Aceite Esencial Muña

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PER
FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
COMPARACIN DE LOS COMPUESTOS

TERPNICOS DEL ACEITE ESENCIAL DE MUA
(Minthostachys mollis) EXTRADOS DE LAS
HOJAS FRESCAS Y SECAS
PRESENTADO POR:
Bach. CASTRO MATTOS MIGUEL ANGEL
ASESORA:
M.Sc. NORMA GAMARRA MENDOZA
PARA OBTENER EL TTULO DE INGENIERO EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
HUANCAYO
2012
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PER
FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS

ALIMENTARIAS
JURADO EXAMINADOR
M.Sc. NORA VELIZ SEDANO ING. SERGIO ANCHIRAICO COSQUILLO

PRESIDENTE SECRETARIO
M.Sc. EDGAR ACOSTA LOPEZ M.Sc. MARIA GUTIERREZ GONZALES

JURADO JURADO
ING. JOSE LUIS SOLIS ROJAS

JURADO
2
ASESORA
_______________________________________
M.Sc. NORMA GAMARRA MENDOZA
_______________________________________
3
DEDICATORIA
Al Seor Jesucristo, por su muerte vicaria

y su resurreccin fsica, quien gua y
sostiene mi caminar.
A mis padres, cuyo sacrificio es una

bendicin en mi vida.
A la Comunidad Bblica Universitaria, por

ser una Escuela de Vida.
A mis amigos, el plato fuerte en el

banquete de la vida.
4
NDICE DE CONTENIDOS
TEMA PGINA
RESUMEN 10
I. INTRODUCCIN 11
II. REVISIN BIBLIOGRFICA 13
2.1. MUA 13
2.1.1. Descripcin botnica. 13
2.1.2. Taxonoma de la mua. 14
2.1.3. Distribucin y especies. 14
2.1.4. Composicin de la mua. 16
2.2. ACEITES ESENCIALES 17
2.2.1. Definicin. 17
2.2.2. Isoprenos y terpenos. 18
2.2.3. Composicin qumica y clasificacin. 19
2.2.4. Propiedades. 21
2.2.5. Aceite esencial de mua. 21
2.3. CARACTERIZACIN DE LOS ACEITES ESENCIALES 29
2.4. EXTRACCIN DE ACEITES ESENCIALES 35
III. MATERIALES Y MTODOS 37
3.1. LUGAR DE EJECUCIN. 37
3.2. MATERIA PRIMA. 37
3.3. EQUIPOS Y MATERIALES. 37
3.3.1. Equipos e instrumentos. 37
3.3.2. Materiales varios de laboratorio. 38
3.3.3. Reactivos. 39
3.4. MTODOS DE ANLISIS. 39
5
3.4.1. Materia prima 39
3.4.2. Aceite esencial 40
3.5. METODOLOGA EXPERIMENTAL 40
3.5.1. Acondicionamiento y secado de la materia prima 40
3.5.2. Destilacin por arrastre de vapor de agua. 41
3.5.3. Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial 42
3.5.4. Caracterizacin cromatogrfica. 43
3.5.5. Descripcin del diagrama de flujo. 44
3.5.6. Diseo experimental. 47
3.5.7. Anlisis estadstico. 47
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES 48
4.1. IDENTIFICACIN DE LA PLANTA. 48
4.2. DESTILACIN. 49
4.3. ANLISIS ORGANOLPTICO. 54
4.4. ANLISIS FSICOS. 55
4.5. CARACTERIZACIN CROMATOGRFICA. 57
V. CONCLUSIONES 74
VI. RECOMENDACIONES 76
VII. BIBLIOGRAFA 77
VIII. ANEXOS 86
Anexo I Identificacin de la mua. . 86
Anexo II Resultados cromatogrficos del aceite esencial de mua
(fresco y seco). 88
Anexo III Resultados estadsticos. 90
6
NDICE DE FIGURAS
Figura 1: Distribucin de todas las especies de mua. 15
Figura 2: Estructura del isopreno. 19
Figura 3: Variabilidad de la composicin terpnica. 23
Figura 4: Estructura qumica de la mentona y el mentol. 25
Figura 5: Estructura qumica de la pulegona. 25
Figura 6: Terpenos principales del aceite esencial de mua. 26
Figura 7: Cromatograma de aceite esencial de mua. 27
Figura 8: Partes principales de un cromatgrafo de gases. 32
Figura 9: Tipos de Cromatogramas: (1) Diferencial, (2) Integral. 33
Figura 10: Parmetros que definen un cromatograma. 34
Figura 11: Principio para la deteccin de los picos. 35
Figura 12: Diagrama de flujo experimental de la extraccin de aceite esencial 46
Figura 13: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua fresca 50
Figura 14: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas frescas. 50
Figura 15: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua seca. 52
Figura 16: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas secas. 52
Figura 17: Cromatograma del aceite esencial (Mua fresca). 58
Figura 18: Cromatograma del aceite esencial (Mua seca). 59
Figura 19: Porcentaje de terpenos hallados (Mua fresca). 62
Figura 20: Porcentaje de terpenos hallados (Mua seca). 62
Figura 21: Comparacin % de los principales componentes de ambos aceites. 66
Figura 22: Porcentaje de Pulegona en ambos aceites esenciales. 67
Figura 23: porcentaje de Mentona en ambos aceites esenciales. 68
Figura 24: Variacin de la cantidad de ambos terpenos. 68
Figura 25: Determinacin del color de mua fresca mediante
7
la carta colorimtrica 87
Figura 26: ANVA para los tratamientos de la mentona. 90
Figura 27: Test de Duncan para los tratamientos de la mentona. 90
Figura 28: ANVA para los tratamientos de la pulegona. 91
Figura 29: Test de Duncan para los tratamientos de la pulegona. 91
8
NDICE DE TABLAS
Tabla 1: Composicin de la mua. 16
Tabla 2: Propiedades fsicas del aceite esencial de mua. 22
Tabla 3: IR y densidad relativa del aceite esencial de mua. 22
Tabla 4: Datos cromatogrficos del aceite esencial de mua. 27
Tabla 5: Principales terpenos en el aceite esencial de mua 28
Tabla 6: Tabulacin de datos de la destilacin (hojas frescas). 49
Tabla 7: Tabulacin de datos de la destilacin (hojas secas). 51
Tabla 8: Resultados organolpticos del aceite esencial. 54
Tabla 9: IR y densidad relativa del aceite esencial. 56
Tabla 10: Porcentaje de los terpenos encontrados en el aceite esencial. 60
Tabla 11: Tiempo de retencin de los terpenos encontrados. 61
Tabla 12: Tiempo de retencin y % de rea de terpenos mayoritarios de Mua
fresca. 65
seca 65
Tabla 14: ANVA para el porcentaje de mentona. 72
Tabla 15: ANVA para el porcentaje de pulegona. 72
Tabla 16: Caractersticas botnicas de la mua. 86
Tabla 17: Resultados de la cromatografa (hojas frescas). 88
Tabla 18: Resultados de la cromatografa (hojas frescas). 89
9
RESUMEN
Se determin el porcentaje de mentona y pulegona en aceite esencial extrado de
hojas frescas y secas de mua. La extraccin se llev a cabo mediante destilacin
por arrastre de vapor a una temperatura de 84 C por 90 minutos. Se utiliz como
materia prima hojas frescas (11,56 % de humedad) y secas (7,81 % de humedad).
ste ltimo valor fue obtenido luego de secar las hojas por 7 horas a una
temperatura constante de 35 C en una secadora de bandejas. Los aceites
esenciales obtenidos fueron separados del agua florentina por decantacin, luego de
20 horas de reposo, posteriormente se determin el ndice de refraccin y la
densidad relativa. Finalmente se realiz la caracterizacin de los compuestos
terpnicos mediante cromatografa de gases. El contenido de mentona y pulegona
para el aceite esencial procedente de hojas frescas fue 30,168 % y 45,036 %,
mientras que para el aceite esencial de hojas secas el contenido fue 24,818 % y
52,321 %, respectivamente. Se nota el descenso de la mentona y el aumento de la
pulegona en el aceite esencial proveniente de hojas secas, debido a los factores que
intervinieron en el proceso, as como a la estructura qumica de los terpenos. El
anlisis estadstico realizado mostr la diferencia significativa entre la cantidad de la
mentona y pulegona encontrados en el aceite esencial extrado de hojas frescas y
secas.
10
I. INTRODUCCIN
Los aditivos sintticos representaron la base fundamental de la industria
alimentaria durante la segunda mitad del siglo XX en las ciudades importantes de
Sudamrica e incluso hasta hoy en el interior del pas. Es sabido que su empleo
puede producir la contaminacin del agro ecosistema, los alimentos pueden
contener residuos, etc. Por tales razones la ciencia ha volcado su atencin hacia
los productos naturales (alimentos funcionales) y sus componentes, los cuales
careceran de los efectos adversos anteriormente mencionados, analizndolos,
comparndolos, extrayendo sus compuestos, etc., demostrando superioridad
sobre compuestos artificiales en su aplicacin en diferentes reas. En esta
perspectiva la industria alimentaria ha incrementado la demanda de esencias y
aromatizantes de procedencia natural, como el limoneno, la pulegona o el mentol
(terpenos de los aceites esenciales), provenientes de los aceites esenciales para
la utilizacin en confitera.
Ahora bien, se requiere investigar la composicin de los aceites esenciales de las
principales hierbas aromticas y, lo que es ms importante, entender cmo vara
la cantidad de los componentes terpnicos mayoritarios cuando las hierbas son
secadas para almacenamiento u otros fines.
La presente investigacin contribuir en resolver el problema de la limitada
cantidad de estudios descriptivos sobre los principales terpenos contenidos en el
aceite esencial de mua. Para tal efecto se compar la cantidad de los dos
principales terpenos del aceite esencial de mua extrado por destilacin por
arrastre de vapor: la mentona y la pulegona de dos tipos de hojas, mediante
anlisis fsicos y cromatogrficos.
11
Los objetivos especficos fueron los siguientes:
Evaluar el comportamiento de la destilacin por arrastre de vapor para la
extraccin de aceite esencial de hojas frescas y secas de mua.
Comparar los resultados organolpticos y fsicos (ndice de refraccin y
densidad relativa) de ambos aceites extrados.
Identificar los componentes terpnicos mayoritarios en el aceite esencial de
hojas secas y frescas mediante cromatografa de gases.
12
II. REVISIN BIBLIOGRFICA
2.1. MUA
2.1.1. Descripcin botnica.
Es una planta arbustiva (Yapuchura, 2010), leosa, que alcanza de 0,80
m y 1,50 m, frondosa en la parte superior, erecta y pubescente. Su tallo
es ramificado desde la base. Sus flores son blancas y se encuentran
reunidas en cortos racimos, situados en la parte superior de las ramas
como pednculos cortos, teniendo 2 en cada axila, los cuales sirven para
su multiplicacin. Seguil (1990) menciona que las hojas son simples,
opuestas, pecioladas y de bordes aserrados. Posee pelos en la cara
inferior de las hojas y en los peciolos (Pezn que sostiene la hoja).
Pertenece a un gnero de inters botnico, farmacutico y econmico
debido a los aceites aromticos encontrados en las glndulas celulares de
las hojas y tallos (Schmidt-Lebuhn, 2009).
13
2.1.2. Taxonoma de la mua.
La clasificacin taxonmica es la siguiente (Aquino, 2007):
Reino : Vegetal
Divisin : Magnoliophyta
Clase : Magnoliopsida
Subclase : Asteridae
Orden : Verbenales
Familia : Lamiaceae
Gnero : Minthostachys (Benth.) Spach
Especie : Minthostachys mollis (Kunth) Grisebach
2.1.3. Distribucin y especies.
Crece entre los 500 a 4000 m.s.n.m., por toda Sud-Amrica, desde
Argentina (Crdoba) hasta Venezuela (Monagas y Sucre) (Schmidt-
Lebuhn, 2009; Aquino, 2007), particularmente en Per, Bolivia, Ecuador y
Argentina, tomando distintos nombres en cada pas. Crece en el campo
silvestre de manera espontnea (Seguil, 1990), en bosques nublados,
ambientes hmedos o en pendientes secas, arenosas y rocosas
(Schmidt-Lebuhn, 2009). En la figura 1 se ven las zonas, marcadas con
puntos, en las cuales crece el gnero Minthostachys.
14
Fuente: Schmidt-Lebuhn (2009)
Figura 1: Distribucin de todas las especies de mua.
Actualmente, y como resultado de las investigaciones morfolgicas y
taxonmicas, se sabe que hay 17 especies, una con tres variedades,
encontradas en Sudamrica, principalmente en los centros de diversidad,
Bolivia y el sur de Per. A continuacin se presentan algunas de ellas
(Schmidt-Lebuhn, 2005 y 2009):
M. mollis (Kunth) Griseb. Tiene un cliz densamente velloso alrededor
de la base, es lobulado, dentado, herbceo, el tubo de la corola es de
2,5 a 4 mm de largo, las hojas son vellosas al envs. Existen tres sub
variedades de esta especie (Schmidt-Lebuhn, 2009), la Minthostachys
mollis hybrida Schmidt-Leb., de Colombia y Venezuela, ms o menos
agudas en sus bases; la Minthostachys mollis mandoniana (Briq)
Schmidt-Leb., del sur de Per y de Bolivia, posee hojas relativamente
15
largas; y la Minthostachys mollis mollis, desde Venezuela hasta el
centro del Per. Posee enorme variabilidad.
M. setosa (Briq.) Epling. De los bosques hmedos de Cochabamba.
M. spicata (Benth.) Epling. De la cordillera occidental del Per.
Presente en condiciones secas.
M. verticillata (Griseb.) Epling. nica nativa de Argentina, pero tambin
la econmicamente ms importante.
2.1.4. Composicin de la mua
En la tabla 1 se presenta la composicin de 100 g de mua.
Tabla 1: Composicin de la mua.
Componente Cantidad (%)

