Manual de Bio - Agronomia

INGENIERIA AGRONOMA UNIVERSIDA D NACIONAL DEL SANTA
PRACTICA N0 1
FOTOCOLORIME TR A
I.- INTRODUCCION
La colorimetra es una de las tcnicas ms usadas en Bioqumica cuando se requiere determinar la

concentracin de un compuesto o grupo de compuestos que forman parte de una solucin coloreada,
ya sea naturalmente o hecha as mediante reacciones qumicas especficas.
Si un rayo de luz monocromtica, de intensidad inicial Io pasa a travs de una solucin, parte de la
luz es absorbida, de manera que la intensidad de luz transmitida It es menor que Io.
La relacin entre It e Io depende de la longitud del medio absorbente, I; y de la concentracin de la

solucin, c.
Solucin absorbente
concentracin o
Rayo Rayo
Incidente Emergente
Luz
Monocromtica
Intensidad Io Intensidad It
Espesor de la
Solucin
Fig. 1: Absorcin de la luz por una solucin
Estos factores se hallan relacionados en la ley de LAMBER y BEER que se expresa en la siguiente
frmula:
Log (Io/It) = E.C.l.
DONDE:
Io = Intensidad de luz incidente
It = Intensidad de luz transmitida
E = Coeficiente de extincin (contante que depende de la longitud de onda y del soluto)
l = Distancia que recorre la luz a travs de la solucin
C = Concentracin de la solucin.
En esta frmula log (Io/It) se conoce como DENSIDAD PTICA (D.O.) o ABSORBANCIA, la cual es
directamente proporcional a la concentracin de la solucin e inversamente propor cional a la
intensidad de la luz transmitida.
La cantidad de la luz absorbida por una solucin puede ser medida por los FOTOCOLORIMETROS ,
aparatos que funcionan a base de filtros, y los ESPECTROFOTMETROS que utilizan prismas o redes
de difraccin que dispersan la luz, formando un espectro del cual se elige la longitud de onda o la
banda.
Un espectrofotmetro tiene dos aplicaciones importantes, una de ellas es para medir la absorbancia o
transmitancia en una determinacin cuantitativa basada en la ley de BEER. Otras es para medir los
espectros de absorcin se sustancias coloridas. Como cada sustancia colorida tiene su propio
BIOQUIMICA 1 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

espectro, los espectros son importantes para la identificacin cualitativa de sustancias y para elegir
una longitud de onda adecuada en una determinacin espectrofotomtrica cuantitativa.
Para calcular la concentracin de una solucin se puede recurrir a dos procedimientos:
Factor de calibracin
Curva de calibracin o curva estndar
1.- FACTOR DE CALIBRACION (FC).- Es la cantidad en peso de una sustancia que corresponde a una
unidad de lectura en el fotocolormetro o espectrofotmetro. Se halla dividiendo la concentracin
de muestras estndar (solucin de composicin qumica igual a la muestra problema, y de
concentracin conocida) entre su D.O. Para mayor exactitud se obtienen varios FC y se trabaja
con el promedio. Esta divisin debe ser un valor aproximadamente igual para cada estndar,
puesto que expresa la proporcionalidad entre D.O. y concentracin.
2.- CURVA ESTNDAR.- Este mtodo consiste en preparar soluciones estndar de diferente
concentracin y construir un grfico en un sistema de coordenadas en el que se colocan las
lecturas del estndar en la ordenada y la concentracin (en g%, mg% o moles/l, etc) en la
abscisa. La concentracin de la muestra problema se obtendr ploteando su lectura en el grfico
y en el punto de interseccin se trazar una perpendicular al eje de las abscisas donde se leer
su concentracin.
II.- OBJETIVOS
2.1. Obtener el espectro de absorcin de una sustancia

2.2. Preparar una curva de calibracin para una sustancia coloreada
2.3. Determinar la concentracin de una muestra problema mediante factor de calibracin y curva
de calibracin.
III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

3.1 EQUIPOS
3.1.1 Espectrofotmetro
3.1.2 Balanza
3.1.3 Agitador magntico
3.2 MATERIALES Y REACTIVOS
3.2.1 Azul de metileno 0,1%
3.2.2 Sulfato de cobre 10%
3.2.3 Dicromato de potasio 0,1%
3.2.4 Agua destilada
3.2.5 Pipetas de 5 10 ml
3.2.6 Matraces
3.2.7 Probetas
IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

4.1 OBTENCION DEL ESPECTRO DE ABSORCIN
4.1.1. Encender el espectrofotmetro (siga las instrucciones del prof.)
4.1.2. Preparar 20 ml de las soluciones de: CuSO 4, Azul de metileno, K2CrO2
4.1.3. Colocar agua destilada (solvente) en una cubeta del espectrofotmetro para que sirva
de blanco
4.1.4. Medir el blanco a la longitud de onda seleccionada como inicial: 400 nm
4.1.5. Reemplazar el blanco con una cubeta que contenga las muestras a medir
4.1.6. Realizar lecturas a intervalos de 25 nm

4.1.7. Construir los espectros de absorcin para cada solucin representando el valor de
absorbancia en el eje vertical y la longitud de onda en el eje horizontal.
4.2 CALCULO DE LA CONCENTRACIN DE UNA SOLUCIN

4.2.1. Preparar soluciones de acuerdo al siguiente esquema:
TUBOS (ml) I II III IV V VI

CuSO4 --- 1 2 3 4 5
Agua destilada 5 4 3 2 1 ---
4.2.2. Leer las D.O. de las soluciones preparadas a la longitud de onda adecuada (resultado
de 4.1)
4.2.3. Construir en papel milimetrado una curva de calibracin con las D.O. y sus
concentraciones respectivas.
4.2.4. Hallar el F.C. para cada solucin y sacar un promedio
4.2.5. Determinar la concentracin de la muestra problema (proporcionado por el docente)
por los dos mtodos estudiados.
V.- DATOS EXPERIMENTALES

5.1. Tabla de datos obtenidos (D.O. a las diferentes longitudes de onda)
VI.- CALCULOS RESULTADOS Y DISCUSION

6.1. Utilizar la frmula C1 V1 = C2 V2 para determinar las concentraciones de las soluciones,
preparadas y construir la curva de calibracin
6.2. Efectuar los clculos necesario de la muestra problema en mg%
6.3. Con los datos obtenidos construir el espectro de absorcin de cada una de las sustancias
estudiadas.
VII. CONCLUSIONES
7.1. Anotar sus conclusiones de la prctica de acuerdo a los objetivos y resultados.
VIII. CUESTIONARIO
8.1. Cul crees que es mtodo ms exacto para obtener la concentracin de una muestra
problema, el grfico o el analtico? Por qu?
8.2. Qu factores alteran la ley de LAMBER y BEER?
8.3. El color que exhibe una sustancia est determinada por la luz que transmite o que absorbe?
8.4. A fin de probar la validez de la ley de BEER en la determinacin de la vitamina A, se prepararon
soluciones de concentracin conocida y se trataron por un procedimiento normalizado con
tricloruro de antimonio en cloroformo para producir una coloracin azul. El porcentaje de
transmisin de la luz incidente filtrada para cada concentracin, expresada en g ml-1, fue el
siguiente:
Concentracin g ml-1 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0

Transmisin, % 66,8 44,7 29,2 19,9 13,3
IX.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

9.1. Albert, R. y F. Daniela. 1989 Fisicoqumica. 2da. Reimpresin. Continental S.A. de C.V. Mxico,
1970
9.2. Ayres, G. 1970. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2da. Edicin. Harla. Mxico
9.3. Horna, E. La clula. Mdulo I de Bioqumica. Chimbote. Universidad nacional del Santa. 1988.

PRACTICA N0 2
D E MOS TRA CIN D E LA A CTIV ID A D D E U NA OXID ORRE D U CTA S A
I.- INTRODUCCION
Las enzimas son protenas altamente especializadas que funcionan como catalizadores biolgicos de
las reacciones celulares. Existen seis clases principales de enzimas de acuerdo al tipo de reaccin
catalizada; una de estas es la clase de las oxidorreductasas.
Como ya se sabe, los organismos obtienen su energa a travs de reacciones de oxidacin reduccin
catalizadas por las oxidorreductasas y su capacidad de realizar una determinada reaccin depende
del potencial redox (Eh). Existen microorganismos que pueden desarrollarse en ambientes pobres o
ricos en oxgeno, la presencia de mayores o menores concentraciones de oxgeno en un alimento
indicarn si ste es un medio oxidante o no, o lo que es lo mismo si posee valores altos o bajos de E h
respectivamente; de acuerdo con esto, los microorganismos se clasifican en:
1. Aerobios estrictos: Crecen en presencia de oxgeno

Eh : + 350 a 500mv
2. Anaerobios estrictos: Crecen en ausencia de oxgeno

Eh : - 150mv
3. Aerobios facultativos: Crecen en presencia o ausencia de oxgeno

Eh : - 350 a + 500 mv
La determinacin de los potenciales de xido reduccin en alimentos se realiza con electrodos

apropiados y tambin se usan algunas sustancias que se van a colorear o decolorar a diferentes
valores de Eh
En la prctica se usar el azul de metileno, un indicador de xido reduccin, con la finalidad de

estimar en forma aproximada la carga microbiana de leche. El ensayo se denomina PRUEBA DE LA
REDUCTASA, una prueba rpida que se usa para inspeccionar leche tratada o no por el calor y
destinada a los consumidores. El fundamento radica en que por la actividad microbiana sus
nutrientes van a ser oxidados y otras sustancias, entre ellas el indicador, van a ser reducidas por
accin enzimtica.
II.- OBJETIVOS
2.1. Verificar la actividad de una enzima de xido reduccin
2.2. Estimar el nmero de microorganismos presentes en un alimento mediante la prueba de la
reductasa.

