9.2.

2002 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 39/71

COMISSO

DECISO DA COMISSO
de 1 de Fevereiro de 2002
que aprova um Manual Diagnstico que estabelece procedimentos diagnsticos, mtodos de amos-
tragem e critrios de avaliao dos testes laboratoriais de confirmao da peste suna clssica
[notificada com o nmero C(2002) 381]
(Texto relevante para efeitos do EEE)

(2002/106/CE)

A COMISSO DAS COMUNIDADES EUROPEIAS,
Tendo em conta o Tratado que institui a Comunidade Europeia,
(5) A experincia adquirida nos ltimos anos no controlo da
peste suna clssica conduziu identificao dos
mtodos de amostragem e dos critrios de avaliao dos
resultados dos testes laboratoriais mais adequados para o
diagnstico correcto desta doena em vrios tipos de
situaes.

Tendo em conta a Directiva 2001/89/CE do Conselho, de 23

(6) As medidas previstas na presente deciso esto em
de Outubro de 2001, relativa a medidas comunitrias de luta
conformidade com o parecer do Comit Veterinrio
contra a peste suna clssica (1), e, nomeadamente, o n.o 3 do
Permanente,
seu artigo 17.o e o n.o 1 do seu artigo 29.o,

Considerando o seguinte:

(1) necessrio estabelecer a nvel comunitrio procedi- ADOPTOU A PRESENTE DECISO:

mentos diagnsticos, mtodos de amostragem e critrios
de avaliao dos resultados dos testes laboratoriais de
confirmao da peste suna clssica.

Artigo 1.o
(2) O anexo IV da Directiva 2001/89/CE estabelece as
competncias e atribuies do Laboratrio Comunitrio
de Referncia para a peste suna clssica, a fim de que 1. Os Estados-Membros asseguraro que a confirmao da
este coordene, em consulta com a Comisso, os mtodos peste suna clssica assente:
utilizados nos Estados-Membros para o diagnstico desta
doena. Tais competncias e atribuies incluem a orga-
nizao peridica de testes comparativos e o forneci- a) Na deteco de sinais clnicos e de leses post mortem da
mento dos reagentes de referncia a nvel comunitrio. doena;

b) Na deteco de vrus, antignio ou genoma nas amostras de

(3) O vrus da peste suna clssica no considerado um
risco para a sade humana.
(4) Foram recentemente desenvolvidos testes laboratoriais
para assegurar o diagnstico rpido da peste suna cls-
sica.
(1) JO L 316 de 1.12.2001, p. 5.
tecidos, rgos, sangue ou excrees de sunos;
c) Na demonstrao de uma resposta de anticorpo especfico
em amostras de sangue,
em conformidade com os procedimentos, mtodos de amos-
tragem e critrios de avaliao dos resultados dos testes labora-
toriais estabelecidos no manual constante do anexo presente
deciso.
L 39/72 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

2. Contudo, os laboratrios de diagnstico nacionais refe- ltima redaco que lhe foi dada pelo Acto de Adeso da
ridos no ponto 1 do anexo III da Directiva 2001/89/CE podem ustria, Finlndia e Sucia.
utilizar alteraes dos testes laboratoriais referidos no manual
anexo presente deciso, ou utilizar testes diferentes, desde que Artigo 3.o
possa ser demonstrado que apresentam sensibilidade e especifi-
cidade iguais. A presente deciso aplicvel a partir de 1 de Novembro de
2002.
A sensibilidade e especificidade destes testes alterados ou dife-
rentes devem ser avaliadas no mbito de testes comparativos Artigo 4.o
peridicos organizados pelo Laboratrio Comunitrio de Refe- Os Estados-Membros so os destinatrios da presente deciso.
rncia da peste suna clssica.

Feito em Bruxelas, em 1 de Fevereiro de 2002.

Artigo 2.o
Pela Comisso
So revogados os anexos I e IV da Directiva 80/217/CEE do
David BYRNE
Conselho, de 22 de Janeiro de 1980, que estabelece medidas
comunitrias de luta contra a peste suna clssica (1), com a Membro da Comisso

(1) JO L 47 de 21.2.1980, p. 11.

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ANEXO

MANUAL DE DIAGNSTICO DA PESTE SUNA CLSSICA

CAPTULO I

Introduo, objectivos e definies

1. Por forma a assegurar mtodos uniformes de diagnstico da peste suna clssica, o presente manual:
a) Estabelece directrizes e requisitos mnimos em relao aos mtodos de diagnstico e amostragem e aos critrios de
avaliao dos resultados dos exames clnicos e post mortem e dos testes laboratoriais utilizados para o diagnstico
correcto da peste suna clssica (1).
b) Estabelece requisitos mnimos de biossegurana e normas de qualidade que devem ser observados pelos laborat-
rios de diagnstico da peste suna clssica e no transporte das amostras;
c) Estabelece os testes laboratoriais que devem ser utilizados no diagnstico da peste suna clssica e as tcnicas
laboratoriais empregues na tipagem gentica dos isolados de vrus da peste suna clssica.

2. O presente manual destina-se sobretudo s autoridades responsveis pelo controlo da peste suna clssica. Neste
contexto, confere-se especial destaque aos princpios e aplicaes dos testes laboratoriais e avaliao dos respectivos
resultados, e no a tcnicas laboratoriais especficas.

3. Para efeitos do disposto no presente manual, para alm das definies referidas no artigo 2.o da Directiva 2001/89/CE,
aplicam-se as definies que se seguem:
a) explorao suspeita qualquer explorao suincola que contm um ou mais sunos suspeitos de estar infectados
com o vrus da peste suna clssica, ou uma explorao de contacto, tal como definida na alnea v) do artigo 2.o da
Directiva 2001/89/CE;
b) animal reactivo qualquer suno com um resultado positivo nos testes serolgicos de peste suna clssica que no
apresente uma histria de contacto com o vrus da peste suna clssica e relativamente ao qual no haja dados
indicativos de propagao da infeco para sunos em contacto (2).
c) subunidade epidemiolgica ou subunidade qualquer edifcio, local ou terreno vizinho em que so mantidos
grupos de sunos em contacto directo ou indirecto frequente entre si, que, entretanto, so mantidos separados de
outros sunos da mesma explorao;
d) sunos em contacto so sunos que viveram numa explorao em contacto directo com um ou mais sunos
suspeitos de estarem infectados com o vrus da peste suna clssica no decurso dos 21 dias precedentes.

CAPTULO II

Descrio da peste suna clssica, com especial nfase no diagnstico diferencial

A. Introduo

1. A peste suna clssica causada por um vrus de ARN encapsulado pertencente ao gnero Pestivirus da famlia dos
Flaviviridae. Este vrus est relacionado com os pestivrus dos ruminantes que causam a diarreia vrica dos bovinos
(BVDV) e a border disease (BDV). Esta relao tem fortes consequncias a nvel diagnstico, na medida em que
ocorrem reaces cruzadas e pode conduzir a resultados falsos positivos nos testes laboratoriais.

2. O vrus da peste suna clssica relativamente estvel nas excrees hmidas de sunos infectados, nas carcaas de
sunos, na carne de suno fresca e noutros produtos base de carne de suno. prontamente inactivado por
detergentes, solventes lpidos, proteases e desinfectantes comuns.

3. A principal via natural de infeco a oro-nasal, por contacto directo ou indirecto com sunos infectados ou
atravs do fornecimento de alimentos para animais contaminados pelo vrus. Nas reas com elevada densidade de
sunos, a propagao do vrus ocorre facilmente entre exploraes suincolas vizinhas. Tambm pode verificar-se a
transmisso da doena atravs do smen de varrascos infectados.

4. Nos animais individuais, o perodo de incubao de cerca de uma semana a dez dias, embora, a nvel das
exploraes, em condies reais, os sintomas clnicos possam apenas tornar-se evidentes duas a quatro semanas
aps a introduo do vrus, ou at mesmo posteriormente, se se tratar apenas de sunos reprodutores ou de estirpes
de vrus pouco virulentas.

(1) A deciso sobre o nmero de amostras a recolher para os testes laboratoriais deve igualmente atender sensibilidade de tais testes.
O nmero de animais objecto de amostragem deve ser superior ao indicado no presente manual caso a sensibilidade do teste
utilizado no seja muito elevada.
(2) Os animais reactivos podem ter ttulos de anticorpos de neutralizao do vrus ligeiramente positivos (a situao mais frequente) a
fortemente positivos. Aps a colheita de uma nova amostra, os animais reactivos podem apresentar um ttulo constante ou em
diminuio. Em termos gerais, s poucos sunos de uma explorao apresentam falsos resultados positivos.
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5. Os sinais clnicos de peste suna clssica so muito variveis e podem ser confundidos com os de muitas outras
doenas. A gravidade dos sintomas depende sobretudo da idade do animal e da virulncia do vrus. Por via de regra,
os animais jovens so mais fortemente afectados do que os animais menos jovens. Nos sunos reprodutores menos
jovens, a infeco frequentemente suave ou at mesmo subclnica.

