilla puede ir ms lenta que la otra. La horquilla ms rpida ser detenida
por la protena Tus, la otra se detendr espontneamente al encontrarse con la horquilla
detenida. La horquilla ms rpida debe detenerse para que no ocurra la sobrerreplicacin
del ADN.

Al terminar la replicacin se tienen dos productos: dos

molculas de ADN. Pero stas permanecen unidas. Una
topoisomerasa II corta las dos cadenas de uno de los
cromosomas, para permitir la separacin de ambas molculas de ADN.
142
Tema 16 Transcripcin

Concepto
La transcripcin es el proceso encargado de la sntesis de una molcula de ARN a partir de
la informacin codificante del ADN (los genes). Esta copia est catalizada por la ARN
polimerasa.

Un gen es una regin del ADN que codifica para una protena. sta es la definicin clsica,
pero no es totalmente correcta, ya que el producto final del gen no es siempre una protena,
puede dar lugar a ARNt o ARNr. Adems, un gen no slo tiene regiones codificantes,
tambin tiene regiones no codificantes. Por lo tanto, la definicin ms correcta sera: un gen
es un conjunto de secuencias de ADN, reguladoras y estructurales, necesarias para codificar
un producto gnico.

Estructura del gen

Los genes estn formados por dos regiones principales:

Regin estructural: es la parte codificante del gen y es la que se va a expresar. La

molcula de ARN que resulta directamente de la transcripcin es el transcrito
primario. En esta regin, se encuentran, a su vez:
o Intrones: son secuencias no codificantes, que se transcriben pero nunca se
traducen, y que se encuentra situada entre dos exones. Son eliminadas
durante la maduracin del ARN.
o Exones: son las secuencias codificantes, estn en la regin estructural del
gen. Se transcriben y se traducen, y por lo tanto, estn en el ARN maduro

Regin reguladora: es la parte que no tiene una funcin codificante, pero es

necesaria para el inicio de la transcripcin. Dentro de esta regin, se encuentra un
promotor, que nunca se transcribe, pero que es el lugar donde se va a unir la ARN
polimerasa para iniciarse la expresin gnica, es decir, determina el sitio de inicio
de la transcripcin. En el caso de eucariotas, hay varios promotores (tantos como
genes haya), mientras que en procariotas, slo hay un promotor.

Al igual que hay un promotor tambin hay un terminador, que se encuentra en el extremo
de la regin estructural, es necesario para que finalice la transcripcin.

Gen

Regin reguladora Regin estructural

Promotor Exn Intrn Exn Terminador

143
Alberto Fonte Polo

En eucariotas, el promotor se denomina promotor basal, ya que en la regin reguladora

tambin hay un promotor proximal y elementos distales. Estas son secuencias que se unen a
factores de transcripcin (un tipo de protenas) para regular la velocidad de inicio de la
transcripcin, facilitando o inhibiendo la expresin gnica.

Regin reguladora

Elementos Distales Promotor Proximal Promotor Basal Exn

En la transcripcin slo una de las cadenas se usa como molde, el promotor determina que
cadena usar la ARN polimerasa como plantilla. La ARN polimerasa slo lee en direccin
35, por lo que segn este el promotor a la derecha o la izquierda del gen, se usar una
cadena u otra del ADN como molde.

La hebra molde se denomina hebra consentido, hebra +, o hebra codificante.

La otra hebra se denomina hebra antisentido, hebra , o hebra no codificante.

La secuencia de bases de la hebra + es idntica a la del transcrito primario, slo que en

lugar de timina hay uracilo. La hebra antisentido es antiparalela y complementaria al
transcrito primario.

Los nucletidos se numeran con respecto a la hebra aguas abajo

consentido, y el primer nucletido que aparece en el
ARN es el (+1) y se corresponde con el origen de 5 3 2 1 +1 +2 +3 +4 3
transcripcin.
Los nucletidos situados cerca del extremo 5 R. reguladora R. estructural
y que no se codifican, se numeran de forma negativa;
mientras que los situados cerca del extremo 3 y que se codifican, se numeran de forma
positiva. Los nucletidos numerados negativamente se corresponderan a la regin
reguladora, mientras que los numerados positivamente se corresponderan a la regin
estructural.
Cuando se habla de posiciones hacia la izquierda de una determinada base, se dice
que estn situadas aguas arriba o corriente arriba. Sin embargo, si se habla de
posiciones hacia la derecha, se dice que estn situadas aguas abajo o corriente abajo
de dicha base.

Reaccin qumica de polimerizacin

Requerimientos:
Hebra molde de ADN.
Sustratos: ribonucletidos trifosfato (ATP, GTP, CTP y UTP).
ARN polimerasa que emplear como cofactor Mg2+.

