Tema 10.1 Tema 10.

LOS LEUCOCITOS. MÉTODOS DE ESTUDIO

Tema 10.1 GENERALES Y COMPLEMENTARIOS

LOS LEUCOCITOS. Hematopoyesis

MÉTODOS DE ESTUDIO Principios generales para el examen morfológico de
GENERALES Y médula ósea y la realización del mielograma

COMPLEMENTARIOS Semiología de los leucocitos de sangre periférica.

Normalidad
Anomalías más frecuentes
Bioquí
Bioquímica Clí
Clínica i Hematologia Métodos diagnósticos en hematología

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Tema 10.1 Tema 10.1

MEDULA ÓSEA SANGRE
Hematopoyesis PERIFERICA

La hematopoyesis es el mecanismo fisiológico responsable

de la formación continuada de los distintos elementos formes
sanguíneos, que los mantiene dentro de la normalidad en la
sangre periférica

En el adulto la hematopoyesis se lleva a cabo en la médula

ósea, localizada en el interior de los huesos planos (cráneo,
esternón, sacro, pelvis, etc)

En el hombre existe una célula madre pluripotente con

capacidad de proliferación, diferenciación y autorrenovación:
CFU-GEMM

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1
 Tema 10.1 Tema 10.1

SERIE GRANULOPOYÉTICA NORMAL EN

MÉDULA ÓSEA

Principios generales para el examen

morfológico de médula ósea y la realización
del mielograma

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Tema 10.1 Tema 10.1

SERIE MONOCÍTICA NORMAL

EN MÉDULA ÓSEA
SERIE LINFOIDE

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 Tema 10.1 DISTRIBUCIÓN DE LOS ANTÍGENOS DE SUPERFICIE EN LAS Tema 10.1
CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS EN SU DIFERENCIACIÓN

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Tema 10.1 Tema 10.1

MÉDULA ÓSEA
MIELOGRAMA
Relación gránulo / eritroide : 3 / 1
Serie Tipo de célula Proporción
Granulocítica Mieloblastos
Promielocitos Semiología de los leucocitos de sangre
Neutrófila Mielocitos
Metamielocitos
Bandas 60 % periférica.
Polinucleares

Eritroblástica Proeritroblastos Normalidad

Eritroblastos basófilos
Eritroblastos policromatófilo 25%
Eritroblasto ortocromático

Otros Eosinófilos
Basófilos
Linfocitos 15%
Plasmáticas
Monocitos
Histiocitos /macrófagos Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

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 Tema 10.1 Tema 10.1

INFORME AUTOMATIZADO DE UN HEMOGRAMA

SERIE BLANCA

LEUCOCITOS

Recuento del número total de leucocitos por unidad de

volumen

FÓRMULA LEUCOCÍTICA no patológica

Expresión de las cinco poblaciones normales en percentage

i valor absoluto.

Se realiza por análisis morfológico o por autoanalizador

FÓRMULA LEUCOCÍTICA patológica

Extensión de sangre periférica para valorar morfología

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Tema 10.1 Tema 10.1

Hemograma. Representación gráfica de las poblaciones

Poblaciones leucocitarias

EOSINOFILOS

NEUTRÓFILOS

Volumen
Tamaño del
núcleo
NEUTROFILOS Forma del núcleo
MONOS
Regularidad del
citoplasma
El espesor de las
imágenes expresa la
LINFOCITOS cantidad de células
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 SERIE GRANULOPOYÉTICA: Tema 10.1 Tema 10.1

NEUTRÓFILOS.
PRODUCCIÓN Y MADURACIÓN

MÉDULA ÓSEA
Proceso de proliferación y maduración (acelerado
en caso de infección)
Almacenamiento
BASÓ
BASÓFILO
SANGRE
EOSINÓFILO
Vida media 6 horas

TEJIDOS
Emigran a pulmón, tubo digestivo y bazo
Vida media alrededor de 2 días
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SERIE GRANULOPOYÉTICA: Tema 10.1 Tema 10.1

EOSINÓFILOS Y BASÓFILOS.
CARACTERÍSTICAS

EOSINÓFILO
Proceso de maduración similar al de los neutrófilos
Vida media en sangre 16 horas
Los gránulos contienen peroxidasa, catalasa y flavoproteina
(peroxisomas): oxidación de lípidos
Menor actividad antibacteriana que los neutrófilos
Papel en la defensa contra helmintos