6. A peste suna clssica apresenta as formas aguda, crnica e pr-natal.

B. Forma aguda

1. Os leites desmamados e os sunos de engorda tendem a apresentar a forma aguda da peste suna clssica. Os sinais
iniciais so anorexia, letargia, febre, conjuntivite, linfadenopatia, sinais respiratrios e obstipao seguida de
diarreia.

As hemorragias cutneas caractersticas ocorrem geralmente nos ouvidos, na cauda, no abdmen e na parte medial
dos membros a partir das segunda a terceira semanas aps a infeco e persistem at morte. Observam-se
frequentemente sinais neurolgicos, como a claudicao dos membros traseiros, a descoordenao dos movimentos
e as convulses.

Um dado constante a febre. Esta geralmente superior a 40 C, embora nos sunos adultos possa no exceder
39,5 C.

2. O vrus da peste suna clssica causa leucopenia e imunossupresso graves, que frequentemente conduzem a
infeces secundrias entricas ou respiratrias. Os sinais destas infeces secundrias podem mascarar ou
sobrepor-se aos sinais mais tpicos da peste suna clssica, podendo induzir em erro quer o explorador agrcola
quer o veterinrio.

A morte ocorre geralmente dentro do prazo de um ms. tambm possvel a recuperao, associada produo de
anticorpos, sobretudo nos animais adultos reprodutores que no apresentam sinais clnicos graves. Os anticorpos
contra o vrus da peste suna clssica so detectveis duas a trs semanas aps a infeco.

3. As anomalias anatomopatolgicas observveis no exame post mortem ocorrem sobretudo nos gnglios linfticos e
nos rins. Os gnglios apresentam-se tumefactos, edematosos e hemorrgicos. As hemorragias renais apresentam
dimenses variveis, desde as petquias, dificilmente visualizveis, at s equimoses. Hemorragias anlogas podem
igualmente ser observadas na bexiga, laringe, epiglote e corao ou encontrar-se disseminadas nas serosas do
abdmen e trax. Existe frequentemente uma encefalite no purulenta. Podem igualmente verificar-se leses devidas
a infeces secundrias, as quais podem induzir o veterinrio em erro. Os enfartes do bao so considerados
patognomnicos, embora apenas sejam observados infrequentemente.

4. Em termos gerais, a forma aguda da peste suna africana conduz a uma situao clnica e patolgica muito idntica
da peste suna clssica. Quando existem, as hemorragias cutneas e auriculares so muito facilmente detectveis e
sugerem a existncia de peste suna africana ou clssica aguda. Poucas outras doenas causam leses anlogas.

A forma aguda da peste suna clssica deve ser considerada em caso de suspeita de erisipela, sndrome reprodutivo
e respiratrio dos sunos, intoxicao por cumarina, prpura hemorrgica, sndrome de caquexia multissistmica
ps-desmame, sndrome de dermatite e nefropatia dos sunos, infeces por Salmonella ou Pasteurella ou de outros
sndromes entricos ou respiratrios que no respondam ao tratamento com antibiticos.

5. O vrus da peste suna clssica eliminado na saliva, na urina e nas fezes desde o incio dos sinais clnicos at
morte. O vrus da peste suna clssica tambm pode ser eliminado no smen.

C. Forma crnica

1. A forma crnica da infeco ocorre nos casos em que os sunos no so capazes de desenvolver uma resposta
imunolgica eficaz contra o vrus da peste suna clssica. Os sinais iniciais de infeco crnica so idnticos aos da
infeco aguda. Mais tarde, ocorrem sinais predominantemente inespecficos, como febre intermitente, enterite
crnica e emaciao. No h hemorragias cutneas caractersticas.

Estes sunos podem apresentar sinais clnicos da doena no perodo de dois a trs meses que precede a sua morte.
O vrus da peste suna clssica constantemente eliminado desde o incio dos sinais clnicos at morte. Nas
amostras de soro podem ser transitoriamente detectados anticorpos.

2. As alteraes patolgicas so menos tpicas, podendo, designadamente, no ser observadas hemorragias nos rgos
e nas serosas. Nos animais com diarreia crnica, so comuns as leses no leo, na vlvula leo-cecal e no recto.

3. Uma vez que os sinais clnicos de peste suna clssica crnica so bastante inespecficos, o diagnstico diferencial
deve abranger muitas outras doenas. A febre no est necessariamente presente em todos os animais, muito
embora nas exploraes afectadas a febre possa ser detectada em pelo menos alguns sunos.
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D. Forma pr-natal e forma de incio retardado da doena

1. O vrus da peste suna clssica capaz de atravessar a placenta dos animais grvidos e de infectar o feto, embora
nas porcas a doena seja frequentemente subclnica.

As consequncias da infeco transplacentria do feto dependem em larga medida da idade de gestao e da

virulncia do vrus. A infeco durante a parte inicial da gravidez pode conduzir a abortos e nados-mortos,
mumificao e a malformaes. Tudo isso implica uma reduo da taxa de fertilidade na explorao.

A infeco de porcas com at 90 dias de gravidez pode conduzir ao nascimento de leites com viremia persistente,
os quais podem apresentar-se clinicamente normais ao nascer e podem sobreviver vrios meses. Aps o nasci-
mento, podem manifestar atraso do crescimento, emaciao, e, por vezes, tremor congnito. Esta forma de infeco
designada peste suna clssica de incio retardado. Estes leites podem desempenhar um papel crucial na
propagao da doena e na persistncia do vrus numa populao, visto que esto constantemente a eliminar vrus
at sua morte.

2. A deteco da peste suna clssica pode ser especialmente difcil nas exploraes de sunos reprodutores, dado que
a infeco pode ser muito suave e confundida com muitas outras situaes patolgicas. Quer o vrus da peste suna
clssica quer a infeco por parvovrus, o PPRS, a leptospirose e a doena de Aujeszky podem causar diminuio da
fertilidade e abortamento. O material abortado devido peste suna clssica no pode ser distinguida anatomopato-
logicamente do devido a outros agentes de doena.

Em caso de suspeita de doena infecciosa do tracto reprodutivo, h que investigar imediatamente a peste suna
clssica se a explorao em questo puder ser considerada em risco (por exemplo, devido localizao da
explorao numa rea em que a peste suna clssica ocorre em sunos selvagens), e, em todo o caso, logo que
tenham sido excludas todas as doenas infecciosas mais comuns do tracto reprodutivo.

CAPTULO III

Directrizes sobre os principais critrios a ponderar com vista ao reconhecimento de uma explorao como sendo uma
explorao suspeita de peste suna clssica

A deciso de reconhecer uma explorao como sendo uma explorao suspeita basear-se- nos seguintes dados, critrios e
justificaes:

a) Dados clnicos e anatomopatolgicos obtidos nos sunos. Os principais dados clnicos e anatomopatolgicos a
ponderar so os seguintes:
febre com aumento da morbilidade e da mortalidade,
febre com sndrome hemorrgico,
febre com sintomas neurolgicos,
febre de origem desconhecida em que o tratamento com antibiticos no conduziu melhoria do estado de sade,
abortamento e problemas de fertilidade em maior nmero nos trs meses precedentes,
tremor congnito dos leites,
animais com doena crnica,
animais jovens com atraso do crescimento,
petquias e equimoses, especialmente nos gnglios linfticos, rins, bao, bexiga e laringe,
enfartos ou hematomas, especialmente no bao,
lceras em boto no clon, designadamente perto da juno leo-cecal, nos casos crnicos;

b) Dados epidemiolgicos. Os principais dados epidemiolgicos a ponderar so os seguintes:

apurar se os sunos estiveram em contacto directo ou indirecto com uma explorao suincola comprovadamente
afectada pela peste suna clssica,
apurar se uma explorao forneceu sunos que subsequentemente se comprovou estarem infectados com a peste
suna clssica,
apurar se as porcas foram artificialmente inseminadas com smen proveniente de uma fonte suspeita,
L 39/76 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

apurar se houve contacto directo ou indirecto com sunos selvagens de uma populao com peste suna clssica,
apurar se os sunos so mantidos ao ar livre numa regio em que os sunos selvagens esto infectados pelo vrus da
peste suna clssica,
apurar se os sunos foram alimentados com lavaduras e se se suspeita de que tais lavaduras no foram tratadas por
forma a inactivar o vrus da peste suna clssica,
apurar se pode ter ocorrido exposio (por exemplo, devido s pessoas que entram na explorao ou aos
transportes);

c) Dados relacionados com os resultados dos testes serolgicos. Os principais dados laboratoriais a ponderar so os
seguintes:
reaco serolgica causada por infeco inaparente com o vrus da peste suna clssica ou por vacinao (1),
reaco cruzada entre os anticorpos contra o vrus da peste suna clssica e os contra outros pestivrus (2),
deteco de animais reactivos (3).

CAPTULO IV

Mtodos de verificao e amostragem

A. Directrizes e procedimentos relativos ao exame clnico e amostragem em sunos de exploraes suspeitas

1. Os Estados-Membros asseguraro a execuo nas exploraes suspeitas dos exames clnicos, da amostragem e dos
exames laboratoriais adequados para a confirmao ou excluso da peste suna clssica, em conformidade com as
directrizes e procedimentos estabelecidos nos pontos 2 a 7 infra.