No se requiere cebador, las ARN polimerasas son autoiniciadoras. Tienen dos sitios de
unin: el sitio de iniciacin, donde se incorpora el primer ribonucletido (+1), que suele ser
ATP o GTP, y el sitio de elongacin, aqu se incorpora el ribonucletido de la posicin +2,
y tras l todos los dems. De este modo no es necesario ningn cebador.

144
 Bioqumica - Tema 16

El grupo hidroxilo del primer ribonucletido realiza un ataque nucleoflico sobre el fosfato
del segundo ribonucletido, de este modo se forma un enlace fosfodister.
Por cada enlace fosfodister se libera un PPi, que se hidroliza a 2 Pi para hacer que
el proceso sea irreversible, en una reaccin catalizada por la pirofosfatasa.

ARN polimerasas
Las ARN polimerasas, o transcriptasas, son enzimas que sintetizan ARN a partir de la
hebra molde de ADN. Sin embargo, hay diferencias entre eucariotas y procariotas.

Procariotas

En la bacteria E. coli solamente hay un tipo de ARN polimerasa, que se encarga de

transcribir todos los tipos de ARN. Est constituida por 5 cadenas polipeptdicas: 2
subunidades , 1 subunidad , 1 subunidad y 1 subunidad . Las subunidades y
constituyen el centro activo de la enzima, aqu se encuentra la actividad polimerasa 53.
Estas subunidades (2) se unen para formar el ncleo cataltico de la ARN polimerasa.
Sin embargo, para que se inicie la transcripcin, es necesaria la presencia de una
subunidad denomina factor , que reconocer y se unir al promotor del gen. Todo ello se
denomina holoenzima ARN polimerasa.
Una vez iniciada la sntesis se disocia el factor , y el proceso de transcripcin lo
realizar slo el ncleo. El factor reconoce la regin promotora del gen. Se asegura que la
ARN polimerasa se una a los sitios correctos.

Estructura tridimensional
de la ARN polimerasa

Eucariotas

En mitocondrias y cloroplastos slo hay un tipo de ARN polimerasa, mientras que, en el

ncleo de la clula hay tres tipos de ARN polimerasas:

145
Alberto Fonte Polo

ARN polimerasa I: transcribe un gen que codifica para 3 de los 4 ARNr (28 S, 18 S
y 5,8 S). Los tres forman parte de una sola cadena de 45 S, que es cortada en la
etapa de maduracin.
ARN polimerasa II: transcribe todos los genes codificantes de protenas, los
ARNhn (nucleares heterogneos) que al madurar dan lugar al ARNm. Tambin es
responsable de la transcripcin de los ARNsn.
ARN polimerasa III: transcribe al ARNt y al ARNr de 5 S.

La toxina amanitina es un pptido producido por el hongo Amanita phalloides, que

inhibe la ARN polimerasa II. Al inhibir la sntesis proteica el hgado es el primer rgano en
verse afectado (la amanitina provoca un fallo heptico). Los primeros sntomas de
intoxicacin aparecen hasta 24 h despus de la ingesta, si no se trata rpidamente puede
ocasionar la muerte. En elevadas concentraciones esta toxina tambin inhibe a la ARN
polimerasa III.

Transcripcin en procariotas
La transcripcin bacteriana (E. coli) tiene 3 etapas: iniciacin, elongacin y terminacin. En
la iniciacin la ARN polimerasa se encuentra en forma de holoenzima. En la elongacin
slo participa el ncleo de la ARN polimerasa. La terminacin ocurre cuando la enzima
alcanza las secuencias terminadoras.

Iniciacin

La holoenzima ARN polimerasa se une aleatoriamente a la doble hlice de ADN (se une a
las dos hebras). En este punto la enzima tiene baja afinidad por el ADN. Posteriormente, la
ARN polimerasa se desplaza por la doble hlice en busca del promotor. Cuando el factor
reconoce el promotor, aumenta la afinidad de la ARN polimerasa por l, y se forma un
complejo promotor cerrado.

En las bacterias hay distintos tipos de factores , el ms comn es el factor 70, reconoce la
mayora de los promotores.

Hay dos regiones del ADN que presentan secuencias consenso de nucletidos importantes
para la unin con el factor :
Regin 10: cuya secuencia consenso es TATAAT, se denomina caja Pribnow.
Regin 35: cuya secuencia consenso es TTGACA.

146
 Bioqumica - Tema 16

Estas secuencias no siempre son as, hay

variaciones de bases. Son secuencias que se han
tomado como consenso al estudiar distintos genes,
y estn formadas por las bases que ms
frecuentemente las suelen componer.
Se ha visto que cuanto ms similares son
las regiones (10) y (35) a las secuencias
consenso, ms fuerte ser la unin del factor y
ms eficaz es el inicio de la transcripcin.