3.1 EQUIPOS
3.1.1 Balanza analtica
3.1.2 Bao mara
3.2.1 50 ml de leche fresca (por sub grupo de prctica)
3.2.2 05 ml Solucin diluida de azul de metileno
3.2.3 Termmetro
3.2.4 100 ml Agua destilada
3.2.5 Pipetas de 1 10 ml
3.2.6 03 Tubos de ensayo 15 X 150

4.1 Mezclar cuidadosamente la muestra por inversin y agitacin y colocar 10 ml en un tubo de
ensayo, cuidando que los lados internos no se mojen de leche.

4.2 Aade 1 ml de la solucin de azul de metileno evitando que la pipeta haga contacto con la
muestra, ni con las paredes del tubo.
4.3 Tapar aspticamente el tubo con tapn de goma, invirtelo 2 veces de tal manera que toda la
columna de aire se eleve por encima de la leche.
4.4 Despus de 5 minutos colocar el tubo de ensayo en el bao de agua a 37.5 0,5 0C, cuida que
el agua se mantenga por encima del nivel de la leche en el tubo y que el interior del bao sea
oscura.
4.5 Preparar 2 tubos control, uno que contenga 1 ml de agua corriente y 10 ml de leche similar a
la que se est probando, y otro que contenga 1 ml del indicador y 10 ml de leche. Ambos
tubos control tienen que introducirse en agua hirviente por lo menos durante 3 minutos.
4.6 Se considera que la leche est en buen estado cuando no se decolora despus de haberla
incubado 30 minutos los tres tubos a 37 C. Una leche decolorada es aquella que ha perdido el
color en toda la columna o hasta 5 mm de la superficie. Registra tus resultados.
V.- RESULTADOS Y DISCUSION

5.1. Representar mediante esquemas los resultados obtenidos
VI.- CONCLUSIONES
6.1. Anotar las conclusiones de la prctica de acuerdo a los objetivos propuestos
VII. CUESTIONARIO
7.1. Qu es el potencial redox?
7.2. Qu correlacin existe entre el nmero de microorganismos en una muestra alimenticia y el
tiempo de reduccin del azul de metileno?
7.3. Una muestra de carne tendr los mismos valores de E h en toda su masa?
7.4. Seale dos muestras alimenticias en las que se puede aplicar la prueba de la reductasa?
7.5. Que razones hacen difcil la determinacin de Eh en alimentos?
VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

8.1. Horna, E.1988. Transformaciones energticas. Mdulo 2 de Bioqumica. Universidad Nacional
del Santa. Chimbote Per
8.2. Morris, J. G. 1976. Fisicoqumica para Bilogos. Revert S.A. Espaa.

PRACTICA N0 3
D E MOS TRA CIN D E L A NA TU RA LE ZA PROTE ICA

D E LA E NZIMA CA TA LA S A E N V E GE TA LE S
I.- INTRODUCCION
Las enzimas son la clase ms numerosa y especializada de las protenas que funcionan como
catalizadores biolgicos para las reacciones celulares. Las enzimas tienen enorme poder cataltico,
gran especificidad y actividad regulada, intervienen en la transformacin de la energa en diversas
formas de trabajo. Las reacciones mas simples como son la autlisis de los tejidos animales, de
considerable inters para la industria alimenticia, en lo que se refiere al ablandamiento de la carne
durante el sazonado, son catalizadas por las catepsinas, las cuales se liberan y activan luego de
ocurrida la muerte. El efecto acelerador es uno de los ms altos que se conocen, multiplica la
velocidad de la reaccin hasta en un milln de veces.
Las enzimas son protenas que contienen los mismos aminocidos que se encuentran en otras
protenas. Al igual que otras protenas tambin tiene una estructura tridimensional, que representa la
conformacin de contenido de energa mnimo, y pueden consistir de una sola o de varias cadenas
polipeptdicas.
El objetivo del presente experimento es evidenciar que las enzimas son protenas que gozan de las
propiedades de stas y que son sensibles a todos los agentes fsico-qumicos que actan sobre los
mismos, haciendo variar su comportamiento y actividad.
II.- OBJETIVOS
2.1. Obtener un extracto crudo de la enzima catalasa
2.2. Demostrar cualitativamente el efecto de cidos, bases y sales sobre la actividad de la catalasa .

3.1 EQUIPOS
3.1.1 Congeladora
3.1.2 Centrfuga
3.1.3 Estufa
3.2 MATERIALES Y REACTIVO
PROPORCIONADO POR EL ALUMNO
3.2.1 Tomates verdes (inmaduras)
3.2.2 Papas verdes (inmaduras)
3.2.3 Manzanas verdes (inmaduras)
3.2.4 Un cuchillo de cocina
3.2.5 Un rayador
3.2.6 Dos paquetes de gasa o papel de filtro
PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO
3.2.7 Hidrxido de sodio 2N
3.2.8 cido clorhdrico 0.5N
3.2.9 Acido tricloroactico 20%
3.2.10 Sulfato de cobre 20%
3.2.11 Buffer fosfato 0.05 M, y 0.1 M pH 6,5
3.2.12 Perxido de hidrgeno 3%
3.2.13 Cloruro de sodio 0.15 M
3.2.14 Tubos de ensayo
3.2.15 Embudos
3.2.16 Matraces
3.2.17 Pipetas de 5 y 10 ml
3.2.18 Mortero

4.1 OBTENCION DEL EXTRACTO CRUDO

4.1.1. Pelar los tomates verdes y eliminar la cscara, el pericarpio almacenarlo a -70 0C
4.1.2. Limar el pericarpio congelado, adicionar 3 ml de Buffer fosfato 0.1 M pH 6,5
4.1.3. Filtrar el extracto crudo a travs de 2 capas de gasa o papel de filtro y centrifugar a 10
000 rpm por 15 minutos y guardar las alcuotas a -18 0C
4.2 DEMOSTRACIN DE LA NATURALEZA PROTEICA
4.2.1 Armar el siguiente sistema:

Enzima 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
NaOH 2N ---- 2.4 ---- ---- ---- ----
HCl 0.5N ---- ---- 2.4 ---- ---- ----
ATCA 20% ---- ---- ---- 2.4 ---- ----
CuSO4 20% ---- ---- ---- ---- 2.4 ----
Buffer Fosfato 0.05 M pH 6,5 ---- ---- ---- ---- ---- 2.4
Dejar en reposo los 6 tubos durante 20 minutos a 30 0C
4.2.2 Preparar el siguiente sistema

Buffer fosfato 0.05 M pH 6,5 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
NaCl 0.15 M 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
H2O2 3% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
4.2.3 Preincubar por 2 minutos a 25 0C, luego agregar a cada uno de los tubos 2,0 ml de la
enzima tratada en el paso 4.2.1.
4.2.4 Dejar en incubacin durante 5 minutos a 25 0C y determinar la actividad enzimtica
cualitativamente de la siguiente manera:
Presencia de actividad enzimtica (+) = Formacin de gas

Ausencia de actividad enzimtica (-) = Ausencia de gas
TUBOS I II III IV V VI
Tomates
Papas
Manzanas
VI. CONCLUSIONES
6.1. Anotar sus conclusiones de la prctica.
VII. CUESTIONARIO
7.1. Qu es un extracto crudo?
7.2. A qu clase de enzima corresponde la catalasa? Su nombre y su cdigo EC.
7.3. Qu otros factores pueden considerarse para demostrar que las enzimas son protenas ?
7.4. Indique 4 enzimas que pueden extraerse de vegetales
7.5. Importancia de las enzimas

8.1. Braverman, J.B. 1980. Introduccin a la Bioqumica de los alimentos. El manual moderno.
Mxico.
8.2. Metzler, E.D. 1981. Bioqumica, Omega. Barcelona.

PRACTICA N0 4
D E TE RMINA CIN D E LA A CTIV ID A D E NZIM TICA

D E LA A LFA A MILA S A V E GE TA L
I.- INTRODUCCION
Las enzimas son biocatalizadores de naturaleza proteica cuya funcin es acelerar las reacciones
qumicas llevndolas ms rpidamente a su posicin de equilibrio. Pertenecen al grupo de las
protenas globulares cuyos pesos moleculares oscilan entre 10 4 y 106 daltons; pueden consistir de
una sola o de varias cadenas polipeptdicas, y contener tambin partes no proteicas.
En una reaccin bioqumica catalizada por enzimas, a medida que progresa la reaccin se incrementa
la concentracin de los productos a expensas de la desaparicin de los correspondientes sustratos,
en tanto que pertenece fija la concentracin de la enzima. De esto podemos deducir que si se desea
medir la actividad de una enzima puede hacerse controlando el sustrato no transformado (sustr ato
residual) o controlando los productos liberados. Tambin puede medirse la modificacin de los
factores, en el caso de enzimas que requieren estas sustancias.
La actividad cataltica se expresa en trminos de unidades de actividad, y para ello la Comis in de

Enzimas para la Unin Internacional de Bioqumica sugiri que Una unidad (u) de cualquier enzima
se define como la cantidad que catalizar la transformacin de un micromol de sustrato por minuto
bajo condiciones definidas de pH y temperatura.
En la prctica se estudiar la actividad de una amilasa de origen vegetal, midiendo el sustrato
residual. Asimismo, se medir su actividad especfica, que viene a constituir un criterio de pureza, y
se define como el nmero de unidades de enzima por mg de protena.
II.- OBJETIVOS
2.1. Determinar la actividad enzimtica de una amilasa, extrada de trigo germinado, dosando
almidn residual.
2.2. Determinar la actividad especfica de la amilasa vegetal

3.1 EQUIPOS
3.1.1 Estufa
3.2.1 Semillas germinadas de trigo
3.2.2 Semillas germinadas de cebada
3.2.3 Solucin de almidn 0.1%
3.2.4 cido clorhdrico 0.5N
3.2.5 Lugol
3.2.6 Reactivo de Biuret
3.2.8 Embudos
3.2.9 Mortero
3.2.10 Pipetas de 1, 5 y 10 ml
4.1 EXTRACCION DE LA AMILASA
4.1.1. Poner a germinar 3 das, 50 semillas
4.1.2. Triturar las semillas cuando las raicillas tenga 0.5 cm de largo, adicionando 10 ml de
buffer + cloruro de calcio.
4.1.3. Filtrar en gasa
4.2 DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
4.2.1 Armar el siguiente sistema:

Almidn Almidn residual

TUBOS (ml) inicial
I II III IV
Sustrato 1.0 1.0 1.0 1.0
Dejar en incubacin a 30 0C durante 5 minutos
Extracto crudo de enzima --- 0.1 0.2 0.3
0
Mezclar e incubar a 30 C durante15 minutos exactos
Acido clorhdrico 0.5 N 1.0 1.0 1.0 1.0
Dejar en reposo por 5 minutos a temperatura ambiente
Agua destilada 9.9 9.8 9.7 9.6
Lugol 0.5 0.5 0.5 0.5
4.2.2 Mezclar, medir las absorbancias despus de 5 minutos a 620 nm

4.2.3 Anotar las absorbancias de los 4 tubos de prueba.
4.3 DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ESPECIFICA

4.3.1 Determinar el contenido proteico del extracto crudo de la enzima con el reactivo de
Biuret de acuerdo al siguiente esquema:
TUBOS (ml) I II III IV

Preparado enzimtico --- 0.2 0.1 0.05
Agua destilada 1.0 0.8 0.9 0.95
Reactivo de Biuret 4.0 4.0 4.0 4.0
4.3.2 Mezclar e incubar a 37 0Cdurante 30 minutos

4.3.3 Realizar las lecturas de absorbancia a 540 nm calibrando a cero con el tubo N0 1
V.- DATOS EXPERIMENTALES

5.1. Determinacin de la actividad enzimtica
N0 TUBO ABSORBANCIA (.. nm)
I
II
III
IV
5.2. Determinacin de la actividad especfica
N0 TUBO ABSORBANCIA (.. nm)

I
II
III
IV
VI. CALCULOS, RESULTADOS Y DISCUSION

6.1. Determinar la concentracin del almidn (mg/ml), multiplicando absorbancia por factor de
calibracin. Obtener el promedio de los tubos II, III, y IV.
6.2. Calcular las unidades de enzima (U) de la siguiente forma:
6.3. Determinar mg de protena/ml = Absorbancia X Factor

6.4. Obtener el promedio de los tubos II, III, IV, y determinar la Actividad Especfica (AE) de la
siguiente manera:
6.5. Realizar un flujograma de la obtencin de la amilasa.
VII. CONCLUSIONES
7.1. Anotar sus conclusiones de la prctica
VIII. CUESTIONARIO
8.1. En la sntesis de arginina a partir de cido glutmico se observaron las siguientes reacciones:
1 2 3 4
Glu N ac. Glu Orn Cit Arg
Siendo 1, 2, 3, 4 enzimas
Indica cules son los sustratos y productos correspondientes para estas enzimas mediante un
cuadro
8.2. Por qu se sometieron las raicillas del cereal a un proceso fsico y qumico en el proceso de
extraccin?
8.3. Si se te da una solucin que supuestamente contiene una enzima, Cmo determinaras en la
solucin la presencia de una enzima que cataliza la hidrlisis del almidn?
8.4. Represente mediante un flujograma el proceso de extraccin de una amilasa de una fuente
diferente a la utilizada en prctica
8.5. Cmo se puede incrementar la actividad especfica de una enzima?
9.1. Horna, E. 1988. Enzimas. Mdulo 03 de Bioqumica. Universidad Nacional del Santa. Chimbote
Per.
9.2. Villavicencio, M. 1993. Bioqumica. Tomo I. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa. Lima
Per.

PRACTICA N0 6
DETERMINACIN CUALITATIVA DE CARBOHIDRATOS
I.- INTRODUCCION
Los carbohidratos desempean en los organismos vivos diversas funciones. Los animales los emple an
de preferencia como combustible para producir energa, cuando los reciben en exceso los almacenan
en forma de polisacridos (glucgeno) o los convierten en grasa para ser utilizadas en el momento
oportuno. Las plantas pueden sintetizar o almacenar grandes cantidades de carbohidratos,
especialmente mientras ocurre la fotosntesis, los que servirn como fuente energtica para ellos
mismos o para los animales.
Por otro lado, diversos glcidos o derivados de ellos contribuyen a la formacin a la formacin de
estructuras de sostn, pues son constituyentes de sustancias como la celulosa en los vegetales, los
mucopolisacridos en los animales y diversos glcidos complejos en la pared bacteriana. Adems,
numerosas molculas esenciales para cualquier clula, como los cidos nucleicos y numerosas
coenzimas poseen residuos hidrocarbonados.
Qumicamente, los carbohidratos son derivados aldehdicos o cetnicos de alcoholes superiores

polivalentes o compuestos que por hidrlisis dan estos derivados. Se clasifican en c uatro gran des
grupos: Monosacridos, disacridos, oligosacridos y polisacridos. Tiene diferentes propiedades
fsicas y qumicas, y en base a ellas existen mtodos que nos permiten diferenciarlos, lo que
constituye el objetivo de esta prctica.
II.- OBJETIVOS
2.1. Reconocer los diferentes tipos de carbohidratos

2.2. Identificar la presencia de azcares reductores provenientes de la hidrlisis cida de muestras
de carbohidratos.

3.1 EQUIPOS
3.1.1 Balanza
3.1.2 Bao mara
3.2.1 Una papa
3.2.2 5 gr de almidn por grupo de trabajo
3.2.3 Solucin de glucosa 1 %
3.2.4 Solucin de sacarosa 1 %
3.2.5 Solucin de maltosa 1 %
3.2.6 Solucin de almidn 1 %
3.2.7 Solucin de fructosa %
3.2.8 Solucin alcohlica de Alfa naftol 5 %
3.2.9 Acido sulfrico Q.P.
3.2.10 Reactivo de Selivanoff
3.2.11 Reactivo de Bradford
3.2.12 Acido clorhdrico 1,5 %
3.2.13 Solucin de Hidrxido de potasio 1 %
3.2.14 Solucin de Fehling A
3.2.15 Solucin de Fehling B
3.2.17 Pipetas de 1, 5 y 10 ml

4.1 ACCION DE LOS ACIDOS OXIDANTES

4.1.1. REACCIN DE MOLISH.-
Es una reaccin general de los carbohidratos que sirve para detectar su presencia en
una sustancia problema. Una reaccin negativa es una buena evidencia de la ausencia
de azcares, mientras que una prueba positiva es simplemente indicadora de la
posibilidad de su existencia y requiere una mayor investigacin.

Sol. Glucosa 1% 2.0 ---- ---- ----
Sol. Sacarosa 1% ---- 2.0 ---- ----
Sol. Maltosa 1% ---- ---- 2.0 ----
Sol. Almidn 1% ---- ---- ---- 2.0
Sol. Alfa naftol 5% (gotas) 02 02 02 02
Mezclar bien agitando el tubo, agregar lentamente por las paredes
Acido sulfrico 2.0 2.0 2.0 2.0
Observar en la interfase la aparicin de un anillo rojo violeta oscuro, lo cual indica una
reaccin positiva. Esta reaccin es debida a la condensacin de los furfurales formados
por la accin del cido con el alfanaftol.
4.1.2. REACCION DE SELIVANOFF.-

Esta es una reaccin especfica para azcares con grupo funcional cetnico.
TUBOS (ml) I II III

Sol. Fructosa 1% 1.0 ---- ----
Sol. Glucosa 1% ---- 1.0 ----
Sol. Sacarosa 1% ---- ---- 1.0
Rx. Selivanoff 5.0 5.0 5.0
Mezclar bien y someter a bao mara hirviente. Observar lo que sucede en los tubos, a
intervalos de 3 minutos, durante 15 minutos.
La reaccin es positiva cuando se observa una coloracin rojo cereza.
4.1.3. REACCION DE BARFOED.-

Esta prueba se utilizar para diferenciar monosacridos de disacridos

Sol. Glucosa 1% 1.0 ---- ---- ----
Sol. Fructosa 1% ---- 1.0 ---- ----
Sol. Sacarosa 1% ---- ---- 1.0 ----
Sol. Maltosa 1% ---- ---- 1.0
Rx Barfoed 5.0 5.0 5.0 5.0
Mezclar bien y someter a bao mara hirviente por espacio de 5 minutos, controlar el
tiempo en que aparecen las reacciones positivas (precipitado rojo naranja) en los
diferentes tubos. Interpretar los resultados.
4.1.4. ACCION DE LOS ALCALIS SOBRE LOS CARBOHIDRATOS

Las aldosas y cetosas, como los carbohidratos compuestos que contienen un grupo
azcar libre, presentan el fenmeno de la tautomerizacin cuando son sometidos a la
accin de los lcalis dando origen a las formas enlicas que se comportan como cidos
dbiles y tiene la capacidad de unirse al lcali dando lugar a sales enlicas que tienen
propiedades reductoras.

De estas propiedades se valen los mtodos para la identificacin y cuantificacin de

muchos azcares (Reaccin de Benedict, Fehling, etc.). En la prctica se har una
hidrlisis cida de un polisacrido y luego se proceder a identificar el azcar reductor
correspondiente.
PROCEDIMIENTO:
Triturar en un mortero una papa sin cscara
Agregar 5 10 ml de agua destilada, mezclar y decantar el sobrenadante en un
vaso de precipitacin.
En un tubo de ensayo medir 2 ml del sobrenadante anterior, y en otro tubo de
ensayo medir 2 ml de solucin de almidn previamente preparado
Aadir 2 ml de HCl 1,5 % a cada uno de los tubos
Calentar los tubos de ensayo en bao mara hasta que hierva durante 15 minutos;
enfriar, adicionar 5 gotas de KOH 1%
Aadir a los tubos anteriores 1 ml de las soluciones de Fehling A y B, luego
someterlos a ebullicin entre 3 y 5 minutos. Observar los que sucede
5.1. Los resultados de cada prueba indicarlos en un cuadro como el que sigue:
TUBOS I II III IV
VI. CONCLUSIONES
6.1. Indicar las conclusiones de la prctica.
VII. CUESTIONARIO
7.1 Cul de las pruebas permite diferenciar aldosas de cetosas? Fundamente su respuesta.
7.2 El almidn ingerido por el ser humano sufre el mismo tipo de hidrlisis cida realizada en la
prctica? Cmo se hidroliza?
7.3 Cuales son las unidades monomricas de:
- Lactosa - Sacarosa
- Maltosa - Celulosa
7.4 Representa la unin de molculas en la formacin del almidn, glucgeno, y celulosa
7.5 De los siguientes azcares, Cul no es reductor? por qu?
- Glucosa - Sacarosa
- Lactosa - Fructosa
8.1. Bohinski, R. 1978. Bioqumica 2da edicin. Fondo Educativo Latinoamericano S.A.
8.2. Morrison, R. y Boyd. 1985. Qumica orgnica. 2da edicin. Fondo Educativo Latinoamericano S.A .
Mxico.
8.3. Villavicencio, M. 1993. Bioqumica. A&B S.A. Editores, Lima Per.