Independentemente da adopo na explorao em questo das medidas referidas no n.o 2 do artigo 4.o da Directiva
2001/89/CE, tais directrizes e procedimentos aplicar-se-o igualmente em casos de doena sempre que a peste
suna clssica seja considerada no mbito do diagnstico diferencial. o que sucede mesmo quando os sinais
clnicos e a situao epidemiolgica da doena observada em sunos sugerem uma probabilidade muito reduzida de
ocorrncia de peste suna clssica.

Em todos os outros casos, sempre que se suspeite da infeco pelo vrus da peste suna clssica de um ou mais
sunos, sero adoptadas na explorao suspeita em questo as medidas referidas no n.o 2 do artigo 4.o da Directiva
2001/89/CE.

Em caso de suspeita de peste suna clssica em sunos presentes num matadouro ou meio de transporte,
aplicar-se-o, mutatis mutandis, as directrizes e procedimentos estabelecidos nos pontos 2 a 7 infra.

2. Quando um veterinrio oficial visita uma explorao suspeita para confirmar ou excluir peste suna clssica:
deve proceder-se verificao dos registos de produo e de sade da explorao, caso os haja,
deve efectuar-se uma inspeco de todas as subunidades da explorao, a fim de seleccionar os sunos que vo
ser sujeitos a exame clnico.

O exame clnico deve incluir a medio da temperatura corporal e deve abranger sobretudo os seguintes sunos ou
grupos de sunos:
sunos doentes ou anorxicos,
sunos que recuperaram recentemente de uma situao de doena,
sunos recentemente introduzidos provenientes de focos confirmados ou de outras fontes suspeitas,
sunos mantidos em subunidades recentemente visitadas por pessoas externas que estiveram em contacto
estreito recente com sunos suspeitos ou infectados pela peste suna clssica ou em relao aos quais tenham
sido identificados contactos de alto risco que constituam uma fonte potencial do vrus da peste suna clssica,
sunos que foram j objecto de amostragem e de testes serolgicos da peste suna clssica, caso os resultados de
tais testes no permitam excluir peste suna clssica, e sunos em contacto.

(1) Se os sunos tiverem sido vacinados contra a peste suna clssica com uma vacina convencional, podem encontrar-se seropositivos
apenas devido vacina ou em consequncia de uma infeco inaparente dos animais vacinados.
(2) Em certas circunstncias, at 10 % dos sunos de uma dada explorao podem apresentar anticorpos contra pestivrus de ruminantes
que causam a diarreia vrica bovina e a border disease. Tal facto pode verificar-se quando os sunos se encontram em contacto
directo com bovinos ou ovinos infectados pelo vrus da BVD ou da BD, ou quando os sunos esto em contacto com materiais
contaminados por pestivrus de ruminantes.
(3) Em todos os actuais testes serolgicos da peste suna clssica, uma pequena percentagem dos soros apresenta resultados falsamente
positivos, quer devido falta de especificidade do sistema de teste quer devido aos soros dos animais reactivos.
9.2.2002 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 39/77

Se a inspeco de uma explorao suspeita no revelar a existncia dos sunos ou grupos de sunos acima referidos,
a autoridade competente, sem prejuzo de outras medidas que podem ser aplicadas na explorao em questo em
conformidade com o disposto na Directiva 2001/89/CE e tendo em conta a situao epidemiolgica, deve:
proceder a novos exames na explorao em questo, em conformidade com o disposto no ponto 3 infra; ou
assegurar que sejam obtidas amostras de sangue dos sunos da explorao em questo para testes laboratoriais.
Nesse caso, devem ser utilizados como forma de orientao os mtodos de amostragem estabelecidos nos
pontos 5 e F.2, ou
adoptar ou manter as medidas estabelecidas no n.o 2 do artigo 4.o da Directiva 2001/89/CE, enquanto se
aguardam novas investigaes da explorao em questo, ou
excluir a suspeita de peste suna clssica.

3. Sempre que se remeta para o presente ponto, o exame clnico na explorao em questo deve efectuar-se em sunos
seleccionados aleatoriamente nas subunidades em que tenha sido identificado ou suspeito um risco de introduo
do vrus da peste suna clssica.

O nmero mnimo de sunos a examinar deve permitir a deteco de febre nestas subunidades, com um nvel de
confiana de 95 %, caso a sua prevalncia seja de 10 %.

No entanto, no que respeita:

s porcas reprodutoras, o nmero mnimo de porcas a examinar deve permitir a deteco de febre, com um
nvel de confiana de 95 %, caso a sua prevalncia seja de 5 %,
aos centros de colheita de smen, todos os varrascos devem ser examinados.

4. Se forem detectados sunos mortos ou moribundos numa explorao suspeita, devem ser efectuados exames post
mortem, preferivelmente em pelo menos cinco destes sunos, e, designadamente, em sunos:
que, antes da sua morte, manifestaram, ou manifestam, sinais muito evidentes de doena,
com febre elevada,
mortos recentemente.

Se estes exames no tiverem demonstrado leses sugestivas de peste suna clssica, muito embora, dada a situao
epidemiolgica, sejam consideradas necessrias novas investigaes:
deve proceder-se a um exame clnico, tal como estabelecido no ponto 3, e recolha de amostras de sangue, tal
como estabelecido no ponto 5, na subunidade em que os sunos mortos ou moribundos eram mantidos, e
devem efectuar-se exames post mortem em trs ou quatro sunos em contacto.

Independentemente da existncia ou no de leses sugestivas de peste suna clssica, devem ser obtidas amostras de
rgos e tecidos de sunos sujeitos a exames post mortem para testes virolgicos, em conformidade com o disposto
no ponto B.1 do captulo V. Estas amostras devem preferivelmente ser colhidas em sunos recentemente mortos.

Caso sejam efectuados exames post mortem, a autoridade competente deve assegurar que:
sejam tomadas as precaues e medidas de higiene necessrias para evitar a propagao da doena, e
que os sunos moribundos sejam abatidos de forma humana, em conformidade com o disposto na Directiva
93/119/CEE do Conselho.

5. Se numa explorao suspeita forem detectados mais sinais clnicos ou leses sugestivos de peste suna clssica e a
autoridade competente considerar que estes dados so insuficientes para confirmar um surto de peste suna clssica,
no sendo, portanto, necessrios, testes laboratoriais, devem ser obtidas amostras de sangue para testes laborato-
riais dos sunos suspeitos e de outros sunos em todas as subunidades em que os sunos suspeitos sejam mantidos,
em conformidade com os procedimentos adiante estabelecidos.

O nmero mnimo de amostras a colher para os testes serolgicos deve permitir a deteco de uma seroprevalncia
de 10 % com um nvel de confiana de 95 % na subunidade em questo.

No entanto, no que respeita:

s porcas reprodutoras, o nmero mnimo de porcas em so colhidas amostras deve permitir a deteco de
uma seroprevalncia de 5 % com um nvel de confiana de 95 % (1),
aos centros de colheita de smen, devem ser colhidas amostras de sangue em todos os varrascos.

O nmero de amostras a obter com vista aos testes virolgicos deve estar em conformidade com as instrues da
autoridade competente, que deve atender ao leque de testes disponveis, sensibilidade dos testes laboratoriais que
sero utilizados e situao epidemiolgica.

(1) Em certos casos, como nas situaes em que se suspeita de peste suna clssica numa explorao com um nmero limitado de
sunos jovens, a percentagem de porcas infectadas pode ser muito reduzida. Nestes casos, a amostragem deve incidir sobre um
nmero mais elevado de porcas.
L 39/78 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

6. Se a suspeita de peste suna clssica na explorao em questo estiver relacionada com os resultados de testes
serolgicos j efectuados, para alm da colheita de amostras de sangue nos sunos referidos no ponto 2, quinto
travesso do segundo pargrafo, devem ser utilizados os seguintes procedimentos:

a) Se os sunos seropositivos forem porcas prenhes, algumas delas, preferivelmente pelo menos trs, devem ser
abatidas e sujeitas a um exame post mortem. Antes do abate, deve ser colhida uma amostra de sangue com vista a
novos testes serolgicos. Os fetos sero sujeitos a uma pesquisa do vrus da peste suna clssica, ou do antignio
ou do genoma desse mesmo vrus, em conformidade com o disposto no captulo VI, a fim de detectar infeco
intra-uterina;

b) Se os sunos seropositivos forem porcas com leites amamentados, devem ser colhidas amostras de sangue de
todos os leites, que devem ser sujeitas a uma pesquisa do vrus da peste suna clssica, ou do antignio ou do
genoma desse mesmo vrus, tal como referido no captulo VI. Devem ser igualmente obtidas amostras de sangue
das porcas, com vista a novos testes serolgicos.

7. Se, aps a execuo do exame numa explorao suspeita, no forem detectados sinais clnicos nem leses
sugestivos de peste suna clssica, muito embora a autoridade competente considere necessria a execuo de novos
testes laboratoriais para excluir a peste suna clssica, utilizar-se-o a ttulo de orientao os mtodos de
amostragem referidos no ponto 5.