Para iniciar la sntesis del ARN se tendr que desnaturalizar parte del gen, y por ello, la
ARN polimerasa desenrolla la hlice. Se desenrolla parte de la regin promotora y parte de
la regin estructural, inicialmente se desenrolla una vuelta de hlice, es decir, 12 pares de
bases: desde la posicin 11 hasta la +2. Es as como se forma el complejo promotor
abierto.

La actividad de la ARN polimerasa da lugar a un dinucletido que permanecer unido a la

hebra molde. Tras el primer enlace fosfodister se van incorporando ribonucletidos hasta

147
Alberto Fonte Polo

formar una cadena de 10 ribonucletidos (unidos a la hebra molde, formando una molcula
hibrida de ADNARN).

El factor , al estar unido al ADN, no permite el desplazamiento de la ARN polimerasa. Y

cuando ya hay una cadena de 10 ribonucletidos se disocia el factor , disminuye la
afinidad de la enzima por la regin promotora y el ncleo de la ARN polimerasa puede
avanzar hacia otras regiones del ADN. As comienza la elongacin.

Elongacin

Conforme avanza el ncleo de la ARN polimerasa, va desenrollando la hlice de ADN, y la

burbuja de transcripcin ir avanzando.

Solo los 12 ltimos ribonucletidos incorporados permanecen unidos a la hebra molde,

formando una cadena de doble hlice ADNARN, el resto de la cadena de ADN se disocia
y permanece libre.

Para volver a enrollar el ADN que ya se ha transcrito se requiere una topoisomerasa I, que
renaturaliza el ADN. En las zonas de superenrollamiento se acumula tensin, se requiere
una topoisomerasa II.

El ADN que ha sido transcrito puede volver a ser transcrito de nuevo, por otra ARN
polimerasa. As, pueden obtenerse muchas copias en poco tiempo.

Superenrollamiento positivo
Topoisomerasa II
Topoisomerasa I
Burbuja de
Superenrollamiento transcripcin
negativo
Hebra no-molde

ARN polimerasa
ADN
Hebra molde
Centro activo
Hbrido ADN-ARN
ARN Direccin de transcripcin

Terminacin

Cuando el ncleo de la ARN polimerasa alcanza las secuencias de terminacin del ADN, la
transcripcin finaliza.

En las bacterias hay dos mecanismos de terminacin alternativos, en cada gen ocurrir uno.
Uno es la terminacin independiente de Rho, el otro es la terminacin dependiente de Rho.

Terminacin independiente de Rho (): en este mecanismo la secuencia que acta

como seal de terminacin es una regin que contiene dos secuencia palindrmicas
148
 Bioqumica - Tema 16

ricas en G y C, es decir, que se lee en los dos sentidos de la misma manera. Una de
estas secuencias palindrmicas es complementaria a la otra. Adems, tras esas
secuencias, se encuentra una regin poliA final: GCCCG........CGGGC........ AAAA
En el ARN se dar la secuencia complementaria: CGGGC........GCCCG........UUUU

Una vez se haya transcrito, fuera de la burbuja de transcripcin, se aparea el ARN

consigo mismo, formndose as una horquilla. Con esto, se desacopla la ARN
polimerasa y se acaba as la sntesis de ARN. Hay un segmento de uracilos del ARN
interaccionando con las adeninas del ADN, pero es una hlice inestable porque solo
se forman dos puentes de hidrgeno entre una adenina y un uracilo. Por esto, se
libera el ARN. El ADN se renaturaliza para que pueda ser transcrito de nuevo.

horquilla

Terminacin dependiente de Rho (): en este caso, la secuencia de terminacin es

el sitio Rut, que es el sitio de unin de la protena . La protena Rho tiene dos
actividades enzimticas:
- Helicasa: desenrolla la hlice hbrida ADNARN.
- ATPasa: hidroliza ATP para dar lugar a ADP y a fosfato inorgnico (Pi).

Cuando el ncleo de la ARN polimerasa transcribe el sitio Rut, la protena Rho se

une a la secuencia Rut. La hidrlisis de ATP le da a la protena Rho la energa
necesaria para que pueda avanzar por la cadena de ARN en direccin 3. As, puede
alcanzar a la ARN polimerasa (detenida temporalmente). Rho con su actividad
helicasa desenrolla la hlice ADNARN (empleando como energa el ATP), el
ARN se libera, y el ADN se renaturaliza.

149
Alberto Fonte Polo

Salvo el ARNm de procariotas, los dems ARN son inmaduros, son transcritos primarios.
Necesitarn sufrir una maduracin, en la que intervienen exonucleasas. Se modificar
qumicamente el ARN, por ejemplo, se metilarn algunas bases para aumentar la resistencia
a la degradacin enzimtica del ARN.