Humedad 16
Protenas 3,2
Grasas 2,8
Carbohidratos 66,3
Fibra 9,4
Ceniza 11,7
Calcio 2237 mg
Fosforo 269 mg
Hierro 22,4 mg
Retinol 306 mg
Tiamina 306 mg
Riboflavina 1,81 mg
Niacina 6,85 mg
Energa 268 kcal
Fuente: Yapuchura (2010)
16
2.2. ACEITES ESENCIALES
2.2.1. Definicin.
Internacionalmente se define a los aceites esenciales como un
producto obtenido por hidrodestilacin, destilacin por arrastre de
vapor, destilacin seca o algn otro proceso mecnico sin calor, de
toda o alguna parte de la planta (Graa, 2010). Por su parte Camacho
et al (2011) dice que un aceite esencial es una mezcla de componentes
terpnicos voltiles producto del metabolismo secundario de las plantas
en cuya composicin interviene una proporcin de hidrocarburos de la
serie polimetilnica del grupo de los terpenos que responden a la
frmula (C5H8)n, junto con otros compuestos casi siempre oxigenados
(sean estos alcoholes, steres, teres, aldehdos y compuestos
fenlicos) que son los que transmiten a los aceites el aroma que los
caracteriza. Los ms olorosos se encuentran en zonas tropicales,
donde la energa solar es grande. Zekaria (2007) dice que tras la
biosntesis stos compuestos se almacenan en distintos rganos de la
planta. El aceite esencial es guardado como microgotas en las
glndulas, aquellos necesitan difundirse hacia el exterior. Para esto el
aceite esencial atraviesa las paredes de las glndulas y las microgotas
llegan a la superficie, se evaporan y llenan el aire con su perfume.
Mayormente son de olor agradable, aunque existen excepciones como
el aceite esencial del ajo y la cebolla, esto debido a los compuestos
azufrados que hay en ellos (Albarracn y Gallo, 2003; Zekaria, 2007).
A nivel biolgico cumplen varias funciones, segn Morales (1973) y
Beltrn (1983) influyen en la atraccin de insectos o su repulsin;
17
tambin acta como cicatrizante de lesiones sufridas en la planta, para
que no se evapore el agua interior por las lesiones. Funcionan
hormonalmente en la polinizacin, pues en la floracin los aceites
esenciales van a las flores. Fsicamente actan como reguladores de la
conductividad de calor del agua y de la presin osmtica.
Metablicamente desciende la concentracin de aceite en las plantas
que crecen a la sombra. Beltrn (1983) menciona que tambin actan
como sustancias de reserva, es decir como dadores de hidrgeno para
los procesos de oxi-reduccin y funcionaran tambin como fuentes de
energa durante interrupciones en la asimilacin normal de anhdrido
carbnico.
2.2.2. Isoprenos y terpenos.
Morrison y Boyd (1990) los comparan con bloques de construccin
desde los cuales se forman muchas sustancias, como ladrillos de una
pared. Una de estas unidades es el isopreno. Casi todos los terpenos
(que se hallan en los aceites esenciales) tienen esqueletos carbonados
construidos con unidades de isopreno unidas entre s de un modo muy
regular, es decir, en palabras simples, de pies a cabeza. La
importancia del isopreno es tal que el colesterol y la vitamina A se
constituyen paso a paso, de unidades isoprnicas. En la figura 2
encontramos la estructura qumica del isopreno, con su caracterstica
forma de silla. Se dice que tanto la molcula como la unidad de
isopreno tienen una cabeza (el extremo ramificado) y una cola (el
extremo etilo no ramificado). La frmula condensada de los terpenos es
C10H16. (Vitoria, 1948).
18
Fuente: Wade (1993)
Figura 2: Estructura del isopreno.
La combinacin de isoprenos forma monoterpenos y sesquiterpenos.
Todos ellos son lquidos (menos el canfeno), muy refringentes,
incoloros, muchos de ellos pticamente activos. Su punto de ebullicin
suele estar entre 160 C y 180 C, por lo cual al extraerlos se obtienen
mezclas de ellos. Entre los terpenos (o monoterpenos) y los
sesquiterpenos (C15H24) podemos ver que los primeros son ms
voltiles, menos polares y su punto de ebullicin es menor; los
segundos son ms estables a temperatura ambiente, ms polares y su
punto de ebullicin es mayor. Fundamentalmente hay dos tipos de
monoterpenos y sesquiterpenos, los oxigenados y los no oxigenados.
2.2.3. Composicin qumica y clasificacin.
Cerruti y Neumayer (2004) dicen que dentro de sus ms de 100
componentes, podemos agruparlos en compuestos alifticos de bajo
peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehdos, cetonas, steres y
cidos), monoterpenos, sesquiterpenos, fenilpropanos. Castaeda
(2008) clasifica la composicin de una manera distinta: Esencias
hidrocarbonadas: monoterpenos (limoneno) y sesquiterpenos; Esencias
oxigenadas: steres, por ejemplo ster de metilo; aldehdos terpnicos
y aldehdos aromticos (vainillina); cetonas; alcoholes monoterpnicos
19
y diterpnicos (timol, terpineol, mentol, linalol, geraniol, citronelol);
fenoles (carvacrol); cetonas (d-carvona); xidos; compuestos
azufrados; compuestos nitrogenados; cidos; cumarinas; teres
(eugenol, anetol). Se clasifican a los aceites esenciales de acuerdo a
consistencia, origen y naturaleza qumica de los componentes
mayoritarios (Cerruti y Neumayer, 2004).
Consistencia: Se dividen en fluidas (lquidas a temperatura
ambiente), Blsamos (espesos y poco voltiles como la copaiba) y
Oleorresinas (lquidos muy viscosos o semislidos como el caucho),
segn Albarracn et al (2003) y Castaeda (2008).
Origen: Naturales (extradas de las mismas plantas, sin
modificacin alguna, con bajo rendimiento), artificiales
(enriquecimiento de la esencia o mezcla con otras. Ejemplos son los
aceites de rosa, geranio y jazmn) y sintticas, es decir sintetizados
qumicamente como la esencia de vainilla (Castaeda, 2008).
Por sus componentes mayoritarios: Tenemos tres grupos, los
monoterpenos (como el aceite de hierbabuena) con 10 tomos de
carbono, derivados del Geranilpirofosfato (GPP); sesquiterpenos
(como el aceite de pino o copaiba) con 15 tomos de carbono,
derivados de Farnesilpirofosfato (FPP); los Fenilpropanoides, como
aceite de clavo, canela, ans, contiene un anillo aromtico unido a
una cadena de tres carbonos. (Castaeda, 2008; Martnez, 2003;
Albarracn y Gallo, 2003).
20
2.2.4. Propiedades.
Son lquidos a temperatura ambiente (Beltrn, 1983; Castaeda,
2008); de aspecto oleoso, solubles en ter de petrleo (Castaeda,
2008), en tetracloruro de carbono y otros disolventes orgnicos.
(Albarracn y Gallo, 2003). Se unen con facilidad a las grasas y
aceites fijos.
Poseen olor variable o intenso (Castaeda, 2008), as como su
sabor acre, caustico e irritante y a veces aromtico dulce y delicado
(Albarracn y Gallo, 2003).
Incoloros en estado puro. (Castaeda, 2008).
Punto de ebullicin entre 150 y 300 C (Beltrn, 1983).
Sensibles a la oxidacin, se polimerizan, dando productos
resinosos.
ndice de refraccin elevado (Castaeda, 2008).
La luz los vuelve amarillos y oscuros modificando su perfume.
La mayora es menos densa que el agua; su densidad relativa es a
15 C, de 0,84 a 1,2.
El punto de ebullicin vara entre 150C a 300C. (Albarracn y
Gallo, 2003; Castaeda, 2008).
2.2.5. Aceite esencial de mua.
El olor aromtico de la mua se debe al contenido de aceite esencial
que posee la planta (Kumoro et al, 2010) el cual se encuentra ubicado
principalmente en las hojas y tallos en ms del 98%; Es un lquido
incoloro y de sabor ardiente, obtenido por destilacin con vapor
hmedo o vapor seco. El vapor hincha la pared y por smosis la
21
esencia fluye al exterior, sin embargo puede hidrolizarse en el proceso
generando steres (Seguil, 1990). En la tabla 2 se encuentran las
caractersticas del aceite esencial de mua y en la tabla 3 sus
parmetros fsicos.
Tabla 2: Propiedades fsicas del aceite esencial de mua.
Fuertes y
Cano et al Aquino
Caracterstica Seguil (1990) Mungua
(2008) (2007)
(2001)
Ligeramente Ligeramente
Color Incoloro Amarillento
amarillo. amarillo
Olor Similar al mentol. Mentol Agradable Fuerte
Picante con Ligeramente
Sabor Picante fresco. Picante
frescor picante
Aspecto Lquido fluido. Lquido limpio - Lquido oleoso
Densidad relativa
0,9189 0,9295 (20 C) 0,852 g/mL 0,9189
(25 C), d2020
ndice de
refraccin (20 1,4727 1,5689 1,487 1,4727
C), n2020
Otros investigadores reportan slo los resultados fsicos:
Tabla 3: IR y densidad relativa del aceite esencial de mua.