B. Mtodos de amostragem nas exploraes caso sejam abatidos sunos aps a confirmao da doena

1. Para que possa ser determinado o modo de introduo do vrus da peste suna clssica na explorao infectada,
bem como o perodo de tempo aps a sua introduo, caso os sunos de uma explorao sejam abatidos aps a
confirmao de um surto em conformidade com o n.o 1, alnea a), do artigo 5.o da Directiva 2001/89/CE, aquando
do abate dos sunos devem ser obtidas aleatoriamente amostras de sangue para testes serolgicos.

2. O nmero mnimo de sunos em que devem ser colhidas amostras deve permitir a deteco de uma seroprevalncia
de 10 % com um nvel de confiana de 95 % nos sunos de cada uma das subunidades da explorao (1).

Podem tambm ser colhidas amostras para testes virolgicos, em conformidade com as instrues da autoridade
competente, que deve atender ao leque de testes disponveis, sensibilidade dos testes laboratoriais que sero
utilizados e situao epidemiolgica.

3. No entanto, no que respeita aos surtos secundrios, a autoridade competente pode decidir derrogar em relao ao
estabelecido nos pontos 1 e 2 supra e estabelecer mtodos de amostragem ad hoc, tomando em considerao os
dados epidemiolgicos j disponveis sobre a fonte e a via de introduo do vrus na explorao, bem como a
probabilidade de propagao da doena a partir da explorao.

C. Mtodos de amostragem caso os sunos sejam abatidos a ttulo de medida preventiva numa explorao
suspeita

1. Para que a peste suna clssica possa ser confirmada ou excluda e sejam obtidos dados epidemiolgicos adicionais,
caso os sunos sejam abatidos a ttulo de medida preventiva numa explorao suspeita em conformidade com o
disposto no n.o 3, alnea a), do artigo 4.o ou no n.o 2 do artigo 7.o da Directiva 2001/89/CE, devem ser colhidas
amostras de sangue para testes serolgicos, bem como amostras de sangue ou amgdalas para testes virolgicos, em
conformidade com o procedimento estabelecido no ponto 2.

2. A amostragem deve abranger sobretudo:

sunos com sinais ou leses post mortem sugestivos de peste suna clssica, bem como os sunos em contacto
com eles,
outros sunos que possam ter tido contacto perigoso com sunos infectados ou suspeitos, ou que se suspeite
terem sido contaminados com o vrus da peste suna clssica.

As amostras provenientes destes sunos devem ser obtidas em conformidade com as instrues da autoridade
competente, que deve atender situao epidemiolgica. Nesse caso, os mtodos de amostragem estabelecidos nos
segundo, terceiro e quarto pargrafos devem ser utilizados como forma de orientao.

Alm disso, os sunos provenientes de cada uma das subunidades da explorao devem ser objecto de uma recolha
de amostras aleatria (2). Nesse caso, o nmero mnimo de amostras a colher para os testes serolgicos deve
permitir a deteco de uma seroprevalncia de 10 % com um nvel de confiana de 95 % na subunidade em
questo.

(1) No entanto, caso seja aplicada a derrogao prevista no n.o 1 do artigo 6.o da Directiva 2001/89/CE, a amostragem deve abranger
as subunidades da explorao em que os sunos foram abatidos, sem prejuzo da execuo de exames e amostragens adicionais nos
restantes sunos da explorao, que se processaro em conformidade com as instrues da autoridade competente.
( ) No entanto, se a autoridade competente tiver limitado a aplicao do abate preventivo apenas parte da explorao em que foram
2

mantidos os sunos suspeitos de estarem infectados ou contaminados pelo vrus da peste suna clssica, em conformidade com o
disposto no n.o 3, alnea a), do artigo 4.o da Directiva 2001/89/CE, a amostragem deve abranger as subunidades da explorao em
que esta medida foi aplicada, sem prejuzo da execuo de exames e da obteno de amostras adicionais nos restantes sunos da
explorao, que se processaro em conformidade com as instrues da autoridade competente.
9.2.2002 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 39/79

No entanto, no que respeita:

s porcas reprodutoras, o nmero mnimo de porcas em que so colhidas amostras deve permitir a deteco de
uma seroprevalncia de 5 % com um nvel de confiana de 95 % (1),
aos centros de colheita de smen, devem ser colhidas amostras de sangue em todos os varrascos.

O tipo de amostras a obter com vista aos testes virolgicos e o teste a utilizar devem estar em conformidade com
as instrues da autoridade competente, que deve atender ao leque de testes disponveis, sensibilidade desses
testes e situao epidemiolgica.

D. Mtodos de verificao e amostragem antes de ser dada a autorizao de transferncia de sunos provenientes
de exploraes situadas em zonas de proteco ou vigilncia, caso estes sunos sejam abatidos ou objecto de
occiso

1. Sem prejuzo do disposto no n.o 1, segundo pargrafo da alnea f), do artigo 11.o da Directiva 2001/89/CE, para
que possa ser concedida autorizao de transferncia de sunos provenientes de exploraes situadas em zonas de
proteco ou vigilncia em conformidade com o disposto no n.o 3 do artigo 10.o da referida directiva, o exame
clnico efectuado por um veterinrio oficial deve:
ser executado no perodo de 24 horas que precede a transferncia dos sunos,
ser feito em conformidade com o procedimento previsto no ponto A.2.

2. No que respeita aos sunos transferidos para outras exploraes, para alm das investigaes a efectuar em
conformidade com o disposto no ponto 1 supra, deve proceder-se ao exame clnico de sunos de cada subunidade
da explorao em que so mantidos os sunos que devem ser transferidos. No que respeita aos sunos com mais de
trs a quatro meses de idade, este exame deve abranger a medio da temperatura de uma certa percentagem dos
mesmos.

O nmero mnimo de sunos a examinar deve permitir a deteco de febre nestas subunidades, com um nvel de
confiana de 95 %, caso a sua prevalncia seja de 10 %.

No entanto, no que respeita:

s porcas reprodutoras, o nmero mnimo de porcas a examinar deve permitir a deteco de febre, com um
nvel de confiana de 95 % na subunidade aonde so mantidas as porcas que vo ser transferidas, caso a sua
prevalncia seja de 5 %.
aos varrascos, devem ser examinados todos os animais que vo ser transferidos.

3. No que respeita aos sunos transferidos para um matadouro, para uma instalao de transformao ou para outros
locais a fim de a serem abatidos ou objecto de occiso, para alm das investigaes a efectuar em conformidade
com o disposto no ponto 1 supra, deve proceder-se ao exame clnico de sunos de todas as subunidades em que so
mantidos os sunos que devem ser transferidos. No que respeita aos sunos com mais de trs a quatro meses de
idade, este exame deve abranger a medio da temperatura de uma certa percentagem dos mesmos.

O nmero mnimo de sunos a examinar deve permitir a deteco de febre nestas subunidades, com um nvel de
confiana de 95 %, caso a sua prevalncia seja de 20 %.

No entanto, no que respeita s porcas reprodutoras e aos varrascos, o nmero mnimo de sunos a examinar deve
permitir a deteco de febre, com um nvel de confiana de 95 % na subunidade aonde so mantidos os sunos que
vo ser transferidos, caso a sua prevalncia seja de 5 %,

4. Se os sunos referidos no ponto 3 forem abatidos ou objecto de occiso, em todas as subunidades da explorao de
que os sunos foram transferidos devem ser colhidas amostras de sangue para testes serolgicos, ou amostras de
sangue e amgdalas para testes virolgicos.

O nmero mnimo de amostras a examinar deve permitir a deteco de uma seroprevalncia de 10 % com um
nvel de confiana de 95 %.

No entanto, no que respeita s porcas reprodutoras e aos varrascos, o nmero mnimo de sunos em que devem ser
colhidas amostras deve permitir a deteco de uma seroprevalncia ou de uma prevalncia de vrus de 5 %, com
um nvel de confiana de 95 % na subunidade aonde so mantidos esses sunos.

(1) Em certos casos, como quando haja a suspeita de peste suna clssica numa explorao com um nmero limitado de sunos jovens,
a percentagem de porcas infectadas pode ser muito reduzida. Nesses casos, devem ser colhidas amostras num nmero mais elevado
de porcas.
L 39/80 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

O tipo de amostras a obter e o teste a utilizar devem estar em conformidade com as instrues da autoridade
competente, que deve atender ao leque de testes disponveis, sensibilidade desses testes e situao epidemiol-
gica.

5. No entanto, em derrogao do disposto no ponto 4 supra, se forem detectados sinais clnicos ou leses post mortem
sugestivos de peste suna clssica quando os sunos forem abatidos ou objecto de occiso, sero aplicveis as
disposies relativas amostragem estabelecidas no ponto C.

E. Mtodos de verificao e amostragem numa explorao no mbito do repovoamento

1. Se numa explorao forem reintroduzidos sunos em conformidade com o disposto no n.o 2, alneas a) ou b), do
artigo 13.o ou no n.o 8, segundo pargrafo da alnea b), do artigo 19.o da Directiva 2001/89/CE, devem ser
utilizados os seguintes mtodos de amostragem:
no que respeita reintroduo de sunos testemunha, devem ser colhidas aleatoriamente num certo nmero de
sunos amostras de sangue para testes serolgicos que permitam a deteco de uma seroprevalncia de 10 %
com um nvel de confiana de 95 % em cada uma das subunidades da explorao,
no que respeita ao repovoamento total, devem ser colhidas aleatoriamente num certo nmero de sunos
amostras de sangue para testes serolgicos que permitam a deteco de uma seroprevalncia de 20 % com um
nvel de confiana de 95 % em cada uma das subunidades da explorao.