150
Tema 17 Traduccin

Introduccin
La traduccin es el proceso que conducir a la sntesis de protenas a partir de la
informacin contenida en el ARNm. Este proceso requiere mucha energa, se consumen 4
molculas de ATP por cada aminocido que se incorpora a la cadena. El 80% de la energa
proporcionada por los alimentos se dedica a esta sntesis proteica.

En la traduccin se pasa del lenguaje de 4 letras del ARNm (A, U, G y C) al lenguaje de 20

letras de las protenas (los 20 aminocidos).

Requerimientos:

ARN: participan los tres tipos de cidos ribonucleicos:

o ARNm: contiene la informacin que se traducir en protenas.
o ARNt: transportan los aminocidos del citoplasma y leen el mensaje a partir
del anticodn. Se requieren 32 ARNt.
o ARNr: forman el ribosoma junto a unas protenas (50 en eucariotas). Genera
los enlaces peptdicos entre aminocidos y fija el ARNm al ribosoma.
Aminocidos: son veinte y se unen en la etapa de activacin al ARNt.
Protenas: pueden ser:
o AminoaciltRNA sintetasas: son enzimas que catalizan la unin del
aminocido al ARNt. Hay veinte aminoaciltRNA sintetasas en las clulas,
son enzimas muy especficas para los aminocidos y para los ARNt.
o Factores proteicos: son protenas citoplasmticas que se asocian al ribosoma
para participar en la sntesis de la protena. Son los siguientes:
- Factores de iniciacin (IF).
- Factores de elongacin (EF).
- Factores de terminacin (RF): terminan la sntesis proteica y liberan
la cadena polipeptdica.
Estos factores tienen actividad enzimtica GTPasa.
Energa: se obtiene de la hidrlisis del ATP (en la activacin del aminocido) y del
GTP (en la etapa ribosomal de la traduccin).

La traduccin ocurre en sentido 53, al contrario que la replicacin y la transcripcin. La

sntesis proteica tiene lugar desde el extremo NH2 terminal hasta el extremo COOH
terminal.

El cdigo gentico
Es la correlacin entre nucletidos y aminocidos. El codn es la unidad de codificacin.
Cuando se desconoca el cdigo gentico se trat de averiguar la unidad de codificacin.
Se hicieron tres supuestos:
1. Si cada base codificase para un aminocido, podra haber tan solo cuatro
aminocidos distintos, lo que implica que el cdigo gentico no tiene una
correspondencia 1:1.
151
Alberto Fonte Polo

2. Ahora bien, si se supone que cada dos bases codifican para un aminocido, se ve
que el nmero de aminocidos distintos que se tendra en el lenguaje de los cidos
nucleicos sera de 16 aminocidos (42). Por ello, tampoco es vlida la relacin 2:1.
3. Sin embargo, si se supone que cada tres bases codifican para un aminocido, se ve
que el nmero de aminocidos distintos es de 64 aminocidos (43). Como este
nmero es mucho ms grande que el nmero de aminocidos codificables que existe
(20), la relacin 3:1 (un triplete, un aminocido), es vlida. As pues, a cada triplete
se le denomina codn.

En la determinacin del cdigo gentico destaca el experimento de utilizacin de

homopolmeros. Consiste en la sntesis de cadenas de ARNm compuestas por un solo tipo
de ribonucletido, para ver que aminocido codifica el triplete del que se compone dicho
ARN.
Para realizar esta traduccin in vitro se emplean extractos de clulas. Primero se
trata el extracto con nucleasas para degradar su ARNm, as no se traducir el ARNm de
esas clulas. Despus se introduce en el tubo de ensayo el extracto, acompaado de
aminocidos radiactivos (que permitirn analizar las protenas sintetizadas), ATP y GTP.
Cuando se realizaba la traduccin in vitro con una cadena de ARNm poliU se
sintetizaba un pptido formado exclusivamente por fenilalanina, por lo tanto el triplete
UUU codifica para Phe. Posteriormente, se hizo lo mismo con el ARNm poliA, y se vio
que el triplete AAA codificaba para Lys; con el ARNm poliC, el triplete CCC codifica
para Pro; y con el ARNm poliG, del cual se concluy que el triplete GGG da lugar a Gly.