BASÓFILO
Los gránulos contienen glisosaminoglicanos
Reacciones de hipersensibilidad cutánea, bronquial, etc.
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 Tema 10.1 Tema 10.1

SERIE GRANULOPOYÉTICA:
MONOCITOS.
SERIE LINFOIDE
CARACTERÍSTICAS
Linfocito
MONOCITO

Funciones quimiotáctica y de fagocitosis

Secreción de citoquinas (IL-1, TNF, interferón) y
factores de crecimiento
Mediadores en procesos de inflamación y defensa

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SERIE LINFOIDE Tema 10.1 Tema 10.1

CARACTERÍSTICAS LINFOCITOS T/ NK LINFOCITOS B

Origen Célula madre pluripotente Célula madre pluripotente
SERIE LINFOIDE
hematopoyética linfoide hematopoyética linfoide
Adquisición competencia Timo Médula ósea
Linfocito grande granulado
Inmunológica
Longevidad Larga (habitualmente) Corta (habitualmente)
Porcentaje en sangre periférica 65-75% 10-20%

Función primordial Inmunidad celular

Características morfológicas:
-Tamaño
-Gránulos citoplasmáticos
-Granulación azurófila
ƒ Gran tamaño y ubicación
paranuclear:
ƒ Menor tamaño y localización
múltiple:
-Cromatina
-Basofilia citoplasmática
Función colaboradora (T4)
Función supresora (T8)
Natural Killer (NK)
Pequeño o mediano
Presentes
Linfocito T colaborador (T4)
Linfocito T supresor (T8)
Densa
Relativamente acentuada
Síntesis de anticuerpos
Mediano o grande
Ocasionales
Menos densa
Menor
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 Tema 10.1 Tema 10.1
RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
VALORES DE REFERENCIA EN NIÑOS
VALORES DE REFERENCIA EN ADULTOS
Valor absoluto ( x 109 L)
Valor Primer 2a6 6 a 14
Diámetro Valor relativo
absoluto
( μm ) (%) año años años
( x 109 L)
Leucocitos 6 – 16 6 - 12 4,5 - 12
Leucocitos 4 - 10
Neutrófilos 1,5 – 8,0 2,0 - 7,5 2,0 – 8,0
Neutrófilos 10-14 1,7 - 7,0 45– 70
Eosinófilos 0,2 – 0,4 0,2 – 0,4 0,2 – 0,4
Eosinófilos 10-14 0,05 - 0,5 1–5
Basófilos - 0 – 0,01 0 – 0,01
Basófilos 12-14 0,01 - 0,05 0,0 – 0,5
Linfocitos 3,0 – 9,0 2,5 – 8,0 1,5 – 7,0
Linfocitos 7-18 1,5 - 4,0 20 – 40
Monocitos 0,3 – 0,8 0,5 - 0,8 0,4 – 0,8
Monocitos 14-20 0,1 - 1,0 3- 10
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Tema 10.1 Tema 10.1

ALTERACIONES CUALITATIVAS
NEUTRÓFILOS
de médula ósea y la realización del mielograma
ANOMALIAS DEL NÚCLEO
Semiología de los leucocitos de sangre CLUMPING
periférica. Anormal condensación de la cromatina
Disposición en extensos grumos
Anomalías más frecuentes
Cualitativas
Cuantitativas
ANOMALÍA DE PELGER-HUËT
Leucopenias Segmentación ausente o disminuida

Leucocitosis Clumping
Constitucional o adquirida
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 Tema 10.1 Tema 10.1
ALTERACIONES CUALITATIVAS
NEUTRÓFILOS

ANOMALIAS DEL NÚCLEO

NÚCLEO EN ANILLO
Hiposegmentación nuclear
Se observa un gran agujero central

HIPERSEGMENTACIÓN
Polinucleares con más de 5 segmentos
También puede afectar a los eosinófilos

APÉNDICES NUCLEARES EN PALILLO DE

TAMBOR
Nódulos cromatínicos en forma de gota pendiente
Corresponden a cromosomas sexuales femeninos
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 inactivados Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 10.1 ALTERACIONES CUALITATIVAS Tema 10.1

NEUTRÓFILOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMA
NÚCLEO EN ANILLO DESGRANULACIÓN
LEUCOCITARIA
Signo dismórfico
Citoplasma agranular y azulado
Puede ser artefacto
- PH inadecuado
-discrasias plasmocelulares
-frotis engrasados