No entanto, no que respeita s porcas reprodutoras e aos varrascos, o nmero de amostras a obter deve permitir
detectar uma seroprevalncia de 10 % com um nvel de confiana de 95 %.

2. Aps a reintroduo dos sunos, a autoridade competente deve assegurar que, em caso de doena ou morte dos
sunos de uma explorao por motivos desconhecidos, os sunos em questo sejam imediatamente testados em
relao peste suna clssica. As presentes disposies aplicar-se-o at que as restries referidas no n.o 2, segundo
pargrafo da alnea a), do artigo 13.o e no n.o 8, segundo pargrafo da alnea b), do artigo 19.o da Directiva
2001/89/CE sejam levantadas na explorao em questo.

F. Mtodos de amostragem em exploraes situadas na zona de proteco, antes do levantamento das restries

1. Para que as medidas referidas no artigo 10.o da Directiva 2001/89/CE possam ser levantadas numa zona de
proteco, necessrio que em todas as exploraes da zona:
seja efectuado um exame clnico em conformidade com os procedimentos estabelecidos nos pontos A.2 e A.3,
sejam colhidas amostras de sangue para testes serolgicos, tal como estabelecido no ponto 2 infra.

2. O nmero mnimo de amostras de sangue a colher deve permitir a deteco de uma seroprevalncia de 10 % com
um nvel de confiana de 95 % nos sunos de cada uma das subunidades da explorao.

No entanto, no que respeita:

s porcas reprodutoras, o nmero mnimo de amostras a colher deve permitir a deteco de uma seropreva-
lncia de 5 % com um nvel de confiana de 95 %,
aos centros de colheita de smen, devem ser colhidas amostras de sangue em todos os varrascos.

G. Mtodos de amostragem em exploraes situadas na zona de vigilncia, antes do levantamento das restries

1. Para que numa zona de vigilncia possam ser levantadas as restries referidas no artigo 11.o da Directiva
2001/89/CE, deve efectuar-se um exame clnico em todas as exploraes da zona, em conformidade com os
procedimentos estabelecidos no ponto A.2.

Alm disso, devem ser colhidas amostras de sangue de sunos para testes serolgicos:
em todas as exploraes em que no sejam mantidos sunos com idades compreendidas entre dois e oito meses,
sempre que a autoridade competente considere que a peste suna clssica pode ter-se propagado silenciosa-
mente s porcas reprodutoras,
em qualquer outra explorao em que a autoridade competente considere necessria uma amostragem,
em todos os centros de colheita de smen.
9.2.2002 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 39/81

2. Sempre que se proceda amostragem de sangue com vista a testes serolgicos em exploraes situadas na zona de
vigilncia, o nmero de amostras de sangue a obter nessas exploraes deve estar em conformidade com o disposto
no ponto F.2. No entanto, se a autoridade competente considerar que a peste suna clssica pode ter sido
propagada silenciosamente s porcas reprodutoras, a amostragem apenas poder efectuar-se nas subunidades em
que estes animais so mantidos.

H. Mtodos de monitorizao e amostragem serolgica em reas em que haja suspeita ou confirmao de peste
suna clssica em sunos selvagens

1. No que respeita monitorizao serolgica de sunos selvagens em reas em que haja suspeita ou confirmao de
peste suna clssica, a dimenso e a rea geogrfica da populao-alvo em que h que obter amostras deve ser
previamente definida, para se determinar o nmero de amostras que devem ser colhidas. A dimenso da amostra
deve ser estabelecida em funo do nmero estimado de animais vivos e no em funo do nmero de animais
abatidos.

2. Se no existirem dados sobre a densidade e a dimenso da populao, a rea geogrfica em que se deve proceder
amostragem deve ser definida tendo em conta a possvel existncia permanente de sunos selvagens e de barreiras
naturais ou artificiais que permitam evitar grandes movimentos contnuos de animais. Se tais circunstncias se no
verificarem, ou se se tratar de grandes zonas, recomenda-se a criao de reas de amostragem com uma superfcie
inferior a 200 km2, em que possam viver habitualmente 400 a 1 000 sunos selvagens.

3. Sem prejuzo do disposto no n.o 2, alnea c), do artigo 15.o da Directiva 2001/89/CE, o nmero mnimo de sunos
em que devem ser colhidas amostras dentro da rea de amostragem definida deve permitir a deteco de uma
seroprevalncia de 5 % com um nvel de confiana de 95 %. Para este efeito, devem ser colhidas amostras em pelo
menos 59 animais em cada rea definida.

Recomenda-se igualmente que:

nas reas em que a presso de caa maior e regular, ou em que se proceda caa selectiva como medida de
controlo da doena, cerca de 50 % dos animais em que so colhidas amostras provenha da classe etria dos trs
meses ao um ano de idade, 35 % da dos um aos dois anos de idade e 15 % dos com mais de dois anos de
idade,
nas reas em que a presso de caa muito reduzida ou nula, sejam obtidas amostras em 32 animais de cada
uma dessas classes etrias,
a amostragem seja efectuada rapidamente, preferivelmente num perodo no superior a um ms,
a idade dos animais em que so colhidas amostras seja determinada com base na ecloso dentria.

4. A recolha de amostras para testes virolgicos em sunos selvagens abatidos ou encontrados mortos deve efectuar-se
em conformidade com o disposto no ponto B.1 do captulo V.

Se for considerada necessria, a monitorizao virolgica dos sunos selvagens abatidos deve ter por objecto
sobretudo os animais com trs meses a um ano de idade.

5. Todas as amostras que devem ser enviadas para o laboratrio devem ser acompanhadas do questionrio referido no
n.o 3, alnea l), do artigo 16.o da Directiva 2001/89/CE.

CAPTULO V

Procedimentos e critrios gerais aplicveis colheita e transporte de amostras

A. Procedimentos e critrios gerais

1. Antes de se proceder amostragem numa explorao suspeita, deve ser elaborado um mapa da explorao e h
que identificar as suas subunidades epidemiolgicas.

2. Sempre que se considere necessria a repetio da amostragem nos sunos, todos os sunos por ela abrangidos
devem dispor de uma marcao especfica, por forma a facilitar tal repetio.

3. Sem prejuzo do disposto no ponto A.5.b do captulo IV, as amostras para testes serolgicos no devem ser
colhidas em leites com idade inferior a oito semanas.

4. Todas as amostras devem ser enviadas para o laboratrio acompanhadas dos formulrios adequados, em conformi-
dade com os requisitos estabelecidos pela autoridade competente. Estes formulrios devem incluir pormenores
sobre a histria dos sunos sujeitos amostragem, bem como a indicao dos sinais clnicos e das leses post
mortem observados.

No que respeita aos sunos mantidos em exploraes, deve ser apresentada informao clara sobre a idade,
categoria e explorao de origem dos sunos sujeitos amostragem. Recomenda-se o registo do local da explorao
em que se encontra cada suno sujeito a amostragem, bem como da marca de identificao nica.
L 39/82 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

B. Recolha de amostras para testes virolgicos

1. Para a deteco do vrus, do antignio ou do genoma da peste suna clssica em sunos mortos ou abatidos, as
amostras mais adequadas so as provenientes dos tecidos das amgdalas, do bao ou do rim. Recomenda-se
igualmente a recolha de duas amostras de outros tecidos linfides, como os gnglios retrofarngeos, parotdeos,
mandibulares ou mesentricos, e de uma amostra do leo. Se se tratar de carcaas autolisadas, prefervel uma
amostra de um osso inteiro ou do esterno.

2. Devem ser colhidas, em conformidade com as instrues da autoridade competente, amostras de sangue coagulado
ou no coagulado de sunos que apresentem febre ou outros sinais de doena.

3. Recomenda-se a execuo de testes virolgicos nos animais doentes. Estes testes so geralmente pouco teis caso
sejam utilizados para monitorizar animais que no apresentem sinais clnicos. No entanto, se o objectivo da
amostragem em larga escala for a deteco do vrus da peste suna clssica na altura em que os sunos se
encontrem em perodo de incubao, as amostras mais adequadas so as que provm das amgdalas.

C. Transporte das amostras

1. Recomenda-se que todas as amostras:

sejam transportadas e armazenadas em contentores estanques,
no sejam congeladas e sejam antes refrigeradas,
sejam enviadas ao laboratrio o mais rapidamente possvel,
sejam mantidas frias numa embalagem com gelo, e no em gelo triturado,
de tecidos ou rgos sejam colocadas num saco de plstico selado e adequadamente rotuladas. Devem ento ser
colocadas em contentores externos maiores e resistentes e almofadadas com material absorvente que permita
evitar a sua deteriorao e absorva lquidos derramados,
se possvel, sejam transportadas directamente para o laboratrio por pessoal competente, por forma a assegurar
o seu transporte rpido e adequado.