U C A G
UUU UCU UAU UGU U
Phe Tyr Cys
UUC UCC UAC UGC C
U UUA
Leu
UCA
Ser
UAA
STOP
UGA STOP A
UUG UCG UAG UGG Trp G
CUU CCU CAU CGU U
His
CUC CCC CAC CGC C
C CUA
Leu
CCA
Pro
CAA CGA
Arg
A
Gln
CUG CCG CAG CGG G
AUU ACU AAU AGU U
Asn Ser
AUC Ile ACC AAC AGC C
A AUA ACA
Thr
AAA
Lys
AGA
Arg
A
AUG Met ACG AAG AGG G
GUU GCU GAU GGU U
Asp
GUC GCC GAC GGC C
G GUA
Val
GCA
Ala
GAA
Glu
GGA
Gly
A
GUG GCG GAG GGG G

De los 64 codones distintos hay 3 codones de terminacin, son: UAA, UAG y UGA.
Cuando son ledos se detiene la sntesis proteica, ya que no hay ningn ARNt que los
reconozca.
Por lo tanto, hay 61 codones codificantes y solamente hay 20 aminocidos
codificables, esto indica que un mismo aminocido puede venir codificado por distintos
tripletes, estos tripletes son codones sinnimos. Esto se debe a que el cdigo gentico es
degenerado.

152
 Bioqumica - Tema 17

El triplete AUG es el codn de iniciacin, codifica para metionina. Todas las protenas de
eucariotas llevan en el primer lugar de su cadena polipeptidica una metionina, al menos
antes de la maduracin. En procariotas el codn AUG, cuando est al inicio, codifica para
formilmetionina.

Hiptesis del balanceo

La hiptesis del balanceo (Crick, 1966) explica la degeneracin del cdigo gentico.

ARNt 3 5
Posicin de
balanceo
1 2 3
anticodn
ARNm 5 3
1 2 3
codn

Hay determinados ARNt que pueden reconocer ms de un codn. En las posiciones 1 y 2

los apareamientos entre anticodn y codn son estrictos, pero en la posicin 3 (5) del
ARNt hay cierta flexibilidad, se permiten interacciones fuertes (las de Watson y Crick) e
interacciones ms dbiles (apareamientos de Hoogsteen).
Crick observ que la tercera base de casi todos los codones se aparea de manera
bastante flexible con su correspondiente ARNt, es decir, la tercera base se balancea.

Cuando la tercera base del anticodn es la guanina, es decir cuando la guanina est en la
posicin de balanceo, puede unirse tanto a citosina, como a uracilo, que es la otra base
pirimidnica. Hay por lo tanto dos codones posibles, ambos codifican para un mismo
aminocido, son codones sinnimos.

Si el uracilo est en la posicin de balanceo, puede unirse a la adenina o a la guanina (pero

de forma ms dbil). Hay de nuevo dos codones que se diferencian en el tercer nucletido,
pero son tambin codones sinnimos.

3 5 3 5

X Y G X Y U
YXC aa1 5 3 YXA aa2
5 3
Y X YXU aa1 Y X YXG aa2

La hipoxantina (I) en la posicin de balanceo puede unirse a uracilo, adenina o citosina. De

cualquier modo, los codones son sinnimos.

3 5

X Y I YXU aa3
5 3 YXA aa3
Y X YXC aa3

153
Alberto Fonte Polo

Si hay 61 codones codificantes, se necesitaran 61 ARNt, pero debido al balanceo de la

tercera base, varios codones (sinnimos) pueden ser reconocidos por un mismo ARNt. De
hecho, existen solo 32 ARNt diferentes, uno de ellos es un ARNt iniciador que introduce
formilmetionina en procariotas.

Adems de ser degenerado, el cdigo gentico es casi universal, es decir, los mismos
codones codifican para un mismo aminocido en la mayora de los seres vivos, a excepcin
de los protozoos y de las mitocondrias.

Codn Sentido estndar Sentido mitocondrial

UGA STOP Trp
AUA Ile Met
AGG Arg STOP
AGA

Pautas de lectura del cdigo gentico

Hay tres lecturas posibles de la cadena de nucletidos del ARNm:

Lectura sin solapamiento:
ABC
ABC DEF GHI DEF
GHI
1 2 3
Lectura con solapamiento de 1 base:
2
ABC
ABC DEF GHI CDE
EFG
1 3
Lectura con solapamiento de 2 bases:
4
2
ABC
ABC DEF GHI BCD
CDE
1
3

La lectura del cdigo gentico es una lectura continua y sin solapamientos. La nica
interrupcin sera un codn de terminacin.