PRACTICA N0 7
EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE PEC TINAS
I.- INTRODUCCION
Las clulas jvenes de las plantas superiores presentan compuestos diferentes a la celulosa en las
paredes celulares, stas son las sustancias pcticas (cidos pcticos y protopectina) constituidos por
una cadena de cidos galacturnicos, unidos por enlaces alfa 1 4, muchas veces esterificados con
metanol. Tambin se han encontrado en su estructura otros azcares como: arabinosa, ramnosa,
manosa, metilxilosa y metilfucosa.
Estos heteropolisacridos son coloides hidrfilos por lo que tienen la propiedad de absorber agua y
transportarla de una clula a otra.
Son responsables de la consistencia firme de la textura de las frutas y hortalizas; el ablandamiento de

estos alimentos se debe en parte a las modificaciones qumicas de las pectinas por la accin de las
enzimas pectolticas. En la industria de los alimentos se utiliza como espesante por su poder
gelificante.
II.- OBJETIVOS
2.1. Obtener pectinas a partir de la manzana
2.2. Identificar las propiedades qumicas de las pectinas.

3.1.1 Manzanas
3.1.2 Gasa
3.1.3 Estufa
3.1.4 Cocina
3.1.5 Acido clorhdrico 0,1 %
3.1.6 Etanol
3.1.7 Acetona
3.1.8 Hidrxido de sodio 3 N
3.1.9 Hidrxido de bario 3 N
4.1 OBTENCION DE LA PECTINA.-

Triturar unas manzanas en un mortero, colocar en una gasa de doble capa y prensar para
eliminar el jugo. El bagazo obtenido colocarlo en una placa petri, luego llevar a secar en
estufa a 100 0C por espacio de 20 - 30 minutos
Remover la muestra y colocarlo en un vaso de precipitacin
Aadir 20 ml de agua destilada, remover para rehidratacin; luego adicionar 50 ml de HCl
diluido (pH: 1 3) y mantener a una temperatura de 70 0C por espacio de 2 horas
Escurrir y prensar en gasa para eliminar el bagazo, enfriar el lquido obtenido y dejar
sedimentar.
En una cocina hervir el lquido para concentrar su volumen hasta de su volumen.
4.2 IDENTIFICACION.-
Seguir las indicaciones del siguiente cuadro, cada tubo debe ser observado inmediatamente
para un mejor reconocimiento.
TUBOS (ml) I II III IV CARACTERISTICAS

Muestra 1.0 1.0 1.0 1.0 -----

NaOH 3N (gotas) 02 ---- ---- ---- pp amarillo gelatinoso
Ba(OH)2 3N ---- 0.5 ---- ---- pp blanco
Acetona ---- ---- 5 ---- gel incoloro
Etanol ---- ---- ---- 5 gel incoloro
5.1. Los resultados de cada prueba indicarlos en un cuadro como el que sigue:
CARACTERISTICAS TUBOS I II III IV
VI. CONCLUSIONES
6.1. Indicar las conclusiones de la prctica de acuerdo a los objetivos
VII. CUESTIONARIO
7.1 Cules son las condiciones que se requiere para la formacin de geles en la preparacin de
mermeladas de frutas y jaleas?
7.2 Qu sustancias utiliza la industria de alimentos como gelificante, adems de la pectina
comercial?
7.3 Cul es la funcin de los solventes orgnicos en los tubos 3 y 4?
7.4 Qu sustancia se utiliza como clarificante en la elaboracin de pectina comercial?
7.5 Qu otros materiales pueden emplearse para la obtencin de pectinas? Indique el
procedimiento a partir de uno de ellos.
8.1. Braverman, J.B. 1980. Introduccin a la Bioqumica de los alimentos. El manual moderno.
Mxico.

PRACTICA N0 8
RECONOCIMIENTO Y CUANTIFICACION DE GRASAS: INDICE DE

PEROXIDOS
I.- INTRODUCCIN:
El anlisis de algunas de las caractersticas fsicas y qumicas de las grasas y aceites es

necesario, ya que de l se derivan sus propiedades. Este anlisis permite establecer
adulteraciones en los productos normales e identificar productos nuevos. En anlisis de rutina
las determinaciones de los ndices de yodo, saponificacin, acidez, perxido y la materia no
saponificable, junto con las pruebas cualitativas para adulteraciones son suficientes para
confirmar la identidad y comestibilidad de la mayora de las grasas y aceites.
Tanto el ndice de yodo como el de refraccin indican el contenido de cidos grasos no

saturados; en estos, el punto de fusin es ms bajo que en los cidos grasos saturados; el
ndice de peroxido es indicador del grado de rancidez oxidativa de las grasas. El ndice de yodo
como algunos de los otros ndices presenta grandes fluctuaciones en las diferentes pocas del
ao. Por ejemplo, la grasa de la leche tiene un 35% de cido oleico (ndice de yodo 35,
aproximadamente); sin embargo, este ndice es ms elevado en verano y ms bajo en invierno,
segn ha sido determinado en pases que poseen estaciones marcadas
II.- OBJETIVO
2.1 Determinar la extensin de rancidez oxidativa de dos muestras de aceite comestible
III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
3.1. EQUIPOS
3.1.1 Balanza analtica.
3.1.2 Bureta.
3.1.3 Frasco lavador
3.1.4 Matraces erlenmeyer esmerilados 29/32, con tapn (2).
3.1.5 Probeta de 100 ml.
3.1.6 Probeta de 50 ml
3.1.7 Pipetas de 10 ml
3.1.8 Propipetas
3.2 REACTIVOS
3.2.1 Cloroformo p.a.
3.2.2 Acido actico Glacial 38%
3.2.3 Solucin saturada de yoduro de potasio 20%
3.2.4 Tiosulfato de sodio 0,01 N
3.2.5 Almidn al 1%
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Pesar una cantidad adecuada de grasa o aceite en un matraz erlenmeyer limpio y seco
(5 g/ml)
2. Aadir 10 ml de cloroformo (p.a) y disolver rpidamente la grasa por agitacin
3. Aadir 15 ml de cido actico 38%
4. Aadir 1 ml de disolucin saturada de yoduro de potasio.

5. Tapar el matraz y agitar suavemente por rotacin durante 1 minuto

6. Dejar reposar 5 minutos en un lugar oscuro.
7. Aadir 75 ml de agua destilada, sacudir con energa por 5 min.
8. Aadir tiosulfato hasta aclarar la muestra
9. Valorar el yodo liberado con disolucin de tiosulfato de sodio 0,01N, utilizando disolucin
de almidn (1 ml) como indicador (gotas).
10. Paralelamente, efectuar un ensayo en blanco.
V.- RESULTADOS
Clculos
El ndice de perxidos (IP) se expresa en miliequivalentes de oxgeno activo por kilogramo

de muestra:
En donde:
V = volumen de disolucin de tiosulfato de sodio, en ml consumido en el ensayo de la

muestra.
V' = volumen de disolucin de tiosulfato de sodio, en ml consumido en el blanco.
N = normalidad de la disolucin de tiosulfato de sodio.
m = peso, en gramos, de la muestra.
VI.- DISCUSIN
6.1. Explicar los resultados en base a la literatura recomendada.
VII.- CONCLUSIONES
7.1. Anotar sus conclusiones de acuerdo a sus resultados y objetivos.
VIII.- CUESTIONARIO
7.1. Esquematice un flujograma de la prctica

7.2. Escribir la reaccin entre los perxidos y el yoduro de potasio.
7.3. Escribir la reaccin de valoracin (sub apartado 4 de la metodologa).
7.1. Horton, H. 1995. Bioqumica. Prentice Hall. Hispanoamericana. S.A. Mxico
7.2. Murray, R. y Col. 1996. Bioqumica de Harper. 13era. Edicin. Manual Moderno. Mxico
D.F.