2. A parte externa da embalagem deve ter aposto o endereo do laboratrio receptor e conter a seguinte meno bem
visvel: Material anatomopatolgico animal; Perecvel; Frgil; No abrir fora de um laboratrio dedicado peste
suna clssica.

3. O laboratrio que recebe as amostras deve ser informado antecipadamente sobre a data e hora e o modo de
chegada das amostras.

4. No que respeita ao transporte areo de amostras para o Laboratrio Comunitrio de Referncia da peste suna
clssica (1) a partir de Estados-Membros que no a Alemanha ou de pases terceiros, a embalagem deve estar
rotulada de acordo com a regulamentao da IATA.

CAPTULO VI

Princpios e aplicao dos testes virolgicos e avaliao dos respectivos resultados

A. Deteco do antignio vrico

1. Teste de anticorpos fluorescentes (FAT)

O princpio do teste a deteco do antignio vrico em criosseces delgadas de material orgnico proveniente de
sunos suspeitos de estarem infectados pelo vrus da peste suna clssica. O antignio intracelular detectado
atravs da utilizao de anticorpo conjugado com FITC. Os resultados positivos devem ser confirmados atravs da
repetio da colorao com um anticorpo monoclonal especfico.

As amgdalas, o rim, o bao, vrios gnglios linfticos e o leo so exemplo de rgos adequados. No que respeita
aos sunos selvagens, pode igualmente utilizar-se um esfregao da medula ssea, se esses rgos se no encon-
trarem disponveis ou tiverem sido autolisados.

O teste pode ser executado num dia. Dado que as amostras de rgos apenas podem ser obtidas em animais
mortos, a sua utilizao para efeitos de despistagem tem valor limitado. A confiana no resultado do teste pode ser
limitada por uma colorao incerta, sobretudo se no tiver sido adquirida experincia considervel na execuo do
teste ou se os rgos testados estiverem autolisados.

(1) O Laboratrio Comunitrio de Referncia tem uma autorizao ilimitada para receber amostras para fins diagnsticos e isolados do
vrus da peste suna clssica. Antes do transporte, pode ser solicitada a este laboratrio uma cpia da autorizao de importao, a
qual pode ser includa num envelope e colada parte externa da embalagem.
9.2.2002 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 39/83

2. Teste ELISA para a deteco de antignio

O antignio vrico detectado atravs da utilizao de vrias tcnicas ELISA. A sensibilidade do teste ELISA para a
deteco de antignio deve ser suficientemente elevada para que se obtenha um resultado positivo com animais que
apresentem sinais clnicos de peste suna clssica.

Recomenda-se a utilizao de testes ELISA para a deteco de antignio em amostras de animais com sinais clnicos
ou manifestaes anatomopatolgicas da doena. Estes testes no so adequados para o exame de animais
individuais. So exemplo de amostras adequadas os leuccitos, o soro, o sangue no coagulado e as suspenses dos
rgos referidos no ponto 1 provenientes de sunos suspeitos de estarem infectados com o vrus da peste suna
clssica (1).

O teste ELISA pode ser realizado num s dia e pode ser efectuado com equipamento automatizado. A sua
vantagem mais importante a de que, num curto espao de tempo, pode ser processado um elevado nmero de
amostras. Recomenda-se a utilizao de testes ELISA para a deteco de antignio que dem resultados satisfatrios
no material de referncia. No entanto, actualmente, todos os testes ELISA comercializados so menos sensveis do
que o isolamento do vrus numa cultura de clulas e a sua sensibilidade significativamente melhor em amostras
de sangue de leites do que em amostras de sangue de sunos adultos.

B. Isolamento do vrus

1. O isolamento do vrus baseia-se na incubao de material da amostra em culturas de clulas sensveis de origem
porcina. Se existir na amostra, o vrus da peste suna clssica replica-se nessas clulas at se alcanarem quantidades
detectveis por imunocolorao das clulas infectadas com anticorpos conjugados. So necessrios anticorpos
especficos da peste suna clssica para o diagnstico diferencial com outros pestivrus.

2. Os materiais mais adequados para o isolamento do vrus da peste suna clssica so os leuccitos, o plasma ou o
sangue total obtido a partir de amostras de sangue no coagulado ou dos rgos referidos no ponto A.1.

3. O isolamento de vrus melhor adequado para a investigao de amostras de um nmero reduzido de animais,
mais do que para a vigilncia em larga escala. O processo de isolamento do vrus trabalhoso e requer pelo menos
trs dias para que se obtenham resultados. Podem ser necessrias duas outras passagens em culturas de clulas para
que seja detectada uma pequena quantidade de vrus na amostra. Tal facto implica que podem ser necessrios at
10 dias para que se obtenha o resultado final. As amostras autolisadas podem ter efeito citotxico na cultura de
clulas, e, por conseguinte, limitar a sua utilizao.

4. Recomenda-se igualmente o isolamento do vrus casa haja confirmao prvia de peste suna clssica atravs de
outros mtodos. O isolamento deve ser utilizado como teste de referncia para a confirmao de resultados
positivos aps a execuo de testes ELISA para a deteco de antignio, PCR, FAT ou de colorao indirecta por
peroxidase.

Os isolados de vrus da peste suna clssica obtidos desta forma so teis para a caracterizao do vrus,
designadamente para a sua tipagem gentica e para epidemiologia molecular.

5. Todos os isolados de vrus da peste suna clssica provenientes de todos os focos primrios, casos primrios em
sunos selvagens ou casos detectados em matadouros ou meios de transporte devem ser objecto de tipagem
gentica num laboratrio nacional de referncia de um dos Estados-Membros, ou em qualquer outro laboratrio
autorizado pelo Estado-Membro em questo ou pelo Laboratrio Comunitrio de Referncia, em conformidade
com o disposto no ponto E.

Tais isolados de vrus devem ser sempre prontamente enviados para o Laboratrio Comunitrio de Referncia para
recolha do vrus.

C. Deteco do genoma vrico

1. A reaco da polimerase em cadeia (PCR) utilizada para a deteco do genoma vrico em amostras de sangue,
tecidos ou rgos. Pequenos fragmentos de ARN vrico so transcritos para fragmentos de ADN, os quais so
amplificados pela PCR at se alcanarem quantidades detectveis. Dado que este teste apenas detecta uma sequncia
genmica do vrus, a PCR pode ser positiva at mesmo em situaes em que no esteja presente nenhum vrus
infeccioso (por exemplo, em tecidos autolisados ou em amostras de sunos convalescentes).

2. A PCR pode ser utilizada num pequeno nmero de amostras cuidadosamente seleccionadas de animais suspeitos
ou de material proveniente de fetos abortados. Nas carcaas de varrascos selvagens, poderia ser o mtodo de
primeira escolha, caso o material estivesse autolisado e o isolamento do vrus j no fosse possvel devido
citotoxicidade.

3. O material de amostragem adequado para a PCR diagnstica so os rgos descritos em relao ao isolamento de
vrus ou ao sangue no coagulado.

(1) Encontram-se disponveis comercialmente vrios testes ELISA para a deteco do antignio da peste suna clssica, os quais so
validados com vrios tipos de amostras.
L 39/84 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

4. A PCR pode ser executada em 48 horas. Requer equipamento laboratorial adequado, instalaes separadas e pessoal
habilitado. Uma das suas vantagens o facto de as partculas vricas infecciosas no necessitarem de ser replicadas
no laboratrio. Este mtodo altamente sensvel, embora muito sujeito a contaminao, a qual pode conduzir a
falsos resultados positivos. Por conseguinte, so essenciais procedimentos rigorosos de controlo da qualidade.
Alguns mtodos so especficos dos pestivrus, e no da peste suna clssica, pelo que requerem testes confirmat-
rios adicionais, como a sequenciao do produto da PCR.

D. Avaliao dos resultados dos testes virolgicos

1. Os testes virolgicos so essenciais para a confirmao da peste suna clssica.

O isolamento do vrus deve ser considerado o teste virolgico de referncia e deve ser utilizado como teste
confirmatrio sempre que necessrio. A sua utilizao particularmente recomendada em caso de resultados
positivos dos testes FAT, ELISA ou PCR no associados existncia de sinais clnicos ou de leses da doena, bem
como em qualquer outro caso de dvida.

No entanto, um foco primrio de peste suna clssica pode ser confirmado se forem detectados sinais clnicos ou
leses da doena nos sunos em questo e se pelo menos dois testes de deteco do antignio ou do genoma
apresentarem resultados positivos.

Um foco secundrio de peste suna clssica pode ser confirmado se, para alm da relao epidemiolgica com um
foco ou caso confirmado, forem detectados sinais clnicos ou leses da doena nos sunos em questo e se um teste
de deteco do antignio ou do genoma apresentar resultados positivos.

Os casos primrios de peste suna clssica em sunos selvagens podem ser confirmados atravs do isolamento do
vrus ou de resultados positivos em pelo menos dois testes de deteco do antignio ou do genoma. Um resultado
positivo num teste de deteco do antignio ou do genoma pode confirmar novos casos de peste suna clssica em
sunos selvagens que tenham uma relao epidemiolgica com casos anteriormente confirmados.