Etapa citoslica: activacin de los aminocidos

El objetivo de la activacin del aminocido es unir el aminocido a su correspondiente
ARNt y, por ello, son necesarias:
Las enzimas aminoaciltRNA sintetasas, para dar lugar al complejo aminocido
tRNA.
La hidrlisis de ATP, que dar la energa suficiente para que suceda esta fase.
Esto sucede en el citosol y el aminocido no se transfiere en un paso, sino que debe
convertirse en un compuesto de elevada energa, para que ese aminocido se pueda
transferir al ARNt.
154
 Bioqumica - Tema 17

La reaccin ocurre en dos pasos secuenciales:

Activacin del aminocido: se une el aminocido 1 reconocido por la enzima y

una molcula de ATP al centro activo de la aminoaciltRNA sintetasa en dos sitios
diferentes, ya que esta enzima tiene dos sitios de unin en el centro activo. La
reaccin que se da es entre el carboxilo del aminocido 1 y el grupo P del ATP,
formndose un aminoacil~AMP mediante un enlace rico en energa y liberndose
pirofosfato inorgnico (PPi).

aminocido ATP PPi

adenosina pirofosfato

ataque nucleoflico
aminoacil~AMP

El intermediario sigue en el centro activo de la enzima y es un componente rico en

energa, necesario para que se d la segunda reaccin.

Unin al ARNt: a la aminoaciltRNA sintetasa, entra el ARNt especfico para el

aminocido 1, que ser reconocido por el brazo aceptor y por el codn. La misma
sintetasa cataliza la reaccin del intermediario al brazo CCA 3 del ARNt, en el

155
Alberto Fonte Polo

cual, se rompe el enlace entre el AMP y el aminocido, liberndose AMP y

obtenindose el aminoacil~tRNA.

aminoacil~tRNA

Este se libera del centro activo de la enzima y, el enlace que se da entre el

aminocido y la adenosina del ARNt es un enlace rico en energa que participa en la
formacin del enlace peptdico, en el ribosoma.

La reaccin global de la aminoaciltRNA sintetasa es:

Mg 2
aa1 tRNA aa1 ATP enzima
aa1 tRNA aa1 AMP PPi

Para que la reaccin sea irreversible, el pirofosfato se hidrolizar a dos fosfatos por medio
de la pirofosfatasa:
PPi Pirofosfat
asa
2Pi

El coste energtico de la activacin de los aminocidos equivale a 2 molculas de ATP por

cada aminocido activado (una molcula de ATP para activarlo y otra para hidrolizar el
PPi). Esta reaccin, en conjunto, es exergnica.

La aminoaciltRNA sintetasa tiene una funcin correctora de pruebas (como la ADN

polimerasa) para corregir los aminocidos errneos. Si hay un error y no se corrige, en el
ribosoma no se va a corregir porque no se vuelve a verificar si el aminocido es el correcto,
solo se confirma que la unin codnanticodn es correcta. Por ejemplo, supongamos un
tRNAIle que, por error, lleva unida una valina (Val). Cuando est en la etapa ribosomal, si la
unin codnanticodn es correcta, la valina se incorporar a la cadena polipeptdica
(aunque no debiera).

La tasa de error de esta sintetasa es de 104, aunque este valor es relativamente alto, no
supone un gran problema, ya que las protenas no se transmiten a la descendencia, y adems
se sintetizan en un gran nmero.

156
 Bioqumica - Tema 17

Etapa ribosomal

Estructura del ribosoma de procariotas

Un ribosoma ensamblado es una estructura que se compone de ARN ribosmico (ARNr) y

protenas. En el caso de procariotas, tienen una estructura de coeficiente de sedimentacin
70S, que se divide en una subunidad grande (50S) y en una subunidad pequea (30S).

Subunidad mayor: hay 34 protenas distintas y 2 clases de ARNr: 23S (que es una
ribozima con actividad peptidil transferasa) y 5S.
Subunidad menor: hay 21 protenas distintas y solamente se encuentra en l el
ARNr 16S (que fija el ARNm al ribosoma).

50 S

30 S

En el ribosoma, hay tres sitios de unin al ARNt:

Sitio A o aminoacilo: en este lugar, se da la entrada de cada aminoacil~tRNA salvo
el primero, que ir al sitio P.
Sitio P o peptidilo: es el lugar donde se ir colocando la cadena polipeptdica, es
decir, el peptidil~tRNA.
Sitio E o de salida (exit): aqu se sita el ARNt vaco, una vez descargado de la
cadena peptdica.

Fase de iniciacin

En la fase de iniciacin, participan las dos subunidades del ribosoma, el ARNm y los
factores de iniciacin, de los cuales hay tres tipos: IF1, IF2 e IF3. De stos, el IF2 tiene
actividad enzimtica GTPasa y va asociado a GTP.

En la fase de iniciacin se debe unir el ARNm a la subunidad 30S, e incorporar el primer

aminoacil~tRNA para formar el complejo de iniciacin 70S. En procariotas el primer
aminoacil~tRNA es la formilmetionil~tRNA.