Referencia IR Densidad relativa
USP Menta piperita1 1,45 0,899
ISO Menta piperita2 1,46 0,9
Lima3 1,469 0,92
Huancayo4 1,4983 0,9868
Fuente: 1-3Morales (1973); 4 Beltrn (1983).
22
Sobre composicin del aceite esencial de mua existe mucha
variabilidad en los resultados de los estudios realizados. Esta
diferencia no solo se da en la presencia o ausencia de tal o cual
terpeno, sino respecto a su porcentaje y a la especie, as como a su
lugar de procedencia. Este concepto se condensa en la figura 3. La
variabilidad se presenta en funcin de varios factores, como el lugar de
procedencia y la sub especie (Morales, 1973). Seguil (1990) detalla
varios estudios con resultados variables, por ejemplo uno presenta
pineno, pineno y limoneno, mientras que otros no. Tambin Fuertes y
Mungua (2001) estudi la composicin de tres extractos de aceite
esencial de la sierra del pas obteniendo los siguientes resultados:
Aceite esencial de mua (Tarma): 1-tetradeceno (23,14 %), 2s-trans-
mentona (23 %) y pulegona (13,21 %); Aceite esencial de mua
(Huaraz): 2s-trans-mentona (41,48 %) y pulegona (16,02 %), -
terpineno (7,55%); Aceite esencial de mua (Pampas): 2s-trans-
mentona (34,51%) y pulegona (28,62 %) y nerodilol (5,08%).
Fuente: Schmidt-Lebuhn (2005)

Figura 3: Variabilidad de la composicin terpnica.
23
No obstante lo anterior puede asegurarse la presencia de dos terpenos
mayoritarios en todos los aceites esenciales de la Minthostachys mollis:
la Pulegona y la Mentona (Schmidt-Lebuhn, 2009). Tomados
individualmente, las caractersticas de cada terpeno mayoritario son las
siguientes:
Mentona; es una cetona, de sabor spero y amargo, ms o menos
soluble en agua. Se origina por oxidacin de alcohol secundario y
reduccin de metionina. Existe una relacin con el mentol. A ms
mentol, menos Mentona y viceversa (Morales, 1973). Junto a la
Pulegona conforman el 75% de componentes terpnicos. Es mejor
conocido como constituyente de la Menta piperita. Posee un aroma
muy caracterstico por el cual es usado en perfumera. Adems posee
propiedades digestivas. En la figura 4a se muestra su estructura cclica
y su radical cetona. Su punto de ebullicin es 206 C; su gravedad
especfica 0,894; la rotacin ptica, -26 y el ndice de refraccin
1,4995 (Morales, 1973).
Mentol; se encuentra en pequeas cantidades. Es usado como
refrescante y contra el dolor de garganta. Posee un radical alcohol que
da al aceite el sabor y olor. Es estado puro se presenta en forma de
cristal hexagonal, incoloro y brillante. Es un alcohol terpnico
monocclico y saturado, posee tres tomos de carbono asimtricos.
Existe en dos formas L-mentol y D-mentol, siendo de mayor inters el
primero pues su olor es 3,3 a 3,5 veces mayor que el segundo, de
acuerdo a Morales (1973). En la figura 4b se muestra su estructura
qumica, unida a un radical hidroxilo. Su punto de fusin es 43-45C;
24
Punto de ebullicin 126 215C; Gravedad especifica 0,881; Rotacin
especifica -50. Se forma por reduccin de la mentona y la pulegona
(Morales, 1973).
a) b)
Fuente: Merck (2012), Merck (2012)2
Figura 4: Estructura qumica de la mentona y el mentol.
Pulegona; uno de los ms importantes terpenos de muchos aceites de
Minthostachys, es altamente txico en grandes cantidades, incluso
induce al aborto. Su toxicidad explica probablemente el efecto del
aceite contra pestes y parsitos. Esta sustancia es usada en
perfumera y como saborizante. Su estructura se muestra en la figura 5.
Carvacrol; esta es la tercera sustancia en importancia del aceite. El
ms importante de los terpenos de baja proporcin. Se lo conoce mejor
en el aceite de organo. Es muy requerido como sazonador, pues se lo
utiliza como ingrediente en la preparacin de las pizzas.
Fuente: Merck (20123).
Figura 5: Estructura qumica de la pulegona.
25
Linalol; empleado como sazonador y como insecticida. Se le encuentra
en pequeas cantidades.
Timol; como su nombre sugiere, este terpeno es mejor conocido en las
especies Thymus. Se usa como un antisptico.
Otros terpenos minoritarios son: limoneno, sabineno y pineno. El
consolidado de las estructuras qumicas se observa en la figura 6.
Fuente: Schmidt-Lebuhn (2005).
Figura 6: Terpenos principales del aceite esencial de mua.
Estos compuestos fueron identificados por mtodos cromatogrficos,
por ejemplo Cano et al (2008) identificaron los metabolitos presentes
en el aceite esencial de mua para estudiar su actividad antimictica in
vitro. Sus resultados se resumen en la tabla 4. Se encontraron 2
terpenos mayoritarios (pulegona y mentona). En la misma tabla
tambin se muestra el tiempo de retencin. En la figura 7 se aprecia el
cromatograma obtenido luego del anlisis realizado.
26
Figura 7: Cromatograma de aceite esencial de mua.
Fuente: Cano (2007).
Tabla 4: Datos cromatogrficos del aceite esencial de mua.
Metabolito Tiempo de retencin (min) Composicin (%)

Pulegona 13,20 36,88
Mentona 11,09 24,24
Limoneno 5,32 0,77
Mirceno Trazas
Mentol 12,8 No detectable
Fuente: Cano et al (2008).
Otras investigaciones muestran la cantidad de cada componente
terpnico mayoritario, como en la tabla 5:
27
Tabla 5: Principales terpenos en el aceite esencial de mua.
Fuente: 1, 2, 3: Fuertes y Mungua (2001); 4,5: Giza y Rincn (2007);
6: Cano (2007); 7: Zegarra (2010); 8: Chaquilla et al (2011); 9: Arauco
et al (2010) y 10: Azaa (2010).
Se nota claramente que la pulegona y la mentona son los primeros
compuestos terpnicos encontrados, seguidos, con mucha variabilidad,
del mentol, el Linalol y el limoneno. Respecto a los usos del aceite
esencial de mua, Schmidt-Lebuhn (2009) menciona que se utilizan
sus componentes terpnicos en perfumera; por su parte Morales
(1973) detalla su utilizacin como farmacutico, para cremas dentales,
jabones, perfumera, en confitera para elaboracin de chicles, cigarros,
licores, jaleas, helados, flan y queques o pueden ser destinados como
esencias aromatizantes. Se utilizan los compuestos terpnicos como
principios activos con fines medicinales en la produccin de antibiticos
que no daen al estmago, en jarabes para la tos y soluciones
antispticas superficiales (Aquino, 2007).
28
Cano (2009) y Cano et al (2008) estudiaron uno de los usos del aceite
esencial de mua en funcin a su actividad antimictica,
probablemente por los monoterpenos encontrados. Los terpenoides del
aceite esencial de mua, segn este estudio, afectan la actividad de las
enzimas catalizadoras a nivel de membrana, es decir interfieren en la
traslocacin de protones sobre la membrana. Ellos concluyen que el
aceite esencial de mua puede ser una alternativa teraputica a la
dermatomicosis; sin embargo se requerira evaluar una formulacin en
crema a diferentes concentraciones de aceite esencial (25 50%) y en
animales de experimentacin, para luego poder validar su posible uso
en humanos.
Debe destacarse que la mua posee diferentes quimiotipos, que
incluso el aceite esencial de una planta varia respecto a otra, an
perteneciendo a plantas cosechadas en el mismo lugar, esto debido a
la heterogeneidad de la mua y a su condicin silvestre. Para remediar
este problema se debera plantear la investigacin de los quimiotipos.
2.3. CARACTERIZACIN DE LOS ACEITES ESENCIALES.
Se realiza mediante la Cromatografa de gases (CG), un proceso mediante el
cual una mezcla es separada en sus componentes por medio de una fase
mvil gaseosa que pasa a travs de un absorbente slido fijo (Kirk et al,
1996). Sirve tanto para identificar como para cuantificar analitos (Calle y
Hernndez, 2006; Acosta et al, 2003; De los ngeles, 2008; Gonzales, 2004).
Su ventaja es la cantidad de muestra necesaria para analizar, que es de 10
g a 500g.
29
a) Descripcin de la tcnica:
Fase mvil: La fase mvil gaseosa proporciona un rpido equilibrio
entre las fases con mayor eficiencia en la obtencin de los anlisis. Los
gases ms utilizados son: nitrgeno, helio, hidrgeno y argn. La fase
mvil no debe interactuar con la fase estacionaria ni con la muestra,
debe tener bajo costo, ser compatible con el detector y tener alta
pureza. Para dar una mayor reproducibilidad al anlisis, la saturacin
del gas debe ser constante y debe ser controlada a travs de vlvulas
de aguja (Rivera, 2008).
Sistemas de inyeccin: La inyeccin se realiza generalmente con
microjeringas que contienen la muestra. El volumen inyectado no debe
superar la capacidad de la columna y entre ms pequeo sea el
volumen usado de la muestra mayor ser la eficiencia y la
reproducibilidad del anlisis. La temperatura aplicada debe ser
suficiente para la volatilizacin de la muestra.
Columnas: La columna consiste en un tubo largo que contiene la fase
estacionaria. Los materiales ms usados son el cobre, el acero, el
aluminio, el vidrio y el tefln. El material de la columna no debe
interaccionar con la fase estacionaria ni con la muestra.
Sistema de detectores: Las sustancias presentes en la muestra pasan
a travs de la columna, en donde son separadas y llegan al sistema de
deteccin. Con relacin a la selectividad, los detectores pueden ser
clasificados en universales y selectivos o especficos. Los detectores
universales miden la variacin de una propiedad del gas de arrastre
que sale de la columna mientras que los detectores especficos miden
30
una propiedad caracterstica de una determinada clase de sustancias.
Con relacin a la sensibilidad, los detectores cuya respuesta vara poco
por cambios en la velocidad de flujo de la fase mvil, son llamados
detectores sensibles de flujo de masa. En estos detectores la
sensibilidad se define como la relacin del rea de pico a la masa
inyectada. En los detectores sensibles a la concentracin, la respuesta
vara en funcin del flujo de la fase mvil y su sensibilidad se define
como el producto del rea del pico por el flujo de la fase mvil dividido
por la masa inyectada. La respuesta del detector debe ser lineal dentro
de un amplio intervalo de concentraciones. Este intervalo de
concentraciones se conoce como intervalo lineal dinmico y
corresponde a la diferencia entre la concentracin mxima del intervalo
lineal dinmico y la mnima concentracin del mismo y que debe
distinguirse de la seal de fondo del detector. El anlisis cuantitativo se
puede llevar a cabo gracias a la relacin directa que existe entre la
respuesta del detector y la concentracin de la muestra, siempre y
cuando la respuesta obtenida para la muestra se encuentre dentro de
ese intervalo (Rivera, 2008).
El detector registra el cambio de presin y esto sirve para comparar los
picos impresos, los cuales se dan en funcin a tiempos de retencin. El
tiempo de retencin es aquel que transcurre despus de la inyeccin
de la muestra para que el pico del analito alcance el detector. Su
smbolo es tR, (De los ngeles, 2008; Zorca et al, 2006). Luego, para
establecer el porcentaje de cada componente se recurre al mtodo de
normalizacin de rea, el cual se calcula dividiendo el rea de cada
31
componente entre el rea total del cromatograma y multiplicndolo por
100%, es decir:

% = 100

Respecto a la instrumentacin, la figura 8 muestra un diagrama
esquemtico de un cromatgrafo de gases. Consiste en 5 partes
principales: un suministro de gas vehculo (la fase mvil) con
reguladores de presin y medidores de flujo; el sistema de inyeccin; la
columna cromatogrfica y la estufa; el detector y sus amplificadores
electrnicos; el graficador y otros aditamentos para la presentacin de
datos (Kirk et al, 1996).
Fuente: Etxebarria y Fernndez (2006).
Figura 8: Partes principales de un cromatgrafo de gases.
b) Cromatogramas
Es la representacin de la respuesta o seal del sistema de deteccin
continuo o discontinuo en funcin del tiempo, volumen del eluyente o
distancia en el lecho cromatogrfico. El cromatograma toma la forma de
un registro en la carta de un registrador o plotter o un nmero
determinado de datos tomados por un microcomputador despus de la
correspondiente transformacin. Segn el tipo de detector continuo, el
32
cromatograma puede ser diferencial, cuando la seal solo se origina al
pasar analito por el mismo, e integral, cuando la seal se acumula, como
se aprecia en la figura 9.
Fuente: Rivera (2008).
Figura 9: Tipos de Cromatogramas: (1) Diferencial, (2) Integral.
El cromatograma contiene la informacin analtica relativa a la muestra
(complejidad: nmero de picos, deteccin cualitativa y/o cuantitativa de
uno o varios componentes). Los parmetros que definen el
comportamiento cromatogrfico de un soluto en un sistema
cromatogrfico de elucin, y que sirve de base para los clculos analticos
se muestran en el esquema de la Figura 10, como el tiempo de retencin
(TR), volumen de retencin (VR), tiempo muerto (TM), volumen muerto
(VM), rea (A), altura del pico (h) y base del pico (w).
33
Figura 10: Parmetros que definen un cromatograma.
En el ajuste de datos, el software realiza en primer lugar un ajuste de
datos, con la finalidad de eliminar el ruido y permitir el correcto
funcionamiento del algoritmo de integracin.
En la integracin de los picos, el algoritmo de integracin del
cromatograma es capaz de distinguir diferentes casos de picos
cromatogrficos en los cuales la lnea de base se fija de distinta manera.
Para ello se tiene en cuenta el valor de la seal, su derivada (D1) y su
derivada segunda (D2). Se considera detectado el comienzo del pico
cuando la derivada primera de la seal supera un valor prefijado (D1 > Ls)
punto 2 de la Figura 11. Cuando la derivada pasa por cero siendo la
derivada segunda negativa, se detecta el mximo (D1=0, D2<0) Punto 3
de la Figura 11. El final de pico se detecta cuando la derivada segunda es
positiva y la derivada primera supera el valor prefijado (D1>Li) Punto 4 de
la Figura 11. Los valores de Ls y Li pueden ser variables a lo largo del
cromatograma, lo cual permite compensar el efecto de ensanchamiento
34
de los picos. El tiempo de retencin que identifica al componente es aquel
en el cual ocurre el mximo, punto 3 de la Figura 11. La lnea de base es
una recta que une los puntos 2 y 4. Para calcular el rea se resta el rea
bajo la lnea de base del rea bajo la curva de la seal (Rivera, 2008).
Figura 11: Principio para la deteccin de los picos.
Picos superpuestos: En el caso de dos o ms picos fusionados o
superpuestos se traza una lnea de base entre el comienzo del primero y
el fin del ltimo. El criterio usual es trazar rectas verticales desde los
valles hasta la lnea de base comn y en base a esta divisin se asignan
las reas.
2.4. EXTRACCIN DE ACEITES ESENCIALES
Para extraer aceites esenciales de la mua se utiliza la destilacin por
arrastre de vapor (Castaeda, 2008; Cerruti y Neumayer, 2004; Martnez,
2003). La muestra es encerrada en una cmara inerte y sometida a una
corriente de vapor de agua sobrecalentado (Cano et al, 2008). Por efecto de
la temperatura del vapor en un cierto tiempo, el tejido vegetal se rompe
35
liberando el aceite esencial contenido y ste a su vez, debido a su alta
volatilidad es arrastrado por el vapor de agua hacia el condensador para ser
enfriada y separada, debido a su inmiscibilidad y a la diferencia de
densidades y viscosidad con el agua (Castaeda, 2008). El principio bsico
de la destilacin de dos lquidos heterogneos, como el agua y un aceite
esencial, es que cada uno ejerce su propia presin de vapor como si el otro
componente estuviera ausente. Cuando las presiones de vapor combinadas
alcanzan la presin del recinto, la mezcla hierve. Aceites esenciales con
puntos de ebullicin hasta 300C, evaporarn a temperaturas cercanas al
punto de ebullicin ms alto que el agua (100C).
La destilacin por arrastre de vapor se realiza en tres etapas (Camacho, et al
2011): Calentamiento, extraccin y enfriamiento. Cada una de ellas involucra
diferentes fenmenos de transferencia de calor, adicionalmente en la etapa
de extraccin se presenta transferencia de masa. En la Etapa de
calentamiento; se suministra vapor de agua desde la caldera hacia el
reactor, hasta cuando comienza a evaporarse los aceites y son entonces
arrastrados hacia el condensador; es all donde el vapor de agua transfiere
calor latente al material vegetal; La Etapa de extraccin se inicia en el
momento en que comienza la produccin de condensado de agua-aceite;
aqu se determina el tiempo necesario para la extraccin. La transferencia de
masa en esta etapa se refiere a la cantidad de aceite que es arrastrado por
el vapor. En la Etapa de enfriamiento; se condensan los vapores de agua-
aceite que provienen del destilado, despus se enfra para separar las fases
y obtener el aceite por decantacin (Castaeda, 2008).
36
III. MATERIALES Y MTODOS
3.1. LUGAR DE EJECUCIN.
La investigacin se desarroll en las instalaciones del laboratorio de qumica
de alimentos, de la Facultad de Ingeniera en Industrias Alimentarias, en la
Universidad Nacional del Centro del Per Huancayo; y en el laboratorio de
investigacin fisicoqumica de la Facultad de Ciencias, en la Universidad
Nacional de Ingeniera, Lima.
3.2. MATERIA PRIMA.
Mua (Minthostachys mollis) en estado de prefloracin, del anexo de
Tulumayo, distrito de Comas, provincia de Concepcin, departamento Junn.
3.3. EQUIPOS Y MATERIALES.
3.3.1. Equipos e instrumentos.
Balanza analtica, Adventurer OHAUS. Capacidad, 310 g. precisin
0,01 g.
Balanza comercial, Cavory, Capacidad, 15 kg.
Termmetros, 150C
37
Higrmetro Digital. IN: -10C ~ + 50C; OUT: -50C ~ + 70C;
Precisin: 1C; Humedad: 20% ~ 99% 5%.
Secadora de bandejas, 30 100 C
Computadora Samsung.
Cromatgrafo de gases, Varian 450-GC. Columna Supelcowax 10,
30 mm0,53 mm.
Mini carta colorimtrica, flower council Holland, RHS.
Refractmetro. ABBE ptico Grados Brix 0 - 95 / IR-1700
Temporizador. Control Company, 4 tiempos.
Olla a presin Oster, Capacidad, 10 L.
Cocinilla elctrica.
3.3.2. Materiales varios de laboratorio
Probetas, 50 y 100 mL
Matraz erlenmeyer 50 y 100 mL
Matraz kitazato, 250 mL
Vasos de precipitacin 10, 50, 100 y 250 mL
Embudo de vidrio.
Pinzas metlicas.
Cpsulas.
Balones, 250 mL
Baln con vstago, 500 mL.
Baln de 3 picos, 500 mL.
Equipo refrigerante.
Campana desecadora.
Mangueras de goma y silicona.
38
Soportes universales con accesorios.
Peras de decantacin, 500mL.
Rejilla de asbesto.
Picnmetro.
Fiola de 100 mL y 50 mL
Pipetas, 1, 5, 10 mL
Succionadores.
Varillas de vidrio.
Micro jeringa, 1 mL.
Pizetas.
Crisoles.
Papel filtro Whatman.
Tubos capilares de vidrio.
3.3.3. Reactivos
Alcohol etlico.
Hexano, grado CG
Helio, gas transportador, grado CG
Agua destilada p.a. Trifarma.
Cloruro de sodio al 10%. Lab. Sanderson S.A.
3.4. MTODOS DE ANLISIS.
3.4.1. Materia prima.
Identificacin de la planta recolectada, segn el mtodo de Jones
(1988). La determinacin de color de las hojas se realiz
39
comparndolas con las escala de colores de la Mini carta, Flower
Council Holland, RHS (UPOV, 2012).
Determinacin de humedad inicial y final de las hojas de mua,
segn el mtodo gravimtrico de diferencia de peso con el extracto
seco, AOAC.
3.4.2. Aceite esencial.
Anlisis organolptico de los aceites esenciales extrados. Se utiliz
el mtodo adaptado de Dixit (2006).
Determinacin del rendimiento, el ndice de refraccin por el mtodo
refractomtrico y la densidad especfica a 20 C.
Composicin de los principales terpenos de los aceites esenciales
mediante cromatografa de gases, por el mtodo de normalizacin
de rea, segn Fuertes y Mungua (2001).
3.5. METODOLOGA EXPERIMENTAL
3.5.1. Acondicionamiento y secado de la materia prima.
Se recolectaron 12 kg de plantas de mua fresca. Con ayuda de unos
guantes se separaron las hojas medianas y grandes del tallo, para
evitar el contacto directo de las manos con las hierbas. Del total de
hojas, se utiliz 3 kg para la extraccin de aceite esencial de hojas de
mua fresca y se utiliz 9 kg para el secado posterior. En todas estas
operaciones se protegi a la mua de la luz directa del sol.
Se realiz la determinacin de humedad inicial y final de las hojas de
mua, despus del secado, segn el mtodo de la estufa de aire de
Hart y Fisher (1971). El secado se realiz a una temperatura media de
40
35 C para disminuir la humedad (Morales, 1973). Esta operacin se
efectu en un secador de 5 bandejas.
Los parmetros de secado fueron los siguientes:
T de secado : 35C
Tiempo : 7 horas
Bandejas utilizadas : 3 (0,59 1,06) m2
Dimensiones de las hojas : Ancho, 2,1 0,57 cm
: Largo, 3,5 0,67 cm
Densidad de carga : 0,356 kg/m2.
rea (A) : 0,6254 m2
S (cantidad de carga) : 0,2229 kg
3.5.2. Destilacin por arrastre de vapor de agua.
Se realiz la destilacin por arrastre de vapor, de acuerdo al mtodo de
Camacho et al (2011) con modificaciones. Se hicieron ensayos
preliminares de extraccin de aceite esencial de mua molida
utilizando un baln de tres bocas unido a un baln con vstago, ambos
de 500 mL de capacidad, para hacer la primera destilacin. El sistema
se conect a un equipo refrigerante de bolas, conectado a una fuente
de agua potable. Se utiliz una cantidad de mua de 53,673 g. El
tiempo de extraccin fue 90 minutos a una temperatura de 84 C.
(Camacho et al, 2011 y Aquino, 2007). Sin embargo el rendimiento fue
muy bajo por lo que se procedi a montar un sistema de destilacin
mediante una olla a presin de 10 litros, la cual cumpla la funcin de
autoclave, acoplada a un sistema refrigerante. A la salida de ste se
41
coloc una probeta de 100 mL para medir la cantidad de destilado
obtenido en cada extraccin. Obtenidos los datos del volumen
destilado, se realiz otra extraccin en las mismas condiciones. En
este caso al refrigerante se una a una pera de decantacin de 500 mL,
para recibir la destilacin. La pera contena una solucin de NaCl al
10% (Camacho et al, 2011); la cantidad de NaCl a aadir est en una
proporcin 1:30 (solucin salina - agua/aceite). Los parmetros
utilizados en ambas extracciones fueron los siguientes:
Carga total (fresca) : 0,950 kg
Carga total (seca) : 1,010 kg
T de entrada del agua refrigerante : 27 C
T de salida del agua refrigerante : 30 C
Caudal refrigerante : 10 mL H2O/s
3.5.3. Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial.
Para el anlisis organolptico se utiliz el mtodo adaptado de Dixit
(2006), el cual const de una inspeccin visual del aceite comparado
con otros resultados en trminos de color, viscosidad y presencia de
impurezas. Para la fragancia se coloc una tira de papel absorbente a
una profundidad de 1 cm; se realiz la primera impresin llevando al
olfato la tira de papel, se repiti la operacin despus de 4 o 5 minutos,
se realiz una vez ms a los 15 minutos y finalmente en 24 horas.
Estos datos fueron comparados y registrados. El proceso para el sabor
fue similar.
42
El rendimiento (RAE) se determin por el mtodo gravimtrico
volumtrico mediante la siguiente expresin (Jurez et al, 2010):
%Rae = Vol.ae (mL) / Pmuestra (g) x 100
Donde:
Vol.ae : Volumen del aceite esencial obtenido; en mL.
Pmuestra: Peso de la muestra a destilar; en g.
Se determin el ndice de refraccin y la densidad relativa (a 20 C
ambos). Se calibr el refractmetro con agua destilada hasta obtener
valores constantes de 1,333, haciendo uso de las ruletas? del
refractmetro. Seguidamente se realiz la lectura del ndice de
refraccin del aceite esencial. La densidad relativa se determin
utilizando jeringas de 1 mL.
3.5.4. Caracterizacin cromatogrfica.
La caracterizacin cromatogrfica para determinar los componentes
terpnicos (mentona y pulegona) y su proporcin en el aceite esencial,
se llev a cabo en las instalaciones del laboratorio de fisicoqumica de
la Facultad de ciencias de la Universidad Nacional de Ingeniera, en
Lima, Per. Se utiliz aceite esencial solubilizado, 0,1 mL aceite
esencial / 10 mL hexano (Zegarra, 2010; Fuertes y Mungua, 2001). La
caracterizacin se realiz por duplicado para cada tipo de aceite. Los
parmetros del Cromatgrafo Varian 450-GC, fueron los siguientes:
Columna: SupelcowaxTM -10 (Poli etilenglicol); 30 m con dimetro
interior = 0,53 mm ID y espesor de fases estacionaria, 1 micrometro.
43
Temperatura de columna: temperatura inicial 70 C con rampa,
4C/min y temperatura final a 160 C durante 25 minutos. Tiempo
total, 48 minutos.
Temperatura de inyeccin: 220 C.
Temperatura del detector FID: 190 C.
Gas vehculo: Helio
Flujo del gas: 5mL/min
Flujos al detector FID (ionizacin a la llama):
-Make-up (helio) : 25mL/min.
-Combustin (H2) : 30mL/min.
-Combustin (aire) : 300mL/min.
Dilucin del aceite esencial de mua: 150 L de aceite en 5 mL de
hexano, grado CG.
Volumen de inyeccin al cromatgrafo: 2L con split 1:20.
Los cromatogramas se construyeron con el programa GALAXIE
para equipo 450-GC Serie GC0907B060.
3.5.5. Descripcin del diagrama de flujo.
Recepcin. La mua fue recibida en un ambiente libre de humedad
y polvo, se revis que la planta est desarrollada, de color verde y
sin signos de putrefaccin y descomposicin.
Limpieza. Se separ de la mua restos de paja, pasto u otras
especies, dejndola libre de impurezas (tierra) y eliminando toda
planta con principios de descomposicin.
44
Seleccin. Se seleccionaron las hojas medianas y grandes, luego
se desecharon los tallos, as como las hojas marchitas.
Pesado. Se realiz al momento de la recoleccin, seleccin,
secado, molienda y tamizado. Se llev a cabo en una balanza de
precisin y en una balanza analtica, segn fue el caso.
Secado. Se realiz en una secadora de bandejas a 35 C por 7
horas, para retirar el agua libre hasta un 8-10 %.
La extraccin de los aceites esenciales se realiz mediante
destilacin por arrastre de vapor de agua a una temperatura de
84C, por 90 minutos.
Para separar el aceite del agua florentina, se aadi una solucin
de cloruro de sodio al 10%. Se dej reposar por 20 horas y luego se
procedi a decantar la mezcla. La pera de decantacin se cubri
con plsticos negros para evitar la accin fotoltica sobre el aceite
esencial.
Envasado. En frascos mbar hermticamente cerrados y sellados
con silicona.
Almacenamiento. Finalizado el proceso, se almacen el aceite
esencial en frascos de vidrio mbar, a una temperatura de 4C, para
su anlisis posterior.
El diagrama de flujo se muestra en la figura 12.
45
Mua
Recepcin
Limpieza Desperdicios
Hojas de mala
Seleccin
calidad
Agua Agua
Secado 35 C refrigerante Extraccin refrigerante
27 C 30 C
Agua Agua
refrigerante Extraccin refrigerante NaCl Agua
Decantacin
27 C 30 C 10 % salina
=20 h
NaCl Agua
Decantacin
10 % salina
=20 h
Envasado
Almacenado 4 C
Figura 12: Diagrama de flujo experimental de la extraccin de aceite