2. Um resultado positivo em relao peste suna clssica num teste de deteco do antignio ou do genoma requer
que o teste em questo seja efectuado utilizando-se anticorpos ou iniciadores especficos do vrus da peste suna
clssica. Se no for especfico da peste suna clssica e for apenas especfico dos pestivrus, o teste utilizado deve ser
repetido utilizando-se reagentes especficos da peste suna clssica.

E. Tipagem gentica dos isolados da peste suna clssica

1. A tipagem gentica dos isolados de vrus da peste suna clssica faz-se atravs da determinao da sequncia de
nucletidos de partes do genoma vrico, designadamente de partes especficas da regio codificadora 5' e/ou do
gene da glicoprotena E2. A similaridade destas sequncias com as j obtidas em isolados de vrus pode indicar se
os focos da doena so causados por estirpes novas ou j conhecidas. Podem assim ser confirmadas ou refutadas
hipteses sobre vias de transmisso formuladas com base na traabilidade epidemiolgica.

A tipagem gentica dos isolados de vrus da peste suna clssica muito importante para a determinao da origem
da doena. No entanto, a relao estreita entre os vrus obtidos em focos diferentes no constitui uma prova
definitiva de uma relao epidemiolgica directa.

2. Se a tipagem de vrus no puder efectuar-se rapidamente num laboratrio nacional ou em qualquer outro
laboratrio autorizado a diagnosticar a peste suna clssica, a amostra original ou o isolado de vrus devem ser
enviados para o Laboratrio Comunitrio de Referncia, a fim de que sejam tipados o mais rapidamente possvel.

Os dados relativos tipagem e sequenciao dos isolados de vrus da peste suna clssica de que dispem os
laboratrios autorizados a diagnosticar a peste suna clssica devem ser enviados ao Laboratrio Comunitrio de
Referncia, para que essa informao seja introduzida na base de dados mantida por este laboratrio.

A informao constante da base de dados deve encontrar-se disposio de todos os Laboratrios Nacionais de
Referncia dos Estados-Membros. No entanto, para efeitos de publicao em revistas cientficas, caso tal seja
solicitado pelo laboratrio em questo, o Laboratrio Comunitrio de Referncia deve assegurar a confidencialidade
de tais dados at que estes se encontrem publicados.

CAPTULO VII

Princpios e aplicao dos testes serolgicos e avaliao dos respectivos resultados

A. Princpios bsicos e valor diagnstico

1. Nos sunos infectados pela peste suna clssica, os anticorpos so geralmente detectveis em amostras de soro a
partir das duas a trs semanas aps a infeco. Nos sunos que recuperaram da doena, podem ser detectados
durante bastantes anos, ou at mesmo at ao resto da vida, anticorpos de neutralizao protectores. Os anticorpos
so tambm detectados esporadicamente na fase terminal dos animais com doena mortal. Nalguns sunos com a
forma crnica da peste suna clssica, podem ser detectados anticorpos durante alguns dias, na parte final do
primeiro ms aps a infeco.
9.2.2002 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 39/85

Os sunos infectados in utero podem ser imunotolerantes em relao ao vrus da peste suna clssica homlogo, no
produzindo assim anticorpos especficos. No entanto, durante os primeiros dias de vida, podem ser detectados
anticorpos de origem materna. A semivida dos anticorpos maternos nos leites saudveis no virmicos de cerca
de duas semanas. Caso estejam presentes em leites com mais de trs meses de idade, muito improvvel que os
anticorpos da peste suna clssica sejam de origem materna.

2. A deteco de anticorpos contra o vrus da peste suna clssica em amostras de soro ou plasma ajuda ao
estabelecimento do diagnstico de peste suna clssica em exploraes suspeitas, ao estabelecimento da durao da
infeco num foco confirmado e monitorizao e vigilncia. No entanto, os testes serolgicos tm pouco valor na
deteco de peste suna clssica em caso de infeco recente numa explorao.

A existncia de alguns sunos seropositivos com um ttulo de neutralizao baixo pode ser indicativa de infeco
recente (duas a quatro semanas). A presena de muitos sunos com um elevado ttulo de neutralizao sugere que o
vrus foi introduzido na explorao h j pelo menos um ms. A localizao dos sunos seropositivos na
explorao pode fornecer dados valiosos sobre o modo como o vrus da peste suna clssica penetrou na
explorao.

No entanto, deve proceder-se avaliao rigorosa dos resultados dos testes serolgicos, tendo em conta todos os
dados clnicos, virolgicos e epidemiolgicos, no mbito do inqurito efectuado em caso de suspeita ou confir-
mao de peste suna clssica, em conformidade com o disposto no artigo 8.o da Directiva 2001/89/CE.

B. Testes serolgicos recomendados

1. Os testes de neutralizao do vrus (VNT) e ELISA so os testes de primeira escolha no diagnstico serolgico da
peste suna clssica.

A qualidade e eficcia do diagnstico serolgico efectuado pelos laboratrios nacionais deve ser periodicamente
verificada no mbito do teste comparativo entre laboratrios organizado regularmente pelo Laboratrio Comuni-
trio de Referncia.

2. O VNT baseia-se na determinao da actividade de neutralizao do vrus dos anticorpos presentes numa amostra
srica, expressa em termos do parmetro de neutralizao a 50 %.

Uma quantidade constante de vrus da peste suna clssica incubada a 37 C com soro diludo. Para efeitos de
despistagem, os soros so inicialmente diludos a 1/10. Se for necessria uma titulao completa, podem
preparar-se diluies duplas do soro, comeando-se com uma diluio de 1/2 ou 1/5. Mistura-se cada diluio com
igual volume de uma suspenso vrica com 100 doses infecciosas (TCID 50).

Aps a incubao, a mistura inoculada em culturas de clulas, as quais so incubadas durante 3 a 5 dias. Aps
este perodo de incubao, as culturas so fixadas e um sistema de marcao imunolgica detecta qualquer eventual
replicao vrica nas clulas infectadas. Deve utilizar-se o ensaio de anticorpo de neutralizao ligado peroxidase
(NPLA) ou de neutralizao-imunofluorescncia (NIF).

Os resultados do VNT so expressos em termos do inverso da diluio srica inicial em que metade das culturas de
clulas inoculadas (parmetro dos 50 %) no apresenta replicao vrica (inexistncia de marcao especfica).
estimado um ponto situado entre os dois nveis de diluio. O sistema de diluio final baseia-se na diluio real do
soro durante a reaco de neutralizao, ou seja, aps a adio de vrus, e antes da adio da suspenso celular.

3. O VNT o teste mais sensvel e fidedigno para a deteco de anticorpos contra o vrus da peste suna clssica. Por
conseguinte, recomenda-se quer para o exame serolgico de um animal individual quer para o de um efectivo. No
entanto, este teste pode detectar anticorpos de neutralizao cruzados especficos das infeces de sunos com
pestivrus de ruminantes.

Na utilizao do VNT para a deteco de anticorpos contra o vrus da BVD e da BD, seguem-se os mesmos
princpios j referidos, sendo este exame utilizado para o diagnstico diferencial de peste suna clssica.

4. As estirpes de pestivrus a utilizar nos testes de neutralizao devem estar em conformidade com as recomendaes
do Laboratrio Comunitrio de Referncia.

5. Foram desenvolvidas vrias tcnicas ELISA com anticorpos monoclonais especficos, as quais so de dois tipos:
testes ELISA competitivos ou bloqueadores e testes ELISA no competitivos.

Os testes ELISA competitivos ou bloqueadores assentam geralmente em anticorpos monoclonais. Se a amostra

srica contiver anticorpos contra o vrus clssico, inibida a ligao de um anticorpo monoclonal especfico
conjugado com peroxidase a um antignio vrico, o que conduz a uma reduo do sinal.

Nos testes ELISA no competitivos, a ligao dos anticorpos sricos ao antignio directamente medida atravs da
utilizao de anticorpos anti-suno conjugados com peroxidase.
L 39/86 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

6. Os laboratrios nacionais devem proceder periodicamente ao controlo de qualidade da sensibilidade e especifici-

dade de cada lote de ELISA atravs do recurso ao painel de soros de referncia fornecido pelo Laboratrio
Comunitrio de Referncia. Este painel incluir:
soro de sunos na fase precoce da infeco por vrus da peste suna clssica (menos de 21 dias aps a infeco),
soro de sunos convalescentes (mais de 21 dias aps a infeco),
soro de sunos infectados por pestivrus de ruminantes.

Os testes ELISA que devem ser utilizados no diagnstico serolgico da peste suna clssica devem poder reconhecer
todos os soros de referncia dos sunos convalescentes. Todos os resultados obtidos com os soros de referncia
devem ser reprodutveis. Recomenda-se igualmente que detectem todos os soros positivos da fase inicial e que
apresentem um mnimo de reaces cruzadas com o soro de sunos infectados com pestivrus de ruminantes.

Os resultados obtidos com os soros de referncia de sunos na fase inicial da infeco do uma indicao da
sensibilidade do teste ELISA.