157
Alberto Fonte Polo

Para fijarse el ARNm a la subunidad pequea, se disocia primero el ribosoma, mediante la

participacin de la IF1 e IF3. Las dos protenas se unen a la subunidad 30S y provocan un
cambio conformacional en dicha subunidad, haciendo que pierda afinidad por la subunidad
50S. La protena IF1 est bloqueando el sitio A para que se una la formilmetionil~tRNA al
ribosoma por el sitio P. Y la protena IF3 impide que la subunidad 50S se una antes de
tiempo.

Para que se suceda la unin del ARNm al ribosoma, tiene que estar presente el codn de
inicio AUG en el ARNm (al igual que ha de tener un codn de terminacin para la ltima
fase de la traduccin). Precediendo a este codn de inicio, en los procariotas, se ve una
secuencia rica en bases pricas (A y G), conocida como secuencia de ShineDalgarno (en
el extremo 5) que es complementaria a una secuencia de bases del ARNr 16S (es decir, del
ARNr de la subunidad pequea), en esta secuencia es donde se une el ribosoma. De este
modo el ribosoma reconoce al codn de inicio (AUG) para que comience la traduccin.

La secuencia de ShineDalgarno es reconocida en el sitio A, de modo que el codn de

inicio queda alineado en el sitio P.

158
 Bioqumica - Tema 17

UAA
secuencia UAG
Shine-Dalgarno AUG UGA
5 3 ARNm

La unin del aminoacil~tRNA al ribosoma requiere el factor IF2, que es el nico que puede
reconocer la formilmetionil~tRNA para unirse a ella y transportarla al ribosoma. Tras esto,
se forma un complejo de tres molculas: ARNm, formilmetionil~tRNA y los factores de
iniciacin. El anticodn del formilmetionil~tRNA se une al codn (AUG) del ARNm y, a
pesar de que no estn las dos subunidades, se inicia la sntesis proteica, formndose el
complejo de iniciacin 30S.

La unin anticodncodn provoca un cambio conformacional en la subunidad 30S,

provocando la disociacin del factor IF3. Entonces, la subunidad mayor se asocia con la
menor. Al unirse la subunidad 50S se activa la actividad GTPasa del factor IF2, de modo
que se hidrolizar el GTP a GDP + Pi, haciendo que pierda afinidad por la subunidad
pequea del ribosoma, y el factor IF2 se libera junto con el IF1. El resultado final es el
complejo de iniciacin 70S. El ribosoma estar totalmente ensamblado, en el sitio P
contiene la formilmetionil~tRNA, mientras que los sitios A y E estn vacos.

Fase de elongacin

Para esta etapa de elongacin, se requiere la presencia de tres factores de elongacin:

EF-Tu: unin y transporte de aminoacil~tRNA.
EF-Ts: factor de reciclaje.
EF-G: factor de translocacin.
Tanto el primer como el tercer factor, tienen actividad GTPasa y, en forma funcional, tienen
asociado GTP que se hidrolizar.

La elongacin ocurre de manera cclica, de modo que ese ciclo se compone de tres pasos:

Inicio (entrada del nuevo aminoacil~tRNA al sitio A): se parte del complejo de
iniciacin 70S y, en el primer ciclo, el sitio E est vaco, mientras que el sitio P
contiene la formilmetionina. Aunque el sitio A est vaco, se alinea con el codn
(+2).

Un nuevo aminoacil~tRNA con el aminocido 2 y

cuyo anticodn se aparea con el codn es transportado
por el factor EF-Tu con GTP, siendo su funcin
similar a la del IF2. Este EF-Tu se une a cualquier
aminoacil~tRNA y lo transporta hasta el sitio A del
ribosoma.

Si el apareamiento codn-anticodn es correcto, el

anticodn 2 se aparea con el codn 2 y se produce un
cambio conformacional en el factor EF-Tu, haciendo
que se estimule la actividad GTPasa. Tras la hidrlisis
de GTP a GDP y fosfato inorgnico, este factor EF-Tu
no tiene afinidad ni por el ribosoma ni por el ARNt,
liberndose al citosol como EF-Tu~GDP.

159
Alberto Fonte Polo

Para reciclar este factor EF-Tu~GDP a EF-Tu~GTP se requiere la interaccin con el

factor EF-Ts, que provoca el cambio conformacional de EF-Tu y hace que pierda
afinidad por el GDP, liberndolo. El GTP celular se une al sitio de unin de EF-Tu
y esto provoca un cambio de conformacin nativa con la consiguiente prdida de
afinidad por la EF-Ts, volvindose as al principio.

Si el apareamiento codn-anticodn es incorrecto, no hay cambio conformacional

en el factor EF-Tu y, por tanto, ni hay actividad GTPasa ni hay rechazo del
ribosoma.