PRACTICA N0 9
ESTRUCTURA MOLECULAR DEL DNA Y SU EXTRACCION
I.- INTRODUCCION
El cido desoxirribonucleico (ADN), es una macromolcula presente en todos los seres vivos,
incluyendo muchos virus (adenovirus), es la portadora la herencia. Gracias a los trabajos de Watson
y Crack en 1953, propusieron un modelo estructural del ADN compuesto por dos cadenas
antiparalelas en forma de hlice.
La unidad bsica del ADN lo constituye un nucletido (el ADN es un polmero de polinucletidos), que
est compuesto por un monosacrido de 5 carbonos, una desoxirribosa, un grupo fosfato y una base
nitrogenada que puede ser purina: adenina o guanina o base pirimdica: citosina, timina o uracilo.
La estructura del ADN suele semejarse a una escalera de mano, en la que las barras estn
constituidas por unas series alternantes de molculas de desoxirribosa, cido fosfrico y los peldaos
por pares de bases nitrogenadas complementarias que estn unidas entre s por puentes de
hidrgeno y las molculas de desoxirribosa por puentes de oxgeno.
El ADN regula la actividad celular, debido a la sntesis de protenas que, en su gran mayora, son
enzimas. La informacin necesaria para la sntesis de protenas se encuentra en el ADN en forma de
clave que estn representadas por la secuencia de las bases nitrogenadas.
II.- OBJETIVOS
2.1. Extraer el ADN a partir de una muestra biolgica

2.2. Reconocer microscpicamente el ADN, haciendo uso de un colorante.
3.1 EQUIPOS
3.1.1 Microscopio
3.1.2 Balanza
3.2.1 10 g de hgado de pollo (por sub grupo de prctica)
3.2.2 10 g de detergente
3.2.3 01 bolsa de gasa
3.2.4 Solucin salina fisiolgica
3.2.5 Solucin de cloruro de sodio 2 M
3.2.6 Alcohol de 96 %
3.2.7 Colorante de acridina o safranina
3.2.8 Mortero
3.2.9 Vasos de precipitacin
3.2.10 Varillas de agitacin
3.2.11 Pipetas de 10 ml
3.2.12 Embudo de vidrio
3.2.13 Lminas portaobjetos
4.1 EXTRACCIN DEL ADN

4.1.1 En un mortero triturar 10 g de hgado de pollo con 15 ml de SSF
4.1.2 Filtrar la mezcla en 3 capas de gasa para eliminar restos de tejido

4.1.3 Agregar una solucin de NaCl 2 M (sol. Hipertnica) en igual volumen del filtrado. Luego
aade 1 g de detergente y agitar con una varilla de vidrio durante 10 minutos
aproximadamente.
4.1.4 Verter la solucin anterior en un vaso de precipitacin, agregar lentamente alcohol por
las paredes del vaso hasta que se formen dos capas o fases. En la interfase se
precipita el ADN.
4.1.5. Con la ayuda de una varilla de agitacin ir moviendo en la misma direccin y observar
cmo se va adviniendo una fibra blanquecina transparente a simple vista (ADN) en la
varilla
4.1.6. Realiza una preparacin en fresco, sacando una fibra de ADN y depositndolo en una
lmina portaobjeto y agregar el colorante
4.1.7 Dejar actuar el colorante por dos minutos, observar en el microscopio a menor y mayor
aumento y determinar su estructura fibrilar
V. RESULTADOS Y DISCUSION
5.1. Representar mediante un flujograma el procedimiento de extraccin del ADN

5.2. Esquematizar las observaciones microscpicas
VI. CONCLUSIONES
VII. CUESTIONARIO
7.1 Qu muestras biolgicas podran utilizarse para extraer ADN?

7.2 Cul es el modelo estructural del ADN?
7.3 Cules son las funciones del ADN?
7.4 Qu otros colorantes podrn ser usados para visualizar el ADN?
7.5 Cul es la importancia de la prctica?
8.1. Cortez, L.R. 1991. Manual de prcticas de biologa general. Universidad Nacional de la
Libertad. Departamento de Ciencias Biolgicas. Trujillo, Per.
8.2. Gree, E. y Bobrowsky, K. 1970. Laboratorio de Biologa de Investigaciones. Publicaciones
Cultural S.A. D.F. de Mxico.
8.3. Villee, C. 1981. Biologa. 7ma. Edicin. Nueva Editorial Interamericana S.A. Mxico.

PRACTICA N0 10
DICROISMO DEL DNA
I.- INTRODUCCION
Durante la replicacin del DNA y otros procesos, deben separarse las dos hebras de la doble hlice, una
de la otra, al menos en una regin localizada. Las dos hebras de la hlice de DNA se separan cu ando se
rompen los enlaces de hidrogeno que unen los pares de bases. En el laboratorio, se puede deshacer la
doble hlice calentando una disolucin de DNA o bien aadiendo un cido o un lcali para ionizar las
bases.
La disociacin de la doble hlice normalmente se llama fusin porque tiene lugar de forma relativamente
brusca a una temperatura determinada. La fusin de los cidos nuclicos se puede evaluar fcilmente
midiendo el comportamiento en su absorbancia de luz, que tiene un pico a una longitud de onda de 260
nm (ver fig.).
En ese sentido, las bases apiladas de los cidos nucleicos absorben menos luz ultravioleta que las bases
que no lo estn, efecto que se conoce como hipocromismo.
II.- OBJETIVOS
2.3. conocer el efecto de la temperatura en la desnaturalizacin del DNA, as como tambin,

determinar los espectros de absorcin del DNA natural y desnaturalizado.
3.3 EQUIPOS
3.3.2 Bao Mara

04 vasos de precipitacin o vasitos de plstico.
06 tubos de ensayo
01 cuchilla
01 cebolla pequea
01 hgado de pollo
1 L de agua destilada
Detergente
NaCl (Sal)

02 Embudos
Gasa, papel filtro o un pauelo blanco
Zumo de pia
Alcohol de 96 muy fro
Solucin desestabilizadora: 900 de H20: 100 detergente + 2 cdtas. de NaCl.
Extraccin del DNA

Machacar 05 g de hgado de pollo o cebolla, en un mortero por espacio de 3 min, seguidamente
mezclarlo con 10 ml de solucin desestabilizadora, movindolo durante 2 min.
Se filtra el lquido obtenido con un papel filtro o gasa. Despus, se llena un cuarto de un tubo de
ensayo con la disolucin filtrada y se aade otro tanto de pepsina (zumo de pia) y se mezcla
vigorosamente.
Se aade un volumen de alcohol muy fro equivalente al del filtrado, cuidadosamente, hacindolo
resbalar por las paredes del vaso para que forme una capa sobre el filtrado. Se deja reposar durante
2 3 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las dos capas. Finalme nte, se introduce una
varilla de vidrio y se extrae una maraa de fibras blancas de DNA. Es importante que cuando se
aada el alcohol fro se debe hacer de forma tal que resbale por las paredes del tubo para que se
forme una capa sobre el filtrado y luego retirar el DNA natural con una varilla de vidrio.
Desnaturalizacin del DNA

En primer lugar, hay que resuspender en 10 ml de agua destilada el DNA natural extrado en el paso
anterior. Despus, hay que tomar 05 ml de la solucin de DNA natural y calenta rlos a una
temperatura de 80C por espacio de 3 min. De esta manera se obtendr el DNA desnaturalizado.
Determinacin del espectro de absorcin del DNA
Con las muestras obtenidas, el DNA natural y el DNA desnaturalizado, se realizarn lecturas
espectrofotomtricas en un rango de longitud de onda de 200-300 nm, y con una frecuencia de cada
10 nm.
V. RESULTADOS Y DISCUSION
5.3. Se realizar la construccin de los espectros de absorcin del DNA natural y desnaturalizado. Es
interesante encontrar los picos de mxima absorcin y encontrar la explicacin de acuerdo con
las propiedades fsico qumicas del DNA. Despus, se discutirn los resultados ayuda de la
literatura especializada.
VI. CONCLUSIONES
VII. CUESTIONARIO
7. 1. Definir que es hipercromismo. Mencionar ejemplos.

7. 2. Cul es la diferencia entre temperatura de fusin y temperatura de desnaturalizacin?
7. 3. Por qu se hacen lecturas espectrofotomtricas del DNA en el espectro de 200-300nm?
7.4. Qu otras propiedades fsicas tiene el DNA?
7.5. Definir que son los cromforos Cules son los elementos del DNA que tienen esta funcin?
1. Clark J. Bioqumica Experimental. Tr. por Justino Burgos Gonzles. Zaragoza: Acribia; 1996
2. Garrido A. Fundamentos de Bioqumica estructural. Madrid: Alfaomega; 2005
3. Laguna J y Pia E. Bioqumica de Laguna. 6 ed. Mxico: El Manual Moderno; 2007

PRACTICA N0 13
SOLUCIONES MADRE, PREPARACION, USOS Y DEFICIENCIAS EN

AGRICULTURA
I.- INTRODUCCION
La mayora de los vegetales obtienen la casi totalidad de sus nutrientes minerales va races pero, en
ocasiones, las sales se incorporan a travs de las hojas (epifitos).
El 25%, de Ia materia seca de los vegetales est compuesto por carbono, oxigeno , nitrgeno 1,
nitrgeno. El 5{/o restante lo forman diversos elementos minerales de los que unos son imprescindibles
para el desarrollo vegetal y otros son accesorios.
La falta de un elemento esencial provoca serios problemas fisiolgicos en las plantas traducindose luego
en trastornos de tipo estructural y morfolgico, provocando posteriormente la muerte prematura de la
planta.
El principal problema de la nutricin mineral es determinar cules de los elementos son esenciales. Al
hacer un anlisis de tejido en una planta no prueba su esencialidad. Una forma de resolver el problema
de la esencialidad es haciendo crecer plantas ante la completa ausencia de un elemento dado. Si la
planta crece normalmente, evidentemente el elemento no es esencial, pero si normalmente decae su
crecimiento. El elemento es esencial. Entonces, un elemento es esencial si la planta no puede completar
su ciclo vegetativo y/o reproductivo ante Ia deficiencia de dicho elemento.
Una forma de estudiar los efectos de las deficiencias de los elementos esenciales en las plantas es
haciendo crecer plan1as en soluciones nutritivas con niveles deficientes, ptimos y/o txicos de
cualquiera de los ejercicios esenciales, para diferenciar los mltiples sntomas que stos provocan en los
distintos rganos de las plantas, principalmente en el follaje, para el desarrollo de esta prctica" primero
prepararemos el material vegetal, lo cual es hacer germinar las semillas del vegetal que vamos a utilizar,
luego se preparan las soluciones nutritivas con fertilizantes comerciales y posteriormente se colocaban las
plantas en ellas y mantenidas mediante la tcnica de la hidropona la evaluacin. La evaluacin del
elemento deficiente se har midiendo e1 crecimiento y anotando los sntomas que aparezcan.
OBJETIVOS:
Diferenciar los sntomas de las deficiencias de un nutriente en las plantas.
Adiestrarse en las desinfestaciones del material vegetal y preparacin de soluciones nutritivas.
A. PREPARACTN DEL MATERIAL VEGETAL