HIPERGRANULACIÓN/ GRANULACIÓN
TÓXICA
Granulación primaria con apetencia
HIPERSEGMENTACIÓ
HIPERSEGMENTACIÓN tintorial alterada, se tiñe de manera
pronunciada
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 Tema 10.1 ALTERACIONES CUALITATIVAS Tema 10.1

NEUTRÓFILOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMA
HIPERGRANULACIÓ
HIPERGRANULACIÓN NEUTROFÍ
NEUTROFÍLICA ANOMALÍA DE CHEDIAK-HIGASHI
Carácter hereditario
Gránulos anormales gigantes azul oscuros
Diámetro de 1 a 3µm
En todos los tipos leucocitarios
DESGRANULACIÓ
DESGRANULACIÓN NEUTROFÍ
NEUTROFÍLICA Patologia de los microtúbulos

( a veces pueden confundirse con Puede presentarse en Leucemias agudas mieloides (LAM)
monocitos)
CUERPOS DE DÖHLE
Inclusiones basófilos y pironinófilas
Forma ovalada o rectangular
y de 1 a 3µm diámetro
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Agregados de reticuloendoplasmico Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 10.1 ALTERACIONES CUALITATIVAS Tema 10.1

NEUTRÓFILOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMA

BASTONES DE AUER
Inclusiones formadas por
fusión de diversos gránulos
primarios
Azurófilas
En forma de bastoncillos
ASTILLAS
Inclusiones alargadas con
extremos puntiformes
Azurófilas
Dispuestas en cúmulos, manojos o
gavillas
Típico de la LAM Promielocítica
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 Tema 10.1 Tema 10.1
ALTERACIONES CUALITATIVAS
LINFOCITOS
ASTILLAS ANOMALIAS DEL NÚCLEO
(imagen para no olvidar) Cromatina en grumos: Leucemia Linfática Crónica (LLC)
Núcleos irregulares, hendiduras: células de Sézary,
centrocitos
Núcleos bilobulados: linfocitosis B policlonal
Segmentación radial: linfocitos estimulados o artefacto (
anticoagulantes)
Linfocitos estimulados: incluso con nucleolo

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Tema 10.1 Tema 10.1

ALTERACIONES CUALITATIVAS
LINFOCITOS
ANOMALIAS DEL CITOPLASMA

Vacuolas: células linfoblásticas

Complejo ribosómico lamelar: tricoleucocitos
Inclusiones globulosas: naturaleza proteica
(inmunocitomas)
LINFOCITOS ESTIMULADOS / ACTIVADOS
Amplitud citoplasmática: con basofilia y
acoplamiento a los hematies: linfocitos activados
(mononucleosis)
Proyecciones citoplasmáticas: linfocitos vellosos

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 Tema 10.1 CITOQUÍMICOS Tema 10.1

proceso químico aplicado a preparaciones de células en porta

Métodos diagnósticos en hematología
intenta detectar componentes de las células: enzimas, principios
CITOQUÍMICOS inmediatos, o sustancias orgánicas
INMUNCITOQUÍMICOS producto final presenta coloración visible al microscopio óptico
CITOMETRÍA DE FLUJO permite diferenciar distintos progenitores: mieloides, linfoides,
monocitoides
CITOGENÉTICA
TÉCNICAS:
BIOLOGÍA MOLEULAR
MIELOPEROXIDASAS: distinguen población mieloide granulocítica
FISH ESTERASAS: distinguen población monocítica
MICROARRAY OTRAS: lisozima, fosfatasa ácida (línea linfoide T), βglucoronidasa,
etc
método menos utilizado que en el pasado
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Tema 10.1 Tema 10.1

INMUNOCITOQUÍMICOS O INMUNOHISTOQUÍMICOS MIELOPEROXIDASA

Se utilizan células frescas o muestras congeladas

previamente fijadas
Anticuerpo CD61 que marca
Se basan en la detección de antígenos celulares línea megacariocítica: plaquetas
mediante anticuerpos monoclonales Serie mieloide granulocítica
Revelados mediante reacción enzimática que
producen coloración ESTERASA:
alfa- naftil acetato esterasa
Muy laboriosas y requieren personal
experimentado para su realización e interpretación
Complementaria a otras técnicas

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07 Serie monocítica Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

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 CITOMETRÍA DE FLUJO Tema 10.1 Tema 10.1