Transpeptidacin: en este paso, se formar el enlace peptdico mediante la

transferencia de un aminocido del sitio P al sitio A por efecto de la peptidil
transferasa. Esta transpeptidacin est catalizada por el ARNr 23S, ya que tiene
actividad peptidil transferasa. La reaccin que se da es la siguiente:

Se da entre el extremo carboxilo del aminoacil~tRNA del sitio P (en este caso, la
formilmetionil~tRNA) y el grupo amino del aminoacil~tRNA del sitio A. El
nitrgeno amnico del aminocido entrante realiza un ataque nuclefilo sobre el
carbono del carboxilo del aminocido 1, rompiendo el enlace que mantena la unin
con el ARNt y formndose as el enlace peptdico. En este caso, se forma un
dipeptidil~tRNA, es decir, dos aminocidos unidos a un ARNt por un enlace rico en
energa.
Adems, este dipeptidil~tRNA est en el sitio A, y en el sitio P hay un ARNt
vacio. Para seguir sintetizando la cadena polipeptdica, se requiere un ARNt nuevo,
pero, al estar ocupado el sitio A, no puede entrar ningn aminoacil~tRNA nuevo, al
igual que el codn de ese aminocido nuevo est fuera. Para que se pueda continuar
con el siguiente aminocido, se pasa a la translocacin.

160
 Bioqumica - Tema 17

Translocacin: el ribosoma avanza por el ARNm en direccin 3 la distancia

equivalente a un codn o un triplete. Para este desplazamiento, se requiere energa
y, para ello, el factor EF-G est unido a GTP, ya que, con su actividad GTPasa, dar
esa energa necesaria para el desplazamiento.
Tras esto, el sitio A est desplazado un lugar, el sitio P estar donde estaba el
sitio A y el sitio E donde estaba antes el sitio P, pasndose as el dipeptidil~tRNA al
sitio P, el ARNt vaco al sitio E y el sitio A est ahora vaco y alineado con el codn
3. Tras esta translocacin, el ARNt del sitio E sale del ribosoma, y se queda vaco.

Etapa de
elongacin

El EF-G~GDP se tendra que regenerar a EF-G~GTP, pero, como no tiene mucha afinidad
por el GDP, lo libera y entra GTP celular en el factor EF-G.

161
Alberto Fonte Polo

Se producen tantos ciclos como nmero de aminocidos tenga esa protena. Este nmero de
aminocidos viene determinado por la longitud del ARNm y, de una protena de n
aminocidos, habr (n 1) ciclos de elongacin, puesto que el primer aminocido se ha
incorporado en la iniciacin.
Tras cada ciclo de elongacin, la protena crece y el ribosoma se desplaza un triplete
a la derecha. Todo este ciclo se repite hasta que se alcanza un codn de terminacin.

Fase de terminacin

En esta fase, se terminar la sntesis proteica y se liberar la cadena polipeptdica.

Intervienen los factores de liberacin o factores RF: RF1, RF2 y RF3 (GTPasa).

La terminacin ocurre cuando en el sitio A se site un codn de terminacin (UAA, UAG o

UGA), mientras que en el sitio P estar la cadena peptdica con un nmero n de
aminocidos, estando el aminocido1 en el extremo y el aminocidon en contacto con el
ARNt. El sitio E se encontrar vacio.

En el sitio A, no se introduce ningn ARNt porque no existe ningn anticodn

complementario a estos codones de terminacin. Lo que si se introduce es un factor de
liberacin (RF1 o RF2), que reconoce distintos codones:
RF1: reconoce los codones UAA y UAG.
RF2: reconoce los codones UAA y UGA.
En ese sitio A, el RF1 o RF2 causa en el ribosoma un cambio conformacional que altera la
actividad peptidil transferasa convirtindola en una actividad hidrolasa, de modo que, el
ARNr 23 S emplear su actividad hidrolasa para hidrolizar el enlace entre el ARNt y la
cadena polipeptdica. Se libera, por lo tanto, todo el polipptido.

Adems, se requiere el factor RF3 asociado a GTP para liberar los factores RF1 o RF2. El
RF3~GTP, mediante la hidrlisis de GTP, permitir la disociacin de los factores de
liberacin, as como la salida del ARNt vaco del sitio P.

Finalmente, la cadena polipeptdica debe pasar una etapa de maduracin, para alcanzar su
conformacin biolgicamente activa o conformacin nativa.
Plegamientos: se requieren protenas chaperonas.
Modificaciones qumicas:
o eliminacin del grupo formilo (CHO).
o eliminacin de la metionina terminal.
o modificaciones del grupo R: hidroxilaciones, metilaciones, fosforilaciones y
carboxilaciones.

162