esencial.
46
3.5.6. Diseo experimental
Para determinar cul de los dos tipos de hojas produjo mayor
contenido de pulegona se us un Diseo Completamente Aleatorio
(DCA) unifactorial. El factor evaluado fue la humedad H1=11,56 %
(hojas frescas) y H2= 7,81 % (hojas secas). Los datos obtenidos
fueron analizados mediante un Anlisis de Varianza (ANVA) con un
nivel de confianza de = 0,05. Seguido de una prueba de
comparaciones mltiples de Duncan. Para la comparacin entre
componentes se us el siguiente modelo aditivo lineal, en el cual la
variable respuesta es la cantidad de mentona y pulegona contenida
en el aceite esencial de mua, mientras que la variable
independiente fue el tipo de hoja (fresca y seca):
= + +
Donde:
: Variable respuesta, rendimiento de mentona y pulegona.
: Media general
: Variable independiente, tipo de hojas de mua (fresca y seca)
: Error experimental
3.5.7. Anlisis estadstico.
El procesamiento de los valores de porcentaje de rea de los
principales compuestos terpnicos del aceite esencial de mua,
fueron analizados mediante un ANVA, se realiz con el programa
estadstico del software Statistical Analysis System (SAS) v. 8.0
47
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
4.1. IDENTIFICACIN DE LA PLANTA.
Las caractersticas identificadas de la planta, de acuerdo a los
procedimientos de Jones (1988) y la UPOV (2012), se resumen en la tabla
16, anexo I. Estos datos fueron contrastados con los reportes de las
investigaciones de Seguil (1990) y Schmidt-Lebuhn (2009). Aquino (2007)
confirma los resultados presentados al afirmar que la mua es un arbusto
frondoso, con tallos ramificados. Respecto a los bordes de las hojas, todos
los investigadores mencionan que las hojas de mua poseen forma de
sierra. Schmidt-Lebuhn (2009) menciona que la mua tiene hojas pequeas
y grandes de 2 a 5 cm. Los resultados presentados se encuentran dentro del
rango establecido por los botnicos. Las fotos de estos resultados se hallan
en el anexo I.
48
4.2. DESTILACIN.
Las tablas 6 y 7 muestran los datos del comportamiento de la destilacin, en
funcin a la temperatura de extraccin y el volumen destilado, para ambas
extracciones, los cuales fueron graficados. El comportamiento de la
destilacin puede verse en las figuras 13 a la 16. En ellas se aprecia el
incremento de la temperatura hasta alcanzar un valor constante.
Tabla 6: Tabulacin de datos obtenidos en la destilacin (hojas frescas).
Destilado Tiempo
Lectura T (C) Destilado (mL)
acumulado (mL) (min)
1 27 0 0 2
2 29 0 0 4
3 41 0 0 6
4 48 0 0 8
5 60 0 0 10
6 70 0 0 12
7 80 0 0 14
8 83 0 0 16
9 83 1 1 18
10 84 1,2 2,2 20
11 84 1,1 3,3 22
12 84 3,6 6,9 27
13 84 1,2 8,1 32
14 84 3,8 11,9 37
15 84 4 15,9 42
16 84 6,6 22,5 47
17 84 6,8 29,3 52
18 84 8,2 37,5 57
19 84 7,2 44,7 62
20 84 6 50,7 67
21 84 5,5 56,2 72
22 84 7,2 63,4 77
23 84 7,8 71,2 82
Total 71,2 mL
49
Figura 13: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua fresca.
Figura 14: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas frescas.
50
Tabla 7: Tabulacin de datos obtenidos en la destilacin (hojas secas).
Destilado
Temperatura Destilado Tiempo
Lectura acumulado
(C) (mL) (min)
(mL)
1 26 0 0 2
2 30 0 0 4
3 42 0 0 6
4 48 0 0 8
5 59 0 0 10
6 71 0 0 12
7 78 0 0 14
8 83 0 0 16
9 83 0 0 18
10 84 0 0 20
11 84 3 3 22
12 84 5 8 25
13 84 8 16 30
14 84 6 22 35
15 84 10 32 40
16 84 12 44 45
17 84 14 58 50
18 84 18 76 55
19 84 10 86 60
20 84 11 97 65
21 84 17 114 70
22 84 18 132 75
23 84 18 150 80
24 84 18 168 85
Total 168
51
Figura 15: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua seca.
Figura 16: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas secas.
52
En las figuras 13 y 15 se pueden confrontar las velocidades de destilacin
(mL/min) y el incremento de la temperatura, mostrando el comportamiento
de la destilacin para ambas extracciones. Este fenmeno concuerda con
las cuatro etapas de la ebullicin (Geankoplis, 1995). A partir de los 83 C,
empez a generarse las primeras gotas de destilado, luego progresivamente
aument el volumen hasta alcanzar un tope, descender y nuevamente volver
al valor anterior. Estos datos fueron comparados con los datos de extraccin
de Aquino (2007), los cuales confirman los resultados presentados aqu.
Para plantas jvenes hay mayor volumen de agua florentina, por ende mayor
aceite esencial. El caso es inverso para plantas adultas. En ambos casos los
resultados muestran un comportamiento discontinuo respecto al volumen
destilado.
El tiempo de extraccin de 90 minutos (para ambas extracciones, hojas
frescas y secas) fue adecuado para limitar los problemas tcnicos, pues a
menores valores no se extrae todo el aceite esencial de la mua y a valores
mayores, se extraen todos los compuestos y a la vez se descompondran los
ms termolbiles (Aquino, 2007). Tambin otros investigadores evaluaron
los tiempos ptimos de extraccin (Morales, 1973; Arauco et al, 2010;
Beltrn, 1983). Sus resultados revelan que el tiempo ptimo de extraccin
tambin se encuentra condicionado por la parte de la planta de la cual se
extraer el aceite esencial.
Ambas extracciones mostraron un comportamiento ordinario en la
destilacin.
53
4.3. ANLISIS ORGANOLPTICO.
Las principales caractersticas organolpticas de ambos aceites esenciales
se muestran en la tabla 8:
Tabla 8: Resultados organolpticos del aceite esencial.
Aceite esencial de hojas Aceite esencial de hojas