Análisis celular multiparamétrico que precisa de

sofisticados sistemas informáticos
Se basa en hacer pasar una suspensión de células
alineadas y de una en una por delante de un haz de
laser focalizado
El impacto produce una serie de señales que
corresponden a diferentes parámetros de la célula y son
recogidos por detectores, que convierten las señales en
impulsos electrónicos y se digitalizan para permitir la
medida simultánea de varios parámetros de la misma
célula SeEl haz directo
reconocen realizaeléctricos
impulsos el recuento
porcelular
unidadpor
deunidad
tiempo:de tiempo
- número
- número dede partículas por dispersión
partículas
Se combinan propiedades físicas con fluorescencias - volumen
- volumen dede
laslas mismas por difracción
mismas
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Representación de dos parámetros físicos: Tema 10.1 Tema 10.1

CUANTO MÁS GRANDE Y MÁS COMPLEJA ES LA CÉLULA, MÁS A Representación de un

LA DERECHA Y ARRIBA SE COLOCARÁ parámetro físico y una
violeta, células pequeñas y poco complejas correspondiente a los linfocitos. fluorescencia.
rojo, basófilos que debido a la composición química de sus gránulos se rojo linfocitos T
comportan con patrones de dispersión similares a los linfocitos
colaboradores CD4+,
verde, población de células grandes y mediana complejidad correspondiente
violeta resto de linfocitos.
a los monocitos.
amarillo, células complejas y grandes correspondiente a los neutrófilos
azul, las células más complejas de todas, correspondiente a los eosinófilos. Representación de dos
fluorescencias
rojo linfocitos T
colaboradores CD4+
violeta resto de linfocitos y
linfocitos T supresores
CD8++.
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 CITOGENÉTICA
Imprescindible en el manejo de pacientes con enfermedades hematológicas
Detectando cambios cromosómicos que implican a genes responsables de la
transformación neoplásica de las células hematológicas
Las mutaciones originadas en precursores hematopoyéticos son observadas
en las células como:
translocaciones (intercambio de material genético entre dos o más
cromosomas)
deleciones (pérdidas de material cromosómico)
duplicaciones (ganancias de material cromosómico)
inversiones (reestructuración del material cromosómico)
El mayor impacto ha sido la demostración de que las anomalías
cromosómicas son un indicador pronóstico independiente de otras variables
(edad, recuento de leucocitos, fenotipo)
Ciertos cariotipos están asociados a buen pronóstico, mientras que otros
indican malos resultados, lo que ha llevado a la administración de terapias
alternativas
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FISH
Técnica FISH (Hibridación in situ con fluorescencia) supuso un
salto cualitativo en la caracterización de las distintas anomalías
cromosómicas
Basada en la propiedad del ADN de cadena simple de hibridar
específicamente con secuencias complementarias
Permite el empleo de sondas específicas para un cromosoma o
un gen dado, aumentando la sensibilidad, eficacia y fiabilidad del
análisis citogenético
Sirve de nexo de unión entre la genética molecular y los
métodos citogenéticos clásicos
En los últimos años se han desarrollado otras: cariotipo
multicolor, hibridación genómica comparada..., con la intención
de resolver las carencias de las sondas convencionales y aportar
una mayor información
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Tema 10.1 BIOLOGIA MOLECULAR Tema 10.1
Estudia las bases ultraestructurales o submicroscópicas subyacentes a los procesos
biológicos
Estudio a la escala molecular de los ácidos nucleicos DNA y RNA
Es un área dentro de los campos de diagnóstico, pronóstico y tratamiento médico
Material de partida:
RNA, DNA de doble cadena y de cadena simple
Técnicas:
Southern blot
PCR
PCR en tiempo real
Microarrays
Marcador molecular en un 40%-70% de las enfermedades hematológicas
Utilidad:
Diagnóstico y Pronóstico
Enfermedad mínima residual (EMR)/ monitorización del tratamiento
Farmacogenética
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Tema 10.1 MICROARRAYS Tema 10.1
Son dispositivos de pequeño tamaño (miniatura) que
contienen material biológico genético . Sobre un soporte no
poroso (vidrio o silicio) se crean micromatrices de sondas
genéticas inmovilizadas, posteriormente son hibridadas con
ácidos nucleicos libres y finalmente se realiza la lectura
mediante scanner de alta precisión (microscopia confocal)
. Se estudian genes que se expresan de forma constante para
asegurarse que las muestras son comparables. Se valora la
intensidad, presencia o ausencia, incremento o descenso y
cuantificación de la variación de señal respecto al control.
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 Tema 10.1 Tema 10.1

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