Puede usarse diversas especies vegetales para demostrarles deficiencias de los nutrientes minerales. Sin
embargo, usualmente se emplean plantas de tomate, girasol, tabaco o frijol, 1,a que ellas manifiestan
muy bien los diversos sntomas.
Objetivo:
Adiestrarse en el proceso cie germinacin y en 1a manipulacin de plntulas
Material de Practica:
Material Biolgico:
Lote de semillas de alfalfa (Medicago sativa) o frejol (Phaseolus vulgaris)
Material de Laboratorio:
Sustrato: grava arena de ro, papel de filtro, etc.
06 Germinadores
01 litro de leja comercial Clorox
01 litro de agua destilada
01 navaja Gillette
02 beaker (100 ml)
ll. PROCEDIMIENTO

l. Semilla: la semilla debe ser de buena calidad, y no haber sido tratados con sustancias qumicas, como
fungicida.
Lavar la semilla con agua de grifo, para eliminar las impurezas.
Remojar las sernillas en una solucin de leja l% por cinco (5'), el tiempo depende la especie vegetal con
que se trabaje.
Se elimina la solucin de leja y e continuacin se enjuaga varias veces, las semillas, con agua destilada.
Dejar las semillas en agua destilada, para luego ser llevadas al sustrato e iniciar el proceso de
germinacin.
2. Sustrato: Es el medio de soporte en donde germinaran las semillas. Este sustrato debe rellenar poca
humedad., el dimetro de las partculas deben estar en un rango de 2 a l0 ml, que no sea material
calcreo y que no presente sustancias orgnicas.
Si se utiliza grava o arena se recomienda desinfestarle con leja 1% por 24 horas luego se elimina la leja
y se lava varias veces hasta que no trascienda a leja. Tambin se puede usar como desinfectante formol,
o el proceso de solarizacin, etc.
3. Germinacin: Colocar las semillas en el sustrato a utilizan, previamente humedecido y depositarlo en
maceteros o semilleros. Las semillas germinan fcilmente a la temperatura de la habitacin y/o
invernadero. Para mantener las semillas germinacin, regar solamente con agua destilada.
4. Plntulas: A los 10 o l5 das de la germinacin, segn la especie se selecciona las que mejor aspecto
presenta (altura promedio, hojas enteras y verdes, tallo recto etc.), si se observan cotiledones, estos
deben ser eliminados. Cuando aparezcan el segundo nivel de hojas se debe iniciar la experiencia.
IV. CUESTIONARIO
1. Cul es Ia diferencia entre un desinfestante y desinfectante?
2. Por qu se remojan las semillas en leja 1 %?
El Clorox contiene 5,259 de hipoclorito de sodio como sustancia activa. Cuntos ml debo formar de
Clorox para preparar 50 ml de leja al 1%?
PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES
Objetivos:
Calcular los pesos de los fertilizantes que intervienen en la solucin de Hogland & Amon (1938).
Determinar los volmenes a utilizar a partir de una solucin stock
Adiestrar al estudiante en la tcnica del cultivo hidropnico.
Material de Prctica
Material Biolgico:
Plntulas de frejol (Phasolus vulgaris).
01 kg de mezcla sulfontrica 31?/n N
01 kg de KNo3 (l59l" N. 4496 K?o)
01 kg de Supersimple (20y; P20t, 20%CaA)
01 kg de SoMg (20%MgO, B0% S04)
01 litro Fe -EDTA (10?/o Fe)
Solucin stock de micronutrientes
01 kg SO4K2 (50% K2O)
250g de benlate (funguicida)
10Pipetas (1,5 y 10 ml)
05 probetas (100 v 250 ml)
05 litros de agua de grifo
01 balanza analtica
10 frascos oscuros (capacidad 500 ml)
10 tapones (technopor)
250 g de detergente
500 g de algodn
III. Procedimiento:
Preparacin de las soluciones stock:
Solucin stock de mezcla sulfonitrica:

0,32 g M.S contiene 0,1 g N

En32 g M.S/ habrn 10g de N o 10 N/ml solucin stock.
Solucin stock de KNO3:
0,68 g de KNO3 contiene 0,25 g K y 0,10 g de N
En 68 g de KNO3/1 habrn 25 g de K v l0 g de N 25
Solucin stock
Solucin Stock de Sper Simple
0,34 g S.S contiene 0,03 g P y 0,049 g Ca
En 34g de S.S/ habrn 3.0 g dc P y 4,9 g de Ca 3,0 mg P y 4,9 mg de Ca/ml de solucin stock.
Solucin stock de SOMg
0,1 g de SOaMg contiene 0.012 g Mg y 0,027 g S.
En 10 g de SOMg/habrn 1,2 g de Mg o 1,2 de Mg/ml de sol. Stock.
Solucion stock de SOK
0.6 g SOKr/l habrn 25 g de K 25 mg K/ml sol stock.
Milimetros de soluciones stock para preparar un litro de solucin nutritiva usando aguade grifo (UNT)
Soluciones Stock Testigo N P K Fe

M sulfontrica 10 0 10 20 10
KNO 10 0 10 0 10
Super Simple 10 10 0 10 10
SOK 0 10 0 0 0
SOMg 10 10 10 10 10
Fe EDTA 1 1 1 1 0
Micronutrientes 1 1 1 1 1
Lavar los frascos de suero, pintados de color negro, detergente y enjuagar varias veces con agua de
grifo.
Al preparar la solucin nutritiva, primero vierta la mitad del volumen final de agua de grifo en los frascos;
luego adicione las solucione stock segn el cuadro descrito lneas arriba.
La cantidad de mililitros de cada solucin stock sealada es la requerida para un litro de solucin
nutritiva.
Cada solucin stock deber aadirse lentamente, mezclando completamente antes de agregar la prxima
solucin stock.
Para evitar la contaminacin de las soluciones stock, cada una de ellas deber tener su pipeta respectiva,
la cual no puede ser utilizada para varias soluciones stock a la vez.
Despus que se han agregado todas las soluciones stock completar con agua de grifo har el volumen
final requerido.
Transferencia de las Plntulas a la Macetas:
Las macetas a utilizar deben estar forradas, en su interior por un plstico de color negro y en la base
deben ser perforadas por un tubo de drenaje.
Agregar a las macetas el sustrato desinfestado y regar con agua de grifo.
Las plntulas, previamente desinfestadas. Deben ser acomodadas en las macetas, teniendo cuidado de
no romper las races.
Todo el sistema debe ser colocado bajo sombra por 15 das.
Durante los primeros 5 das, las plntulas daadas o infectadas debern ser reemplazadas. Las plantas
que posteriormente sufran un accidente no debern ser reemplazadas, pero si dadas a conocer en el
informe.
CUESTIONARIO
l. Escriba la definicin de ppm y mili equivalente.
2. De los siguientes enunciados Cual define correctamente a ppm?
1ug/g 1mg/l 1ul/l
En una formulacin de nutrientes nos pide 200ppm Ca (200 mg/l) Cuntos m de Ca (NO) son necesarios
agregar a la solucin, asumiendo 100% de pureza? Qu cantidad de N (ppm) hemos aadido al
satisfacer las necesidades de Ca?
Del problema anterior, si la formulacin del nutriente nos pide 150ppm N Se debe agregar o disminuir el
N? exprselo en ppm. Si necesita N utilice KNO Por qu es necesario conocer la calidad del agua,

especialmente en lo que refiere a la conductividad elctrica (mMhos/cm), pH, relacin de adsorcin de

sodio (SAR), presencia de cloruros, boro, carbonatos y bicarbonatos.
ANALISIS DEL CRECIMIENTO

Objetivos:
Reconocer como el crecimiento de la planta es afectado por la falta de un nutriente.
Determinar mediante mediciones, grficas y frmulas, corno es el crecimiento de una planta.
Material de Prctica:
Material Biolgico:
Plantas mantenidas en hidropona y en tratamiento por deficiencia de nutrientes.
01 Regla (50 cm)
05 Papel milimetrado
0l Estufa
01 Balanza analtica
0I Termmetro
III. Procedimiento:
Iniciada la experiencia, cada semana debe anotar Ia apariencia que presenta la planta (sntomas) en una
hoja que se le alcanza con esta experiencia- Adems se medir la longitud del vstago, de los
entrenudos, nmero de hojas que van presentando, y el rea foliar.
2. La primera, cuarta y octava semana en que se realiza la experiencia - se deben tomar los siguientes
datos:
Longitud del vstago
Longitud de las races
Longitud de los entrenudos
rea foliar
Peso fresco del vstago
Peso fresco de las races
Peso seco del vstago
Peso seco de las races
3. Con los datos obtenidos realizar:
Graficas: curvas, histogramas, polgonos
Anlisis cuantitativos; aplicar frmulas ICR, IAN, RAF, IC.
Cuestionario
l. De los elementos minerales en que circunstancia se dice que un elemento es mvil y no mvil.
Para hacer un diagnstico nutricional, Qu mtodos conoce para evaluar el requerimiento nutricional?
3 Que se entiende por clorosis-tipos en que se presenta; necrosis; moteado;
Marchitamiento, achaparrado?
Hacer un resumen de la importancia del N, P, K, Ca, Mg, Fe. S y Micronutrientes, en relacin a:
Sueo: origen, formas y contenido
Planta: asimilacin, fisiologa, carencia y diagnostico foliar.
5. Esquematice: clorosis intervenal e intravenal.
Necrosis marginal y nervaduras antocianicas.