Caracterstica
frescas secas
Translcido, ligeramente
Color Ligeramente translcido
amarillo
A menta, ligeramente
Olor A menta, Muy atractivo
atractivo
Sabor Picante Picante
Aspecto Lquido, fluido, aceitoso Lquido fluido, aceitoso.
Estos resultados fueron comparados con los principales reportes de otras
investigaciones referidas al mismo tema. Las principales diferencias
encontradas en ambos tipos de aceite esencial fueron la tonalidad y el olor.
El aceite esencial proveniente de las hojas secas mostr un color
ligeramente ms claro (esto se ver confirmado al evaluar el ndice de
refraccin de ambos aceites). La diferencia en el olor, se explicar tambin
al analizar la composicin de ambos aceites.
Beltrn (1983) reporta los siguientes resultados organolpticos: el color del
aceite esencial es amarillento, el olor semejante al mentol, el sabor picante y
el aspecto lquido. Estos datos coinciden con los de Aquino (2007) y Fuertes
y Mungua (2001). Morales (1973) difiere en su resultado sobre el olor; El
olor del aceite esencial de las hojas secas es ligeramente menos agradable
que el procedente de hojas frescas lo cual se debe al tiempo de destilacin,
54
pues, segn Aquino (2007), el tiempo para la extraccin de aceite esencial
de hojas secas debe ser menor y en las extracciones se utilizaron tiempos
iguales para ambas extracciones. Esto es explicado por la mayor porosidad
de las hojas secas lo cual incrementa la transferencia de masa y la
extraccin de aceite esencial. De esta manera, un tiempo prolongado de
extraccin produce la descomposicin de algunos compuestos o la aparicin
de componentes indeseables. Esto se ver comprobado al presentar los
cromatogramas de cada tipo de aceite extrado. Otro factor que incide en el
olor ligeramente agradable del aceite esencial proveniente de hojas secas,
es la posible polimerizacin de algunos terpenos, como consecuencia directa
de la deshidratacin (Fellows, 1994).
4.4. ANLISIS FSICOS.
Se reporta el rendimiento, ndice de refraccin y la densidad relativa de
ambos aceites. Los rendimientos son 0,267 0,128 % y 2,505 0,025 %
para el aceite esencial de hojas frescas y secas, respectivamente.
Morales (1973) explica que humedades bajas aumentan la porosidad y
facilitan la transferencia de masa en el proceso de la extraccin. En el caso
de la mua seca se extrajo el agua libre, lo cual genera un cuerpo poroso.
Esto incrementa la difusividad del vapor de agua, arrastrando mayor
cantidad de aceite esencial. Otros investigadores obtuvieron similares
resultados. Para el aceite esencial proveniente de hojas frescas tenemos los
siguientes rendimientos, todos ellos en una relacin v/p: Fuertes y Mungua
(2001): 0,27 % (Tarma), 0,21 % (Huaraz), 0,21 % (Pampas), Aquino (2007):
1,03 %. Para rendimientos de aceites esenciales provenientes de hojas
55
secas tenemos los siguientes datos: Morales (1973): 2,13 %, Aquino (2007):
2 2,5 % (UNCP, FIQ), Arauco et al (2010): 0,6 % (Extraccin soxhlet), para
Camacho et al (2011) el rendimiento del aceite esencial extrado es 0,1 a 1%
del peso seco de la planta. Como se ve, los resultados obtenidos en la
presente investigacin concuerdan con los reportados en la literatura
cientfica.
Se determin el ndice de refraccin y la densidad relativa de ambos tipos de
aceites. Los resultados se incluyen en la tabla 9.
Tabla 9: IR y densidad relativa del aceite esencial.
Hojas frescas Hojas secas
IR Densidad relativa IR Densidad relativa
1,4765 0,0002 0,92 0,01 1,4733 0,0002 0,86 0,01
Respecto al ndice de refraccin, podemos comprobar que los resultados
son muy similares a los reportados por la literatura cientfica. Por ejemplo
Fuertes y Mungua reporta valores desde 1,4725 hasta 1,4746, por otro lado
el resultado de Morales (1973) fue 1,469, finalmente el mayor valor
encontrado en las investigaciones consultadas es de Beltrn (1983) con un
valor de 1,4983. A mayor ndice de refraccin el aceite contendr mayores
terpenos bencnicos, a la inversa, mientras sea menor el aceite poseer
mayores compuestos monoterpnicos (Beltrn, 1983). Segn esto el aceite
esencial de las hojas frescas posee ligeramente ms compuestos
terpnicos. Esto comprobara qumicamente que el secado si altera la
composicin del aceite, incrementando la cantidad de compuestos
terpnicos hidrolizados. Agrelo et al (1994) demostraron que un ndice de
56
refraccin cercano a 1,48 muestra que el aceite esencial presenta
compuestos oxigenados. En efecto, ambos tipos de aceites poseen un valor
cercano a ese, lo cual indica la presencia de compuestos terpnicos
oxigenados, entre ellos compuestos cetnicos y alcohlicos. Estos
resultados tambin se ven refrendados por los datos organolpticos
presentados anteriormente.
El aceite esencial de las hojas frescas posee mayor densidad relativa. La
literatura cientfica menciona que valores mayores a 1,00 indican la
presencia de terpenos aromticos, nitrogenados y azufrados; en cambio,
valores menores, incluso cercanos a 0,840, atestiguan la presencia de
hidrocarburos aromticos (Morales, 1973). Estos datos muestran que el
aceite esencial proveniente de hojas secas posee mayores terpenos
oxigenados. Ambos resultados (IR y densidad relativa) comprueban la
presencia de compuestos terpnicos en mayor cantidad, en el aceite
esencial de hojas secas. A fin de comparar los resultados presentados en la
presente investigacin y compararlos con otros estudios mencionamos el
trabajo de Aquino (2007) con un valor de 0,852, el ms bajo de la literatura;
por otro lado, los ms altos valores corresponden a los estudios de Beltrn
(1983) y Morales (1973) con 0,9868 y 0,92, respectivamente. Los IR de este
estudio no escapan del rango permitido para aceites esenciales (1,4), ni las
densidades relativas.
4.5. CARACTERIZACIN CROMATOGRFICA.
Los cromatogramas del aceite esencial de la mua proveniente de hojas
frescas y secas, se muestran en las figuras 17 y 18, respectivamente.
57
Figura 17: Cromatograma del aceite esencial (Mua fresca).
58
Figura 18: Cromatograma del aceite esencial (Mua seca).
59
Respecto a los terpenos mayoritarios totales, es decir aquellos cuya rea
supera el 1 %. Cano (2007), Zegarra (2010), Azaa (2010) y Chaquilla et al
(2011) encontraron que el principal terpeno del aceite esencial de mua fue la
pulegona, en cambio Giza y Rincn (2007); menciona en un estudio que la
mentona es el principal terpeno del aceite esencial.
La tabla 10 muestra la cantidad de otros terpenos mayoritarios encontrados
en ambos aceites esenciales obtenidos y la tabla 11 el tiempo de retencin
encontrado. Segn los reportes de Fuertes y Mungua (2001), podemos
afirmar que el terpeno 8 es un epxido (3-oxatriciclo [4.1.1.O-2,4] octano, 2, 7,
7-trimetil), por el tiempo de retencin similar. Este grupo es muy inestable,
tiene mucha tensin angular y puede abrirse con facilidad frente a muchos
reactivos, incluso frente a protenas, cidos nucleicos y otros metabolitos del
organismo humano. Todas estas caractersticas le confieren propiedades
mutagnicas.
Tabla 10: Porcentaje de los terpenos encontrados en el aceite esencial.
% rea
N
Fresco Seco
1 1,032 1,164
2 1,285
3 2,373 2,483
4 5,327 5,551
5 2,671 2,653
6 3,785 3,73
7 1,026
8 1,869
60
Tabla 11: Tiempo de retencin de los terpenos encontrados en el aceite
esencial.
Tiempo
N
Fresco Seco
1 5,785 5,75
2 12,96
3 14,27 14,25
4 15,71 15,7
5 18,735 18,72
6 19,395 19,38
7 20,97
8 22,51
En la figura 19 y 20 se puede ver la variacin de los terpenos en ambos
aceites, exceptuando a la mentona y la pulegona. En la figura 21, se distingue
la variacin de los terpenos mayoritarios.
61
Figura 19: Porcentaje de terpenos hallados (Mua fresca).
Figura 20: Porcentaje de terpenos hallados (Mua seca).
62
Los cromatogramas tabulados se hallan en el anexo II. En ambos
cromatogramas presentados se distingue un pico que supera a todos, el cual
pertenece al solvente (hexano grado GC) y no a un componente especfico. El
aceite esencial proveniente de hojas frescas contiene 46 componentes, en un
intervalo de 24 minutos, y de hojas secas contiene 55 componentes, en un
intervalo de 33 minutos, aunque los cromatogramas realizados por duplicado
muestren una ligera variacin. Estos resultados fueron comparados con los
datos reportados por Fuertes y Mungua (2001), Giza y Rincn (2007), Cano
et al (2008), Cano (2007), Azaa (2010), Zegarra (2010), Maquera et al
(2009), Carhuapoma et al (2009), Chaquilla et al (2011) y Calixto (2006) y se
comprueba similitud entre los principales componentes terpnicos
encontrados.
En la literatura cientfica referida al aceite esencial de mua, los principales
componentes encontrados son la pulegona, la mentona, el mentol, el
limoneno y otros. Alkire et al (1994) encontraron 19 componentes, entre los
cuales se hallan la mentona, la pulegona y el limoneno. Fuertes y Mungua
(2001) utilizaron el mismo tipo de columna y similares parmetros de anlisis
a los realizados en la presente investigacin (muestra, 0,1 mL en 10 mL de
etanol; Columna: Supelcowax 10, 30 mm 0,53 mm 0,5 mm; Temperatura del
inyector: 190 C; Temperatura del horno: 70 C 160C (4/min); Gas
transportador: helio; Temperatura del detector: 230C) y obtuvieron los
siguientes compuestos: 1-tetradeceno (24,13 %), 2S-trans-Mentona (23 y 41
%), Pulegona (16 y 28 %). La diferencia entre la cantidad de compuestos
terpnicos hallados y los reportados por Fuertes y Mungua (2001) se explica
63
por el origen distinto de la mua, tambin por la diferencia en la temperatura
del detector FID (40C de diferencia) y en la temperatura del inyector (30 C
de diferencia). An as es posible comparar los tiempos de retencin en
ambos anlisis. La 2S-trans-mentona posee un tiempo de retencin promedio
de 15,95 min., mientras que la pulegona tiene un tiempo de retencin de
21,59 min. En la presente investigacin los tiempos son 12,2 y 17,19 min,
respectivamente, por tanto se aprecia similitud en los tiempos de retencin de
la mentona y la pulegona. Cano (2007) tambin utiliza el mismo tipo de
columna para elucidar el aceite esencial de mua. En su investigacin la
temperatura de inyeccin y del detector FID tambin vara 30C respecto de
nuestros parmetros. Sus resultados muestran valores menores que los
presentados aqu. Para la pulegona y la mentona tenemos: 13 min y 11 min,
respectivamente.
Resultado similar al reportado por Calle et al (1994), segn los cuales la
cantidad de pulegona y mentona es, 30,2 % y 29,2 % respectivamente. Los
compuestos mayoritarios identificados por el cromatgrafo en el presente
estudio son la Pulegona y la 2S-Trans-Mentona o mentona, (Chemicalize,
2012) para ambos tipos de aceite. Los estudios de Rojas y Usubillaga (1995)
reportan 28 componentes en el aceite esencial de Minthostachys mollis, en el
cual la cantidad de pulegona ascenda a 75,2 79,3 %. El ms alto
componente es la pulegona, segn el reporte de Fournet et al (1996). El
mismo resultado dio Marriotta et al (2001). Se encuentra mayor pulegona en
plantas jvenes (Osorio, 2009). Emin et al (2004) informa que en las Labiatae
el componentes mayoritario es la pulegona (66,55 %) y la mentona (9,59%).
Esto se debe al hecho de que la mayora de las labiadas poseen pulegona en
64
mayor proporcin que los dems componentes (Perry, 1921). En general, las
plantas labiadas, poseen ms cantidad de pulegona, respecto a la mentona.
Los resultados de tiempo de retencin y rea de la pulegona y mentona se
muestran en las tablas 12 y 13. Otros investigadores encuentran resultados
similares, como Gonzlez et al (2011) que, utilizando la misma columna, pero
diferentes parmetros cromatogrficos encontraron tiempos de retencin de
25,73 min y 18,68 min, para la pulegona y la mentona, respectivamente. Estos
valores, difieren poco de los presentados, pero muestran el mismo orden de
aparicin en el cromatograma.
fresca.
Parmetros Pulegona Mentona

