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4.- Por qu se utilizan roedores para obtener anticuerpos quimricos?

Recordemos que, para la medicina experimental, el ratn es un organismo modelo que


ofrece muchas ventajas con respecto a otros modelos genticos como la mosca
Drosophila, el nematode Caenorhabditis elegans e inclusive la rata. Estas ventajas son:

Al tratarse de un mamfero, una gran parte de sus procesos bioqumicos son


similares al hombre, aunque no hay que perder de vista que no se trata de un
humano en miniatura.
Tienen un tiempo generacional muy corto, son muy prolficos y se adaptan
fcilmente a la vida en los animalarios (bioterios), lo que permite controlar las
variables ambientales en las experimentaciones.
Existe una gran cantidad de lneas genticamente definidas, como las
consanguneas y congnicas, adems de cientos de mutaciones y un gran
nmero de rearreglos cromosmicos disponibles.
Las mejores lneas de mieloma para la produccin de Anticuerpos monoclonales
son las de ratn y de rata.
La existencia de un genoma compuesto por 2.750 millones de pares de bases,
algo ms pequeo que el humano 2.900 millones, pese a la distancia evolutiva
que separa a los roedores de los humanos.
La distancia evolutiva no es bice, sin embargo, para que la mayor parte de los
genes humanos conocidos que estn asociados a enfermedades tengan su
equivalente en el genoma de la rata, y que un alto porcentaje, cercano al 40%,
est conservado en el cdigo gentico de las dos especies.
El artculo publicado en Nature destaca distintas familias asociadas al sistema
inmunolgico, al sentido del olfato, la produccin de feromonas, mecanismos de
protelisis y sensibilidad a sustancias txicas. El uso de la rata como modelo
cientfico cuenta con cerca de 200 aos de historia, lo que le ha convertido en el
animal preferido para el estudio de enfermedades cardiovasculares,
neurodegenerativas, psiquitricas y de comportamiento, metablicas o distintas
formas de cncer, adems de para evaluar su respuesta a frmacos.

De manera resumida, el proceso se inicia con la inmunizacin de ratones de laboratorio


con el antgeno para el cual se desea producir los anticuerpos. Una vez que se tiene la
certeza del estado inmune de estos animales (por lo general esto se establece tomando
muestras de sangre y examinando y/o cuantificando la presencia de anticuerpos
especficos en el suero inmune), los mismos son sacrificados y se obtiene el bazo, en el
cual se encuentra una poblacin numerosa de linfocitos B. A continuacin, los
esplenocitos se fusionan con clulas mielomatosas inmortales que son mantenidas en
el laboratorio en la forma de lneas celulares gracias a su capacidad para crecer
indefinidamente en cultivo. La fusin, fenmeno poco comn en clulas somticas, es
facilitada mediante la adicin de agentes virales (virus Sendai), qumicos
(polietilenglicol) o fsicos (electricidad), de los cuales el ms usado es la sustancia
qumica denominada polietilenglicol (PEG). El producto de la fusin entre un esplenocito
y una clula mielomatosa es denominado hibridoma. Los hibridomas heredan
caractersticas fenotpicas de ambas clulas parentales de manera tal que son capaces
de crecer indefinidamente y de producir el anticuerpo codificado en los genes del
esplenocito pariente. Obviamente, la poblacin de hibridomas obtenida mediante una
fusin, como la descrita anteriormente, es heterognea en cuanto a los anticuerpos
secretados por ella. Con el objeto de seleccionar los hbridos productores del anticuerpo
de inters se realiza clonacin celular. Esta clonacin consiste en sembrar los
hibridomas en microcultivos a una densidad celular tan baja que se garantiza que las
clulas integrantes de la poblacin obtenida en cada microcultivo sean todas idnticas,
es decir, conformen un clon. Los anticuerpos secretados por estas poblaciones clonales
de hibridomas son anticuerpos monoclonales.

Ahora bien, por qu se utilizan roedores en esta obtencin?