7. A sensibilidade do teste ELISA considerada inferior do teste VNT e recomenda-se que aquele apenas seja
utilizado como teste de despistagem de efectivos. No entanto, os testes ELISA requerem instalaes menos
especializadas e podem ser executados mais rapidamente do que o teste VNT, graas existncia de sistemas
automatizados.

Os testes ELISA devem assegurar a identificao de todas as infeces com o vrus da peste suna clssica na fase de
convalescena, e, tanto quanto possvel, no devem sofrer interferncias de anticorpos cruzados contra os pestivrus
de ruminantes.

C. Interpretao dos resultados serolgicos e diagnstico diferencial com infeces devidas a pestivrus de
ruminantes (BVDV e BDV)

1. Sem prejuzo do disposto no n.o 3, alnea a), do artigo 4.o e no n.o 2 do artigo 7.o da Directiva 2001/89/CE, caso
seja detectado um ttulo de neutralizao do vrus da peste suna clssica maior ou igual a 10 ND50 em amostras de
soro colhidas em um ou mais sunos, ou um resultado positivo no teste ELISA em amostras de soro de um grupo
de sunos, devem ser imediatamente aplicadas, ou devem continuar a ser aplicadas na explorao em questo, as
medidas referidas no n.o 2 do artigo 4.o da Directiva 2001/89/CE.

As amostras j colhidas nessa explorao devem ser sujeitas a um teste VNT, atravs da titulao comparativa de
anticorpos de neutralizao contra o vrus da peste suna clssica e contra pestivrus de ruminantes.

2. Se os testes comparativos demonstrarem a existncia de anticorpos contra pestivrus de ruminantes e a ausncia, ou

ttulos claramente reduzidos (inferiores a trs vezes) de anticorpo contra o vrus da peste suna clssica, h que
excluir a suspeita de peste suna clssica, a menos que existam outros motivos que justifiquem a prossecuo da
aplicao das medidas referidas no n.o 2 do artigo 4.o da Directiva 2001/89/CE na explorao em questo.

3. Se os testes comparativos revelarem em mais do que um suno um ttulo de neutralizao do vrus maior ou igual a
10 ND50 e se este ttulo for maior ou igual aos ttulos de outros pestivrus, a autoridade competente deve assegurar
a confirmao da peste suna clssica, desde que se disponha de dados epidemiolgicos sugestivos da doena na
explorao em questo.

4. Sem prejuzo do disposto no n.o 3 do artigo 4.o da Directiva 2001/89/CE, se no houver dados epidemiolgicos
sugestivos da doena, ou se os resultados dos testes anteriores forem inconclusivos, a autoridade competente
assegurar que, na explorao em questo:
as medidas referidas no n.o 2 do artigo 4.o da Deciso 2001/89/CE continuem a ser aplicadas,
se proceda o mais rapidamente possvel a novos exames com vista confirmao ou excluso da peste suna
clssica, em conformidade com o disposto no captulo IV.

5. No entanto, se as verificaes e testes adicionais referidos no ponto 4 no permitirem a excluso da peste suna
clssica, proceder-se- a uma nova colheita de amostras de sangue na explorao, pelo menos duas semanas aps
as verificaes anteriores.

Esta nova amostragem deve abranger os sunos a quem foram j colhidas amostras e que foram j testados, para
que se possam efectuar testes serolgicos comparativos em relao s amostras anteriormente colhidas, por forma a
detectar uma eventual seroconverso no que respeita ao vrus da peste suna clssica ou aos pestivrus dos
ruminantes.

Se estas verificaes e testes adicionais no permitirem a confirmao da peste suna clssica, podero ser
levantadas as medidas referidas no artigo 4.o da Directiva 2001/89/CE.

CAPTULO VIII

Testes discriminativos em caso de vacinao de emergncia

No se encontram disponveis testes discriminativos adequados que permitam distinguir sunos vacinados de sunos
naturalmente infectados pelo vrus da peste suna clssica.
9.2.2002 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias L 39/87

CAPTULO IX

Requisitos mnimos de segurana no que respeita aos laboratrios da peste suna clssica

1. Os requisitos mnimos estabelecidos no quadro 1 devem ser observados por todos os laboratrios que manuseiem o
vrus da peste suna clssica, at mesmo em quantidades reduzidas, tal como requerido pelos testes de isolamento e
neutralizao do vrus. No entanto, os exames post mortem e o processamento de tecidos com vista ao teste FAT e
serologia com antignio inactivado podem ser efectuados com um grau de conteno menos importante, que envolve
medidas bsicas de higiene e desinfeco subsequente, com eliminao segura dos tecidos e soros.

2. Os requisitos adicionais constantes do quadro 1 devem ser observados por todos os laboratrios envolvidos em
procedimentos que envolvam uma forte multiplicao do vrus.

3. Os requisitos constantes do quadro 2 devem ser observados por todos os laboratrios em que se proceda a
experincias veterinrias com o vrus da peste suna clssica.

4. Em todo o caso, todas as existncias do vrus da peste suna clssica devem ser mantidas em armazenamento seguro,
ultracongeladas ou liofilizadas. Recomenda-se que os congeladores e os frigorficos apenas sejam utilizados para o
vrus da peste suna clssica ou para outros materiais no relacionados com o diagnstico da peste suna clssica.
Todas as ampolas individuais devem ser claramente rotuladas e devem ser mantidos registos pormenorizados das
existncias de vrus, bem como das datas e resultados das verificaes de controlo da qualidade. Devem igualmente ser
mantidos registos dos vrus adicionados s existncias, com indicao da fonte, e dos vrus enviados para outros
laboratrios.

5. Recomenda-se que a unidade biossegura destinada ao trabalho com o vrus da peste suna clssica seja apoiada por
reas em que o vrus da peste suna clssica no seja manuseado no que respeita preparao de material de vidro e
de meios, manuteno e preparao de culturas de clulas no infectadas, ao processamento de soros e aos testes
serolgicos (excepto no que respeita aos mtodos que utilizem o vrus vivo da peste suna clssica) e prestao de
apoio administrativo e de secretariado.

Quadro 1

Princpios de conteno biolgica adequados para os laboratrios de diagnstico

Requisitos adicionais Requisitos mnimos

Ambiente geral Presso atmosfrica normal Presso atmosfrica normal

Filtrao HEPA dupla do ar extrado Salas dedicadas apenas a procedimentos bem
Salas especficas, utilizadas exclusivamente definidos
para procedimentos de diagnstico da
peste suna clssica

Vesturio de laboratrio Muda completa de roupa entrada
Vesturio de laboratrio utilizado apenas
na unidade do vrus da peste suna clssica
Luvas descartveis para todas as manipula-
es de materiais infectados
Vesturio esterilizado antes de ser remo-
vido da unidade, ou lavado dentro da
unidade
Vesturio externo especfico utilizado apenas
na unidade do vrus da peste suna clssica
Luvas descartveis para todas as manipula-
es de materiais infectados
Vesturio esterilizado antes de ser removido
da unidade, ou lavado dentro da unidade

Controlo do pessoal Entrada na unidade apenas autorizada a
pessoal formado designado
Lavagem e desinfeco das mos sada da
unidade
Pessoal no autorizado a aproximar-se de
sunos dentro do prazo de 48 horas aps a
sada da unidade
Entrada na unidade apenas autorizada a
pessoal formado designado
Lavagem e desinfeco das mos sada da
unidade
Pessoal no autorizado a aproximar-se de
sunos dentro do prazo de 48 horas aps a
sada da unidade

Equipamento Cmara de segurana biolgica (classe I ou II) utilizada para todas as manipulaes de
vrus vivo. A cmara deve dispor de filtrao HEPA dupla do ar extrado.
Na sala laboratorial dedicada, deve encontrar-se disponvel todo o equipamento necessrio
para procedimentos laboratoriais.
L 39/88 PT Jornal Oficial das Comunidades Europeias 9.2.2002

Quadro 2
Requisitos de biossegurana das salas de animais experimentais

Requisitos

Ambiente geral Ventilao controlada por presso negativa.

Filtrao HEPA dupla do ar extrado.
Meios para fumigao/desinfeco completa no final da experincia.
Todos os efluentes tratados por forma a inactivar o virus da peste suna clssica (calor ou
agentes qumicos).

Vesturio de laboratrio Muda completa de roupa entrada.

Luvas descartveis para todas as manipulaes.
Vesturio esterilizado antes de ser removido da unidade, ou lavado dentro da unidade.

Controlo do pessoal Entrada na unidade apenas autorizada a pessoal formado designado.

Banho de chuveiro completo sada da unidade.
Pessoal no autorizado a aproximar-se de sunos dentro do prazo de 48 horas aps a sada
da unidade.

Equipamento Deve encontrar-se disponvel na unidade todo o equipamento necessrio para procedi-
mentos com animais.
Todos os materiais devem ser esterilizados saida da unidade, ou, caso se trate de amostras
provenientes da animais, devem ser inseridos num contentor estanque com um duplo
invlucro cuja superfcie seja desinfectada com vista ao transporte para o laboratrio da
peste suna clssica.

Animais Todos os animais devem ser abatidos antes de sarem da unidade; os exames post mortem
devem ser efectuados na rea biossegura e as carcaas devem ser incineradas aps o fim dos
exames.