Tiempo de retencin (min) 17,19 12,215
% rea 45,036 0,557 30,168 0,732
seca.
Parmetros Pulegona Mentona

Tiempo de retencin (min) 17,19 0,01 12,2 0,01
% rea 52,321 0,042 24,818 0,181
Otros investigadores utilizando diferentes tipos de columna presentan
resultados similares. Giza y Rincn (2007) tiene para la pulegona y la 2S-
trans-mentona, 21,61 min y 19,20 min, respectivamente. Para Zegarra (2010)
los tiempos son: pulegona, 23,4 min; mentona, 18,2 min. Finalmente, para
65
Chaquilla et al (2011), los tiempos de retencin para estos dos componentes
mayoritarios son mucho menores: pulegona, 8 min y mentona, 6,6 min.
Figura 21: Comparacin porcentual de los principales terpenos de ambos
aceites esenciales.
Se relacionaron y representaron grficamente los resultados de la pulegona y
la mentona. En la figura 22 se aprecia el contenido promedio de la pulegona
en ambos aceites. Es notorio que la cantidad de este componente se
incrementa en la muestra seca en un 16 %.
66
Figura 22: Porcentaje de pulegona en ambos aceites esenciales.
Mientras que la cantidad de mentona es 21 % menor en el aceite extrado de
hojas frescas (figura 23). As mismo podemos ver en la figura 24 la variacin
total de ambos componentes en los dos tipos de aceite esencial de mua. El
aumento global de terpenos es mnimo, un 2% respecto al aceite proveniente
de hojas frescas. Esto se debe a la disminucin de la mentona en las hojas
secas, a la aparicin de nuevos componentes y a la sntesis e interaccin
qumica de todos los terpenos. En general, ambos constituyen ms del 70 %
de los componentes del aceite esencial.
67
Figura 23: Porcentaje de Mentona en ambos aceites esenciales.
Figura 24: Variacin de la cantidad de ambos terpenos.
La diferencia entre la cantidad de estos dos componentes en ambos aceites
tiene una relacin inversa. En el aceite esencial de mua fresca la cantidad de
pulegona es 45,036%, y la de mentona es 30,168%; en cambio el porcentaje
68
de los componentes en el aceite esencial de la mua seca es: pulegona y
mentona, 52,321% y 24,818% respectivamente. Esta diferencia debe
explicarse en funcin al secado de las hojas de mua. En el aceite esencial
extrado de la planta fresca encontramos los componentes naturales del
aceite esencial. El secado, segn Fellows (1994), produce prdida de algunos
componentes, debido a varios factores como la solubilidad en agua de
algunos componentes del aceite esencial. La pulegona es insoluble en agua y
no se perdera al eliminarse el agua libre de las hojas de mua, a diferencia
de otros componentes, como el limoneno (solubilidad en agua, 0,02 g/L;
presin de vapor 2,1 hPa) y el Linalol (solubilidad en agua, 1,45 g/L; 0,10
hPa). El hecho de que el aceite de hojas secas sea de olor poco agradable,
muestra la disminucin de los componentes alcohlicos, como el mentol, pues
estos son los responsables de proveer el olor caracterstico. Esto explica el
aumento de la pulegona, pues los monoterpenos alcohlicos son los
precursores de los compuestos cetnicos, al oxidarse aquellos. Al respecto
Barbosa y Vega (2000) mencionan que uno de los efectos qumicos de la
deshidratacin es la oxidacin de los compuestos del alimento a causa de la
deformacin de la estructura fsica del alimento y de la oxidacin debida a la
porosidad alta del alimento deshidratado. De esta manera los componentes
como el mentol y otros monoterpenos con radicales OH, se oxidan, dando
compuestos como la pulegona. Es debido a esto que el contenido de
pulegona aumenta en el aceite esencial.
La disminucin de la mentona, en comparacin de la pulegona, se debe a sus
puntos de ebullicin diferentes, 208 y 224 C, respectivamente. Esto revela
que se requiere mayor energa para romper los enlaces de la pulegona que
69
de la mentona. Por otra parte, siendo el limoneno el principal precursor del
mentol, y ste de la mentona, su disminucin afectara indirectamente el
contenido de sta. El limoneno es un monoterpeno hidrocarbonado con un
doble enlace en el ciclo hexano en su estructura. Esto confiere al limoneno
baja estabilidad y sensibilidad a la deshidratacin. Adems su bajo punto de
ebullicin, comparado con el de los otros componentes del aceite esencial,
177C, demuestra su sensibilidad a factores externos (UPOV, 2009).
La diferencia en la cantidad de cada componente (ms pulegona en ambos
tipos de aceite y menos mentona en el aceite de hojas secas) se debe
tambin a lo que Banchio et al (2005) denominan como dao mecnico.
Segn esta teora, las hojas al ser cortadas del tallo o al ser cortada la planta,
sta eleva su cantidad de pulegona, como un mecanismo de defensa. La
disminucin del contenido de mentona se debe a su reduccin qumica a
mentol (Primo, 2007). Esta es una respuesta sistmica a diferentes tipos de
dao (Banchio et al, 20052).
La disminucin de la mentona y el 1,8 cineol se debe a la degradacin de la
mentona y el mentol, precursor de sta, a diferentes temperaturas. Para la
mentona, cuyo pico inicial era de 0,89, que almacenado a 4 C descendi a
0,73 y a 25 C, descendi a 0,67, una razn de 25 %. Esta disminucin es
natural. Wainberg (1983) refiere que el mentol se convierte en acetato de
mentilo.
La variacin en el contenido de componentes fue estudiada por Wainberg
(1983), segn el cual dependen de causas medioambientales. Las plantas
jvenes poseen ms pulegona y menos mentona. En las plantas viejas, la
mentona es predominante. Por su parte Burzaco et al (1996) dicen que la
70
composicin cambia a lo largo de la fenologa de la planta; de la misma
opinin es Cludio (2003).
En funcin a su estructura qumica (vase figura 5), Phenomenex (2012) y
R.A.M. (1912) mencionan que la mentona tiene la capacidad de girar
enantiomricamente, debido al enlace simple que posee. Las caractersticas
estructurales de la mentona y la pulegona muestran porque desciende aquella
y esta aumenta (ChemSpider, 2010). El volumen molar, la tensin superficial,
la capacidad de aceptar tomos de Hidrgeno, la refractividad molar y la
polarizabilidad son relativamente similares. Las diferencias se encuentran en
la libre rotacin de la mentona, imposible para la pulegona, el punto de
ebullicin y de inflamacin para la pulegona es mayor (92,548 C y 223,999
C, frente a 72,778 C y 204,999 C para la mentona), lo cual indica mayor
estabilidad qumica para la pulegona. La densidad para la pulegona tambin
es mayor (0,924 frente a 0,881 g/cm3). Finalmente la entalpa de vaporizacin
para la pulegona (46,049 frente a 44,123 kJ/mol), nuevamente es mayor. De
todos estos datos se deduce la estabilidad mayor de la pulegona, frente a la
mentona, en el aceite esencial de la mua proveniente de hojas secas
(Ventos, 2012).
Las caractersticas organolpticas discutidas anteriormente, respecto a la
fragancia del aceite esencial proveniente de hojas frescas, se confirman aqu
pues la mentona provee un olor refrescante y le da un color amarillo plido al
aceite (Lluche, 2011y Food-info, 2012). En este mismo sentido al principio, el
aceite esencial es rico en mentol, luego disminuye su cantidad pues se
71
esterifica generando cidos, modificando su fragancia (Jardn Botnico,
2012).
Se realiz el anlisis estadstico con el software SAS, Versin 8, para evaluar
la significacin de las medias de ambos componentes. As mismo se realiz la
prueba de Duncan para evaluar la eficiencia de ambos tratamientos. Los
datos completos de estos anlisis se encuentran en el anexo III. A
continuacin se muestra el ANVA para evaluar la diferencia significativa entre
la cantidad de mentona de la extraccin de hojas frescas y secas; se realiz el
mismo anlisis para la pulegona. Se compararon estadsticamente los
resultados de mentona y pulegona obtenidos de hojas frescas y secas
obteniendo diferencia significativa en ambos casos. En las tablas 14 y 15 se
muestran los resultados.
Tabla 14: ANVA para el porcentaje de mentona.
Fuente de variacin G.L. S.C. S.M. Fc Ft

Tratamiento 1 28.617 28.617 50.27 0.0193
Error 2 1.139 0.569
Total 3 29.856
Tabla 15: ANVA para el porcentaje de pulegona.
Fuente de variacin G.L. S.C. S.M. Fc Ft

Tratamiento 1 53.071 53.071 170.09 0.0058
Error 2 0.624 0.312
Total 3 53.695
De los resultados presentados se infiere que existe diferencia significativa
entre los rendimientos de cada terpeno encatrado en ambos aceites
En las figuras 26 y 28 del anexo III se muestra el resultado obtenido del
programa; en la primera columna el tratamiento (Model), el error (Error) y el
72
total (Corrected total). En seguida se muestran los valores de grados de
libertad (DF, degree free), suma de cuadrados (Sum of squares), cuadrados
medios (Mean square), F calculado (F value) y F tabulado (F). Estos anlisis
muestran diferencias significativas (P<0,05) entre las medias de ambos
tratamientos, como se observa en los valores F. El coeficiente de variabilidad
indica la variacin que de un experimento, para investigaciones de laboratorio
y agronmicas este valor no debe superar el 20 y 30 %. En esta investigacin
los coeficientes son 2,744 y 1,147 % para ambas componentes
respectivamente, esto significa que la cantidad de mentona y pulegona
expresados en porcentaje de rea son reproducibles. Finalmente obtenemos
la conclusin estadstica que los promedios de contenido de cada
componentes son diferentes.
Se realiz un anlisis posterior por el mtodo del Rango mltiple de Duncan
para determinar cul es el mejor tratamiento. Las figuras 27 y 29 del anexo III
muestran los resultados de la comparacin de promedios con un = 0,05
para la mentona y la pulegona. Observamos que por la aplicacin del Mtodo
de Duncan se forman 2 grupos de tratamientos (A y B) en ambos casos. El
promedio poblacional dentro de un grupo es diferente del promedio
poblacional del tratamiento de cualquier otro grupo. La aplicacin del mtodo
del Rango mltiple de Duncan revela que el mejor tratamiento para la
mentona y la pulegona es el uso de mua fresca y seca, respectivamente. El
rendimiento para la mentona y la pulegona fue 30,1625 y 52,321 %, para
hojas frescas y secas, respectivamente.
73
V. CONCLUSIONES.
La destilacin por arrastre de vapor mostr un comportamiento regular en el
proceso de extraccin de aceite esencial de hojas de mua fresca y seca.
Existi diferencias fisicoqumicas y organolpticas entre los dos aceites
extrados. El aceite proveniente de hojas frescas present un color ms opaco
y un olor ms fragante que el aceite extrado de hojas secas; el ndice de
refraccin y la densidad relativa para el aceite de hojas frescas fue de 1,4765 y
0,92 y para las secas fue 1,4733 y 0,86 respectivamente. Estos resultados
muestran componentes terpnicos diferentes.
El anlisis cromatogrfico del aceite esencial de hojas frescas report un total
de 46 componentes. De los cuales los principales fueron la pulegona (45,036
%) y la mentona (30,168 %). Los componentes mayoritarios totales sumaron
10. Mientras que en hojas secas se encontr 55 componentes, siendo los
principales la pulegona (52,321 %) y la mentona (24,818 %) y los componentes
mayoritarios totales fueron 7.
74
El ANVA de las cantidades de mentona y pulegona de hojas frescas y secas
revelaron diferencias significativas (P<0,05). el anlisis de Duncan revela que el
mejor tratamiento para la obtencin de mentona fue el uso de mua fresca, con
un rendimiento de 30,167% y para la pulegona fue el uso de mua seca, con
un rendimiento de 52,321 %.
75
VI. RECOMENDACIONES
Se sugiere evaluar la influencia de diferentes tiempos de secado sobre los
principales componentes del aceite esencial de la mua.
Se recomienda realizar un estudio que analice la composicin de mentona y
pulegona a diferentes temperaturas de extraccin, para ver cmo afecta la
destilacin a la composicin terpnica del aceite esencial de mua.
Se sugiere realizar modelizacin matemtica para la extraccin del aceite
mediante la destilacin por arrastre de vapor.
Se recomienda comparar los rendimientos y composicin del aceite esencial
extrados por mediante fluidos supercrticos y destilacin por arrastre de
vapor.
Se recomienda realizar estudios qumicos sobre los aceites esenciales que no
slo muestren sus componentes aprovechables, sino tambin su toxicidad,
para evaluar los potenciales riesgos del consumidor.
76
VII. BIBLIOGRAFA
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85
ANEXOS
ANEXO I. Identificacin de la mua
Tabla 16: Caractersticas botnicas identificadas de la mua.
Caractersticas
Color Verde amarronado. Escala RHS-UPOV: Green 42, RHS 137c
Forma de la hoja Posee vellosidad en el haz y el envs, as como ramificaciones
pronunciadas.
Dimensiones Largo, 3,5 0,67 cm; Ancho 2,1 0,57 cm
- Tipo Lanceolada
- pice Acuminado
- Base de la lmina Redondeada
- Bordes Serrado
Tallo Semileoso, erecto. Consistencia blanda, hojas dispersas
regularmente en toda su longitud. Hueco y cilndrico-
rectangular, con vellosidad exterior.
La figura 28 muestra la escala de colores en la cual se encuentran las hojas de
mua. Desde b) hasta f) son colores cercanos a la muestra estudiada. La figura 28a,
es el color ms cercano, Green 42, cdigo internacional RHS 137C.
86
a) d)
c) e)
b) f)
Figura 25: Determinacin del color de mua fresca mediante la carta

colorimtrica RHS.
87
ANEXO II. Resultados cromatogrficos del aceite esencial de mua (fresco
y seco).
Tabla 17: Valores cromatogrficos (hojas frescas).
88
Tabla 18: Valores cromatogrficos (hojas secas).
89
ANEXO III. Resultados estadsticos.
Procesamiento de los valores de porcentaje de rea de los principales
compuestos del aceite esencial de mua. Se utiliz el paquete estadstico del
software SAS v. 8.0
Figura 26: ANVA para los tratamientos de la mentona.
Figura 27: Test de Duncan para los tratamientos de la mentona.
90
Figura 28: ANVA para los tratamientos de la pulegona.
Figura 29: Test de Duncan para los tratamientos de la pulegona.
91

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FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

COMPARACIN DE LOS COMPUESTOS

Bach. CASTRO MATTOS MIGUEL ANGEL

M.Sc. NORMA GAMARRA MENDOZA

PARA OBTENER EL TTULO DE INGENIERO EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS

M.Sc. NORA VELIZ SEDANO ING. SERGIO ANCHIRAICO COSQUILLO

M.Sc. EDGAR ACOSTA LOPEZ M.Sc. MARIA GUTIERREZ GONZALES

ING. JOSE LUIS SOLIS ROJAS

Al Seor Jesucristo, por su muerte vicaria

A mis padres, cuyo sacrificio es una

A la Comunidad Bblica Universitaria, por

A mis amigos, el plato fuerte en el

2.1.1. Descripcin botnica. 13

2.1.2. Taxonoma de la mua. 14

2.1.3. Distribucin y especies. 14

2.1.4. Composicin de la mua. 16

2.2. ACEITES ESENCIALES 17

2.2.2. Isoprenos y terpenos. 18

2.2.3. Composicin qumica y clasificacin. 19

2.2.5. Aceite esencial de mua. 21

2.3. CARACTERIZACIN DE LOS ACEITES ESENCIALES 29

2.4. EXTRACCIN DE ACEITES ESENCIALES 35

III. MATERIALES Y MTODOS 37

3.1. LUGAR DE EJECUCIN. 37

3.2. MATERIA PRIMA. 37

3.3. EQUIPOS Y MATERIALES. 37

3.3.1. Equipos e instrumentos. 37

3.3.2. Materiales varios de laboratorio. 38

3.4. MTODOS DE ANLISIS. 39

3.4.2. Aceite esencial 40

3.5. METODOLOGA EXPERIMENTAL 40

3.5.1. Acondicionamiento y secado de la materia prima 40

3.5.2. Destilacin por arrastre de vapor de agua. 41

3.5.3. Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial 42

3.5.4. Caracterizacin cromatogrfica. 43

3.5.5. Descripcin del diagrama de flujo. 44

3.5.6. Diseo experimental. 47

3.5.7. Anlisis estadstico. 47

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES 48

4.1. IDENTIFICACIN DE LA PLANTA. 48

4.3. ANLISIS ORGANOLPTICO. 54

4.4. ANLISIS FSICOS. 55

4.5. CARACTERIZACIN CROMATOGRFICA. 57

Anexo I Identificacin de la mua. . 86

Anexo II Resultados cromatogrficos del aceite esencial de mua

Anexo III Resultados estadsticos. 90

Figura 1: Distribucin de todas las especies de mua. 15

Figura 2: Estructura del isopreno. 19

Figura 3: Variabilidad de la composicin terpnica. 23

Figura 4: Estructura qumica de la mentona y el mentol. 25

Figura 5: Estructura qumica de la pulegona. 25

Figura 6: Terpenos principales del aceite esencial de mua. 26

Figura 7: Cromatograma de aceite esencial de mua. 27

Figura 8: Partes principales de un cromatgrafo de gases. 32

Figura 9: Tipos de Cromatogramas: (1) Diferencial, (2) Integral. 33

Figura 10: Parmetros que definen un cromatograma. 34

Figura 11: Principio para la deteccin de los picos. 35

Figura 12: Diagrama de flujo experimental de la extraccin de aceite esencial 46

Figura 13: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua fresca 50

Figura 14: Comportamiento total de la extraccin de aceite de hojas frescas. 50

Figura 15: Comportamiento de la extraccin de aceite esencial de mua seca. 52