PRACTICA N0 15
ESTUDIO DEL BOMBEO DE PROTONES POR LEVADURAS
I.- INTRODUCCION
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos unicelulares que se dividen por gemacin. En
comn con otras clulas eucariontes, las levaduras tienen un ncleo en donde reside la informacin
gentica de la clula, mitocondrias en donde se lleva a cabo la sntesis de AT P y un retculo endoplsmico
y aparato de Golgi que se encargan de la sntesis de protenas cuya localizacin final es la membrana
plasmtica o el exterior.
A nivel de la membrana plasmtica, las levaduras tienen una ATPasa de H+ que acopla la hidrlisis del
ATP con el bombeo de protones hacia afuera de la clula. Esta protena es semejante desde un punto de
vista estructural y funcional a la ATPasa de Na+/K+ de las clulas animales y, al igual que la bomba de
sodio/potasio, se inhibe con concentraciones micromolares de vanadato. Como resultado de la actividad
de la ATPasa de H+ en la levadura, se genera un gradiente electroqumico de protones que se utiliza
para impulsar el transporte de nutrientes al interior de la clula, proceso catalizado por sistemas de
transporte llamados simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la importancia de esta
enzima en la economa celular y en la energizacin de la membrana celular, basta decir que la ATPasa de
H+ consume hasta un 25 % del ATP que se sintetiza en la clula.
Adems de esta ATPasa de H+ de la membrana plasmtica, las levaduras tienen otra bomba de protones
en la membrana interna de las mitocondrias, la ATP sintasa, que se encarga de la sntesis del ATP. En
contraste con la enzima de membrana plasmtica, el flujo de protones a travs de la ATP sintasa induce
la sntesis de ATP. Uno de los inhibidores ms efectivos de esta enzima es la oligomicina.
As, se puede proponer uno de los muchos ciclos en los que interviene el ATP en la levadura: por un l ado,
el ATP se sintetiza en la mitocondria por medio de la ATP sintasa, y a nivel de la membrana plasmtica,
la ATPasa de H+ lo hidroliza para bombear protones al exterior de la clula. El factor comn en ambos
casos es un flujo de protones a travs de la membrana.
Objetivos
1. Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los cambios de pH producidos por las levaduras.
2. Que el alumno describa las vas por las cuales la glucosa genera los cambios de pH.

3. Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los desacoplantes sobre la salida de protones.
Hiptesis
Si las levaduras consumen glucosa, se observar una disminucin progresiva de su concentracin en el
medio de cultivo con el tiempo y cambios en el pH extracelular.
Material
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae ) 200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una concentracin final de 1%.
Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en etanol.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada.
Mtodo
Experimento 1 (control)
1 .Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos veces ms con intervalos de 3 minutos para
obtener la lnea basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos 2 veces ms.
EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.2 ml de la solucin de dinitrofenol 40 mmol/l, concentracin
final de 200 mol/l.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
EXPERIMENTO 3 (AZIDA)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.5 ml de la solucin de azida de sodio 400 mmol/l,
concentracin final de 5 mmol/l. Agitar con cuidado.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
6. Registrar sus datos en la siguiente tabla.
pH
TIEMPO (Minutos) GLUCOSA DINITROFENOL AZIDA DE SODIO
0
5
10
15
20
30
40
Anlisis de resultados
1. Hacer una grfica de cada uno de los experimentos; utilizar los valores de las lecturas de pH contra
tiempo.

2. Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control, con dinitrofenol como

desacoplante y con azida de sodio.
3. Hacer una relacin de las vas que producen estos cambios; tomar en cuenta que las levaduras poseen
una ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se encarga de sintetizar ATP y que tienen otra
ATPasa de protones en la membrana plasmtica cuya funcin es similar a la bomba de Na+/K+ en las
clulas de los mamferos (ver fig. 7.1).
Referencias
1. Pea A. Studies on the mechanism of K+ transport in yeast. Arch Biochem Biophys. 1975; 167:397 -
409.
2. Pardo JP. La ATPasa de H+ de la membrana plasmtica de los hongos. Mensaje Bioqumico. 1990; 13:
119-172
Responda a las siguientes preguntas:

1. Cules son las fuentes de carbono que usa la levadura?
2. Cules son las vas metablicas que catabolizan a los carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del catabolismo de los carbohidratos en las levaduras?
5. Cules son los inhibidores de la cadena respiratoria de los sitios I, II y III? Describa su efecto sobre el
consumo de O2 y la sntesis del ATP.
6. Cul es el mecanismo por medio del cual los protonforos desacoplan la fosforilaci n oxidativa?
Describa su efecto sobre el consumo de O2 y la sntesis del ATP.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
4. Alemany, M y S. Font. Prcticas de Bioqumica. Madrid: Alhambra S.A.; 1983

5. Beckett J, Walker S W, Rae R y Chemical Biochemistry . New York: John Ashby P.
Wiley & sons; 2005
6. Berg J M, Tymoczko J L y Bioqumica. Barcelona: Revert; Barcelona; Stryer L. 2008
7. Campbell M K y Farrell S. Bioqumica, Mxico:Thompson; 2004
8. Cox M y Nelson D. Lehinger Principles of Biochemistry . 4th ed. San Francisco: W. H.
Freeman; 2005
9. Chang R. Fsico Qumica con Aplicaciones a Sistemas Biolgicos . Mxico:
C.E.C.S.A;1986
10. Clark J. Bioqumica Experimental . Tr. por Justino Burgos Gonzles. Zaragoza:
Acribia; 1996
11. Garrido A. Fundamentos de Bioqumica estructural . Madrid: Alfaomega; 2005
12. Laguna J y Pia E. Bioqumica de Laguna. 6 ed. Mxico: El Manual Moderno; 2007
13. Morris J.G. Fsicoqumica para bilogos . Barcelona: Revert; 2001
14. Mc Kee T y Mc Kee J R. Biochemistry: An Introduction. 3rd. ed. New Y ork: Mc Graw-
Hill; 2002
15. Segel I.H. Clculos de bioqumica. Cmo resolver problemas matemticos de
bioqumica general. Zaragoza: Acribia; 1982
16. Vsquez R. Termodinmica Biolgica. Mxico: AGT Editor S.A.; 2002
17. Voet D, Voet J y Pratt C. Fundamentos de Bioqumica: La vida a nivel molecular .
Mdica Panamericana (2007)

ANEXOS
PREPARACIN DE SOLUCIONES
Las reacciones que se estudian en Bioqumica estn en disolucin, por lo que es necesario
recordar las formas de expresar e interconvertir las concentraciones de soluciones.
1.- CONCENTRACIONES BASADAS EN EL VOLUMEN:
Molaridad (M).- Es el nmero de moles de soluto por litro de solucin, se da entre

corchetes, por ejemplo [H+] es la molaridad del ion Hidronio.
M= N de moles/ litro de solucin
La molaridad se calcula de la siguiente manera:
N de moles= P / PM, donde
P= Peso del soluto

PM= Peso molecular del soluto
En el organismo los solutos se encuentran en soluciones diluidas, tales como:
1mM = 10-3 M = 1 nmol/l = 1 mol/ml

1M = 10-6 M = 1 mol/l = 1 nml/ml
1nM = 10-9 M = 1 nmol/l = 1 pmol/ml
Una disolucin 1M contiene un Nmero de Avogadro de molculas;
Nmero de Avogadro= 6.023x 1023 molculas, tomos o iones por

Molcula-g, tomo-g o on-g
En general un nmero de Avogadro de partculas se denomina mol, independientemente de

si es inica, monoatmica o molecular, es decir si es ion-g, tomo-g o molcula-g.
Actividad ().- Es la molaridad aparente o efectiva de un soluto; la actividad o molaridad

de un soluto se relaciona de la siguiente manera:
= M, donde;
= Actividad
= Coeficiente de actividad, es decir la fraccin activa de la concentracin
real, y suele ser menor que la unidad.
Por ejemplo, el HCl en disolucin molar est totalmente ionizado, pero la disolucin se
comporta como si solo tuviera [H+]= 0,86M, por tanto = 0,86
Normalidad (N ).- Es el nmero de equivalentes de soluto por litro de solucin, para

conocer el nmero de equivalentes hay que conocer primero el peso de soluto disuelto (W)
y su peso equivalente (PE) y relacionarlos de la siguiente manera:
Nmero de equivalentes= W/PE, donde

PE = PM/n, donde
n= Nmero de H+ u OH- sustituibles por molcula (para cidos o bases) o
n= Nmero de electrones ganados o perdidos por molculas (para agentes
oxidantes o reductores)
La molaridad y normalidad se relacionan por: N=nM
Por lo que una disolucin 0,01 M de H 3P04 es 0,03N
Porcentaje peso/volumen (%p/v) .- Es el peso en g de soluto por 100 ml de solucin.

Se utiliza mayormente en los casos en que las concentraciones exactas de soluto no son
demasiado importantes.
Porcentaje en miligramos (mg%) .- Peso en mg de soluto por 100 ml de solucin

Se utiliza mayormente en laboratorio clnico, por ejemplo un valor clnico de glucosa en
sangre de 225 significa que hay 225 mg de glucosa en 100 ml de suero sanguneo
Osmolaridad.- Es la molaridad de partculas en una solucin. Una solucin 1M de un

soluto no disociable es 1 osmolar. Una solucin 1 M de un soluto disociable es n osmolar,
donde n es el nmero de iones producidos por la molcula, p.e. Una solucin 0,05M de NaCl
es 0,1 osmolar, pues se generaron dos iones: Na + y Cl-.
PROBLEMAS DE RECAPITULACIN:
1.- Cuntos gramos de NaOH se requieren para preparar 500 ml (0.5 L) de solucin 0,04 M? y
expresar la concentracin de esta solucin en N, g/l, %p/v, mg% y osmolaridad
Solucin:
Litros / M = nmero de moles de NaOH requeridos
0,5 / 0,04 = 0,02 moles de NaOH se necesitan
Nmero de moles = P/PM

0,02 = P/40
P = 0,02x40
P = 0,8 g
Se pesan 0,8 g se disuelven en agua y se completa a 500 ml

El NaOH contiene un OH- por molcula, entonces
M=N y la solucin es 0,04 N
La solucin contiene 0,8 g/500 ml o 1,6 g/L o tambin
% (p/v) = g por 100 ml, y como tenemos

1,6g/ 1000 ml = 0,16 g/ 100 ml = 0,16% o
mg% = mg por 100 ml
= 0,16 G/100 = 160 mg/ 100 ml = 160 mg %
Como Na OH nos da 2 partculas ( Na + y OH- )