Vamos a comenzar explicando qu pasara si esta prctica se hiciera en humanos. Por


razones obvias, la fuente de linfocitos B humanos ms asequible es la sangre perifrica.
Sin embargo, dichos linfocitos se hallan sometidos a supresin por parte de otras
poblaciones celulares como Clulas NK, monocitos, linfocitos T citotxicos, etc.,
presentes en Sangre perifrica que evitan que las clulas B se activen al reconocer a
su antgeno, a menos que dichas poblaciones supresoras sean eliminadas. Lo que
ocurre con los roedores es que se los va a sacrificar, para poder tener el bazo y con el
los todos los linfocitos disponibles, pues segn estudios indican que las clulas de
tejidos linfoides slidos son mejor fuente que las procedentes de sangre perifrica.

Los anticuerpos monoclonales de ratn o murinos, pese a ser perfectamente vlidos


para todos los usos teraputicos, no son tiles para su empleo en seres humanos,
especialmente en terapias que requieran tratamientos prolongados, ya que el sistema
inmune los identifica como cuerpos extraos y reacciona para destruirlos, por lo que su
eficacia teraputica se ve claramente disminuida.

A pesar de que se ha hablado de que tal respuesta podra resultar, en principio,


beneficiosa en algunos casos de cncer (gracias a la eventual formacin de anticuerpos
que reproduzcan las estructuras inmunognicas del antgeno tumoral: anticuerpos
antiidiotpicos), la reaccin antirratn o antirrata puede constituir un factor limitante
objetivo de la eficacia y utilidad teraputica de los AMM, de manera particular en
aquellas situaciones donde fuera necesario elevar las dosis y dilatar o repetir el
tratamiento. Adems pueden presentar posibles efectos secundarios como
nefrotoxicidad, reacciones anafilcticas, etc. Por ello se debera obtener anticuerpos
monoclonales humanos.

Para resolver las dificultades mencionadas se han desarrollado varias estrategias. Una
de ellas es la fusin de los linfocitos B humanos y mielomas de ratn o de rata. Mejora
as la frecuencia de formacin de hbridos, pero tales heterohibridomas (hibridomas
formados de dos especies diferentes) pierden eventualmente su capacidad de secretar
inmunoglobulinas. Entre otras cosas, este efecto se debe a que el contenido gentico
de los hbridos entre clulas murinas y humanas es inestable, y con las generaciones
en cultivo stos pierden muy frecuentemente, y de manera selectiva, los cromosomas
humanos. Para superar tal inestabilidad se han establecido lneas de heteromielomas,
como parejas de fusin. Llmanse heteromielomas las clulas hbridas generadas a
partir de la fusin de linfocitos humanos y mielomas de ratn o rata, constituidas en
lneas estables luego del proceso de prdida de algunos cromosomas humanos. Tras
una nueva fusin con linfocitos humanos, el hbrido resultante manifestara una mayor
estabilidad debido, as se presume, a la presencia de ADN humano.
Y la otra va en donde se ha obtenido una segunda generacin de anticuerpos
monoclonales, basada en la humanizacin de los anticuerpos monoclonales de ratn
mediante ingeniera gentica, evitando as el rechazo del sistema inmune al ser
introducidos en el organismo. Son los llamados anticuerpos quimricos. Un
anticuerpo quimrico es creado de tal manera que incorpora parte animal y parte
humana. La parte animal o hipervariable (un 30%) es indispensable para que el
anticuerpo reconozca la sustancia extraa (antgeno) y la parte humana (un 70%) es
responsable de que el sistema inmunitario pueda contribuir a aadir efectividad a su
accin. De este modo es posible modificar los anticuerpos monoclonales, casi de
manera infinita para dotarlos de propiedades efectoras y de reconocimiento diferentes
a las originales y minimizar la posibilidad de generar respuesta inmune frente al propio
anticuerpo teraputico.

Aporte de Anticuerpos humanizados

Los ratones SCID (con inmunodeficiencia combinada severa) carecen funcionalmente


de clulas T y B siendo incapaces de reconocer lo propio de lo impropio. Esta ausencia
de inmunidad especfica frente a antgenos puede aprovecharse para repoblar dichos
ratones con linfocitos humanos de sangre perifrica e incluso se ha demostrado que en
los ratones SCID repoblados puede insucirse una respuesta inmune secundaria si los
linfocitos B humanos se hallaban previamente sensibilizados frente al antgeno.