La osmolaridad = 2 x M = 0,08 Osmolar

2.- Cuntos mililitros de H2SO4 5M se necesitan para preparar 1500 ml de una solucin de H 2
SO4 0,002 M
Este problema es de importancia prctica, pues a veces se necesita una solucin

determinada y solo tiene otra preparada para otro fin, que le puede ser til y se desarrolla
teniendo en cuenta que el nmero de moles a usar debe ser el mismo en ambas soluciones,
por lo tanto como
Nmero de moles = M x volumen en litros
Litros x M (solucin diluida) = Litros x M (solucin concentrada)
Reemplazando valores:
1,5 L x 0,002M = L x 5M
Luego de despejar l y realizar las operaciones tenemos
L = 0,6 ml
O lo que es lo mismo que se deben tomar 0,6 ml de la solucin 5M y diluir hasta 1,5 l
2.- CONCENTRACIONES BASADAS EN EL PESO
Porcentaje peso/peso (% p/p).- Es el peso en g de soluto por 100 g de solucin

Esta forma es til con los cidos cuya concentracin viene dada en % p/p. En este
caso es necesario conocer primeo su densidad () o peso especfico (pe), que es:
= peso por unidad de volumen

pe= respecto al agua, como la del agua es 1 g/ml; el pe es numricamente
igual a la densidad
Molalidad (m).- Es el nmero de moles de soluto por 1000 g de disolvente

Se utiliza en clculos fsico-qumicos, tales como los puntos de ebullicin o
disminucin de puntos de congelacin, para soluciones acuosas diluidas, m y M son
prcticamente iguales; para interconvertir m y M se necesita conocer el % p/p.
Fraccin molar (X).- Es la fraccin del nmero total de moles presentes que representa
el compuesto en cuestin y es til mayormente en algunos clculos bioqumicos. Por
ejemplo en una solucin que contiene n1 del compuesto 1, n2 del compuesto 2 y n3 del
compuesto 3, la fraccin molar del compuesto 2, X viene dada por:
X2 = n2 /n1 + n2 + n3
PROBLEMAS DE RECAPITULACIN:
Preparar 2 litros de HCl 0,4M partiendo de una solucin de HCl concentrado (HCl 28% p/p, PE=
1,15). Calcular su molalidad y fraccin molar
Solucin:
Para la primera parte
Mtodo 1:
Primero calcular el nmero de moles

Nmero de moles = litros x M

= 2 x 0,4
= 0,8 moles de HCL son los que se necesitan
Luego se calcula el peso
Peso = nmero de moles x PM

= 0,80 x 36,5
= 29,2 g de HCl puro
Como la solucin comercial del HCl no viene pura sino al 28% en peso se necesitan 29,2 /
0,28 = 104,3 g de solucin comercial.
Al venir el cido en forma lquida, en lugar de pesarlo, podemos medir su volumen, el cual
es calculado a partir de la frmula de la
Volumen = P/
= 104,3/1,15
= 90,7 ml de solucin comercial son requeridos
Mtodo 2:
Todo el raciocinio anterior se puede resumir en la siguiente frmula:
Peso = V x x % (tanto por uno), donde

Peso = peso de sustancia requerida en g
V = Volumen de solucin original en ml
= densidad
% = fraccin del peso total que es sustancia pura
Por lo tanto:
V= P / x % = 29,2 / 1,15 x 0,28 = 90,7 ml
Mtodo 3:
Se calcula primero la molaridad de la solucin comercial y para ello tenemos que
conocer el peso de HCl puro en 1 L de solucin comercial:
P =Vxx%
= 1000 x 1,15 x 0,28
= 322 g
El nmero de moles en la solucin comercial ser
Nmero de moles = P/PM = 322/36,5 = 8,82 moles
Por lo tanto la solucin comercial de HCL es 8,82M
Como necesitamos 0,08 moles
V=Nmero de moles/ M = 0,8/8,82 = 0,0907 litros
Por lo que se toman 90,7 ml de solucin comercial y se diluyen hasta 2 litros
Para la molalidad:
Como la solucin de HCL es al 28%, entonces contiene 28 ml de HCl por 100 g de
solucin o 28 g de HCL por (100-28)= 72 g de H2O.
En 1 l se tiene: 28/72 x 1000 =388,9 g HCl/ 1000 g de H 2O
Y como Nmero de moles = P/PM
=388,9/36,5 = 10,65 moles HCl/1000g H 2O.
Entonces la solucin es 10,65m
Para la fraccin molar:

Tenemos en 100 g de solucin

Nmero de moles HCl = P/PM = 28g HCl/36,5 g/mol = 0,767 moles HCl
y Nmero de moles H2O =P/PM = 72 g H2O/ 18 g/mol
= 4,0 moles H2O
XH C l = nH C l/nH C l + nH 2 O = 0,767/4,767 = 0,161
Entonces XH C l = 0,161
SOLUCIONES AMORTIGUADORAS, TAMPN O BUFFER
pH
Calcular el pH, el pOH y el nmero de iones tanto hidrogeniones como oxidrilo por litro en
cada una de las soluciones:
a. HCl 0,01M
HCl 0,01 M
H 0,01 M concentracin de iones H

pH log H
pH log 0,01
pH 2
se sabe que :
pOH pH 14
sabemos : H OH - 10 -14 a 25 C
pOH 12 10 OH 10
-2 14
OH 10
- -12
b. H 2 SO4 0,0025M
H cido

H 0,0025 2,5 10
3 mol
l
pOH 14 - 2.6
pH -log 2,5 10 -3 pOH 11,4
pH 2,6

OH - 10 -14

10 11
2,5 10 -3 2,5
Curva de titulacin
Componentes de solucin buffer

PROBLEMAS PARA RESOLVER:
Cul es la molaridad del etanol puro, es decir cuntos moles hay en 1 litro de etanol
puro? La densidad del etanol es 0,789 g/ml. El PM del etanol es 46,07
Calcular el pH, pOH y el nmero de iones H + y OH- por litro en cada una de las
siguientes disoluciones: a) HCl 0,01 M, b) H2SO4 0,0025 M
El H2SO4 concentrado tiene un 96% de H2SO4 en peso y una densidad de 1,84 g/ml.
Calcular el volumen del cido concentrado requerido para preparar a) 750 ml de

H2SO4, b) Una disolucin de H2SO4 que contenga 6,5 equivalentes por litro.
Calcule el pH de una mezcla de cido actico 0,1 M y su base conjugada 0,2 M, si el

pKa del c. Actico es 4,76
Cules son las concentraciones de HOAC y OAc - en un tampn acetato 0,2M pH= 5,0?
La Ka para el cido actico es 1,7x10 -5 y el pKa= 4,77
Describir la preparacin de 3 litros de un tampn acetato 0,2M pH= 5,0, partiendo de

acetato sdico trihidratado slido (PM= 136) y una solucin 1m de una solucin de
cido actico
Describir la preparacin de 10 litros de tampn fosfato potsico 0,045 M y pH 7,5

(pKa1= 2,12, pKa2 = 7,2 y pKa3= 12,32) a partir de:
(a) KH2PO4 y K2HPO4
(b) H3PO4 y KOH
(c) KH2PO4 y KOH
(d) K2HPO4 y HCl
(e) K3PO4 y HCl
(f) KH2PO4 y K3PO4

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INGENIERIA AGRONOMA UNIVERSIDA D NACIONAL DEL SANTA

La colorimetra es una de las tcnicas ms usadas en Bioqumica cuando se requiere determinar la

La relacin entre It e Io depende de la longitud del medio absorbente, I; y de la concentracin de la

Fig. 1: Absorcin de la luz por una solucin

BIOQUIMICA 1 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

Para calcular la concentracin de una solucin se puede recurrir a dos procedimientos:

2.1. Obtener el espectro de absorcin de una sustancia

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

BIOQUIMICA 2 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

4.2 CALCULO DE LA CONCENTRACIN DE UNA SOLUCIN

TUBOS (ml) I II III IV V VI

V.- DATOS EXPERIMENTALES

VI.- CALCULOS RESULTADOS Y DISCUSION

Concentracin g ml-1 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0

IX.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

BIOQUIMICA 3 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

D E MOS TRA CIN D E LA A CTIV ID A D D E U NA OXID ORRE D U CTA S A

1. Aerobios estrictos: Crecen en presencia de oxgeno

2. Anaerobios estrictos: Crecen en ausencia de oxgeno

3. Aerobios facultativos: Crecen en presencia o ausencia de oxgeno

La determinacin de los potenciales de xido reduccin en alimentos se realiza con electrodos

En la prctica se usar el azul de metileno, un indicador de xido reduccin, con la finalidad de

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

BIOQUIMICA 4 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

V.- RESULTADOS Y DISCUSION

VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

BIOQUIMICA 5 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

D E MOS TRA CIN D E L A NA TU RA LE ZA PROTE ICA

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

BIOQUIMICA 6 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

4.1 OBTENCION DEL EXTRACTO CRUDO

TUBOS (ml) I II III IV V VI

4.2.2 Preparar el siguiente sistema

TUBOS (ml) I II III IV V VI

Presencia de actividad enzimtica (+) = Formacin de gas

V.- RESULTADOS Y DISCUSION

VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

BIOQUIMICA 7 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

D E TE RMINA CIN D E LA A CTIV ID A D E NZIM TICA

La actividad cataltica se expresa en trminos de unidades de actividad, y para ello la Comis in de

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

BIOQUIMICA 8 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

Almidn Almidn residual

4.2.2 Mezclar, medir las absorbancias despus de 5 minutos a 620 nm

4.3 DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ESPECIFICA

TUBOS (ml) I II III IV

4.3.2 Mezclar e incubar a 37 0Cdurante 30 minutos

V.- DATOS EXPERIMENTALES

5.2. Determinacin de la actividad especfica

N0 TUBO ABSORBANCIA (.. nm)

VI. CALCULOS, RESULTADOS Y DISCUSION

6.3. Determinar mg de protena/ml = Absorbancia X Factor

BIOQUIMICA 9 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

6.5. Realizar un flujograma de la obtencin de la amilasa.

IX.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

BIOQUIMICA 10 J. Ruiz, O. Villanueva, W. Cappa

DETERMINACIN CUALITATIVA DE CARBOHIDRATOS

Qumicamente, los carbohidratos son derivados aldehdicos o cetnicos de alcoholes superiores

2.1. Reconocer los diferentes tipos de carbohidratos

III. EQUIPOS MATERIALES Y REACTIVOS

IV.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL